Développement d’une méthode de quantification de … · Tannins, anthocyanes Xanthones...
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CRÉATEUR DE LA COSMÉTIQUE VÉGÉTALE ® yves-rocher.com ® Marque déposée par Yves Rocher Développement d’une méthode de quantification de xanthones dans des extraits de coques de mangoustan (Garcinia mangostana L.) par HPTLC-UV Bénédicte Portet Responsable du laboratoire de Phytochimie Aline Gilbert Technicienne phytochimiste
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CRÉATEUR DE LA COSMÉTIQUE VÉGÉTALE®
02/04/2009 y v e s - r o c h e r . c o m
® Marque déposée par Yves Rocher
Développement d’une méthode de quantification de xanthones dans des extraits de coques de mangoustan (Garcinia mangostana L.) par HPTLC-UV
Bénédicte PortetResponsable du laboratoire de Phytochimie
Aline GilbertTechnicienne phytochimiste
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Sommaire
2-Le Mangoustan (Garcinia mangostana L.)
Présentation de la plante
Rappel sur les xanthones : des molécules polyphénoliques atypiques
1-Objectifs de l’étude
3-Présentation de la méthode HPTLC-UV
Détection et révélation des xanthones
Quantification des xanthones
4-Applications
Etude de la variabilité de la teneur en xanthones dans différents lots
de coques
Comparaison des résultats obtenus avec une méthode HPLC-UV
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Objectifs de l’étude
1-Développement d’une méthode d’analyse par HPTLC-UV rapide et efficace pour réaliser
le contrôle qualité de coques de mangoustan.
2- Application de la méthode à l’évaluation de plusieurs lots de plante
3-Comparaison des résultats des dosages de la teneur en xanthones avec ceux obtenus en HPLC-UV.
Zone de récolte
2-Le Mangoustan (Garcinia
mangostana L.)
Présentation de la plante
Rappel sur les xanthones : des
molécules polyphénoliques atypiques
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DESCRIPTION :
-Originaire d’Asie du Sud-Est
-Arbre pouvant atteindre 20 m de haut
-Fruit : coque épaisse, pulpe blanche
CONSTITUANTS PRINCIPAUX
Tannins, anthocyanes
Xanthones
α-mangoustine et -mangoustine
UTILISATIONS / PROPRIETES (Bibliographie):
-Partie la plus utilisée : Les fruits (et coques du fruit)
-Utilisation en alimentaire (pulpe du fruit)
-Utilisations traditionnelles pour ses propriétés
médicinales (coques du fruit) : antibactériennes,
anti-fongiques, anti-oxydantes et anti-inflammatoires.
Le Mangoustan, Fruit du Garcinia mangostana L. (Clusiaceae)
α-mangoustine -mangoustine
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Les principales xanthones des coques du mangoustan
α-mangoustine
-mangoustine
-mangoustine
9-hydroxycalabaxanthone
Molécules polyphénoliques prénylées
max (UV): vers 250 et 320 nm
Plaque (HP)TLC Si60 vs RP18
Détection UV: 254, 366 nm
Révélation: réactif de NEU
245-260 nm 245-260 nm
245-260 nm 245-260 nm
320 nm 320 nm
320 nm
290-330 nm
3-Présentation de la méthode
HPTLC-UV
Détection et révélation des xanthones
Quantification des xanthones
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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque Si60
Plaque : TLC Si60
Système : CHCl3/MeOH 90/10 (v/v)**
Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml
Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU
Système non adapté, les xanthones migrent au front de solvant
mauvaise séparation !!
**Rec.Nat.Prod (2009), 3:4, 178-186
Journal of AOAC international 2008, 91,5, 1145-1148
α-mangoustine
-mangoustine
-m
an
go
us
tin
e
α,-
-ma
ng
ou
sti
ne
s
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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque RP18
Plaque : TLC RP18
Système : CH3CN/Eau/HCOOH 50/50/5 (v/v/v)
Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml
Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU
Système non adapté, les xanthones ne migrent pas suffisamment
mauvaise séparation !!
α-mangoustine
-mangoustine
-m
an
go
us
tin
e
α,-
-ma
ng
ou
sti
ne
s
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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque RP18
Plaque : TLC RP18
Système : CH3CN/Eau/HCOOH 70/27/3 (v/v/v)
Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml
Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU
Système adapté, les xanthones sont séparées !!
α-mangoustine
α,-
-ma
ng
ou
sti
ne
s
-m
an
go
us
tin
e
-mangoustine
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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par HPTLC-UV sur plaque RP18
Plaque : HPTLC RP18
Système : CH3CN/Eau/HCOOH 80/17/3 (v/v/v)
Dépôt: 25µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 0,02mg/ml
Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU
Système mieux adapté, les principales xanthones sont séparées
α-MNG
-MNG
-MNG
9-hydro
4-Applications
Etude de la variabilité de la teneur en
xanthones dans différents lots de coques
Comparaison des résultats obtenus avec
une méthode HPLC-UV
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Mise au point de la méthode de quantification par HPTLC-UV
Scan de la plaque en UV à deux longueurs d’onde: 320 nm et 280 nm
Quantification réalisée sur 5 lots de coques de mangoustan (extrait EtOH), zone de collecte
et saisonnalité identique Étude de la variabilité en fonction de l’année.
