Construção de Biblioteca Gênica

1-Vetor de Clonagem Plasmidial

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

3-Biblioteca de cDNA

4-Cromossomo Artificial Bacteriano

Edmar Vaz de Andrade

1-Vetor de Clonagem Plasmidial

Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem5 – 10 kb

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Ciclo Lítico de um Bacteriófago

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Formação de placas de lise em cultura

de bactérias

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Genoma do bacteriófago λ

1 – Remoção de genes não essenciais

2 – Inserção de sítios de restrição específicos

3 – Introdução de um DNA de preenchimento

4 – Substituição do DNA de preenchimento por um gene de interesse (fragmentos: 10 - 25 kb)

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

DNA de preenchimento

3-Biblioteca de cDNA

Síntese do cDNA

3-Biblioteca de cDNA

Adição de uma extremidade em Gn

Hibridização com iniciador Cn

3-Biblioteca de cDNA

Síntese do cDNA fita dupla e Metilação

3-Biblioteca de cDNA

Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição

3-Biblioteca de cDNA

Digestão com Enzima de Restrição

3-Biblioteca de cDNA

Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ

3-Biblioteca de cDNA

Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante

4-Cromossomo Artificial Bacteriano

Genes par derivado do plasmído F. Facilita a distribuição do plasmídio para células filhas

Construção de bibliotecas genômicas com insertos de até

300.000 pb

Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem modificações, das seguintes referências:

1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e Molecular”, 5ª edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil. (www.whfreeman.com/lodish)

2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.