MICROSCOPIAMICROSCOPIA

OSSERVAZIONE MICROSCOPICAOSSERVAZIONE MICROSCOPICA

La maggior parte dei microrganismi è troppo La maggior parte dei microrganismi è troppo piccola per essere vista a occhio nudo (dimensioni piccola per essere vista a occhio nudo (dimensioni dei batteri: 0,3-5dei batteri: 0,3-5μμm), pertanto risulta essenziale m), pertanto risulta essenziale l’uso di strumenti, quali i microscopi, che mediante l’uso di strumenti, quali i microscopi, che mediante lenti permettono di ingrandire gli oggetti.lenti permettono di ingrandire gli oggetti.

Nella visione microscopica, oltre all’ Nella visione microscopica, oltre all’ ingrandimentoingrandimento sono importanti altri due aspetti: la risoluzione e il sono importanti altri due aspetti: la risoluzione e il contrasto. contrasto.

La La risoluzionerisoluzione è la capacità di dare immagini è la capacità di dare immagini distinte di due punti vicini tra loro; il potere di distinte di due punti vicini tra loro; il potere di risoluzione dell’occhio umano, nelle migliori risoluzione dell’occhio umano, nelle migliori condizioni, è di 0,1 mm.condizioni, è di 0,1 mm.

Il Il contrastocontrasto dipende dal grado di rifrazione della dipende dal grado di rifrazione della luce; essendo la maggior parte delle cellule troppo luce; essendo la maggior parte delle cellule troppo trasparente per essere distinte dallo sfondo, risulta trasparente per essere distinte dallo sfondo, risulta necessario l’utilizzo di colorazioni per aumentarne necessario l’utilizzo di colorazioni per aumentarne il contrasto.il contrasto.

MICROSCOPIO SEMPLICEMICROSCOPIO SEMPLICE

Van Van Leeuwenhoek Leeuwenhoek

(1677)(1677)

Costituenti del microscopioCostituenti del microscopio Ogni microscopio ha come costituenti Ogni microscopio ha come costituenti

fondamentali un obiettivo ed un oculare.fondamentali un obiettivo ed un oculare.La distanza tra oculare e l’oggetto La distanza tra oculare e l’oggetto dell'osservazione è invariabile in qualsiasi dell'osservazione è invariabile in qualsiasi tipo di microscopio, la messa a fuoco tipo di microscopio, la messa a fuoco dell'oggetto avviene attraverso lo dell'oggetto avviene attraverso lo spostamento del sistema ottico utilizzato.spostamento del sistema ottico utilizzato.

L'oggetto viene posto su un vetrino ed L'oggetto viene posto su un vetrino ed illuminato dal basso tramite un illuminato dal basso tramite un condensatore ottico (illuminazione per condensatore ottico (illuminazione per trasparenza o a campo chiaro) oppure trasparenza o a campo chiaro) oppure lateralmente (illuminazione in campo lateralmente (illuminazione in campo scuro). scuro).

Per ottenere una maggiore risoluzione può Per ottenere una maggiore risoluzione può essere aggiunto, tra il preparato e essere aggiunto, tra il preparato e l'obiettivo, un liquido rifrangente (obiettivo l'obiettivo, un liquido rifrangente (obiettivo a immersione).a immersione).

Microscopio composto a luce Microscopio composto a luce trasmessatrasmessa

E’ composto da:E’ composto da: stativo, il supporto meccanico che stativo, il supporto meccanico che

comprende anche le viti comprende anche le viti macrometrica e micrometrica per la macrometrica e micrometrica per la messa a fuoco messa a fuoco

apparato di illuminazione apparato di illuminazione obiettivo obiettivo oculare oculare

OBIETTIVI E OCULARIOBIETTIVI E OCULARI

L’osservazione della morfologia L’osservazione della morfologia (forma (forma

e struttura) dei batteri può essere e struttura) dei batteri può essere fatta in due modi:fatta in due modi:

    con preparati a con preparati a frescofresco con preparati fissaticon preparati fissati

MICROSCOPIO A MICROSCOPIO A CONTRASTO DI FASECONTRASTO DI FASE

Dispositivo ottico capace di convertire differenze Dispositivo ottico capace di convertire differenze di fase in differenze di intensità luminosa, di fase in differenze di intensità luminosa, determinando così contrasto nell’immagine determinando così contrasto nell’immagine ((differenze di fasedifferenze di fase: risultato di piccole differenze : risultato di piccole differenze nell’indice di rifrazione e nello spessore delle nell’indice di rifrazione e nello spessore delle diverse parti delle strutture biologiche)diverse parti delle strutture biologiche)

