FUNDAO OSWALDO CRUZ

WAGNER SANTOS LUCENA

O FRMACO 17 -ETINILESTRADIOL: SEUS POSSVEIS EFEITOS SADE HUMANA E ANIMAL POR EXPOSIES AMBIENTAIS

RIO DE JANEIRO

2013

WAGNER SANTOS LUCENA

O FRMACO 17 -ETINILESTRADIOL: SEUS POSSVEIS EFEITOS SADE HUMANA E ANIMAL POR EXPOSIES AMBIENTAIS

Monografia apresentado ao curso de Ps Graduao Lato Sensu como requisito para obteno do ttulo de Especialista em Tecnologias Industriais Farmacuticas

ORIENTADOR: Prof. Paulo Srgio Bergo de Lacerda, Dsc

Rio de Janeiro

2013

i

ii

AGRADECIMENTOS

minha famlia, obrigado pela compreenso, respeito e pacincia.

Aos meus amigos, pelo apoio e companheirismo.

Aos professores que tive, obrigado por me transmitirem seus

conhecimentos e permitiram chegar at este momento.

iii

RESUMO

Este trabalho contextualiza o frmaco 17 -etinilestradiol como um

interferente endcrino de grande potencial estrognico, ambientalmente

persistente, biodisponivel por via oral ao ser humano, e de contnua entrada

nos compartimentos ambientais (principalmente nos corpos hdricos).

Efeitos na sade humana e animal por exposies ambientais, tcnicas

de identificao e caracterizao laboratorial, e as concentraes encontradas

dessa substncia em diversas matrizes aquticas do mundo so explicitados,

utilizando como ferramenta metodolgica a reviso da literatura cientfica

nacional e internacional sobre o tema

Este trabalho mostra estudos cientficos que relatam a presena do 17 -

etinilestradiol em concentraes ambientais baixas (em torno de nanogramas

por litro), mas que poderiam promover, na biota exposta, efeitos como induo

de feminizao de espcies machos, alterao da proporo entre os sexos da

prole, infertilidade e reduo da fecundidade.

Estas concentraes relatadas no seriam capazes, isoladamente, de

gerar efeitos na espcie humana, segundo pesquisas de avaliao de risco a

sade. Porm, discute-se a contribuio desse frmaco em uma exposio

crnica e mltipla a diversos interferentes endcrinos estrognicos presentes

na gua e alimentos.

Os aspectos regulatrios acerca do estabelecimento de concentraes do

17 -etinilestradiol em que no se observariam efeitos ambientais e possveis

solues para reduzir a exposio ambiental a interferentes endcrinos

tambm so abordados no trabalho .

Palavras-chave: 17 -etinilestradiol , efeitos sade humana e dos animais, exposio ambiental a interferentes endcrino

iv

ABSTRACT

This study contextualizes the drug 17 -ethinylestradiol as a great

potential estrogenic endocrine disruptor, environmentally persistent, orally

bioavailable to humans, which has continuous input in the environmental

compartments (mainly in aquatic matrices).

Effects on human and animal health by environmental exposures,

identification and characterization laboratory techniques, and found

concentrations of this substance in aquatic matrices of the world are showed,

using as a methodological tool a review of national and international scientific

literature on the subject.

This study shows that scientific researches reported the presence of 17 -

ethinylestradiol at low environmental concentrations (around nanograms per

liter), but that could promote, in exposed biota, effects such as induction of

feminization of male species, changing the proportion between sexes of

offspring, infertility and fecundity reduction.

These concentrations reported would not be able, alone, to generate

effects in humans, according to surveys of health risk assessment. However,

there is a discussion regarding the contribution of this drug in a chronic

exposure to multiple and diverse estrogenic endocrine disruptors present in

water and food.

The regulatory aspects regarding the establishment of concentrations of

17 -ethinylestradiol in which not observe environmental effects and possible

solutions to reduce environmental exposure to endocrine disruptors are also

discussed at this study

Keywords: 17 -ethinylestradiol, human and animals health effects, environmental exposure to endocrine disruptors

v

LISTA DE ILUSTRAES OU FIGURAS

FIGURA 1 Estrutura Qumica do 17 -estradiol (a) e do 17 -etinilestradiol

(b).................................................................................................................... 16

vi

LISTA DE QUADROS

QUADRO 1 - Mecanismos de ao de Interferentes endcrinos ................ 8 e 9

QUADRO 2 - Classificao Toxicolgica das Substncias segundo seu DL50

10

QUADRO 3 - Efeitos nos ecossistemas provocados por alguns interferentes

endcrinos ............................................................................................... 13 e 14

QUADRO 4 - Possveis Efeitos do 17 -etinilestradiol na sade humana no uso

em terapia de reposio hormonal ou como contraceptivo.............................. 20

Quadro 5 Resultados obtidos da busca bibliogrfica na base ISI Web of

Knowledge utilizando diferentes descritores .................................................... 26

Quadro 6 Ano em que foram publicados os artigos cientficos encontrados

.......................................................................................................................... 27

QUADRO 7 - Concentraes encontradas de 17 -etinilestradiol em diferentes

matrizes e locais no Brasil ............................................................................... 29

QUADRO 8 - Concentraes relatadas de 17 -Etinilestradiol em matrizes

aquticas no mundo ................................................................................. 29 e 30

QUADRO 9 - Principais Efeitos do 17 -etinilestradiol em diferentes espcies

animais...................................................................................................... 31 e 32

QUADRO 10 - Parmetros Ecotoxicolgicos exigidos para Lanamento de

Efluentes .......................................................................................................... 51

vii

LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS

ANVISA Agencia Nacional de Vigilancia Sanitria

BPCs Bifenilas policloradas

CECR Concentrao do Efluente no corpo hdrico receptor

CENO Concentrao de Efeito no observado

CE50 - Concentrao da substncia que gera 50% de uma atividade mxima em organismos expostos ou que promove o aparecimento de um efeito

em metade da populao de organismos estudados.

CONAMA Conselho Nacional de Meio Ambiente

CSTEE - Committee on Toxicity, Ecotoxicity and the Environment

DDT Dicloro difenil tricloroetano

DES Dietilestilbestrol

DL50 - Dose necessria de uma substncia para produzir a morte de 50% dos organismos expostos

EDCs Endocrine Disruptors Compounds

ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

ETE estao de tratamento de efluentes e/ou esgotos

ETA Estao de tratamento de gua para consumo humano

FSH Follicle Stimulating Hormone

FUNASA Fundao Nacional da Sade

GC-MS Gas cromatography with mass spectrometer detector

viii

HPAs Hidrocarbonetos policclicos aromticos

IARC International Agency for Research on Cancer

INEA-RJ Instituto do Meio Ambiente do Estado do Rio de Janeiro

LC-MS Liquid Cromatography with mass spectrometer detector

LH Luteinizing Hormone

LOAEL Lowest Observed Adverse Effect Level

MMA Ministrio do Meio Ambiente do Brasil

NOAEL No Observed Adverse Effect Level

PNEC - Predicted no effect concentration

TBT Tributilestanho

TPT - trifenilestanho

RDC Resoluo da Diretoria Colegiada

SVS-MS Sistema de Vigilancia Sanitria, Ministrio da Sade do Brasil

USEPA United States Environmental Protect Agency

VTG vitelogenina

ix

SUMRIO

APRESENTAO ............................................................................................. 1

INTRODUO.................................................................................................... 4

1.1 - O sistema endcrino e os seus interferentes ............................................ 4

1.2 - Mecanismo de ao de interferentes endcrinos ...................................... 8

1.3 - Toxicidade das substncias e a avaliao do risco sade...................... 9

1.4 - Efeitos relatados aos interferentes endcrinos .........................................13

1.5 - Dados sobre o interferente endcrino de escolha: 17 -etinilestradiol .....16

1.5.1 Estrutura Qumica, Caractersticas Fsico-Qumicas e classificao

Toxicolgica ..................................................................................................... 16

1.5.2 - Mecanismo de Ao do 17 -etinilestradiol .......................................... 17

1.5.3 - Dados de consumo mundial do 17 -etinilestradiol .............................. 18

1.5.4 - Efeitos Deletrios a sade relacionados ao uso humano em Terapia de

reposio Hormonal e como contraceptivo ...................................................... 19

1.5.5 - Principais metodologias laboratoriais para caracterizao, identificao e

quantificao do etinilestradiol ......................................................................... 21

2 OBJETIVOS .............................................................................................. 25

2.1 - Objetivos gerais ...................................................................................... 25

2.1 - Objetivos especficos................................................................................ 26

3 - METODOLOGIA ........................................................................................ 26

4 RESULTADOS E DISCUSSO................................................................. 26

x

5 - CONCLUSO............................................................................................. 34

6 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .......................................................... 36

7 ANEXO: ASPECTOS REGULATRIOS NO BRASIL ............................. 49

xi

1

APRESENTAO

O avano do conhecimento no campo da Sade e o uso intensivo de

tecnologias na busca contnua pelo combate s enfermidades e pelo bem

estar, tem impulsionado a espcie humana a transformar os recursos naturais e

o ambiente onde vive.

Neste cenrio, dentre o vasto arsenal de tecnologias disponveis,

possvel destacar o uso dos medicamentos alopticos, que so considerados o

principal produto final tecnolgico-cientfico comercializvel do campo da

Sade. A intensificao do seu processo de consumo tem sido cada vez maior

no mundo (WHO, 2004).

A velocidade e a magnitude com que este processo se realiza tem sido

objeto de preocupao de diferentes atores sociais, sobretudo a imprensa, os

movimentos sociais e pesquisadores do campo da Sade, em virtude da

possibilidade desse uso poder trazer consequncias indesejadas para:

- O indivduo ao qual se administra o medicamento: fruto de prescrio ou

posologia equivocada e de efeitos adversos intrnsecos formulao (frmacos

+ excipientes)

- Para a sade dos ecossistemas: afetados pela entrada contnua de frmacos

inalterados e seus subprodutos biologicamente ainda ativos em oceanos, rios e

lagoas, lixivia do solo pelo uso de frmacos na agricultura/pecuria ou na

disposio inadequada em aterros ilegais.

H tambm um possvel impacto sobre os ecossistemas por via de

emisses de gases e particulados na produo industrial

farmacutica/farmoqumica e em indstrias de incinerao de

frmacos/excipientes.

- Para sade coletiva: pela contaminao de guas subterrneas e guas

superficiais, que muitas vezes so usados como mananciais para obteno de

2

gua de consumo humano. Quando essas guas so utilizadas na agricultura,

podem tambm contaminar os alimentos. H de se ressaltar que o consumo de

peixes e crustceos extrados de matrizes contaminadas tambm podem

representar um perigo para a sade humana.

