Post on 22-Jan-2018
ANTICUERPOS
COMPOSICIÓN QUÍMICA Y CARGA ELECTROSTÁTICA
GLUCOPROTEÍNAS CATIÓNICAS (+)
g-globulinas b-globulinas
Ánodo
(+)
Cátodo
(-)
α1 α2 β1 β2 g
Albúminas Globulinas
INMUNOGLOBULINAS
Estructura de las Inmunoglobulinas
Cadenas pesadas (H) y livianas (L)
Puentes disulfuro
Región en bisagra
Bucles
Región Fab y región Fc
Regiones constantes y variables de cadenas H y L
Regiones hipervariables y sitios de unión de Ag
Cadenas pesadas
(H)
Cadenas livianas
(L)
N terminal
C terminal
g μ a ε d
k lPuentes
disulfuro
“Bucle”
Región en
bisagra
C terminal
Fragmentos Fab
Papaína
Fragmento FcHidratos de carbono
Fijación del
complemento
Unión al antígeno
H
L
HN terminal
H
L
N terminal
C terminal
VH
VL
CL
CH1
CH2
CH3
Región
VARIABLE
Región
CONSTANTE
Sitio de unión a Ag o
PARATOPE
Segmentos
HIPERVARIABLES
VARIACIÓN EN LOS DOMINIOS SEGÚN LA CLASE DE Ig
Ig G Ig MIg A
Ig D
Ig E
Estructura
pentamérica
de la Ig M
Estructura
dimérica de la Ig A
Cadena
J
Cadena
J
Componente
secretor
Formación de la IgA2
Estructura del Anticuerpo:
• En la región V hay:
– 3 CDR: Regiones Determinantes de la Complementariedad. Son hipervariables.
– 4 FR: Regiones de armazón o entramado.
• El PARATOPE es una porción de las CDR (Regiones Fab).
• Las regiones Fc intervienen en la fijación del complemento o la unión a tejidos.
Linfocitos B
• Los Linfocitos B seleccionados se
diferencian a:
• Células plasmáticas
• correceptores CD19/CD21 y CD81
• Células de Memoria
• CD40
Inmunoglobulinas
Conc
suero
Vida
media
Fijac
Comp
Placent
a
Mucosas Alergia
s
Estruc
IgG 13.5 21 1 a 3 + + - - Mono
IgM 1.5 10 3+ - - - Pentá
mero
IgA 3.55 6 - - + - Dímero
IgD 0.03 3 - - - - Mono
IgE 0.00005 2 - - - + mono
IgGFijación de Complemento
IgG12+
Atraviesa placenta y es una Opsonina
IgG21+
IgG33+
Atraviesa placenta y es una Opsonina
IgG4Negativo
Atraviesa placenta
Clases de Inmunoglobulinas: características
gg-bg-bbgMovimiento
electroforético
7S8S11S19S7SCoeficiente de
sedimentación
180.000200.000360.000900.000180.000
monómeromonómerodímero (monómero)
pentámeromonómeroEstructura
Ig DIg EIg AIg MIg G
PM (Da)
IgDIgEIgAIgMIgG
k-lk-lk-lk-lk-lCadena liviana
Bazo
G. linfáticosVías digestivas y respiratorias
Vías digestivas y respiratorias
Bazo
G. linfáticos
Méd. ósea
Bazo
G. linfáticos
Méd. ósea
Principal lugar
de síntesis
13119112,9% Hidratos de
Carbono
deamgCadena pesada
RUMIANTES EQUINO
PORCINO
CARNÍVOROS
SUERO Ig G Ig G Ig G
CALOSTRO Ig G Ig G Ig G
LECHE Ig G Ig A Ig A
DISTRIBUCIÓN EN SUERO, CALOSTRO Y LECHE
Inmunoglobulinas predominantes
VALENCIA DE UNIÓN AL ANTÍGENO
(cantidad de sitios de unión )
IgG IgM IgA IgE IgD
2 5 (10) 2 ó 4 2 2
UNIÓN a Ag
Setiembre 2005
RESPUESTA PRIMARIA Y SECUNDARIA
Setiembre 2005
Principales características respuesta primaria y secundaria
Componente Respuesta primaria Respuesta secundaria
Células B
Tiempo respuesta
Duración respuesta
Isotipo anticuerpo
Afinidad del anticerpo
No preactivadas
(vírgenes)
Generalmente 5-10 días
Corta
Predominante IgM
Baja
Memoria
Generalmente 1-5 días
Largo periodo
Predominante IgG
Alta
Producción de Ig en respuesta primaria y secundaria
Concentración
Ig en suero Total
Total
10 15 20 25 / 3 10 15 30
IgG
IgG
IgMIgMAg Ag
Latencia Latencia
días
PRIMARIA SECUNDARIA
Latencia Larga Corta
Síntesis Ig Lenta Rápida
Persistencia AC Baja Alta
Ig predominante Ig M Ig G
Título máximo AC Bajo Alto
Dosis de inmunógeno
necesaria
Alta Baja
Funciones efectoras
IgG IgM IgA IgE IgDAglutinación + +++ + - -
Precipitación +++ + + + -
Fijación de
complemento+ +++ - - -
Neutralización + ++ + - -
Opsonización ++ +++ - - -
Citotoxicidad Ac
dependiente++ - - + -
Inmunidad en
mucosas- - ++ - -
Traspaso por
placenta++ - - - -
Célula Plasmática
NÚCLEO
Cadena H
Péptido
Adicional
Vesícula secretora
o de Russell
Hemimolécula
Carbohidratos
Aparato
de Golgi
Líquido
Extracelular
R.E.R.
