Seminario biomolecular corregido

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    25-Jul-2015
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1. Rippei Hayashi, Nono Takeuchi and Takuya Ueda POR: Sara Manuela Ocampo Ramrez Paola Andrea Parra Estrada 2. NLS Nuclear Location Signal Specific aminoacidic sequences Nucleus Cytoplasm Nuclear pore 1. Carrrier prontein 2. Cytoplasmatic protein 3. NLS 4. Nuclear protein 1 2 3 44 3. IMPORTIN Receptor and carrier proteins Has two subunits Importin- Importin- 4. Lewins cell 5. NRF- 2 GA-binding protein / E4 Transciption factor 1 Multimeric transcsiption factor NRF-2 NRF-2 6. NRF- 2 FUNCTION: Regulates lineage-specific genes, cytosolic ribosomal proteins, genes that control cellular growth, regulates the entire antioxidant system and mitochondria-related genes. ACTIVATION: Regulated by nuclear transport upon neural activation. FUNCTION: Regulates lineage-specific genes, cytosolic ribosomal proteins, genes that control cellular growth, regulates the entire antioxidant system and mitochondria-related genes. ACTIVATION: Regulated by nuclear transport upon neural activation. 7. Cultivo de clulas y transfeccin Resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos multicelulares Resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos multicelulares Introduccin de DNA externo con un vector de expresin. Introduccin de DNA externo con un vector de expresin. 8. Construcciones de un plsmido Formacin de un DNA extracromosmico independiente al DNA cromosmico Formacin de un DNA extracromosmico independiente al DNA cromosmico Fuente: google images 9. Inmunofluorescencia Reaccin antgeno-anticuerpo hecha visible por la incorporacin de un colorante fluorescente al anticuerpo. Exposicin a luz ultravioleta. Reaccin antgeno-anticuerpo hecha visible por la incorporacin de un colorante fluorescente al anticuerpo. Exposicin a luz ultravioleta. Tcnica de anticuerpos fluorescentes 10. Protenas recombinantes Protenas producidas en el laboratorio mediante ingeniera gentica en clulas distintas a las que se producen en la naturaleza. Protenas producidas en el laboratorio mediante ingeniera gentica en clulas distintas a las que se producen en la naturaleza. 11. Ensayos in vitro de importacin nuclear Tcnica para realizar un determinado experimento en un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera de un organismo vivo. Tcnica para realizar un determinado experimento en un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera de un organismo vivo. 12. Ensayos de unin de protenas Tcnica usada para detectar interaccin entre dos protenas. Activa un gen reportero o un factor de transcripcin sobre la secuencia regulatoria UAS (Upstream activating sequence), localizada al inicio del promotor. Tcnica usada para detectar interaccin entre dos protenas. Activa un gen reportero o un factor de transcripcin sobre la secuencia regulatoria UAS (Upstream activating sequence), localizada al inicio del promotor. 13. TCNICAS DE SEPARACIN DE MOLCULAS SEGN LA MOVILIDAD DE STAS La separacin puede realizarse En papel o en acetato de celulosa Matriz porosa: gel Disolucin: libre La separacin obedece a la carga elctrica y masa. La separacin obedece a la carga elctrica y masa. 14. Ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas Tcnica de inmunoensayo de tipo heterognea en la cual un antgeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algn otro tipo 15. Tipo sndwichTipo sndwich 16. Tipo indirectoTipo indirecto 17. Tipo competitivoTipo competitivo 18. La importina-La importina-:: mediamedia la importacin nuclearla importacin nuclear del complejo NRF-2del complejo NRF-2 NcleoNcleo NRF-2 NRF-2 NRF-2 NRF-2 recluta a la NRF-2. Dominios Ets pueden dirigir la NRF-2 al ncleo. Hiptesis: Transporte de NRF-2 mediada por dominios Ets de NRF-2 y eficiencia aumentada por unin al NRF-2 19. Importada al ncleo de manera eficiente. Esto no facilit significativamente la importacin nuclear 20. Se form un heterodmero Se requieren para importacin nuclear 21. Dependan de esto para la importacin nuclear, al igual que la importacin del complejo NRF-2-GFP:NRF-2 NRF-2 media importacin nuclear de complejos NRF-2 22. Ran Q69L Forma mutante de Ran GTPasa Disocia molculas de carga de la importina- -relacionada, por lo que estas median la importacin nuclear. Rch1-IBB Rch1-IBB y una importina-, se unen y enmascaran la importina-. El dominio Rch1-IBB inhibi la importacin del complejo nuclear. 23. IdentificacinIdentificacin del NLSs deldel NLSs del NRF-2NRF-2 y ely el NRF-2NRF-2 24. NRF-2 que normalmente es dependiente del NRF-2 , in vivo fue localizada en el ncleo estando sola. 25. Lo anterior gracias a la mutante NRF-2 Y409E, que no se une al NRF-2 , todava se puede mover en el ncleo. 26. Inhibe la localizacin nucleas de NRF-2 , lo que apoya la idea de que esta va al ncleo a travs del dominio Ets. 27. La delecin del aminocido 310, caus un aumento sorprendente en la localizacin citoslica 28. Se hizo localizar en el ncleo. Esenciales para la funcin de la NLS 29. Representantes de cada subtipo de importina-La importina- y Ran no pueden activar la importacin nuclear en ausencia de la importina-. Rch1, NPI-1, Qip1 activan la de NRF-2-GFP:NRF-2. El complejo importina-: media importacin nuclear de la NRF-2 30. Los carriles 1 y 4 A y el carril 1y2 B indican que la NRF-2 y la NRF-2 se unen a Rch-1: importina facilitando su importacin nuclear respectivamente. Los carriles 6 A y el carril 4 B indican que hay mutaciones en la importacin nuclear de NRF-2 y la NRF-2 si se utiliza una variedad de tipo salvaje. 31. Observacin de la importacin nuclear de NRF-2 y NRF-2 utilizando protenas mutantes incapaces de unir Rch1-importina . Las mutaciones no inhibieron las interacciones del complejo NRF-2. 32. RELACION DE LA IMPORTACION ENTRE EL NUCLEO Y EL CITOPLASMA 33. 1 2 3 4 1. Interaccin entre Rch1 y NRF-2B no se unen por si solas. 2. Utilizacin de Rch1 con IBB murado tiene mas afinidad por NRF-2B. 3. Utilizacin de Rch1 con una residuo mutado inhibe la unin del NRF-2B. 4. Unin eficiente entre Rch1 completo y NRF-2 34. Do HJ, Song H, Yang HM, Kim DK, Kim NH, Kim JH, et al. Hu W, Philips AS, Kwok JC, Eisbacher M, Chong BH Its appeared that the nuclear import of NRF-2 alone is not an efficient event in vivo as compared to that of the NRF-2 complex. It is unlikely that the residual of NRF-2 inhibits nuclear import, the deletion had no effect on its subcellular localization. Therefore, it is probable that the nuclear-localization capability of the NRF-2 Ets is not as strong as the NLS of NRF-2. Desagree 35. Learned to develop ourselves with article both in English and in Spanish language. Learned to relate what we saw in class what we learned in Article. We put into practice the knowledge learned about reading the electrophoresis. Learned the importance of being specific and clear in the study of items. 36. NFR-2 NRF-2 NRF-2 ADN Dominio de ACT. Dominio ETs NLSIMPORTINA ncleoTransporta complejo protena Subunidad Subunidad Prot. citoslicas Genes ribosmicos celular 37. GONZLEZ RABANAL, Jos Manuel; CALVO PRIETO, Jess; BARROS PUGA, Marta. Gestin de la funcin administrativa del servicio Gallego de salud. Vol 3. Editorial Mad, S.L. 2006. Pag 364. GMEZ, Susana; GUTIERREZ, Maria Fernanda. La inmunologa en el diagnstico clnico. Primera edicin. Centro editorial Javeriano. 1994. Pag 76. MARTINEZ SNCHEZ, Lina Mara. Biologa molecular. 2. ed. Medelln: UPB. Fac. de Medicina, 2006. Pag 121-127; 148-155.