Os frmacos, insumos biologicamente ativos sobre as clulas e presentes

na formulao dos medicamentos, so em sua maioria considerados

substncias ambientalmente persistentes e passveis de bioacumulao. Isso

se deve a sua forte atividade biolgica, baixa biodegradabilidade e grande

carter lipoflico dessas substncias (Christensen, 1998), alm de sua entrada

contnua no ambiente aqutico atravs, principalmente, de efluentes e guas

residuais. Alm disso, muitos deles no so completamente removidos pelos

sistemas convencionais de tratamento de esgotos e efluentes (Ternes et

al.,1999) .

Quando se observa esse panorama, restringindo a ateno aos frmacos

que apresentam caractersticas de interferente ou desregulador do sistema

endcrino, essa preocupao adquire uma grande relevncia, podendo gerar

riscos ambientais e sade humana.

Esse receio se justifica devido ao fato de, mesmo presente em

concentraes subteraputicas espcie humana nas guas superficiais ou

em guas tratadas por estaes de tratamento de esgotos e efluentes,

relatado que a contaminao ambiental provocada por interferentes endcrinos

estrognicos, como o 17 -etinilestradiol, em uma exposio crnica e mltipla

de diferentes espcies qumicas, produziriam aes deletrias sobre os

organismos.

Essas aes impactariam principalmente no sistema reprodutivo e no

sistema nervoso (Singleton et al., 2003), e no aparecimento de diferentes tipos

de cnceres, sobretudo os relacionados ao sistema reprodutivo (Fernandez et

al., 2010 ; Davis et al., 1993 ; Wetherill et al., 2005).

Dessa forma, o escopo deste trabalho se restringe ao frmaco

interferente endcrino 17 -etinilestradiol devido a sua considervel

3

biodisponibilidade por via oral e por ser considerado um dos principais e mais

potentes estrognios sintticos de grande produo e consumo no mundo.

O principal objetivo deste trabalho elucidar os efeitos na sade

humana e dos animais pela exposio por fontes ambientais ao frmaco

interferente endcrino estrognico de estudo, ao passo que tambm ser

discutida as principais tcnicas laboratoriais utilizadas para identificao

qumica e caracterizao do potencial estrognico do 17 -etinilestradiol .

Outro aspecto a ressaltar no trabalho diz respeito s concentraes

encontradas para a referida substancia em diferentes matrizes aquticas

relatadas em estudos cientficos pelo mundo, relacionando essas

concentraes com os possveis efeitos in vivo que seriam gerados.

4

1 - INTRODUO

1.1 O sistema endcrino e os seus interferentes

O sistema endcrino, presente sobretudo em animais, est (em conjunto

com o sistema nervoso) intimamente relacionado ao controle de funes vitais,

influenciando na funo dos demais sistemas corporais (Berne et al., 2010)

composto por rgos que possuem como funo a sntese de

hormnios. Os hormnios podem agir tanto localmente quanto serem lanadas

na circulao sistmica, indo atuar em outras reas do organismo e modulando

suas atividades (Berne et al., 2010).

Hormnios so considerados sinalizadores qumicos. Eles atuam na

comunicao entre distintos tipos celulares, que reconhecem os hormnios por

apresentarem receptores especficos, havendo um reconhecimento molecular.

A interao entre o hormnio e seu receptor provoca uma resposta biolgica

especifica (Hardman e Limbird, 2005).

Os hormnios estrognicos esteroidais naturais, como o estradiol , a

estrona e o estriol, esto presentes em todos os animais vertebrados e em

algumas espcies de insetos. Embora apresentem diferentes papis nesses

organismos, sua funo mais marcante e notria est relacionada maturao

sexual e ao desenvolvimento de caractersticas sexuais femininas (Ryan, 1982

e Mechoulam et al., 1984).

Na espcie humana, esses hormnios so sintetizados majoritariamente

pelos ovrios em mulheres que no atingiram a menopausa. Nos homens e em

mulheres ps-menopausa a sua produo essencialmente extragonadal e

est relacionada a transformao metablica de andrognios de 19 carbonos,

sobretudo testosterona e androstenediona, em 17 beta estradiol e estrona.

Essa reao mediada pela enzima aromatase e ocorre particularmente em

clulas mesenquimais do tecido adiposo, nos osteoblastos e condrcitos

sseos, no endotlio vascular e clulas do musculo liso da aorta e em

diferentes locais no crebro (Simpson, 2003)

5

Existem substncias exgenas de ocorrncia no ambiente que

apresentam atividade estrognica, isto , so capazes de interagir com os

receptores estrognicos endgenos, influenciando na interao dos hormnios

aos seus receptores e, com isso, alterando a resposta hormonal (Zacharewski,

1997).

Essas substncias podem ter ocorrncia natural, como os fitoestrgenos

sintetizados no metabolismo de plantas e micoestrgenos no de fungos, ou

serem sintticas, antropognicas.

Esses compostos exgenos, como o 17 -Etinilestradiol, esto inseridos

em um grande grupo de substncias chamadas interferentes ou

desreguladores endcrinos, que na lngua inglesa so chamados de Endocrine

Disruptors Compounds ou EDCs.

Interferente ou desregulador endcrino pode ser definido como:

todo agente exgeno que interfere na sntese, reserva, liberao, transporte,

metabolismo, ligao, ao ou eliminao de hormnios naturais dos

organismos e responsveis pela regulao da homeostase e de processos de

desenvolvimento (Kavlock et al.,1996). Esses compostos se caracterizam por

promover modificaes no sistema endcrino dos organismos, podendo gerar

consequncias negativas sade destes e/ou de seus descendentes.

Os interferentes endcrinos podem atuar sobre diversos alvos

biolgicos, tais como receptores estrognicos, receptores andrognicos, sobre

a tireide, entre outros. Uma mesma substncia pode ter atividade sobre mais

de um alvo biolgico, como por exemplo o agrotxico metoxicloro, que

apresenta ao estrognica e anti-andrognica (Ostby et al., 1999).

Essas substncias esto largamente difundidas na vida cotidiana,

estando presente em diversas matrizes, tais como:

a) gua para consumo humano e Alimentos: onde se destacam os

fitoestrgenos em plantas, agrotxicos nos vegetais e na gua, as substncias

liberadas pelas embalagens, como os ftalatos e bisfenol A (Wilkinson e Lamb,

1999) e os prprios hormnios estrognicos esteroidais provenientes de fonte

6

animal, desde a carne at o leite (inclusive seus derivados) e ovos (Hartmann

et al., 1998).

Para a espcie humana, a maior parte dos interferentes endcrinos absorvidos

provm da via oral, de alimentos e gua contendo essas substncias (Reys,

2001).

b) Produtos cosmticos, como algumas preparaes para a pele, banho e

cabelo, contendo alquilfenis (Birkett e Lester, 2003).

d) Produtos da queima do papel e de plsticos, como as dioxinas e furanos, e

de combustveis fsseis, como os hidrocarbonetos policclicos aromticos ou

HPAs (Santodonato, 1997).

f) Produtos utilizados em instalaes eltricas, as bifenilas policloradas, e

diversos produtos e subprodutos provenientes da indstria qumica, como

saneantes industriais e domsticos, tintas, lubrificantes e emulsificantes,

tambm contendo alquilfenis e alquilfenis etoxilados ( Bila e Dezotti, 2007)

g) Substncias orgnicas polibromadas, que so usadas como retardadores de

chama em eletrnicos e tecidos (Birkett e Lester, 2003).

f) Conservantes parabenos, usados em formulaes farmacuticas e

cosmticas (Reys, 2001).

Em termos histricos, a preocupao com os efeitos relacionados

exposio aos EDCs provm do inicio do sculo XX, com a observao da

efeitos estrognicos em animais de laboratrio expostos a extratos de rgos e

tecidos reprodutivos femininos (Allen e Doisy, 1923).

Posteriormente, nas dcadas de 60 e 70, relatada a hiptese de

associao, entre o uso de dietilestilbestrol (DES) com o surgimento de

neoplasia vaginal em mulheres jovens que haviam sido expostas a esta

substncia antes de seu nascimento (Herbst et al., 1971). H tambm o relato

de aparecimento de efeitos reprodutivos em animais causados pelo agrotxico

organoclorado Dicloro Difenil Tricloroetano (DDT), principalmente atravs da

publicao do livro Silent Spring por Rachel Carson, em 1962 .

No incio da dcada de 90, h um recrudescimento do interesse no

estudo dessas substncias. Foi de suma importncia para isto a Conferncia

de Wingspread em 1991, por estimular a discusso sobre as evidncias de

7

efeitos sade em diferentes organismos pela exposio a substncias

qumicas ambientais.

Neste contexto, possvel ressaltar o estudo de Carlsen et al., 1992,

mostrando evidncias da diminuio da qualidade seminal de homens, em um

perodo de 50 anos. Tambm foi muito relevante a publicao do livro Our

Stolen Future: Are We Threatening Our Fertility, Intelligence, and Survival? por

Colborn et al., em 1997, que relata as evidncias, apontadas em diversos

estudos cientficos, de aes de desregulao no sistema endcrino e

principalmente de efeitos reprodutivos em diferentes espcies causadas pela

exposio a interferentes endcrinos.

Aes governamentais buscando incentivar a pesquisa, avaliar e buscar

solues para a questo foram e esto sendo elaboradas. Entre as diversas

iniciativas, possvel destacar o Programa de avaliao de desreguladores

endcrinos da Agncia de Proteo Ambiental dos EUA (EDSP USEPA).

Este programa atua no desenvolvimento e validao de testes laboratoriais, na

triagem e seleo de substncias que sero analisadas, e na implementao

de polticas e procedimentos que a referida agncia usar para essas

substancias, discutindo o risco ambiental e at humano que elas podem

representar. (USEPA, 2012).

Os principais questionamentos sobre a exposio a interferentes

endcrinos e seus efeitos ambientais e sobre humanos seriam (Bila e Dezotti,

2007):

- Quais substncias seriam capazes de produzir efeitos deletrios, quais seriam

estes efeitos, a partir de qual concentrao e se esta concentrao superada

nas matrizes ambientais.

- Dvidas para se estabelecer concentraes mximas em que no se observa

efeitos adversos aos organismos vivos.

- Possibilidade de Elaborar novas metodologias e avaliar as atuais no que

tange a identificar e caracterizar as concentraes dessas substncias nas

diferentes matrizes e/ou prever as consequncias causadas pelos interferentes

endcrinos em organismos expostos, e se estas metodologias seriam

acessveis para o uso em monitoramento.

8

possvel dividir os interferentes endcrinos em grandes grupos. Para

Birkett e Lester, 2003, os principais grupos de substncias interferentes

endcrinas seriam :

- Substncias poliaromticas: substncias retardadoras de chama

(normalmente substancias orgnicas polibramadas), Bifenilas policloradas

(BPCs) e hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs)

- Agrotxicos: pentaclorofenol linuron, atrazina e o hexaclorobenzeno, entre

outros.