Année de
RécolteRécolte 2009 Récolte 2010 Récolte 2011 Récolte 2012 Récolte 2013
MS % (p/p) 0.50 0.52 0.57 0.55 0.50
320 nm 280 nm
Dosagea-mangoustine Dosage -mangoustine
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Quantification par HPTLC-UV
Courbe d’étalonnage :
Calibration polynomiale par rapport à la hauteur des pics à 320nm pour l’alpha-
mangoustine
Gamme d’étalonnage de l’α-mangoustine comprise entre 60 et 980 ng/spots
Dosage de l’α-mangoustine et des xanthones totales en équivalent α-mangoustine,
solubilisation dans EtOH absolu
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Calibration polynomiale par rapport à la hauteur des pics à 280nm pour la
gamma-mangoustine
Courbe d’étalonnage :
Gamme d’étalonnage de la -mangoustine comprise entre 50 et 525 ng/spots,
solubilisation dans EtOH absolu
Quantification par HPTLC-UV
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0.0
5.0
10.0
15.0
20.0
25.0
30.0
35.0
40.0
45.0
50.0
Co
ncen
trati
on
en
α-
et -
man
go
usti
nes
en
%/M
S
Alpha-mangoustine Gamma-mangoustine
2009 2010 2011 2012 2013
Concentrations en α- et - mangoustines dans des extraits éthanoliques
de coques de mangoustan en fonction de la date de récolte
Résultats obtenus par HPTLC-UV à 320 nm
Teneur en a-mangoustine comprise entre 31% et 43% (/MS) et en -mangoustine
entre 4 et 6% (/MS)
Variabilité observée pour la teneur en α-mangoustine de 2009 à 2013.
La teneur en -mangoustine reste globalement stable pendant cette période.
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D:\Xcalibur\...\AG\Mangoustan\P01Cneg 9/13/2011 4:34:10 PM
RT: 0.00 - 32.00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Time (min)
0
20000
40000
60000
80000
100000
120000
140000
160000
180000
200000
220000
240000
260000
280000
300000
320000
340000
360000
380000
400000
420000
440000
460000
480000
500000
uA
U
8.21
14.19
5.61
3.49 14.781.95
16.489.082.47 3.86 6.83 13.8919.3217.81 22.94 24.1421.7620.73
4.151.29 13.00
NL:5.20E5
nm=279.5-280.5 PDA P01Cneg
Comparaison des résultats avec une méthode de quantification par HPLC-UV à 280 nm
Colonne : RP-18e Lichrocart-lichrospher
Phase mobile: 20% (A) 0,1% HCOOH, 80% (B) CH3CN
Détection UV: 280 nm
Débit: 1ml/min
α-mangoustine
-mangoustine
9-hydroxycalabaxanthone
-mangoustine
-mangoustine
a-mangoustine
-mangoustine
9-hydroxycalabaxanthone.
Plaque : HPTLC RP18
Système : CH3CN/Eau/HCOOH 80/17/3 (v/v/v)
Scan à 280 nm
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Comparaison des résultats avec une méthode de quantification par HPLC-UV à 280 nm
0
10
20
30
40
50
60
70
Gamma-Mangoustine
Alpha-Mangoustine
Xanthones totales
2009 2010 2011 2012 2013
% d
e x
an
tho
ne
s d
an
s les e
xtr
aits
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S
Xanthones totales: dosage des 4 xanthones d’intérêt en éq. α-mangoustine
Teneurs en α et -mangoustines plus élevées en HPLC vs HPTLC (respectivement +18% et +2%)
Teneurs en xanthones totales très proche en HPLC vs HPTLC (respectivement moy. 56% et 55%)
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Conclusion
1- Première étude de dosage des xanthones par HPTLC-UV sur plaque RP-18.
2- Bonne séparation sur les 4 xanthones étudiées : α-mangoustine, -mangoustine,
-mangoustine et 9-hydroxycalabaxanthone.
3- Résultats de quantification obtenus par HPTLC très proches de ceux obtenus en
HPLC
La méthode mise au point par HPTLC-UV peut donc être utilisée
comme méthode de contrôle pour s’assurer de la qualité de lots
de coques de mangoustan
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Remerciements
Aline GILBERT Jocelyn GIBOULOT Georges-Olivier MAILLET
Christian LUBRANO Jean-Renaud ROBIN Bénédicte PORTET
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Merci de votre attention
Département Innovation du Végétal