Permette l’osservazione di strutture biologiche Permette l’osservazione di strutture biologiche vitali, normalmente invisibili, senza dover vitali, normalmente invisibili, senza dover ricorrere alle colorazioniricorrere alle colorazioni

Presenza di due nuovi elementi: Presenza di due nuovi elementi: diaframma diaframma anulareanulare e e piastra di fasepiastra di fase

Osservazione a contrasto di Osservazione a contrasto di fasefase

Un batterioUn batterio(Lb. sakei(Lb. sakei))

Un lievitoUn lievito(S. cerevisiae(S. cerevisiae))

Una muffaUna muffa(G. candidum(G. candidum))

MICROSCOPIO A MICROSCOPIO A FLUORESCENZAFLUORESCENZA

Sorgente di Sorgente di luce ultraviolettaluce ultravioletta

Condensatore con Condensatore con lenti di quarzolenti di quarzo: permettono il : permettono il passaggio della luce UVpassaggio della luce UV

Obiettivo con lenti di vetro: trattengono le Obiettivo con lenti di vetro: trattengono le radiazioni UV permettendo il passaggio della radiazioni UV permettendo il passaggio della radiazione visibile formatasi per fluorescenzaradiazione visibile formatasi per fluorescenza

Fluorescenza primariaFluorescenza primaria: prodotta naturalmente dal : prodotta naturalmente dal preparato (clorofilla)preparato (clorofilla)

Fluorescenza secondariaFluorescenza secondaria: indotta dal trattamento : indotta dal trattamento con sostanze fluorescenti (fluorocromi)con sostanze fluorescenti (fluorocromi)

MICROSCOPIO MICROSCOPIO ELETTRONICO A ELETTRONICO A

TRASMISSIONE (TEM)TRASMISSIONE (TEM)

CaratteristichCaratteristichee

Fascio di Fascio di elettronielettroni per illuminare il preparato per illuminare il preparato

Presenza di Presenza di lenti elettromagnetichelenti elettromagnetiche

Potere di risoluzione: 20Potere di risoluzione: 20Å (100 volte Å (100 volte superioresuperiore a a quello del microscopio quello del microscopio otticoottico))

Ingrandimenti diretti sino a 100.000 e con Ingrandimenti diretti sino a 100.000 e con ulteriore ingrandimento della fotografia sino a ulteriore ingrandimento della fotografia sino a 1.000.0001.000.000

Valido mezzo per studiare l’ultrastruttura dei Valido mezzo per studiare l’ultrastruttura dei microrganismi, ma non allo stato vitale: i campioni microrganismi, ma non allo stato vitale: i campioni devono essere disidratati, tagliati in sezioni devono essere disidratati, tagliati in sezioni ultrasottili e ricoperti con metalli pesanti.ultrasottili e ricoperti con metalli pesanti.

Fotografie di cellule batteriche Fotografie di cellule batteriche al microscopio elettronico a al microscopio elettronico a

trasmissionetrasmissione

MICROSCOPIO ELETTRONICO MICROSCOPIO ELETTRONICO A SCANSIONE (SEM)A SCANSIONE (SEM)

CaratteristicCaratteristichehe

Fascio di Fascio di elettroni elettroni per illuminare il preparatoper illuminare il preparato

Usato per l’esame dettagliato delle superfici dei Usato per l’esame dettagliato delle superfici dei microrganismimicrorganismi

Ingrandimenti che vanno da quelli delle comuni Ingrandimenti che vanno da quelli delle comuni lenti d’ingrandimento sino a 200.000lenti d’ingrandimento sino a 200.000

Potere di risoluzione: 200Potere di risoluzione: 200Å ( inferiore a quello del Å ( inferiore a quello del TEM)TEM)

Vantaggio principale: formare un’Vantaggio principale: formare un’immagineimmagine tridimensionaletridimensionale dell’oggetto dell’oggetto

Fotografie di cellule di Fotografie di cellule di E. coliE. coli al al microscopio elettronico a microscopio elettronico a

scansionescansione

Colorazioni battericheColorazioni batteriche

Per osservare i batteri si usano i colorantiPer osservare i batteri si usano i coloranti

Colorare i batteri consente di: Colorare i batteri consente di:

vedere maggiore contrasto tra l’organismo vedere maggiore contrasto tra l’organismo e lo sfondo, e lo sfondo,

differenziare vari tipi morfologici (tramite differenziare vari tipi morfologici (tramite la forma, la disposizione, la colorazione, la forma, la disposizione, la colorazione, etc.), etc.),

osservare determinate strutture (flagelli, osservare determinate strutture (flagelli, capsule, endospore, etc.).capsule, endospore, etc.).

