Post on 19-Jul-2015
Biochimie 2ème année LMD, UMMTO
Mr LEFSIH, klefsih@yahoo.fr
1. Les α-aminoacides 1.2. Généralités
Les protéines sont les biomolécules les plusabondantes car elles représentent 50 % du poids secd’une cellule.
Elles sont aussi très diverses :
Catalyseurs et régulateurs: les enzymes
Rôle constitutif passif ou actif
Hormones
Hémoglobine
Réponse immunitaires: les anticorps
Rôle de défense ou d’attaque: toxines
Rôle Nutritif
1. Les α-aminoacides 1.2. Généralités
Plus 300 aminoacides différents ont été décrit dansla nature, seulement 20 ont été communémentretrouvés en tant que constituants des protéines demammifères. [les seuls codés génétiquement].
Toutes les protéines sont formées de 20 acidesaminés standard. Ces derniers sont des α-amino-acides, car, à l’exception de la proline, ils présententun groupement amine primaire et un groupementacide carboxylique substitués sur le même atomede carbone et une chaine latérale distinctive(chaine-R) liée au carbon α.
1. Les α-aminoacides 1.3. Définition
Formule générale
un carbone tétraédrique chiral Cα est uni à un carboxyle –COOH, une amine primaire –NH2, un hydrogène –H et une chaîne latérale –R propre à chaque α-aminoacide
1. Les α-aminoacides 1.3. Définition
Selon la convention de Fischer, dans les α-aminoacides, la chaîne
carbonée est verticale et vue par sa convexité ; le COO–, dont le niveau
d’oxydation est le plus élevé, est placé vers le haut et le NH3+ peut alors
se situer soit à gauche, soit à droite du Cα chiral ; les α-aminoacides
appartiennent alors à la série L (laevus, côté gauche) ou à la série D
(dexter, côté droit).
Les α-aminoacides des protéines de tous les êtres vivants connus
appartiennent à la série L.
1. Les α-aminoacides 1.3. Définition
Au pH physiologique (≈ pH 7,4), le groupementcarboxylique est dissocié, formant ioncarboxylate chargé négativement (–COO-), et legroupement amine protoné (–NH3
+).
Dans les protéines, la majorité des groupementscarboxyle et amine sont impliqués dans desliaisons peptidiques et, en général, ne sont pasdisponible pour les réactions chimiques, exceptéformation des liaisons hydrogène. Pour cela, lachaine latérale indique délicatement le rôle del’aminoacide dans la protéine.
Donc il est très judicieux de classifier lesaminoacides d’après les propriétés des chaines.
1. Les α-aminoacides 1.4. classification des α-aminoacides
Chaîne latérale non-polaire
1. Les α-aminoacides 1.4. classification des α-aminoacides
Chaîne latérale polaire non chargée
1. Les α-aminoacides 1.4. classification des α-aminoacides
Chaîne latérale acide
1. Les α-aminoacides 1.4. classification des α-aminoacides
Chaîne latérale basique
1. Les α-aminoacides 1.4. classification des α-aminoacides
1. Les α-aminoacides 1.5. les acides animés non communs
1. Les α-aminoacides 1.5. les acides animés non communs
1. Les α-aminoacides 1.5. les acides animés non communs
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
Ionisation de l ’eau:
L ’eau se dissocie en ions
H2O H+ + OH-
En solution l ’ion H+ est solvaté
H2O + H+ H3O+
La constante d ’équilibre est
[H3O+] [OH-]
Keq =
[H2O]
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
Dans l ’eau pure on a [H3O+] = [OH-] = 10-7 M
Si [H3O+] > [OH-] la solution est acide
Si [H3O+] < [OH-] la solution est basique
On définit le pH = -log [H3O+]
une solution acide a un pH < 7
une solution basique a un pH > 7
La variation d'une unité pH correspond à une variation
facteur 10 de la concentration en ion H+
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
Un acide fort se dissocie totalement dans l ’eau
HCl H+ + Cl-
Un acide faible se dissocie partiellement dans l ’eau, il
s’établit alors un équilibre entre les différentes formes en
solution
AH H+ + A-
AH est l ’acide et A- la base conjuguée
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
Pour un acide HA, la relation entre le pKa, les
concentrations des formes protonées et
déprotonées et le pH est de la forme:
Si pH = pKa on a [AH] = [A-]
Si pH < pKa la forme AH prédomine
Si pH > pKa la forme A- prédomine
pH = pKa + log10
[A-]
[HA]
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
1. Les α-aminoacides 1.6. Ionisation, effet du pH
Les acides aminés sont des molécules amphotères: Il peuvent agir comme desacides et comme des bases.