Ribosoma Cadena L
Síntesis de inmunoglobulinas
SÍNTESIS DE Ig A secretoria (Ig AS)
Luz intestinal
Célula plasmática
submucosaIg A dimérica
Receptor de Ig
polimérica (pIgR)
Ig AsComponente secretor
Enterocito
Degradación de Ig
21-30 díasVIDA MEDIA
70%Sistema retículoendotelial
(S.R.E.)
30%Hepática
DEGRADACIÓN
Clases de anticuerpos: IgG:
• Monómero
• Dos zonas de unión al antígeno (dos fragmentos Fab)
• Cuatro subclases (Ig1, Ig2, Ig3, Ig4)
• La Ig más abundante en el plasma (80%).
• Bajo Pm Difunde bien a otros líquidos corporales y atraviesa la barrera placentaria.
Clases de anticuerpos: IgG:• Neutraliza toxinas
bacterianas
• Activa el complemento
• Sensibiliza y agrega microorganismos para estimular su fagocitosis (opsonización).
• Activa el complemento.
• Es la Ig más importante en la respuesta inmunitaria secundaria (linfocitos B2 de memoria).
Subclase de IgG
nº de puentes S-S
concentración en suero (en
mg/ml)
opsoninas
Activación del
complemento
IgG1 2 9 +++ ++
IgG2 4 3 +/- +
IgG3 11 1 +++ +++
IgG4 4 0.5 - -
http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_05.htm
Algunos datos sobre las subclases de IgG
Clases de anticuerpos: IgM• Elevado Pm (“macroglobulina”)
• Pentámero de Ig
• Los 5 monómeros están unidos por puentes disulfuro y la “proteína j”
• 10 fragmentos fab para unión al Ag
• Confinada al espacio intravascular
• Eficaz en la aglutinación y citolisis de microorganismos
• Respuesta inmunitaria primaria: Papel predominante (aparición temprana)
Clases de anticuerpos: IgADos subclases:
• IgA1: Monomérica. En plasma (poco abundante).
• IgA2: Dimérica. Predominante en secreciones externas (saliva, lagrimal, nasal, leche materna, etc).
• Monomeros unidos por puentes disulfuro y proteína j
• Tiene otra cadena polipeptídica denominada COMPONENTE SECRETOR (sIgA), producida por las células de las mucosas que la protege de la proteolisis enzimática y facilita su transporte.
Clases de anticuerpos: IgA
• Inhibe la adherencia de los microorganismos a la superficie de las células de las mucosas, por lo que es una primera línea de defensa frente a las infecciones.
• También es importante en el procesamiento de los antígenos alimentarios en el intestino.
Clases de anticuerpos: IgD
• Monómero
• Poco abundante en plasma
• Se encuentra en la superficie de algunos linfocitos B sanguíneos
Clases de anticuerpos: IgE• Monómero
• Baja concentración en plasma.
• Se encuentra en la superficie de los mastocitos y los basófilos
• Es la mediadora de las reacciones de hipersensibilidad inmediata (alergias).
• Confiere protección local frente a ciertos patógenos grandes, como helmintos: sirve para reclutar células plasmáticas a través de una reacción de inflamación aguda.
• Está aumentada en infecciones parasitarias.
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
• Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
• Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot
• Inmunocitoquímica
• Inmunofluorescencia
• Inmunoprecipitación
• ELISA/EIA/RIA
• Cromatografía de inmunoafinidad
• Microscopia electrónica (morfología)
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA
Estructura de los anticuerpos
Tipos de Anticuerpos
Anticuerpos monoclonales
1. Inmunización del ratón2. Extracción del bazo3. Preparación de
hibridomas (mieloma+B)
4. Selección de los clones5. Producción y uso de
anticuerpos
Anticuerpos policlonales
1. Inmunización del conejo2. Recuerdos3. Extracción de sangre4. Preparación del suero5. Purificación del anticuerpo
(métodos opcionales)6. Caracterización del
antisuero
Anticuerpos policlonales