ESPECTROFOTOMETRIA

Curvas de calibração e adição padrão

2017

Medidas espectrofotométricas

Calibração do equipamento

(para análise em λ fixo)

1) Selecionar o λ (nm) desejado;

2) Ajustar o 100% T usando a cubeta de vidro (ou quartzo) contendo o solvente (no caso, água destilada)

3) Ajustar o zero %T usando a cubeta negra;

Análise por curva de calibração

1) Fazer as medidas dos padrões e depois da(s) amostras (melhor fazer cada medida em triplicata);

2) De posse das absorbâncias e concentrações preparar o gráfico de calibração e determinar a equação da reta

10

0

mL

50

mL

50

mL

50

mL

50

mL

50

mL

50

mL

2 mL 4 mL 6 mL 8 mL 10 mL

0 mL

Solução-padrão de Fe(II) 10,0 mg L-

1

A = 0.2106 CFe + 0.0013

R2 = 0.9996

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50

Fe - (mg L-1)

Ab

so

rvân

cia

Qual a melhor reta para análise quantitativa? É a que fornece a melhor sensibilidade, ou seja, é a que melhor distingue entre duas concentrações muito próximas e que dá maior sinal para amostras diluídas. Claramente vê-se que λ1 atende a esses requisitos. Duas concentrações próximas terão em λ1 a maior diferença em absorbância. O λ1 é o comprimento de onda de absorção máxima para a substância, simbolizada como λmax. Agora pode-se definir claramente qual o significado da constante ε . Se b e C são os mesmos para cada reta, ε tem que ser diferente, para que o valor de A se modifique. ε é uma constante que só depende da amostra, do solvente e do comprimento de onda. Não depende do caminho ótico ou da concentração, é uma propriedade daquela substância em relação ao meio em que está dissolvida e ao comprimento de onda usado. é chamada de absortividade molar, quando a concentração é expressa em mol/L (seria a absorbância por mol e por centímetro). A unidade de é L/mol.cm.

Adição Padrão

O método de adição-padrão consiste na adição de uma determinada quantidade de padrão à amostra. Deve-se medir a absorbância da amostra antes e após a adição do padrão, nas mesmas condições espectrofotométricas. Desse modo, pode-se minimizar a ação de interferentes contidos na amostra. O efeito dos interferentes é praticamente o mesmo nas soluções de amostra e de amostra mais padrões.

Maior o número de pontos, mais confiável é a análise.

Pode ser adição única - adições múltiplas são mais

adequadas.

Compensa interferências indeterminadas existentes

na amostra.

Usada quando não é possível reproduzir a matriz.

5,00 mL da

amostra +

todos os

reagentes

“branco”

todos os

reagentes

Concentrações

crescentes de

padrão