Ils existent à l'état de zwitterions, c-à-d ils peuvent contenir des charges positives
et négatives par leurs groupement carboxylique chargé négativement et aminé,
chargé positivement et par les groupements ionisables de leurs chaines latérales.
le zwitterion est une forme neutre qui possède autant de charges positives que de
charges négatives
1. Les α-aminoacides 1.7. Titration d’un acide aminé
Si pH < pK1 la forme cationique
est majoritaire
Si pH = pK1 les formes [cations]
= [neutres]
Si pH = (pK1 + pK2)/2 la forme
neutre est majoritaire, on parle
de pHi
Si pH = pK2 les formes [neutres]
= [anions]
Si pH > pK2 la forme anionique
est majoritaire
1. Les α-aminoacides 1.8. Ionisation des AA: évolution des charges
1. Les α-aminoacides 1.8.1. Titration d’un acide aminé à chine latérale non chargée
pHi = ½ (pK1 + pK2) = = (9,60 + 2,34)/2 = 5,97
1. Les α-aminoacides 1.8.2. Titration d’un acide aminé à chine latérale positive
pHi = ½ (pK2 + pK3) = (8,95 + 10,53)/2 = 9,74
1. Les α-aminoacides 1.8.3. Titration d’un acide aminé à chine latérale négative
pHi = ½ (pK1 + pK2) = (4,25 + 2,19)/2 = 3,22
1. Les α-aminoacides 1.9. Propriétés physiques: Solubilité
Les acides aminés sont solubles dans l’eau, mais très
faiblement à un pH autour de leur pHi , plus fortement
en milieu alcalin (formation de sels);
Ils sont plus faiblement solubles dans l’alcool;
La solubilité dans les solvants apolaires dépend de
leur chaine latérale.
1. Les α-aminoacides 1.9. Propriétés physiques: Coloration et absorption de la lumière
Les solutions d’acides aminés sont incolores
La plupart des AA absorbent à une
λ < 230 nm
Les AA aromatiques absorbent vers 280 nm (ultraviolet)
Utile pour repérer la présence de protéines.
Le tryptophane est fluorescent
1. Les α-aminoacides 1.9. Propriétés physiques: Coloration et absorption de la lumière
1. Les α-aminoacides 1.10. Réaction chimiques: la fonction carboxylique
1. Les α-aminoacides 1.10. Réaction chimiques: la fonction amine
1. Les α-aminoacides 1.10. Réaction chimiques: réaction avec la ninhydrine
Le chauffage à
130°C des acides aminés en présence de ninhydrine conduit à la condensation de deux molécules de ninhydrine reliées par un atome d’azote venant de l’acide aminé. C’est le pourpre de Ruhemann.
C’est un composé violet absorbant à 570 nm. L’intensité de la coloration est inversement proportionnelle à la concentration de l’acide aminé.
1. Les α-aminoacides 1.10. Réaction chimiques: formation de pont disulfure
2. Protides et protéines2.1. Définition
Enchaînement d’acides aminés
Chaque acide aminé est aussi appelé un résidu
2 résidus = dipeptide, 3 résidus = tripeptide
Moins de 20 résidus = oligopeptide
20-100 résidus = polypeptide
au-delà de 100 = protéine
Un peptide ne contient pas structures secondaires
canoniques (pas d’hélices ni de feuillets)
2. Protides et protéines2.2. Nomenclature
Orientation dans le sens de synthèse biologique:
NH2 → COOH (= N-term → C-term)
On ajoute le suffixe –yl au nom du résidu.