Sono generalmente sali (un sale è un Sono generalmente sali (un sale è un composto costituito da uno ione carico composto costituito da uno ione carico positivamente ed uno carico positivamente ed uno carico negativamente) nei quali uno dei due negativamente) nei quali uno dei due ioni è colorato. ioni è colorato.

Ad esempio il blu di metilene è il sale Ad esempio il blu di metilene è il sale cloruro di metilene che in acqua si cloruro di metilene che in acqua si dissocerà nello ione blu metilene dissocerà nello ione blu metilene carico positivamente e lo ione cloruro carico positivamente e lo ione cloruro incolore carico negativamente. incolore carico negativamente.

Per capire come funziona un colorante, è Per capire come funziona un colorante, è bene capire la natura fisica e chimica dei bene capire la natura fisica e chimica dei

coloranti coloranti

I coloranti possono essere divisi in I coloranti possono essere divisi in due gruppi: quelli due gruppi: quelli basici basici e quelli e quelli

acidiacidi Se la parte colorata del colorante è Se la parte colorata del colorante è

uno ione positivo viene detto uno ione positivo viene detto basicobasico (ad esempio: il blu di metilene, il (ad esempio: il blu di metilene, il cristal violetto, la safranina). cristal violetto, la safranina).

Se la parte colorata è lo ione carico Se la parte colorata è lo ione carico negativamente esso è negativamente esso è acidoacido (ad (ad esempio: la nigrosina, il rosso congo). esempio: la nigrosina, il rosso congo).

A causa della loro natura chimica, i A causa della loro natura chimica, i citoplasmi di tutte le cellule batteriche citoplasmi di tutte le cellule batteriche hanno una debole carica negativa se fatte hanno una debole carica negativa se fatte crescere in un mezzo a pH neutro. Perciò, crescere in un mezzo a pH neutro. Perciò, quando si usaquando si usa un colorante un colorante basicobasico, , l’organismo si colorerà direttamente. l’organismo si colorerà direttamente.

Un colorante Un colorante acidoacido, invece, forma un , invece, forma un deposito attorno all’organismo, lasciando deposito attorno all’organismo, lasciando l’organismo incolore. Dal momento che l’organismo incolore. Dal momento che l’organismo viene visto indirettamente l’organismo viene visto indirettamente questo tipo di colorazione è detta indiretta questo tipo di colorazione è detta indiretta o negativa, ed è usata per ottenere una o negativa, ed è usata per ottenere una più accurata visione della dimensione, più accurata visione della dimensione, della forma e della disposizione dei batteri. della forma e della disposizione dei batteri.

Come is colorano i batteriMolti batteri mancano di colore o di strutture interne contrastanti. Dal momento che la densità di molti batteri è solo un po’ più alta di quella dell’ acqua, i batteri is vedono difficilmente in sospensione liquida usando un microscopio a campo luminoso perché sono quasi trasparenti.

Allestimento di un vetrinoAllestimento di un vetrino La preparazione di uno striscio è La preparazione di uno striscio è

richiesto nella maggior parte dei richiesto nella maggior parte dei procedimenti di laboratorio, prima procedimenti di laboratorio, prima della colorazione. Ha come finalità di della colorazione. Ha come finalità di fissare i batteri a un vetrino, evitando fissare i batteri a un vetrino, evitando che esse siano perse durante il che esse siano perse durante il processo di colorazione propriamente processo di colorazione propriamente detto. Lo striscio può essere preparato detto. Lo striscio può essere preparato a partire dalle colonie cresciute in a partire dalle colonie cresciute in mezzi solidi o a partire da un mezzo mezzi solidi o a partire da un mezzo liquido. liquido.

METODICA METODICA Prelevare con un ansa sterile un Prelevare con un ansa sterile un

po’ di materiale batterico da una po’ di materiale batterico da una colonia isolata. colonia isolata.

Distendere il materiale su un Distendere il materiale su un vetrino dove era stata vetrino dove era stata precedentemente messa una precedentemente messa una goccia di acqua distillata.goccia di acqua distillata.

Essiccamento: lasciare asciugare a Essiccamento: lasciare asciugare a

temperatura ambiente fino a temperatura ambiente fino a completa evaporazione dell’acqua.completa evaporazione dell’acqua.

