PROSPECÇÃO, PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE α … · 2016-08-15 · glicosidase, ensaio...

1

Click here to load reader

Transcript of PROSPECÇÃO, PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE α … · 2016-08-15 · glicosidase, ensaio...

Page 1: PROSPECÇÃO, PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE α … · 2016-08-15 · glicosidase, ensaio enzimático com substrato sintético e por espectrofotometria, o melhor meio de cultivo

PROSPECÇÃO, PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE α-GLICOSIDASES E CELULASES EM LEVEDURAS OBTIDAS A PARTIR DE FRUTOS DE Euterpe oleracea. Yuri Rafael de Oliveira SILVA (Bolsista PIBIC/UFPA) – [email protected] Bacharelado em Biotecnologia, Faculdade de Biotecnologia, Instituto de Ciências Biológicas. Profa. Dra. Luciana Pereira XAVIER (Orientador) – [email protected] Faculdade de Biotecnologia, Instituto de Ciências Biológicas As enzimas são catalisadores biológicos que chamam atenção na área industrial por apresentarem potencial como alternativa para catalisadores químicos em processos industriais. As alfa-glicosidases destacam-se pela aplicação na indústria alimentícia, enquanto as celulases recebem destaque pela aplicação na produção de biocombustíveis. Os motivos pelo qual as enzimas ainda não são amplamente utilizadas incluem o alto custo e a baixa adaptação as condições industriais. Por esses motivos, é interessante a busca por novas enzimas que apresentem propriedades que supram esta carência. Neste estudo, leveduras foram isoladas a partir de frutos de açaizeiro (Benfica, Pará). As leveduras isoladas passaram por screening de atividade de celulase e alfa-glicosidase e otimização de condições de cultivo das melhores produtoras enzimáticas, e seus extratos enzimáticos foram submetidos a ensaios para caracterização de pH e temperatura. Posteriormente, amostras com atividade alfa-glicosidase foram submetidas a purificação por ultrafiltração seguida de cromatografia de gel-filtração, as frações obtidas foram testadas para atividade de alfa-glicosidase. Quatro leveduras foram isoladas, três delas foram identificadas como Cryptococcus flavus, Bandoniozyma complexa e Tremella sp. e a quarta (L3) não pode ser identificada. Todas apresentaram atividade de alfa-glicosidase e celulase em ensaios de screening em meio indicador. Nos ensaios de alfa-glicosidase, ensaio enzimático com substrato sintético e por espectrofotometria, o melhor meio de cultivo para produção continha glicina como fonte de carbono, e o tempo de produção variou entre 24 e 48 horas nas diferentes espécies. Tremella sp. e L3 apresentaram atividade ótima de alfa-glicosidase em pH 5,6. L3 apresentou temperatura ótima em 40°C. Estimou-se a massa molecular em duas faixas, 155kDa-66kDa e 30kDa-20kDa, que podem indicar duas alfa-glicosidases ou diferentes subunidades de uma mesma enzima. A atividade de celulase foi testada em Cryptococcus flavus e indicou pH ótimo de 6,6 quando cultivada no meio contendo glicina por 48h. A partir destes resultados, foi possível a padronização de um meio de cultivo para produção de alfa-glicosidases nas leveduras identificadas, assim como a caracterização parcial de enzimas ainda não estudadas. Palavras-chave: Alfa-glicosidase, Celulase, Açaí, Levedura. Título do projeto do Orientador: Produção de catalisadores heterogêneos e enzimas imobilizadas para aproveitamento de rejeitos derivados do refino de óleos vegetais, óleos residuais e glicerol. Classificação do trabalho na Tabela de Áreas do Conhecimento no CNPq. Grande Área: Ciências Biológicas Área: Bioquímica Subárea: Enzimologia