Le dernier résidu garde son nom d’origine
Exemple: ala-phe-ser: alanylphénylsérine
2. Protides et protéines2.3. Liaison peptidique
.
.
2. Protides et protéines2.3. Liaison peptidique
Les 6 atomes engagés dans la liaison
peptidique sont dans le même plan.
2. Protides et protéines2.3. Liaison peptidique
la liaison peptidique est un hybride de résonance où les électrons sont localisés dans une orbitale moléculaire π qui recouvre les atomes O, C et N et empêche la libre rotation autour de l’axe C-N.
2. Protides et protéines2.3. Liaison peptidique
Une chaîne poly-peptidique a deux types de
liberté de rotation qui lui permettent d’adopter les
conformations qui caractérisent sa structure
secondaire :
la liberté de rotation d’un angle Φ autour de la
liaison unissant le carbone α à l’azote amidique
(liaison Cα–N) ;
la liberté de rotation d’un angle Ψ autour de la
liaison unissant ce même carbone a au carbone du
carbonyle (liaison Cα–C).
2. Protides et protéines2.4. Détermination du pHi
Exemple: glu-gly-ala-his-leu-arg-val
On repère les pKa correspondant dans un tableau.
en vert, les pKa des groupements ionisables
2. Protides et protéines2.4. Détermination du pHi
Tableau d’ionisation
2. Protides et protéines2.4. Détermination du pHi
Evolution des la charge globale du peptide
+3 ↔ +2 ↔ +1 ↔ 0 ↔ -1 ↔ -2
les pKa adjacents de la forme zwitterion sont pKa = 6 et pKa = 9,67 ; donc:
pHi = ½ (6 + 9,67) = 7,8
à pH = 7,8 le peptide a une charge globale = 0
pKa=2,32 pKa=4,25 pKa=6 pKa=9,67 pKa=12,48
2. Protides et protéines2.5. Structure primaire
Structure primaire : séquence d’AA sous forme
linéaire.
La protéine ne s’est pas encore repliée.
Il n’y a pas de liaisons à l’intérieur même de la chaîne.
2. Protides et protéines2. 5. Structure primaire
Glucagon
Oxytocine
2. Protides et protéines2. 5.1 Structure primaire: action des endopeptidases
2. Protides et protéines2.5.2 Structure primaire: action des exopeptidases
2. Protides et protéines2.5.3 Détermination de AA N-terminal: dégradation d’Edman
La dégradation d’Edman. On laisse
réagir d’abord à pH 9, le résidu
N-terminal d ’une chaîne
polypeptidique avec PITC, et on
obtient le dérivé phénylthio-
carbamyle (PTC). Traité avec l’acide
trifluoroacétique, ce dérivé libère la
thiazolinone de l’acide aminé N-
terminal. La thiazolinone séparée par
extraction subit alors, en solution
aqueuse acide, un réarrangement en
une phénylthiohydantoïne (PTH) de
l’acide aminé. En remettant la chaîne
polypeptidique restante en milieu
alcalin, le deuxième résidu d’acide
aminé est prêt pour le deuxième cycle
de dégradation d’Edman.
2. Protides et protéines2.5.3 Détermination de AA N-terminal: réaction au chloride de dansyle
2. Protides et protéines2.5.3 Détermination de AA N-terminal: méthode de Sanger
Procédure de Sanger pour identifier le résidu N-terminal. Laprotéine est traitée avec du 1-fluoro -2,4-dinitrobenzène (FDNB) dansdes conditions alkalines pour produire une protéine dont le résidu N-terminal est modifié.