Fissazione: passare velocemente il Fissazione: passare velocemente il

vetrino, tenuto con una pinza, sulla vetrino, tenuto con una pinza, sulla zona più calda della fiamma del zona più calda della fiamma del becco bunsen, per almeno tre becco bunsen, per almeno tre voltevolte..

Le colorazioni Le colorazioni possono essere possono essere

semplici semplici monocromatiche monocromatiche

o differenziateo differenziate

Colorazioni sempliciColorazioni semplici

Rendono le cellule meglio evidenziabili Rendono le cellule meglio evidenziabili all'osservazione microscopica. Richiedono all'osservazione microscopica. Richiedono l'uso di un solo colorante (es. blu di l'uso di un solo colorante (es. blu di metilene, cristal violetto, fucsina basica).metilene, cristal violetto, fucsina basica).

La colorazione semplice è utilizzata per la La colorazione semplice è utilizzata per la valutazione della forma, della disposizione valutazione della forma, della disposizione e delle dimensioni dei batteri, non e delle dimensioni dei batteri, non consente però di evidenziare i dettagli consente però di evidenziare i dettagli della struttura interna.della struttura interna.

COLORAZIONE SEMPLICE CON BLU COLORAZIONE SEMPLICE CON BLU DI METILENEDI METILENE

OBIETTIVO: OBIETTIVO: Osservare la forma di diversi microrganismi Osservare la forma di diversi microrganismi utilizzando una colorazione semplice.utilizzando una colorazione semplice.

PRINCIPIO: PRINCIPIO: I coloranti usati in microbiologia sono sostanze I coloranti usati in microbiologia sono sostanze organiche nelle quali sono presenti gruppi organiche nelle quali sono presenti gruppi funzionali detti “cromofori” associati alla funzionali detti “cromofori” associati alla produzione di colore. Si distinguono in produzione di colore. Si distinguono in coloranti basici (blu di metilene, violetto di coloranti basici (blu di metilene, violetto di genziana, safranina) e acidi (nigrosina, fucsina genziana, safranina) e acidi (nigrosina, fucsina acida). La colorazione aumenta il contrasto acida). La colorazione aumenta il contrasto con l’ambiente rendendo più visibili le cellule. con l’ambiente rendendo più visibili le cellule. Poiché i batteri sono ricchi di acidi nucleici, si Poiché i batteri sono ricchi di acidi nucleici, si colorano molto bene con coloranti basici come colorano molto bene con coloranti basici come il blu di metilene.il blu di metilene.

METODICAMETODICA

Dopo aver appoggiato il vetrino Dopo aver appoggiato il vetrino su una vaschetta per la su una vaschetta per la colorazione, aggiungere colorazione, aggiungere qualche goccia di blu di qualche goccia di blu di metilene.metilene.Attendere circa 3 minuti, Attendere circa 3 minuti, quindi lavare con acqua quindi lavare con acqua mediante una spruzzetta.mediante una spruzzetta.Eliminare buona parte Eliminare buona parte dell’acqua di lavaggio dell’acqua di lavaggio inclinando il vetrino; asciugare inclinando il vetrino; asciugare delicatamente, prima con carta delicatamente, prima con carta da filtro, poi all’aria.da filtro, poi all’aria.

COLORAZIONE SEMPLICE CON BLU DI METILENE

RISULTATO

COLORAZIONE SEMPLICECON BLU DI METILENE

Colorazioni complesseColorazioni complesse

Richiedono l'uso di più coloranti. Mettono in Richiedono l'uso di più coloranti. Mettono in evidenza non solo la morfologia, ma anche evidenza non solo la morfologia, ma anche determinate caratteristiche di gruppi di determinate caratteristiche di gruppi di microrganismi (colorazioni differenziali). microrganismi (colorazioni differenziali).

In generale, i batteri hanno una affinità per In generale, i batteri hanno una affinità per un grande numero di coloranti un grande numero di coloranti principalmente si tratta dei derivati basici principalmente si tratta dei derivati basici dell’anilina (blu di metilene, cristal violetto, dell’anilina (blu di metilene, cristal violetto, fucsina basica, ecc.). fucsina basica, ecc.).

Fra i metodi esistenti, quelli piu’ importanti Fra i metodi esistenti, quelli piu’ importanti in un laboratorio di microbiologia sono il in un laboratorio di microbiologia sono il metodo di metodo di GRAM GRAM e il metodo di e il metodo di ZIEHL-ZIEHL-NEELSENNEELSEN..