- Esterides: 17 -estradiol, dietilestilbestrol, 17 -etinilestradiol, estrona, estriol

e mestranol.

- Compostos orgnicos oxigenados: os principais exemplos seriam o bisfenol A

e os diversos ftalatos.

- Alquilfenis: octilfenol, o nonilfenol, e o nonilfenol etoxilado .

1.2 Mecanismo de ao dos interferentes endcrinos

Os interferentes endcrinos podem atuar atravs de diferentes

mecanismos de ao, como expostos no quadro 1 abaixo. importante

salientar que muitas desses compostos ainda no apresentam um mecanismo

de ao totalmente elucidado e que a mesma substncia pode ter mais de um

mecanismo de ao, como por exemplo o praguicida metoxicloro, considerado

uma substncia estrognica e tambm antiandrognica (Ostby et al., 1999).

Quadro 1 : Mecanismos de ao de Interferentes endcrinos em animais

Mecanismo de ao

Definio

Mimetizar

(Agonismo)

O interferente Endcrino, em virtude de sua analogia estrutural

com o hormnio natural, poderia se acoplar ao receptor de

hormnio

Bloquear

(Antagonismo)

Certos interferentes endcrinos interagem com o receptor

hormonal, tendo capacidade de bloquear a ligao do

9

hormnio natural com este receptor

Mecanismo de ao

Definio

Depleo de

hormnios

Estimulam processos de degradao e eliminao do

hormnio, gerando uma depleo da concentrao deste nos

organismos.

Estimular Promovem a sntese de novos receptores hormonais dentro da

clula, gerando mltiplos sinais

Inibir enzimas Atuam inibindo enzimas cuja funo est relacionada a lise de

hormnios

Destruir Atuam promovendo a destruio do hormnio ou na perda da

capacidade deste ultimo em cumprir sua funo. H

modificao na estrutura do hormnio direta ou indiretamente,

resultando em problemas na interao com o stio receptor.

Adicionalmente, podem ocasionar modificaes nos padres

de sntese dos hormnios

Fonte: Adaptado de Bila, 2005.

1.3 Conceitos de toxicidade e avaliao do risco sade

Para compreendermos os efeitos sade dos organismos provocados

pela exposio aos interferentes endcrinos, necessrio compreender alguns

conceitos bsicos de toxicologia.

A dose se relaciona com a quantidade total de uma substncia recebida

pelo organismo. Geralmente expressa em unidades de massa ou volume por

massa de peso corpreo (exemplo: mg por kg corpreo) . As vias digestiva

drmica/cutnea, e respiratria so algumas das principais portas de entrada

das substncias nos organismos em exposio ambiental (FUNASA,2002).

A DL50 a dose necessria de uma substncia para produzir a morte de

50% dos organismos expostos (Hodge e Sterner, 1949). normalmente

expressa em unidades de massa por massa de peso corpreo e elaborada a

10

partir de estudos de experimentao em animais e outras espcies. um

parmetro de toxicidade aguda. A partir da DL50 possvel estabelecer uma

classificao das substancias por sua toxicidade aguda (Hodge e Sterner,

1949), como mostrado no Quadro 2 abaixo.

Quadro 2: Classificao Toxicolgica das Substncias segundo seu DL50

Classificao DL50 (em rata, por via oral)

.Extremamente txico < 1 mg.Kg-1

Altamente txico 1-50 mg.Kg-1

Moderadamente txico 50-500 mg.kg-1

Ligeiramente txico 0,5-5 g.Kg-1

Praticamente no txico 5-15 g.Kg-1

Relativamente no txico 15 g.Kg-1

Fonte: Hodge e Sternes, 1949

J a CE50 ou DE50 a dose da substncia que promove o aparecimento

de um efeito em metade da populao de organismos estudados. Expressa

normalmente em unidade de massa por volume (CE50) ou unidades de massa

por massa de peso corpreo (DE50), se constituem como indicadores de

potncia, representando o quo capaz a substncia em gerar uma

determinada resposta (FUNASA, 2002)

Para o entendimento sobre o risco de exposio humana e ambiental,

necessrio tambm estabelecer os conceitos de risco, perigo e avaliao de

risco.

Os perigos esto relacionados a evento, agente ou condio que teria a

capacidade de gerar efeitos indesejados a partir de suas caractersticas

intrnsecas. J o risco seria uma probabilidade com que esse perigo se

manifestasse, tendo uma conotao quantitativa (Freitas, 2002)

No contexto toxicolgico, se considera risco como a chance de ocorrer

um efeito indesejado para a sade humana ou dos ecossistemas a partir de

11

uma exposio a um estressor ambiental (fsico, qumico ou biolgico), que

teria a capacidade de induzir resposta adversa.

J a avaliao de risco seria uma ferramenta para mensurar esses

riscos a sade, descrevendo-os de acordo com a sua natureza e magnitude,

auxiliando numa tomada de deciso quanto ao estabelecimento de um risco

aceitvel para um determinado agente estressor (Freitas, 2002).

A avaliao de risco envolve as etapas de identificao do perigo,

avaliao de toxicidade (utilizando de uma relao dose-resposta), avaliao

da exposio e caracterizao do risco (National Research Council, 1983).

A relao dose-resposta, mencionada acima, expressa atravs de uma

curva que est relacionada a incidncia de um desfecho, mostrando a

proporo de uma populao em estudo que apresenta um determinado

desfecho para cada dose estudada (Freitas, 2002).

Essa curva pode ser influenciada por fatores relacionados a

suscetibilidade individual, principalmente os relacionados a polimorfismos

genticos de enzimas de metabolizao da(s) substncia(s) em teste. Outro

dado toxicolgico importante a curva dose-efeito, que expressa uma relao

entre a dose e a intensidade de um efeito graduado, para uma populao ou

indivduo (Hardman e Limbird, 2005).

Todas as informaes supracitadas auxiliam no estabelecimento de

limites de segurana ou tolerncia na exposio a substncias txicas

(expressos em doses de referencia ou ingesto diria aceitvel).Para se

estabelecer os limites de exposio segura em substncias no

carcinognicas, so usados parmetros como LOAEL (Low Observable

Adverse Effect Level ou nvel/dose mais baixo no qual um efeito adverso

observado) e NOAEL, (No observable Adverse Effect Level ou nvel/dose

mais alto no qual no se observa efeito adverso (OPAS/USEPA, 1996).

Esses parmetros so obtidos atravs de uma curva dose-resposta

realizada com estudos de experimentao animal em diversas doses da

12

substncia em teste, e esses dados so extrapolados para a espcie humana

com auxilio de fatores de segurana que englobam fatores de incerteza e

ponderao, para que se assegure um menor risco e maior proteo na

exposio humana a essa substncia (OPAS/USEPA, 1996).

No caso de substncias carcinognicas, que podem causar danos com

qualquer dose de exposio, so utilizadas tcnicas de avaliao do risco

quantitativo, tentando extrapolar os efeitos para doses baixas com auxilio de

modelos matemticos (OPAS/USEPA, 1996).

A produo de efeito txico pode tambm estar relacionada a exposio

a mais de uma substncia, havendo efeitos antagnicos, sinrgicos, aditivos

e/ou potenciais entre as mesmas, conforme definido abaixo (FUNASA, 2002):

-Efeito antagnico: o efeito obtido pela mistura de substncias, em uma

determinada dose, ser menor que o esperado quando h a exposio

individual de cada substancia sobre o referido organismo, nesta mesma dose

- Efeito aditivo: o efeito obtido pela mistura de substncias, em uma

determinada dose, ser igual a soma dos efeitos individuais de cada substncia

envolvida sobre este organismo. Muitas vezes, difcil avaliar esses efeitos

aditivos para substancias estrognicas, uma vez que muitas delas no

apresentam uma curva dose-resposta linear

- Efeito sinrgico: o efeito final obtido pela mistura ser maior que o esperado,

sendo superior a soma aritmtica dos efeitos individuais de cada uma das

substancias envolvidas..

- Efeito potencial: uma substncia ter seu efeito aumentado ao interagir com

outra que, originalmente, no apresenta aquele efeito.

De forma geral, alguns dos principais fatores relacionados gerao do

efeito txico dos agentes qumicos em uma exposio ambiental so

(FUNASA, 2002 ; Freitas, 2002):

13

- Propriedades intrnsecas substncia: propriedades fsico-qumicas (lipofilia,

solubilidade em gua, estado fsico, tamanho molecular, etc), natureza dos

subprodutos formados, ligao protenas circulantes, persistncia ambiental,

carcinogenicidade e mutagenicidade.

- Caractersticas atreladas ao organismo: idade, espcie, fatores genticos

(polimorfismos de enzimas), estado nutricional e imunolgico, ausncia ou

presena de patologias pr-existentes, gnero sexual, peso corporal e estado

emocional

- Caracterizao da exposio: frequncia e durao da exposio, vias de

entrada no organismo, rota de exposio no ambiente

- Propriedades atreladas ao ambiente: influncias causadas pela temperatura,

radiao solar, umidade, entre outros.

1.4 Efeitos Relatados aos interferentes endcrinos

Os principais efeitos sade dos organismos provocados dos

interferentes endcrinos so, segundo Bila (2005), distrbios no sistema

reprodutivo animal, englobando estmulo de hermafroditizao ou feminizao

de espcies, prejuzo no desenvolvimento das gnadas e diminuio da

reproduo. O quadro 3 abaixo relata alguns dos efeitos dessas substancias

documentados em estudos cientficos.

Quadro 3: Efeitos nos ecossistemas provocados por interferentes endcrinos

Espcie Agente txico

Efeito Relatado Referncia

Mamfero

Bisfenol A

Danos ao sistema reprodutivo de ratos Markey et

al., 2003

PCB

Aumento na mortalidade de golfinhos Aguilar e

Borrel,

1994

14

DDT

Distrbios no sistema reprodutivo de

ratos

Bitman et

al., 1968

Espcie Agente txico

Efeito Relatado Referncia

Rptil

DDE e DDT

Diminuio das concentraes

plasmticas de hormnios sexuais e

alteraes estruturais nas gnadas

(havendo diminuio do tamanho

peniano) dos jacars.

Guillette et

al., 1996 e

1999,

Milnes et

al., 2002

Mexilho

Efluente de

ETE

Estimulo a liberao de vitelogenina na

circulao sistmica e distrbios de

crescimento da concha dos mexilhes.