L’hydrolyse en milieu acide produit les AA libres et l’aminoacideDNP. Cet aminoacide marqué est identifié par chromatographie.
2. Protides et protéines2.6. Évolution de la structure primaire
2. Protides et protéines2.6. Évolution de la structure primaire
2. Protides et protéines2.6. Évolution de la structure primaire
2. Protides et protéines2.7. Structure secondaire
C’est un repliement local d’une chaîne
peptidique selon les interactions entre AA.
Il existe plusieurs modèles de structures
secondaires :
Hélice α
Feuillet β
Boucles
Coudes
2. Protides et protéines2.7.1 Hélice α
Les chaînes latérales R sont
orientées vers l’extérieur de
l’hélice.
Les oxygènes des CO pointent
vers l’extrémité C-terminale, les
hydrogènes des NH vers
l’extrémité N-terminale
des liaisons hydrogène
s’établissent entre les CO et les NH
; individuellement, ces liaisons
n’ont pas une grande énergie de
stabilisation mais leur
accumulation stabilise fortement
l’hélice α.
2. Protides et protéines2.7.1 Hélice α
2. Protides et protéines2.7.2 Feuillet β
Se rencontrent rarement dans les membranes car
moins stables que les hélices α.
Les chaînes peuvent être parallèles ou anti parallèles.
Les acides aminés des chaînes opposés l’une à l’autre,
interagissent par des liaisons hydrogènes.
Les AA se situent à 0,35nm l’un de l’autre. Un
étirement est possible.
Dans la représentation schématique d’une protéine,
on donne aux brins b la forme d’une flèche.
2. Protides et protéines2.7.2 Feuillet β
Antiparallèle
Parallèle
2. Protides et protéines2.7.2 Feuillet β
2. Protides et protéines2.7.3 Coudes et boucles
Les hélices et des feuillets plissés sont
connectés par des régions de conformation non
répétitive et souvent irrégulière, de longueur
variable, les coudes ou les boucles.
Ce sont des domaines de liaison au sein des
protéines.
Permettent les changements d’orientation dans
l’espace.
Souvent exposés à la surface des protéines
2. Protides et protéines2.7.3 Motifs de reploiement
2. Protides et protéines2.8. Structure tertiaire
C’est l’arrangement dans l’espace des différentes structures secondaires.
C’est la structure tridimensionnelle, très stable dans laquelle sont impliquées toutes sortes de liaison non covalentes et covalentes:
Ponts disulfure
Liaison de coordinence ou dative.
Ioniques
Hydrogène
Van der Walls (dipôle induit-dipôle induit)
Hydrophobes
Elle garantit l’activité biologique de la protéine.
2. Protides et protéines2.8. Structure tertiaire
2. Protides et protéines2.8. Structure tertiaire
Une protéine soluble dans l’eau va se replier de façon à ce
que les résidus les plus polaires soient au contact du solvant. Les
résidus apolaires, eux, seront au cœur de la protéine de façon à ne
pas interagir avec l’eau.
Carboxypeptidase Myoglobine Concanavaline A
2. Protides et protéines2.9. Structure quaternaire
C’est l’association de plusieurs chaînes peptidiques pour donner un complexe stable et actif.
Les chaînes qui constituent ce complexe sont des protomères ou sous-unités, chacune ayant une structure tertiaire définie.
L’association des différentes chaînes se fait via des liaisons faibles et parfois aussi via des ponts disulfures.
On peut trouver des homomultimères (plusieurs chaînes peptidiques identiques) et des hétéromultimères (plusieurs chaînes peptidiques différentes).
2. Protides et protéines2.9. Structure quaternaire
Hémoglobine Immunoglobuline
2. Protides et protéines2.9. Structure quaternaire
2. Protides et protéines2.10. Hétéroprotéines
Les protéines peuvent être covalemment liées
à d’autres molécules:
si c’est à un lipide on parle de lipoprotéine
si c’est à un glucide on parle de glycoprotéine
si c’est à un métal on parle de métalloprotéine