COLORAZIONE DI COLORAZIONE DI GRAMGRAMGRAM POSITIVI GRAM NEGATIVI

FISSAZIONE

CRISTAL VIOLETTO

LIQUIDO DI LUGOL

DECOLORAZIONE

COLORAZIONE DI CONTRASTO (SAFRANINA)

Le cellule vengono colorate con un colorante basico quale il cristal violetto e successivamente trattate con liquido di Lugol (iodio sciolto in una soluzione di ioduro di potassio). Fino a questo punto tutte le forme microbiche appaiono colorate. Se si lava con alcol, si osserva che alcune specie si decolorano (Gram-) e altre no (Gram+). Le prime possono essere evidenziate usando un colorante di contrasto (es. safranina o fuxina).

GRAM+GRAM+ GRAM-GRAM-

RISULTATO

FAMIGLIE DI BATTERI FAMIGLIE DI BATTERI GRAM+ E GRAM-GRAM+ E GRAM-

MICRORGANISMIMICRORGANISMI GRAMGRAM FORMAFORMA

MICROCOCCHIMICROCOCCHI ++ AMMASSI di COCCHI AMMASSI di COCCHI

STAFILOCOCCHISTAFILOCOCCHI

STREPTOCOCCHISTREPTOCOCCHI

++

++COCCHI a GRAPPOLI COCCHI a GRAPPOLI

COCCHI a CATENELLECOCCHI a CATENELLE

BACILLIBACILLI ++ BASTONCELLARIBASTONCELLARI

CLOSTRIDICLOSTRIDI ++ BASTONCELLARIBASTONCELLARI

CORYNEBATTERIACORYNEBATTERIA ++ BASTONCELLARIBASTONCELLARI

MYCOBATTERIMYCOBATTERI ++ BASTONCELLARIBASTONCELLARI

BRUCELLABRUCELLA -- BASTONCELLARIBASTONCELLARI

COLIFORMICOLIFORMI -- BASTONCELLARIBASTONCELLARI

PSEUDOMONASPSEUDOMONAS -- BASTONCELLARIBASTONCELLARI

AEROMONASAEROMONAS -- BASTONCELLARIBASTONCELLARI

METODO DI ZIEHL-NEELSENMETODO DI ZIEHL-NEELSEN

si basa sulla caratteristica di alcool-acido si basa sulla caratteristica di alcool-acido resistenza di determinati batteri come il resistenza di determinati batteri come il Mycobacterium tuberculosisMycobacterium tuberculosis che permette di che permette di trattarli con una soluzione di fucsina trattarli con una soluzione di fucsina fenicata a caldo o a freddo. Tali batteri fenicata a caldo o a freddo. Tali batteri resistono al trattamento posteriore con una resistono al trattamento posteriore con una soluzione di alcool-acido cloridrico (HCl 3% soluzione di alcool-acido cloridrico (HCl 3% in etanolo) e ritengono la colorazione in etanolo) e ritengono la colorazione inizialeiniziale rossarossa, , mentre altri si decolorano e mentre altri si decolorano e assumono la colorazione di fondo , assumono la colorazione di fondo , normalmente fatta con blu di metilene 0,3% normalmente fatta con blu di metilene 0,3% o verde malachite.o verde malachite.

N:B: I vetrini vanno ben fissati N:B: I vetrini vanno ben fissati preferibilmente alla fiamma del becco preferibilmente alla fiamma del becco

Bunsen o lasciati in termostato overnight.Bunsen o lasciati in termostato overnight.

COLORAZIONE CON COLORAZIONE CON FLUOROCROMO AURAMINA-OFLUOROCROMO AURAMINA-O

Procedimento:Procedimento: Coprire i preparati con una soluzione di Auramina O Coprire i preparati con una soluzione di Auramina O

e lasciare agire per 15 minuti a temperatura e lasciare agire per 15 minuti a temperatura ambiente;ambiente;

lavare i vetrini in acqua corrente;lavare i vetrini in acqua corrente; coprire i vetrini con soluzione decolorante per 2 coprire i vetrini con soluzione decolorante per 2

minuti;minuti; lavare i vetrini in acqua corrente;lavare i vetrini in acqua corrente; coprire i vetrini con una soluzione di permanganato coprire i vetrini con una soluzione di permanganato

di potassio e lasciare agire per 3 minuti;di potassio e lasciare agire per 3 minuti; lavare i vetrini in acqua corrente;lavare i vetrini in acqua corrente; lasciare seccare a temperatura ambiente;lasciare seccare a temperatura ambiente; osservare i preparati al microscopio a fluorescenza, osservare i preparati al microscopio a fluorescenza,

con un obiettivo di 40x , al piu’ presto possibile.con un obiettivo di 40x , al piu’ presto possibile.

