Análisis espectrofotométricos

1. Características de una onda electromagnética

La radiación electromagnética es una onda, caracterizada por sus propiedades:

Longitud de onda λ Frecuencia ν Amplitud A

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2. Ley de Lambert y Beer

La cantidad de luz absorbida depende de: El tipo de sustancia por la que atraviesa la

luz La distancia que recorre la luz La concentración de la sustancia

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2. Ley de Lambert y Beer

Transmitancia ó % transmitancia% T = (I/Io) 100

Absorbancia: se relaciona con la Transmitancia por medio de la ecuación:

A = -log T = -log(I/Io) = log(Io/I)A = C d

donde: : Coeficiente de absortividadC: Concentración de la sustancia en análisisd: distancia que recorre la luz

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3. Espectro electromagnético

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4. Efectos de la radiación UV y visible sobre las moléculas

La radiación UV y visible al actuar sobre las moléculas puede producir excitaciones electrónicas sobre determinados grupos funcionales, que en el caso de la luz visible se llaman grupos cromóforos, porque son responsables del color.

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Grupos cromóforos: son grupos funcionales responsables de la absorción de la radiaciónPrincipalmente son:

Metales de transición Dobles y triples enlaces C-C, sistemas aromáticos, grupo carbonilo,

imino -C=N, nitro y enlaces C-Y donde Y es un átomo con pares libres.

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Grupo hemo de la hemoglobina Minerales

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Grupos auxocromos: son grupos sustituyentes del cromóforo y alteran la λmax. Son auxocromos los halógenos, grupos metilo, grupos hidroxi, alcohoxi, amino.Efecto de los grupos auxocromos sobre los cromóforos:• Desplazamiento batocrómico.- La absorción del cromóforo se desplaza hacia mayores longitudes de onda•Desplazamiento hipsocrómico.- La absorción del cromóforo se desplaza hacia menores longitudes de onda•Efecto hipsocrómico.- la banda presenta mayor intensidad •Efecto hipocrómico.- la banda presenta menor intensidad

Grupos cromóforos:• Grupos orgánicos con dobles enlaces conjugados• Grupos orgánicos con estructuras aromáticas

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Β-caroteno Antocianos

• Absorbe una parte de la energía del espectro visible la sustancia aparece del color complementario

5. Espectro visible

Un colorante puede absorber la luz visible y el color que aparece es el color que se refleja. Por eso un colorante que absorbe la luz roja, aparecerá de color azul.

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Espectrofotómetro

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Espectrofotómetro

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7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría

Se debe realizar primero el espectro característico de la sustancia, para encontrar la longitud de máxima aborbancia ().

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7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría

Una vez determinada max se procede a trabajar a esta longitud de onda para construir la curva de calibración de la sustancia, preparando diferentes concentraciones de la misma.

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7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría

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Curva de calibración

k = d

8. Estructura de algunos colorantes

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Azul de metileno

Anaranjado de metilo

8. Estructura de algunos colorantes

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Rojo de metilo

Rojo congo

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