Gagn et

al., 2001

Moluscos

TBT e TPT

Masculinizao de espcies fmeas Fernandez

et al., 2002

Tartaruga

17-beta

estradiol

Estmulo a liberao na circulao de

vitelogenina e distrbios na produo

de ovos

Irwin et al.,

2001

Pssaros

Pesticidas Diminuio da fertilidade Fry, 1995

DDT

Induo da Feminizao em gaivotas

macho

Fry e

Toone,

1981

DDT

Distrbios no sistema reprodutivo Bitman et

al., 1968

Anfbios

atrazina

Distrbios no sistema reprodutivo e

diminuio da populao

Dalton,

2002

Efluente de

ETE

Estimulao a liberao de

vitelogenina na circulao sistmica e

hermafroditizao da especie

Bogi et al.,

2003

Fonte: BILA, 2005

15

Em relao aos efeitos na espcie humana, devido a enorme gama de

substancias qumicas que esto submetidos no cotidiano e a ausncia de

estudos de experimentao em humanos (por bvios motivos ticos), difcil

elucidar claramente a associao da exposio a uma nica substncia com

um determinado desfecho.

Para estabelecer uma associao causal entre um determinado

desfecho e uma exposio so necessrios ( Rothman e Greenland, 2008):

- Associao matemtica exposio-desfecho, com significncia estatstica, em

estudos epidemiolgicos bem delineados, com o controle de variveis de

confundimento e evitando, o quanto for possvel, os vieses.

- Consistncia dos resultados, devendo haver similaridade entre os resultados

encontrados nos diferentes estudos cientficos.

- Estabelecimento de uma sequencia temporal, que assegure que a exposio

vem antes do desfecho e que quanto maior a exposio, maior ser a

probabilidade de ocorrncia e magnitude desse desfecho

- Plausibilidade biolgica, ou seja, necessrio elucidar os mecanismos

bioqumicos e fisiopatolgicos relacionando o efeito do agente txico no

desenvolvimento do desfecho.

Para as substncias desreguladoras endcrinas, as maiores suspeitas

esto relacionadas alterao dos parmetros do smen (diminuio da

qualidade seminal), anomalias nos rgos reprodutivos, distrbios na tireoide

(que poderiam estar relacionado a problemas de crescimento) e aumento da

incidncia de neoplasias de testculo, mama, e prstata (CSTEE, 1999).

H evidencias mais contundentes na exposio ao DDT e seus

derivados e prejuzo nos parmetros de qualidade seminal (De Jager et al,

2006 e Aneck-Hahn et al., 2007) e na relao entre o cncer vaginal e cervical

e a exposio intrauterina ao dietilestilbestrol (Herbst et al., 1971).

16

Existem ainda suspeitas de impacto ao sistema imunolgico por

estrognios naturais e sintticos (Ahmed, 2000), e aumento da incidncia de

casos de impotncia, decrscimo da libido e das concentraes plasmticas de

andrognios no sangue (Waring E Harris, 2005).

1.5 Dados sobre o interferente endcrino de escolha: 17 -Etinilestradiol

1.5.1 Estrutura Qumica, Caractersticas Fsico-Qumicas e Classificao Toxicolgica

A frmula molecular do 17 -Etinilestradiol C20H24O2 e sua estrutura

qumica, mostrada na figura 1, bastante semelhante a do hormnio natural 17

-estradiol, ambos apresentando 3 anis de 6 carbonos (sendo um deles

aromtico e ligado a uma hidroxila, se caracterizando como um anel fenlico) e

um anel de 5 carbonos, ligado a uma hidroxila .

Figura 1: Estrutura Qumica do 17 -estradiol (a) e do 17 -etinilestradiol (b)

O anel fenlico aromtico presente o responsvel pela atividade

biolgica, isto , ele proporciona a atividade estrognica das substncias. A

presena do grupo etinil no carbono 17 proporciona uma potencia por via oral

aumentada, devido a inibir o metabolismo de primeira passagem heptica

(Hardman e Limbird, 2005)

Figura 1 (a) 17 -estradiol Figura 1 (b) - 17 -etinilestradiol

17

Em relao as propriedades fsico-qumicas, o 17 -etinilestradiol

frmaco sinttico de alta lipofilia, de relativamente baixa solubilidade em gua,

com boa absoro por via oral, capaz de se ligar fortemente a protenas

circulantes e apresentando excreo pelas urina e fezes no ser humano,

grande parte na forma conjugada e inativa com glicurondios e sulfatos (Ying et

al., 2002, Lai et al., 2000) .

Alguns autores (Coleman et al., 2004; DAscenzo et al., 2003; Baronti et

al., 2000) associam as concentraes encontradas de etinilestradiol e

estrognios naturais em afluentes e efluentes das estaes de tratamento de

guas residuais, com a hiptese de que bactrias no esgoto, sobretudo

Escherichia Coli, poderiam desfazer a reao de conjugao, regenerando-os

em sua forma ativa .

Tambm documentado que a conjugao glicurnica gera um produto

com menor persistncia ambiental, apresentando uma degradao biolgica

mais facilitada que o estrognio conjugado a sulfato (DAscenzo et al., 2003)

Em relao a sua toxicidade aguda, relatado um DL50 para essa

substancia, de 2952 mg.kg-1 em ratos e 1737 mg.kg-1 em camundongos

(Goldenthal,1971), sendo classificada como ligeiramente txica em exposio

aguda por via oral

Na espcie humana, apresenta biodisponibilidade por via oral de cerca

de 40%, interagindo vastamente com protenas plasmticas, tendo tempo de

meia vida biolgica de 7,7 horas e meia vida de eliminao (tempo necessrio

para que o organismo depure 50% da dose absorvida da substancia) de 13 a

27 horas (Kanarkowski et al., 1988, e Goebelsmann, 1986).

1.5.2 Mecanismo de Ao do 17 -etinilestradiol

Por se caracterizar como um hormnio esteroidal sinttico de forte

analogia estrutural ao 17 beta estradiol, seu mecanismo de ao ser bastante

18

similar a deste ultimo, atuando fortemente e de forma agonista com receptores

estrognicos ER e ER, presentes no citoplasma celular e no ncleo celular.

Aps a interao no citoplasma, que ocorre no domnio de ligao

hormonal de ER e ER, o complexo receptor-ligante entra no ncleo celular,

havendo uma modificao na conformao do receptor, ao qual capaz de

interagir com sequencias promotoras do DNA intituladas elementos de resposta

ao estrognio, promovendo um controle da transcrio gnica e regulando a

formao de mRNA . Estes ltimos interagem com ribossomos havendo a

traduo em protenas especificas, modificando o metabolismo celular

(Brzozowski et al., 1997, Gaido et al., 1997)

Alguns dos principais alvos dos estrognios incluem clulas do trato

reprodutivo feminino, as clulas mamarias, sseas, hepticas e clulas do

hipotlamo e pituitria (Hardman e Limbird, 2005).

Os estrognios, como o 17 -etinilestradiol, so capazes de atuar na

glndula pituitria suprimindo a liberao de hormnio folculo estimulante

(FSH) e do hormnio Luteinizante (LH). A combinao de estrognio e

progestognio tambm inibe o eixo hipotlamo-pituitria, diminuindo a secreo

de hormnio liberador de gonadotrofina (GnRH). A ao de contracepo

ocorrer devido a deficincia no desenvolvimento e maturao folicular,

inibindo a formao de vulos capazes de serem fecundados (Hardman e

Limbird, 2005).

1.5.3 Dados de consumo mundial do 17 -etinilestradiol

O 17 -Etinilestradiol normalmente utilizado em doses entre 10 a 50 g

em medicamentos anticoncepcionais orais (conjuntamente com

progestognios) e seus outros usos clnicos incluem tratamento de sintomas da

perimenopausa, da obstruo mamria ps-parto, no sangramento uterino, na

terapia hormonal para mulheres com hipogonadismo, e na terapia paliativa

19

para carcinoma maligno de prstata e mama (Associao Internacional de

Pesquisa sobre o Cncer - IARC, 2012).

Em relao ao seu consumo mundial, cerca de 881 milhes de unidades

farmacuticas contendo essa substncia foram vendidos no mundo em 2006,

129 milhes na Amrica Latina (Ims Health , 2005, apud IARC, 2007).

1.5.4 Efeitos Deletrios a sade relacionados ao uso humano em Terapia de reposio Hormonal e como contraceptivo

Segundo a IARC, os contraceptivos orais, caracterizados por uma

associao entre substncia estrognicas (incluindo o 17 -etinilestradiol) e

progestognios na mesma formulao, esto classificados no grupo 1, sendo

definidos como reconhecidamente carcinognicos na espcie humana, estando

relacionado ao surgimento de cncer de mama, colo uterino e de fgado (IARC,

2012).

De acordo com esta mesma entidade, a terapia de reposio hormonal

unicamente com estrognios (entre os quais o 17 -etinilestradiol) tambm

estaria enquadrada no grupo 1 (reconhecidamente carcinognico para espcie

humana), e estaria envolvido no desenvolvimento de cncer de endomtrio, e

ovrio, havendo tambm uma associao positiva para cncer de mama

(IARC, 2012).

Os mecanismo envolvidos na atividade carcinognica dos estrognios

no esto totalmente elucidados, sendo propostos 3 mecanismos que

poderiam explicar tal ao (Hardman e Limbird, 2005):

a) Os estrognios induziriam proliferao celular, e tal ao poderia estar

relacionada ao aumento de defeitos espontneos na replicao do DNA

b) Aps as mutaes terem se estabelecido em clulas alvo (pela ao de

substancias carcinognicas diversas), os estrognios induziriam a proliferao

de clones com defeitos genticos.

20

c) Gerao de espcies reativas de oxignio capazes de gerar danos nas

bases do DNA, oriundas de biotransformao de estrognios catecis em

quinonas ou semiquinonas.

O 17 -etinilestradiol tambm est relacionado a sndrome de

Disgenesia Testicular principalmente por exposio materna no perodo fetal, j

que o etinilestradiol interage com pouca eficincia a globulina de ligao dos

hormnios sexuais, e com isso conseguir atravessar a barreira placentria

atingindo o feto (Vidaef et al., 2005, e Sharpe et al., 2003).

Alguns dos efeitos sade humana conhecidos no uso do 17 -

etinilestradiol so encontrados no Quadro 4.

Quadro 4: Possveis Efeitos do 17 -etinilestradiol na sade humana no uso em terapia de reposio hormonal ou como contraceptivo.

Ao do 17 -etinilestradiol Tipo de Estudo Tamanho amostral

Fonte

Nuseas, hipersensibilidade

das mamas ( associao

etinilestradiol + desogestrel )

Ensaio Clnico

10.672

Fotherby (1992)

Aumento da incidncia de

clculos biliares

Reviso

sistemtica

- Uhler et al.

(2000)

Menor sensibilidade glicose

(associao etinilestradiol +

drospirenona)

Ensaio Clnico 80 Oelkers et al.

(1995)

Aumento da presso arterial

(associado a progestognio)

Estudo

Epidemiolgico

68 297 Chasan-Taber

(1996)

Ao protrombtica e

elevao dos riscos de

Tromboembolismo Venoso

Reviso

Sistemtica

- Ouyang et al.

