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Construção de Biblioteca Gênica 1-Vetor de Clonagem Plasmidial 2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ 3-Biblioteca de cDNA 4-Cromossomo Artificial Bacteriano Edmar Vaz de Andrade

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Construção de Biblioteca Gênica

1-Vetor de Clonagem Plasmidial

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

3-Biblioteca de cDNA

4-Cromossomo Artificial Bacteriano

Edmar Vaz de Andrade

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1-Vetor de Clonagem Plasmidial

Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem5 – 10 kb

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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Ciclo Lítico de um Bacteriófago

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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Formação de placas de lise em cultura

de bactérias

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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

Genoma do bacteriófago λ

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1 – Remoção de genes não essenciais

2 – Inserção de sítios de restrição específicos

3 – Introdução de um DNA de preenchimento

4 – Substituição do DNA de preenchimento por um gene de interesse (fragmentos: 10 - 25 kb)

2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ

DNA de preenchimento

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3-Biblioteca de cDNA

Síntese do cDNA

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3-Biblioteca de cDNA

Adição de uma extremidade em Gn

Hibridização com iniciador Cn

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3-Biblioteca de cDNA

Síntese do cDNA fita dupla e Metilação

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3-Biblioteca de cDNA

Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição

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3-Biblioteca de cDNA

Digestão com Enzima de Restrição

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3-Biblioteca de cDNA

Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ

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3-Biblioteca de cDNA

Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante

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4-Cromossomo Artificial Bacteriano

Genes par derivado do plasmído F. Facilita a distribuição do plasmídio para células filhas

Construção de bibliotecas genômicas com insertos de até

300.000 pb

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Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem modificações, das seguintes referências:

1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e Molecular”, 5ª edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil. (www.whfreeman.com/lodish)

2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.