COLORAZIONE CON COLORAZIONE CON FLUOROCROMO AURAMINA-OFLUOROCROMO AURAMINA-O

I micobatteri appaiono colorati in verde I micobatteri appaiono colorati in verde fluorescente, contro un fondo castano.fluorescente, contro un fondo castano.

Colorazione spore Colorazione spore (secondo Schaeffer-(secondo Schaeffer-

Fulton)Fulton) Allestire e fissare un vetrino Allestire e fissare un vetrino Appoggiare il vetrino su un sostegno sopra Appoggiare il vetrino su un sostegno sopra

una vaschetta contenente acqua la quale una vaschetta contenente acqua la quale verrà portata all’ebollizione.verrà portata all’ebollizione.

Colorare abbondantemente con Colorare abbondantemente con verde verde malachitemalachite, lasciare il vetrino esposto al , lasciare il vetrino esposto al vapore che si sviluppa per 3-5’ e aggiungere vapore che si sviluppa per 3-5’ e aggiungere ancora il colorante facendo attenzione che il ancora il colorante facendo attenzione che il vetrino non rimanga a secco.vetrino non rimanga a secco.(per evitare che il vetrino cada nella (per evitare che il vetrino cada nella vaschetta trattenerlo con una pinza di legno).vaschetta trattenerlo con una pinza di legno).

Lavare con acqua e colorare con Lavare con acqua e colorare con safranina safranina per per 5’.5’.Dopo aver lavato abbondantemente con acqua Dopo aver lavato abbondantemente con acqua asciugare delicatamente.asciugare delicatamente.

RISULTATORISULTATO Osservare al microscopio con ogni tipo di Osservare al microscopio con ogni tipo di

obiettivo, procedendo per gradi, dagli obiettivi obiettivo, procedendo per gradi, dagli obiettivi a secco a piccolo ingrandimento, fino a secco a piccolo ingrandimento, fino all’obiettivo ad immersione e registrare i all’obiettivo ad immersione e registrare i risultati ottenuti anche mediante un disegno. risultati ottenuti anche mediante un disegno.

spore spore appariranno appariranno colorate con colorate con

verde verde malachitemalachite, le , le

altre parti altre parti della cellula della cellula

con safraninacon safranina

COLORAZIONE COLORAZIONE STRUTTURALE DELLA STRUTTURALE DELLA

CAPSULACAPSULA OBIETTIVO:OBIETTIVO:

Osservare la presenza di batteri Osservare la presenza di batteri capsulati utilizzando una colorazione capsulati utilizzando una colorazione che, non richiedendo fissazione, che, non richiedendo fissazione, permette una visione senza artefatti permette una visione senza artefatti della morfologia batterica.della morfologia batterica.

PRINCIPIO: PRINCIPIO: La capsula dei batteri non ha alcuna affinità per i La capsula dei batteri non ha alcuna affinità per i coloranti perciò per metterla in evidenza si fa coloranti perciò per metterla in evidenza si fa ricorso a colorazioni negativericorso a colorazioni negative..

METODICAMETODICA

Deporre una goccia di inchiostro di china Deporre una goccia di inchiostro di china diluito al 10% su un vetrino portaoggetti. diluito al 10% su un vetrino portaoggetti. Prelevare con un ansa sterile un po’ di Prelevare con un ansa sterile un po’ di materiale batterico da una colonia isolata.materiale batterico da una colonia isolata.

Sospendere il materiale sull’inchiostro di Sospendere il materiale sull’inchiostro di china e coprire con un vetrino coprioggetto.china e coprire con un vetrino coprioggetto.

Osservare al microscopio con ogni tipo di Osservare al microscopio con ogni tipo di obiettivo, procedendo per gradi, dagli obiettivo, procedendo per gradi, dagli obiettivi a secco a piccolo ingrandimento, obiettivi a secco a piccolo ingrandimento, fino all’obiettivo ad immersione e registrare fino all’obiettivo ad immersione e registrare i risultati ottenuti anche mediante un i risultati ottenuti anche mediante un disegno. disegno.

RISULTATOI granuli molto fini di colorante determinano uno sfondo semiopaco nel quale spiccano le capsule chiare.