(2006)

21

Em relao ao efeito do 17 -etinilestradiol na formao de clculos

biliares, relatado que essa substncia promoveria uma elevao da saturao

da bile com o colesterol e reduo da secreo de cidos biliares (Heuman et

al., 1980)

O efeito de elevao da presso arterial foi explicitado no estudo de

Chasan-Taber et al. (1996) em que, aps 4 anos de seguimento, o

desenvolvimento de hipertenso arterial em mulheres usurias de

anticoncepcionais orais (sendo o etinilestradiol o estrognio mais

frequentemente utilizado) apresentou um risco duas vezes superior, quando

comparadas a mulheres que no utilizaram este mtodo contraceptivo.

O mecanismo que explique a ao dos anticoncepcionais orais na

hipertenso ainda no est totalmente elucidado, mas a principal suspeita recai

sobre a ativao do sistema renina-angiotensina-aldosterona (Lewington et al,

2002).

1.5.5 Principais metodologias laboratoriais para caracterizao da atividade, identificao e quantificao qumica do 17 -etinilestradiol em matrizes ambientais

Diferentes metodologias so disponveis para a caracterizao,

identificao e quantificao do 17 -etinilestradiol em uma matriz ambiental

(sobretudo aqutica), existindo ensaios in vivo, in vitro e mtodos qumicos

analticos disponveis.

Entre os ensaios in vivo, possvel destacar os ensaios com uso de

roedores e os realizados com peixes.

Nos ensaios em peixes, mensurada a capacidade da substncia (ou

da mistura de substancias em determinada concentrao ou mesmo de um

efluente) de induzir a sntese de vitalogenina em peixes machos.

22

A vitelogenina uma protena presente na circulao sistmica em

espcies de animais ovparos, estando em concentraes baixas nas espcies

macho e alta nas fmeas, e sua funo est relacionada maturao dos

vulos (Irwin et al., 2001)

A expresso do gene de vitelogenina est relacionada s concentraes

de estrognios no organismo e por isso se consideram os nveis de

vitelogenina como um marcador de feminizao de peixes e de exposio a

substncias interferentes endcrinas estrognicas (Korach e Mclachlan, 1995).

A mensurao da vitelogenina realizada por radioimunoensaio ou por

imunoensaio enzimtico (ELISA).

J o ensaio in vivo com roedores capaz de mensurar as modificaes

da massa uterina de roedores (ensaio uterotrfico) ou ento detectar alteraes

na histologia de clulas do epitelio da mucosa vaginal (ensaio de cornificao

da mucosa vaginal). Seu uso menos difundido, em virtude dos problemas

ticos do uso de animais e do elevado custo em comparao com outros

ensaios.

Em relao aos ensaios in vitro, os principais so o teste YES, o teste de

ligao competitiva nos receptores de estrognio e o teste E-Screen

No teste YES (sigla para Yeast Estrogen Screen), elaborado por

Routledge e Sumpter (1996) utilizada uma levedura de Saccharomyces

cerevisiae geneticamente manipulada, ao qual em seu genoma foi adicionada

uma sequncia de DNA do receptor de estrognio humano. Com isso, esse

teste capaz de analisar a atividade estrognica da substncia, ou seja, a

capacidade que a substncia possui em interagir com o receptor de estrognio

humano e produzir uma resposta.

A mensurao no ensaio YES colorimtrica, por espectrofotometria, ao

qual a enzima -galactosidase, formada de acordo com a atividade estrognica

da substncia( ou mistura de substncias), metaboliza e gera uma mudana de

cor de amarelo para vermelho do agente cromognico clorofenol vermelho--D-

23

galactopiranosida, presente no meio de anlise. Os resultados obtidos no teste

YES so comparados aos do padro de 17 -estradiol, sendo expresso em

concentrao equivalente de 17-estradiol.

O ensaio E-Screen fundamentado no efeito de multiplicao de clulas

de carcinoma mamrio humano MCF-7 estimulado pela exposio a

substncias com atividade estrognica. Neste ensaio utilizado um soro,

inserido no meio de analise para inibir a replicao das clulas MCF-7. As

substancias com atividade estrognica seriam capazes de anular esse efeito

inibitrio e estimular a proliferao dessas clulas tumorais.

O perodo de incubao das clulas de 4 a 6 dias, sendo realizado na

presena e na ausncia da substancia padro (17 -estradiol) e da amostra em

teste. A mensurao da proliferao celular pode ser feita atravs de contagem

do numero de clulas ou ncleos (Soto et al., 1995) ou por mtodo

colorimtrico (Krner et al., 1998).

No teste de ligao competitiva aos receptores de estrognio

analisada a capacidade da substancia em teste de disputar com o padro de

estrognio (no caso, usado o 17 -estradiol radiomarcado) a ligao com os

receptores estrognicos, sendo os resultados mensurados com o auxilio de um

cintilador lquido

Alguns estudos que submetem as mesmas substancias-teste a ensaios

in vitro e in vivo, como o de Folmar et al., 2002, ao qual mostram que as

substncias apresentam maior potencia in vivo que in vitro, explicitando a

dificuldade dos ensaios in vitro de emular completamente as condies in vivo.

Nas anlises qumicas, normalmente no se mensura a atividade ou o

efeito biolgico da(s) substncias, porm permite identificar e quantificar as

concentraes das espcies qumicas em uma matriz ambiental complexa e de

componentes desconhecidos, algo que no possvel nos ensaios in vivo e in

vitro.

24

As principais metodologias qumicas utilizadas para analisar

interferentes endcrinos (como o 17 -etinilestradiol) devem ser capazes de

detectar essas substncias, presentes normalmente em concentraes baixas

em matrizes ambientais aquticas, numa faixa de g.l-1 ou mesmo g.lP-1P.

Essas metodologias englobam uma etapa preliminar de extrao

(permitindo uma purificao e pr concentrao da amostra, sendo a extrao

de fase slida a mais utilizada) e a determinao atravs de cromatografia

lquida ou a gs (usando ou no a derivatizao), normalmente acoplada a um

detector de espectrmetro de massas (Brossa et al., 2002).

H tambm ensaios imunoenzimaticos, fundamentados no principio da

interao especifica entre um antgeno e um anticorpo, sendo este ultimo a

substancia de interesse (ou a mistura delas) presente na matriz ambiental.

Esses ensaios so normalmente precedidos por uma etapa preliminar de

extrao, visando uma purificao e pr concentrao da amostra (Farre et al.,

2006), e um dos principais metodos imunoenzimaticos utilizados para analise

do 17 -etinilestradiol o ensaio de imunoadsoro enzimtica, tambm

chamado de teste ELISA.

O teste ELISA pode ser policlonal ou monoclonal. No policlonal,

detectada essa substancia em conjunto com outras (normalmente os

estrognios naturais), no sendo capaz de caracterizar individualmente a

concentrao de cada uma das substancias desse grupo presentes na amostra

J o teste ELISA monoclonal altamente especifico, detectando uma

nica substncia ou espcie qumica, podendo ser usado quantitativamente e

gerando resultados confiveis e muitas vezes em concordncia com analises

cromatogrficas (Farre et al., 2006).

25

2 OBJETIVOS

2.1 - Objetivo Geral

Ao longo deste trabalho, so abordados os efeitos na sade humana e

dos ecossistemas pela exposio por fontes ambientais ao frmaco interferente

endcrino estrognico 17 -etinilestradiol.

2.2 - Objetivos especficos:

- Explicitar as tcnicas laboratoriais utilizadas para identificao qumica

e caracterizao do potencial estrognico do 17 -etinilestradiol em matrizes

ambientais aquticas.

- Mostrar as concentraes encontradas para a referida substancia em

matrizes aquticas relatadas em estudos cientficos.

3 - METODOLOGIA

Foi utilizada a reviso da literatura cientifica como ferramenta

metodolgica para o desenvolvimento deste trabalho.

Foram pesquisadas publicaes em revistas cientificas, livros, teses e

monografias nas bases de dados ISI Web of knowledge e Google Acadmico,

com resultados at

As palavras chave usadas foram: etinilestradiol, sade humana,

interferente endcrino, sade animal, esgoto, rio, concentrao ambiental,

exposio ambiental e seus correspondentes em lngua inglesa

A escolha das publicaes utilizadas foi feita mediante disponibilidade da

publicao completa para consulta e tambm pela analise do material obtido.

26

4 RESULTADOS E DISCUSSO

Utilizando a base de dados ISI Web of Knowledge e os descritores

especificados no captulo 3 em lngua inglesa, foi possvel montar os quadros 5

e 6 abaixo, com os resultados da pesquisa bibliogrfica. Foi possvel notar que

no se obteve resultados com a interseco de descritores em lngua

portuguesa utilizando essa base de dados.

Quadro 5 Resultados obtidos da busca bibliogrfica na base ISI Web of Knowledge utilizando diferentes descritores

Descritores Usados Nmero de publicaes encontradas

Ethinylestradiol + river + environmetal

concentration

36

Ethinylestradiol + Endocrine Disruptor +

Environmental concentration

23

Ethinylestradiol + Environmental exposure +

Human Health

6

Ethinylestradiol + Environmental exposure +

environmetal concentration

10

Ethinylestradiol + river + human health 5

Ethinylestradiol + animal health + wastewater 2

Ethinylestradiol + environmetal concentration

+ animal health

1

environmetal exposure + Ethinylestradiol

+river

19

Ethinylestradiol + river + wastewater 52

Ethinylestradiol + wastewater + environmetal

concentration

41

Combinaes em lngua portuguesa anlogas

s que usaram descritores os em lngua

inglesa

0

27

Quadro 6 Ano em que foram publicados os artigos cientficos encontrados

Ano da Publicao Resultados

2005 14

2006 17

2007 23

2008 21

2009 25

2010 31

2011 34

2012 30

Observando os dados obtidos nos quadros 5 e 6, possvel notar que a

maior parte das 195 publicaes obtidas est relacionada a deteco desse

estrognio em rios ou em esgotos (sobretudo domsticos), e que foram

encontradas relativamente poucas publicaes relacionando as exposies

ambientais ao 17 -etinilestradiol efeitos na sade animal e humana. Alm

disto, foi observado uma tendncia de crescimento do nmero de publicaes

ao longo dos anos na srie 2005-2012, com exceo dos ano de 2008 e 2012.

No que tange ao contedo das publicaes e na presena dessa

substncia nos compartimentos ambientais, foi possvel observar que o 17 -

etinilestradiol um frmaco largamente difundido no ambiente, tendo entrada

contnua nas matrizes aquticas atravs de efluentes da indstria

farmacutica/farmoqumica e pelo esgoto humano, lanado sem tratamento ou

com tratamento convencional no totalmente eficaz para remover essa

substncia (Ternes et al, 1999), e com isso permitindo sua difuso nas guas

superficiais, subterrneas e at mesmo na gua de consumo humano (Stumpf

et al., 1999).

Essa substncia pode ser encontrada inclusive em chorumes de aterros

sanitrios (Behnisch et al., 2001), em sedimentos marinhos (Lai et al., 2000) e

28

no lodo de estaes de tratamento de efluente utilizado na agricultura, podendo

promover uma contaminao do solo (Ternes et al., 2002).

Existem trabalhos mostrando a presena do frmaco at mesmo em

mangues, como o estudo de Froehner et al.(2011), ao qual encontrou

concentraes de 129.75 +/- 3.89 ng.g-1 em amostras de sedimento do mangue

Itacorubi, em Santa Catarina-Brasil.

Embora o uso do 17 -etinilestradiol como fator de crescimento na

criao de animais (sobretudo gado) seja ilegal em muitos pases, estudos

mostram que essa forma de contaminao dos ambientes aquticos no pode

ser descartada (Matthiessen et al., 2006).

Restringindo a ateno aos estudos que pesquisaram essa substncia

em ambientes aquticos, foi observado, ao ser analisado o quadro 5

(concentraes encontradas de 17 -etinilestradiol em diferentes matrizes e

locais no Brasil) e o quadro 6 (Concentraes relatadas de 17 -Etinilestradiol

em matrizes aquticas no mundo, adaptado de Ferreira, 2008) que essa

substncia est presente em concentraes na faixa de ng.lP-1P .

Entre os diversos estudos, possvel destacar o de Gerolin, 2008, em

que foi encontrada uma alta concentrao do frmaco tanto na gua dos rios

que so utilizados para obter a gua de beber quanto tambm nesta ultima.

Naquele estudo, foi relatada uma deficiente remoo do 17 -

etinilestradiol na estao de tratamento de gua, ao qual a eficincia de

remoo na estao de Sumar foi de 41% e na de Campinas foi de 38%.

J no estudo de Ternes et al.,1999, a Estao de Tratamento de

Efluentes (ETE) da PENHA-RJ as taxas de remoo para o frmaco foram de

64% e 78% no filtro biolgico e no sistema de lodos ativados, respectivamente.

29

Quadro 7: Concentraes encontradas de 17 -etinilestradiol em diferentes matrizes e locais no Brasil

Matriz Local Concentrao Relatada

Referencia

gua Potavel

Campinas e Sumar

SP

275 e 472, ng.L-

1 respectivamente

Gerolin E.R.

(2008)

gua de Rio Campinas e Sumar

SP

444 e 758 ng.L-1

respectivamente

Gerolin E.R.

(2008)

Esgoto

Domstico

ETE Penha RJ 5 ng.L-1 Ternes et al.

(1999)

gua Potavel Seropdica RJ No detectado Kuster et al.

(2009)

gua Potvel So Luiz MA No detectado Verbinnen et

al. ( 2010 )

gua de Rio Rios Paraba do Sul,

Maca, Guandu,

Lagoa Rodrigo de

Freitas e Lagoa De

Jacarepagu RJ -

Brasil

No Detectado

ou abaixo do

limite de

quantificao

Kuster et al.

(2009)

Quadro 8 : Concentraes relatadas de 17 -Etinilestradiol em matrizes aquticas no mundo.

Local Concentrao Referncia

ETE(s) da Noruega, Sucia,

Finlndia, Pases Baixos,

Blgica, Alemanha, Frana e

Sua

1,1 ng.L-1 Johnson et al.(2005)

ETE Alemanha 1,5 ng.L-1 Pawlowski et al.

30

(2004)

Local Concentrao Referncia

ETE Frana 4,9 a 7,1 ng.L-1 para

afluente e 2,7-4,5

ng.L-1 para efluente

tratado

Cargout et al.(2004)

ETE Alemanha Efluente tratado: 0,1

a 8,9 ng.L-1

Kuch e Ballschmitter

(2001)

guas Superficiais - EUA 73 ng.L-1 Kolpin et al. (2002)

guas Superficiais e gua

Potvel Alemanha

gua superficial :

0,10 a 5,1 ng.L-1

gua potvel: 0,15 a

0,50 ng.L-1

Kuch e Ballschmitter

(2001)

guas superficiais - Frana 1,1 a 2,9 ng.L-1 Cargout et al.(2004)

Fonte: adaptado de FERREIRA, 2008

Em relao aos efeitos provocados pelo 17 -etinilestradiol, relatado a

este composto um alto potencial estrognico in vitro (Beck et al., 2006), com

potncia e estabilidade em gua superior aos estrognios naturais (Snyder et

al., 1999).

apontado que essa substncia, em conjunto com os hormnios

naturais, geraria a maior parte da atividade estrognica em efluentes de ETE

no Reino Unido (Desbrow et al., 1998) e que seria o mais potente interferente

endcrino para peixes (Jurgens et al., 2002)

Alguns estudos, como o de Purdom et al., 1994, mostram que, na

concentrao de 0,1 ng.L-1, o 17-etinilestradiol seria capaz de estimular a

expresso da vitelogenina em peixes, j na faixa de concentrao de 0,1 a 15

ng.L-1 poderia interferir na diferenciao sexual e que na faixa de concentrao

de 2 a 10 ng.L-1 haveria indcios de prejuzo a fecundidade.

31

O efeito de exposies crnicas ao 17-etinilestradiol, em concentrao

de 5 ng.L-1 tambm poderia trazer prejuzos na fecundidade da prole dos

peixes (Nash et al., 2004)

A descrio de efeitos em animais relatados na literatura causados pela

exposio ao 17-etinilestradiol est contida no quadro 7 (Principais efeitos do

17 -etinilestradiol em diferentes espcies animais, adaptado de Bila,2005).

Muitos estudos mostram efeitos aditivos e sinrgicos envolvendo essa

substncia, resultando em um aumento da atividade estrognica, o que poderia

tornar ainda mais preocupante a presena do 17-etinilestradiol no ambiente.

relatado efeito aditivo entre o 17-etinilestradiol e 17-estradiol em

ensaio in vitro YES (Chen et al., 2007) e em mistura de substncias contendo

17-estradiol, 17-etinilestradiol, nonilfenol, octilfenol e bisfenol A em ensaio in

vivo de induo de vitelogenina em peixes machos (Brian et al., 2005).

J os efeitos sinrgicos so relatados, em teste YES, na combinao

das substncias 17-estradiol, 17-etinilestradiol, nonilfenol e bisfenol A (Chen

et al., 2007)

Quadro 9 Principais Efeitos do 17 -etinilestradiol em diferentes espcies animais

Ao Espcie Fonte

Estimulao de

Vitelogenina

Peixes de gua salgada

e gua doce (Danio rerio,

Pimephales promelas,

Cyprinodon varlegatus)

Schmid et al.,

2002,Rose et al., 2002

Folmar et al., 2002

Aumento da Mortalidade

da espcie

Peixe de gua Doce

(Pimephales promelas)

Schmid et al., 2002

Diminuio da

reproduo

Peixe de gua Doce

(Pomatoschistus

Robinson et al., 2002

32

minutus)

Ao Espcie Fonte

Retardo do crescimento

e diminuio da

reproduo

Ratos Machos (Rattus

norvegicus)

Vosges et al., 2008

Alterao da proporo

entre sexos

Peixe de gua Doce

(Pimephales promelas)

Parrot e Blunt, 2005

Infertilidade e Reduo

da Fecundidade

Peixe de gua doce

(Danio rerio)

Nash et al., 2004

Fonte: Adaptado de Bila, 2005

Ao se observar as concentraes da substncia relatadas na literatura,

como as mostradas nos quadros 5 e 6 e nos achados de Purdom et al., 1994,

possivel levantar fortes suspeitas de que o 17 -etinilestradiol possa

desenvolver efeitos reprodutivos adversos na biota (sobretudo em espcies de

peixes) presentes nessas matrizes aquticas .

Em relao ao estabelecimento de concentraes de exposio segura

dessa substncia, ainda no h um consenso.

A Agncia Ambiental da Inglaterra e Gales, em uma reviso bibliogrfica

sobre os estrognios naturais e o 17 -etinilestradiol, concluiu que a

concentrao prevista em que no se observariam efeitos (PNEC) desse

estrognio na biota marinha e de gua doce seria 0,1 g.L-1 (Young et al.,

2004).

H estudos recentes nessa rea, sendo possvel destacar o de Caldwell

et al., 2008, ao qual, a partir de reviso de dados de concentrao em que no

se observa efeitos reprodutivos de 26 espcies em 39 publicaes, concluiu

que a PNEC para esse estrognio sinttico seria de 0,35 g.L-1.

33

Em relao aos desfechos associados a exposio humana 17 -

etinilestradiol por fontes ambientais, estes ainda no esto totalmente

elucidados. As principais suspeitas so: infertilidade masculina (Vosges et al.,

2008) e distrbios de crescimento em crianas (Andersson et al., 1999).

Os Grupos mais suscetveis a exposio seriam os pr-adolescentes

masculinos (cuja produo endgena de estrognios situada em 0,5 g.kg-

1.dia-1 , segundo Vosges et al., 2008) e as mulheres ps menopausa

(Andersson et al., 1999, Klein et al., 1996 e Vosges et al., 2008).

Estudos de avaliao de risco a sade humana para 17 -etinilestradiol

de fontes ambientais, concluem que as concentraes seriam insuficientes

para produzir danos sade humana (Cao et al., 2010 ; Webb et al., 2003 ;

Caldwell et al., 2009 ).

No entanto, questionvel o efeito aditivo dessa substncia com outras

substncias estrognicas no ambiente e a contribuio dessas em uma

exposio crnica e precoce (Vosges et al., 2008).

possvel questionar tambm o contexto das reas estudadas, uma vez

que esses estudos relatam condies de pases desenvolvidos, ao qual grande

parte dos domiclios possui esgotamento sanitrio adequado, diferindo da

inexistncia ou precariedade das condies de saneamento presentes e

possvel contaminao das guas superficiais usadas para abastacimento

pblico de agua em diversas cidades de pases subdesenvolvidos ou em

desenvolvimento

34

5 - CONCLUSO

Frente ao panorama abordado ao longo deste trabalho, foram

observados os riscos envolvidos na exposio ambiental ao interferente

endcrino estrognico 17 -Etinilestradiol.

Foi possvel notar que os efeitos das exposies ambientais ao 17 -

etinilestradiol esto relacionados hermafroditizao de espcies macho,

diminuio da fecundidade e fertilidade e ao aparecimento de tumores ou

doenas em tecidos reprodutivos (Bila, 2005).

Alm disto, tambm foi explicitado que a associao entre a exposio

ambiental ao 17 -Etinilestradiol e seus efeitos decorrentes apresentada com

mais dados e evidncias para os efeitos nos ecossistemas que nos efeitos a

sade humana, embora hajam questionamentos a respeito da contribuio

desse potente estrgeno artificial em conjunto com outras substncias

estrognicas presentes na vida moderna, em um cenrio de exposio crnica

e em doses dirias baixas (Vosges et al., 2008).

Diferentes metodologias analticas foram desenvolvidas para avaliar a

atividade estrognica (ensaios in vitro, como o ensaio YES e E-screen, e

ensaios in vivo, como os ensaios de mensurao da vitelogenina em peixes) e

para mensurar as concentraes especficas (principalmente por metodologias

cromatogrficas e por ELISA monoclonal) do 17 -Etinilestradiol em diferentes

matrizes ambientais, sobretudo aquticas, sendo detectadas em concentraes

na faixa de ng.lP-1P .

Desta forma, entre as solues possveis para este problema, possvel

destacar:

a) Elaborao de uma Campanha de comunicao dos riscos sobre a

exposio a substncias interferentes endcrinas populao, envolvendo a

imprensa, as diferentes esferas de governo e movimentos sociais/ambientais,

estimulando tambm o consumo racional dos medicamentos (incluindo

35

medicamentos anticoncepcionais orais) pela populao e a prescrio

adequada do profissional mdico.

b) Fiscalizao, por parte de organismos de vigilncia ambiental e sanitria, da

disposio segura dos medicamentos, seguindo as legislaes vigentes

c) Atuao governamental, com plano de metas e prazos definidos, exigindo

das empresas pblicas ou privadas de gua e saneamento, a expanso da

rede da cobertura do tratamento de esgoto e produo/distribuio de gua de

consumo humano nas cidades, e apoio tcnico a instalaes sanitrias

adequadas nas reas rurais.

e) Incentivo governamental e privado pesquisa de novos tratamentos e

otimizao dos sistemas atuais de tratamento de guas e efluentes sanitrios

f) Estmulo reutilizao da gua (gua de reuso).

g) Reviso Peridica da Portaria do Ministrio da Sade 2914/2011, norma que

dispe sobre os procedimentos de controle e de vigilncia da qualidade da

gua para consumo humano e seu padro de potabilidade, e da Resoluo

CONAMA 430/2011, que Dispe sobre as condies e padres de lanamento

de efluentes em corpos hdricos receptores, visando incluir concentraes

mximas permitidas na gua potvel e nos efluentes tratados para substncias

estrognicas que j tenham seus valores de referncia para exposio segura

documentados na literatura cientifica

36

6 - REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

AGUILAR, A., BORRELL, A. Abnormally High Poly chlorinated Biphenyl

Levels in Striped Dolphins (Steneua Coeruleoalba) Affected by the 1990-

1992.

Mediterranean Epizootic. The Science Total Environmental, v. 154, pp. 237-247, 1994.

ALLEN, E.; DOISY, E. A. An Ovarian Hormone: Preliminary Report On Its

Localization, Extraction And Partial Purification, And Action In Test Animals.

JAMA: The Journal of the American Medical Association, v. 81, n. 10, p. 819-821, 1923.

ANDERSSON, A. M.; SKAKKEBAEK, N. E. Exposure to exogenous

estrogens in food: possible impact on human development and health.

European Journal of Endocrinology / European Federation of Endocrine Societies, v. 140, n. 6, p. 477-485, 1999. ANECK-HAHN, N. H. et al. Impaired Semen Quality Associated With

Environmental DDT Exposure in Young Men Living in a Malaria Area in the

Limpopo Province, South Africa. Journal of Andrology, v. 28, n. 3, p. 423434, 2007.

AHMED, S. The immune system as a potential target for environmental

estrogens (endocrine disrupters): a new emerging field. Toxicology, v. 150, n. 13, p. 191-206, 2000.

BARONTI, C. . Monitoring Natural and Synthetic Estrogens at Activated

Sludge Sewage Treatment Plants and in a Receiving River. Water Environmental Science Technology, v. 34, n. 24, p. 5059-5066, 2000. BECK, I. C., et al. Analysis of Estrogenic Activity in Coastal Surface Waters

of the Baltic Sea Using the Yeast Estrogen Screen. Chemosphere, v. 63, pp. 18701878, 2006

BEHNISCH, P. A. et al. Estrogenic and Dioxin-Like Potency in each step of

a Controlled Landfill Leachate Treatment Plant in Japan. Chemosphere, v. 43, pp. 977-984, 2001

37

BERNE, R. M.; KOEPPEN; STANTON, B. A. Berne & Levy physiology. Philadelphia, PA: Mosby/Elsevier, 2010

BIRKETT, J. W., LESTER, J. N., Endocrine Disrupter in Wastewater and Sludge Treatment Process, CRC Press LLC, Florida, 2003. BILA, D. M., Degradao e Remoo da Atividade Estrognica do Desregulador Endcrino 17-Estradiol pelo Processo de Ozonizao, Tese de Doutorado, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2005.

BILA, D. M,; DEZOTTI, M.; Desreguladores Endcrinos no Meio Ambiente:

Efeitos e Consequncias, Quimica Nova, 30 (3), 651-666, 2007. BITMAN, J. et al. Estrogenic Activity of o, p-DDT in the Mammalian Uterus

and Avian Oviduct. Science, v. 162, pp. 371-372, 1968. BOGI, C. et al. Endocrine Effects of Environmental Pollution on Xenopus

laevis and Rana temporaria. Environmental Research, v. 93, pp. 195201. 2003

BRASIL. Lei n 9.605, de 12 de fevereiro de 1998. Dispe sobre as sanes penais e administrativas derivadas de condutas e atividades

lesivas ao meio ambiente, e d outras providncias. Disponvel

em http://www.planalto.gov.br/ccivil_03/leis/l9605.htm, acessado em

20/06/2012.

BRASIL. Lei n 12.305, de 2 de agosto de 2010. Institui a Poltica Nacional de Resduos Slidos; altera a Lei n 9.605, de 12 de fevereiro de 1998; e

d outras providncias. Disponvel em

http://www.planalto.gov.br/ccivil_03/_ato2007-2010/2010/lei/l12305.htm ,

acessado em 20/06/2012

BRASIL. Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA). Resoluo RDC n 306, de 7 de dezembro de 2004. Dispe sobre o Regulamento Tcnico para o gerenciamento de resduos de servios de sade.

Disponvel em www4.anvisa.gov.br/base/visadoc/CP/CP%5B20735-1-

0%5D.PDF, acessado em 20/06/2012.

BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio

Ambiente, CONAMA. Resoluo CONAMA n 358, de 29 de abril de 2005. Dispe sobre o tratamento e a disposio final dos resduos dos servios

38

de sade e d outras providncias. Disponvel em

www.mma.gov.br/port/conama/res/res05/res35805.pdf, acessado em

20/06/2012.

BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. Conselho Nacional do Meio

Ambiente, CONAMA. Resoluo CONAMA n 430, de 13 de maio de 2011. Dispe sobre as condies e padres de lanamento de efluentes,

complementa e altera a Resoluo no 357, de 17 de maro de 2005, do

Conselho Nacional do Meio Ambiente. Disponvel em

www.mma.gov.br/port/conama/legiabre.cfm?codlegi=646, acessado em

20/06/2012.

BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria 2914, de 12 de dezembro de 2011. Dispe sobre os procedimentos de controle e de vigilncia da qualidade da

gua para consumo humano e seu padro de potabilidade. Disponvel em

bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/gm/.../prt2914_12_12_2011.html ,

acessado em 20/06/2012.

BRIAN, J. V. et al. Accurate prediction of the response of freshwater fish to

a mixture of estrogenic chemicals. Environmental Health Perspectives, v. 113, n. 6, p. 721-728, 2005.

BROSSA et al. Application of on-line solid-phase extraction-gas

chromatography-mass spectrometry to the determination of endocrine

disruptors in water samples. Journal of Chromatography A, v. 963, n. 1-2, p. 287-294, 2002.

BRZOZOWSKI, A. M. et al. Molecular basis of agonism and antagonism in

the oestrogen receptor. Nature, v. 389, n. 6652, p. 753-758, 1997. CALDWELL, D. J. et al. Derivation of an Aquatic Predicted No-Effect

Concentration for the Synthetic Hormone, 17-Ethinyl Estradiol.

Environmental Science Technology, v. 42, n. 19, p. 7046-7054, 2008. CALDWELL, D. J. et al. An Assessment of Potential Exposure and Risk

from Estrogens in Drinking Water. Environmental Health Perspectives, v. 118, n. 3, p. 338-344, 2009.

CAO, Q.; YU, Q.; CONNELL, D. W. Fate simulation and risk assessment of

endocrine disrupting chemicals in a reservoir receiving recycled

39

wastewater. The Science of the Total Environment, v. 408, n. 24, p. 6243-6250, 2010.

CARGOUT, M., et al. Assessment of River Contamination by Estrogenic

Compounds in Paris rea (France). Science of the Total Environmental, v. 324, pp. 55-66, 2004.

CARLSEN, E. et al. Evidence for decreasing quality of semen during past

50 years. BMJ (Clinical Research Ed.), v. 305, n. 6854, p. 609-613, 1992. CARSON, R. Silent Spring. Book Club edition ed. [s.l.] HOUGHTON MIFFLIN HARCOURT, 1962.

CHASAN-TABER, L. et al. Prospective study of oral contraceptives and

hypertension among women in the United States. Circulation, v. 94, n. 3, p. 483-489, 1996.

CHEN, P.-J. et al. Biological assessments of a mixture of endocrine

disruptors at environmentally relevant concentrations in water following

UV/H2O2 oxidation. The Science of the Total Environment, v. 376, n. 1-3, p. 18-26, 2007.

CHRISTENSEN, F. M. Pharmaceuticals in the Environment: A Human

Risk? Regulatory Toxicology and Pharmacology, v. 28, n. 3, p. 212-221, 1998.

COLBORN, T.; DUMANOSKI, D.; MEYERS, J. P. Our Stolen Future: Are We Threatening Our Fertility, Intelligence, and Survival? - A Scientific Detective Story. [S.l.] Plume, 1997. COLEMAN, H. M. et al. Rapid loss of estrogenicity of steroid estrogens by

UVA photolysis and photocatalysis over an immobilised titanium dioxide

catalyst. Water Research, v. 38, n. 14-15, p. 3233-3240, 2004. NATIONAL RESEARCH COUNCIL. Risk Assessment in the Federal Government:Managing the Process Working Papers. Washington, D.C.: The National Academies Press, 1983.

COMMITTEE ON TOXICITY, ECOTOXICITY AND THE ENVIRONMENT,

(CSTEE), 1999. Human and Wildlife Health Effects of Endocrine Disrupting Chemicals, with Emphasis on Wildlife and on Ecotoxicology Test Methods.

40

DASCENZO, G. et al. Fate of natural estrogen conjugates in municipal

sewage transport and treatment facilities. Science of The Total Environment, v. 302, n. 13, p. 199-209, 2003. DALTON, R. B. Frogs Put in the Gender Blender by Americas Favourite

Herbicide. Nature, v. 416, pp.665-666, 2002 DAVIS, D. L. et al. Medical hypothesis: xenoestrogens as preventable

causes of breast cancer. Environmental Health Perspectives, v. 101, n. 5, p. 372-377, 1993.

DESBROW, C. et al. Identification of Estrogenic Chemicals in STW

Effluent. 1. Chemical Fractionation and in Vitro Biological Screening.

Environmental Science Technology, v. 32, n. 11, p. 1549-1558, 1998. DE JAGER, C. et al. Reduced seminal parameters associated with

environmental DDT exposure and p,p-DDE concentrations in men in

Chiapas, Mexico: a cross-sectional study. Journal of andrology, v. 27, n. 1, p. 1627, 2006.

EVANS, R. M. The steroid and thyroid hormone receptor superfamily.

Science v. 240, n. 4854, p. 889-895, 1988. FARRE, M. et al. Evaluation of commercial immunoassays for the detection

of estrogens in water by comparison with high-performance liquid

chromatography tandem mass spectrometry HPLC-MS/MS (QqQ).

Analytical and Bioanalytical Chemistry, v. 385, n. 6, p. 1001-1011, 2006. FERNANDEZ, M. A. et al. Ocorrncia de Imposex em Thais Haemastoma:

Possveis Evidncias e Contaminao Ambiental Por Compostos

Organotnicos no Rio de Janeiro e em Fortaleza, Brasil. Caderno de Sade Pblica, v.18 (2), p.463-476, 2002. FERNANDEZ, S. V.; RUSSO, J. Estrogen and Xenoestrogens in Breast

Cancer. Toxicologic pathology, v. 38, n. 1, p. 110-122, 2010. FOLMAR, L. C. et al. Comparative Estrogenicity of Estradiol, Ethynyl

Estradiol and Diethylstilbestrol in an in vivo, Male Sheepshead Minnow

(Cyprinodon variegatus), Vitellogenin Bioassay. Aquatic Toxicology, v. 49, pp. 77-88, 2000

41

FOLMAR, L. C. et al. A comparison of the estrogenic potencies of estradiol,

ethynylestradiol, diethylstilbestrol, nonylphenol and methoxychlor in vivo

and in vitro. Aquatic Toxicology, v. 60, n. 1-2, p. 101-110, 2002. FOTHERBY, K. Clinical experience and pharmacological effects of an oral

contraceptive containing 20 micrograms oestrogen. Contraception, v. 46, n. 5, p. 477488, 1992.

FREITAS, Carlos Machado de. Avaliao de riscos como ferramenta para

a vigilncia ambiental em Sade. Informaes Epidemiolgicas do Sus, Braslia, v. 11, n. 2002 .

FROEHNER, S. et al. Occurrence of Sexual Hormones in Sediments of

Mangrove in Brazil. Water, Air, & Soil Pollution, v. 219, n. 1-4, p. 591-599, 12 2011.

FRY, D. M. e TONNE, C. K. DDT Induced Feminization of Gull Embryos.

Science, v. 213, pp. 922-924, 1981 FRY, D. M. Reproductive Effects in Birds Exposed to Pesticides and

Industrial

Chemicals. Environmental Health Perspecttives,v. 103(Suppl 7), pp. 165-171, 1995

FUNASA Fundao Nacional da Sade. Textos de Epidemiologia para Vigilncia Ambiental em Sade. Braslia, Ministrio da Sade, Fundao Nacional de Sade, 2002.

GAIDO, K. W. et al. Evaluation of chemicals with endocrine modulating

activity in a yeast-based steroid hormone receptor gene transcription assay.

Toxicology and Applied Pharmacology, v. 143, n. 1, p. 205-212, 1997. GAGN, F. et al. Evaluation of Estrogenic Effects of Municipal Effluents to

the Freshwater Mussel Elliptio Complanata. Comparative Biochemistry and Physiology Part C. v. 128, pp. 213-225, 2001 GEROLIN, E.R. Ocorrncia e remoo de disruptores endcrinos em guas utilizadas para abastecimento publico de campinas em Sumar SP . 2008. tese de doutorado, Universidade Estadual de Campinas, 2008

42

GOEBELSMANN, U. 1986. Pharmacokinetics of contraceptive steroids in

humans. Pp. 67-111 in Contraceptive Steroids: Pharmacology and Safety, A. T. Gregoire and R. T. Blye, eds. New York: Plenum Press GOLDENTHAL, E. I. A compilation of LD50 values in newborn and adult

animals. Toxicology and Applied Pharmacology, v. 18, n. 1, p. 185-207, 1971.

GUILLETE,L. J. J. et al. Reduction in Penis Size and Plasma Testosterone

Concentrations in Juvenile Alligators Living in a Contaminated

Environment. General and Comparative Endocrinology, v. 101, pp. 32-42, 1996

GUILLETTE, L. J. J. et al. Plasma Steroid Concentrations and Male Phallus

Size in Juvenile Alligators from Seven Florida Lakes. General and Comparative Endocrinology, v. 116, pp. 356372, 1999 HARDMAN J.G., LIMBIRD L.E.,Goodman and Gilman's The pharmacological basis of therapeutics, 10th ed., 2005. McGraw-Hill, New York

HARTMANN, S.; LACORN, M.; STEINHART, H. Natural occurrence of

steroid hormones in food. Food Chemistry, v. 62, n. 1, p. 7-20, 1998. HERBST, A. L.; ULFELDER, H.; POSKANZER, D. C. Adenocarcinoma of

the vagina. Association of maternal stilbestrol therapy with tumor

appearance in young women. The New England Journal of Medicine, v. 284, n. 15, p. 878-881, 1971.

HEUMAN, R. et al. Effects of postmenopausal ethinylestradiol treatment on

gallbladder bile. Maturitas, v. 2, n. 1, p. 69-72, 1980. HODGE, H. C.; STERNER, J. H. Tabulation of Toxicity Classes. American Industrial Hygiene Association Quarterly, v. 10, n. 4, p. 93-96, 1949. INTERNATIONAL ASSOCIATION FOR RESEARCH ON CANCER (IARC).

IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans Volume 100A (2012) - A Review of Human Carcinogens: Pharmaceuticals

INTERNATIONAL ASSOCIATION FOR RESEARCH ON CANCER (IARC).

IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to

43

Humans Volume 91 (2007) - Combined Estrogen-Progestogen Contraceptives and Combined Estrogen-Progestogen Menopausal Therapy

IRWIN, L. K., GRAY, S., OBERDRSTER, E. Vitellogenin Induction in

Painted Turtle, Chrysemys Picta, as a Biomarker of Exposure to

Environmental Levels of Estradiol. Aquatic Toxicology, v. 55, pp. 49-60, 2001

JOHNSON, A. .; BELFROID, A.; DI CORCIA, A. Estimating steroid

oestrogen inputs into activated

sludge treatment works and observations on their removal from the effluent. Science of The Total Environment, v. 256, n. 23, p. 163-173, 2000.

JOHNSON, A. C. et al. Comparing Steroid Estrogen, and Nonylphenol

Content Across a Range of European Sewage Plants with Different

Treatment and Management Practices. Water Research, v. 39, pp. 47-58, 2005.

JRGENS, M. D. et al. The potential for estradiol and ethinylestradiol

degradation in english rivers. Environmental Toxicology and Chemistry, v. 21, n. 3, p. 480488, 2002.

KANARKOWSKI, R. et al. Pharmacokinetics of single and multiple doses of

ethinyl estradiol and levonorgestrel in relation to smoking. Clinical Pharmacology and Therapeutics, v. 43, n. 1, p. 23-31, 1988. KAVLOCK, R. J. et al. Research needs for the risk assessment of health

and environmental effects of endocrine disruptors: a report of the U.S.

EPA-sponsored workshop. p. 715-740, 1996. KLEIN, K. O. et al. A longitudinal assessment of hormonal and physical

alterations during normal puberty in boys. II. Estrogen levels as determined

by an ultrasensitive bioassay. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, v. 81, n. 9, p. 3203-3207, 1996. KOLPIN, D. W., et al. Pharmaceuticals, Hormones, and Other Organic

Wastewater Contaminants in U.S. Streams, 1999-2000: A National

Reconnaissance. Environmental Science and Technology, v. 36, n. 6, pp. 1202-1211, 2002.

44

KORACH, K. S.; MCLACHLAN, J. A. Techniques for detection of

estrogenicity. Environmental Health Perspectives, v. 103, n. Suppl 7, p. 5-8, 1995.

KRNER, W. et al. Validation and application of a rapid in vitro assay for

assessing the estrogenic potency of halogenated phenolic chemicals.

Chemosphere, v. 37, n. 9-12, p. 2395-2407, 1998. KUCH, H. M., BALLSCHMITER, K. Determination of Endocrine-Disrupting

Phenolic Compounds and Estrogens in Surface and Drinking Water by

HRGC-(NCI)-MS in the Picogram per Liter Range. Environmental Science and Technology, v. 35, n. 15, pp. 3201-3206, 2001. KUSTER, M. et al. Analysis of phytoestrogens, progestogens and

estrogens in environmental waters from Rio de Janeiro (Brazil).

Environment International, v. 35, n. 7, p. 997-1003, 2009. LAI, K. M. et al. Binding of Waterborne Steroid Estrogens to Solid Phases

in River and Estuarine Systems. Environmental Science Technology, v. 34, n. 18, p. 3890-3894, 2000.

LEWINGTON, S. et al. Age-specific relevance of usual blood pressure to

vascular mortality: a meta-analysis of individual data for one million adults

in 61 prospective studies. Lancet, v. 360, n. 9349, p. 1903-1913, 2002. MARKEY, C. M., et al.,Endocrine Disruptors: From Wingspread to

Environmental Developmental Biology. Journal Steroids Biochemistry &

Molecular Biology, v. 1802, pp. 1-10. 2003

MATTHIESSEN, P. et al. Contamination of headwater streams in the

United Kingdom by oestrogenic hormones from livestock farms. Science of The Total Environment, v. 367, n. 23, p. 616-630, 2006. MECHOULAM, R.; BRUEGGEMEIER, R. W.; DENLINGER, D. L.

Estrogens in insects. Cellular and Molecular Life Sciences, v. 40, n. 9, p.

942-944, 1984.

MILNES, M. R. et al. Plasma Steroid Concentrations in Relation to Size and

Age in Juvenile Alligators From Two Florida Lakes. Comparative Biochemistry and Physiology Part A, v. 131 pp. 923930, 2002

45

NASH, J. P. et al. Long-term exposure to environmental concentrations of

the pharmaceutical ethynylestradiol caus