Haplotipos del gen de la β-globina en pacientes

con anemia falciforme y su incidencia en la

República Dominicana.

Carlos Fdo Vergara Castillo Esp, MSc, PhD(c)

Este proyecto fue desarrollado en el

Instituto de Innovación en

Biotecnología e Industria (IIBI)

Hace parte de las investigaciones financiadas por el Ministerio de Educación Superior, Ciencia y

Tecnología, a través del FONDOCYT.

Herencia de la anemia falciforme

http://www.google.com.do/imgres?q=sickle+cell+anemia&hl

Estructura proteica de la hemoglobina

http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/posters/chromosome/hbb.shtml

http://www.britannica.com/EBchecked/media/160694/The-distribution-of-malaria-and-the-distribution-of-sickle-cell

Numero de pacientes muestreados por ciudad.

Cuidad Hospitales No. pacientes muestreados

Santo Domingo Luis E. Aybar 144

Robert Reid Cabral

Santiago José María Cabral y Báez 61

La Vega Murillo King 19

San Francisco de Macorís San Vicente de Paul 14

Higuey Nuestra Señora de la Altagracia 11

Total 249

Fase de laboratorio

▫ Toma de muestra y Extracción de ADN

Tarjetas Watman FTA

Frotis bucal.

• Análisis SNP basado en PCR.

AA

TA

AA

TA

517pb

267pb

Gel de agarosa al 2%. Confirmación de diagnostico de pacientes falcémicos y portadores. Se observa claramente la separación de los fragmentos de 517 pb y de 267 pb, lo que permite identificar individuos homocigotos y heterocigotos para la mutación.

Restricción enzimáticaDirección Posición

Enzimas de restricción Secuencias de marcadores

HindII 5' a ε 5' TCTCTGTTTGATGACAAATTC f 18652–18672

5' AGTCATTGGTCAAGGCTGACC r 19391–19411

XmnI 5' a Gγ 5' AACTGTTGCTTTATAGGATTTT f 33862–33883

5' AGGAGCTTATTGATAACCTCAGAC r 34495–34518

HindIII dentro de IVS II Gγ 5' AGTGCTGCAAGAAGAACAACTACC f 35677–35700

5' CTCTGCATCATGGGCAGTGAGCTC r 35981–36004

HindIII dentro de IVS II Aγ 5' ATGCTGCTAATGCTTCATTAC f 40357–40377

5' TCATGTGTGATCTCTCAGCAG r 40971–40991

HindII 3' a ψβ 5' GTACTCATACTTTAAGTCCTAACT f 49559–49582

5' TAAGCAAGATTATTTCTGGTCTCT r 50448–50471

AvaII dentro de IVS II β 5' GTGGTCTACCCTTGGACCCAGAGG f 62416–62439

5' TTCGTCTGTTTCCCATTCTAAACT r 62720–62743

Mapa de restriccion de cluster del gen de

B-globina

Ubicación de las seis regiones de restricción para cuatro enzimas del cluster del gen de la beta-globina.ddd

Gel de agarosa al 2% donde se muestra el corte enzimático para un grupo de pacientes con HindII para ε.

Haplotipo Configuración de corte

Árabe-indio (+ + + - + +)

Benín (- - - - + +)

Camerún (+ + + - + +)

Senegal (- + + - + +)

Bantú-CAR (- - + - - +)

Bantú A1 (- - - - - +)

Bantú A2 (+ - - - - +)

Bantú A2a (+ - - - - -)

Bantú A4 (- + + - + -)

Bantú A6 (- - + + - +)

Sitios de restricción

Haplotipos ε γG γA ψβ 3´ψβ 5´β N %

Árabe-indio + + + - + + 8 7.55

Benín - - - - + + 31 29.2

Bantú-CAR - - + - - + 1 0.943

Bantú A1 - - - - - + 18 17.0

Bantú A2 + - - - - + 8 7.55

Bantú A4 - + + - + - 1 0.943

Bantú A6 - - + + - + 3 2.83

Camerún - - + + + + 7 6.6

Senegal - + + - + + 9 8.49

Atípico 13 - - + - + + 20 18.9

Definición de haplotipos y frecuencias haplotípicas significativas

1 2 3 4 5

1 0.00000

2 0.10803 0.00000

3 -0.03019 0.01633 0.00000

4 0.00331 -0.01276 -0.05820 0.00000

5 0.02321 0.09831 -0.06108 0.04715 0.00000

Cálculo FST poblacional.

1 2 3 4 5

1 -0.00000

2 0.11432 -0.00000

3 0 0.01646 -0.00000

4 0.00331 0 0 -0.00000

5 0.02348 0.10348 0 0.04829 -0.00000

1 2 3 4 5

1 0.00000

2 0.12111 0.00000

3 0 0.01660 0.00000

4 0.00332 0 0 0.00000

5 0.02376 0.10902 0 0.04948 0.00000

Distancia genética de Reynolds, Weir y Cockerham

Distancia genética de Slatkin.

Representación haplotípica en el continente africano (Tomado de Rodriguez y col, 1998)

Haplotipos

Población N Bantú-CAR Benín Senegal Camerún Otros

Rep. Dominicana1 207 31* 31 9 7 0.0

Afro-Brasileños2 20 60.0 10.0 30.0 0.0 0.0

Salvador3 42 54.8 45.2 0.0 0.0 0.0

Salvador 4 160 48.2 45.6 0.6 0.0 5.6

Canadá5 61 11.5 49.2 13.1 13.1 13.1

U.S.5 371 19.1 55.3 15.1 3.5 7.0

Jamaica6 244 9.8 75.4 2.9 2.1 9.8

Surinam5 77 29.9 53.2 2.6 2.6 11.7

Guadalupe7 252 11.5 77.0 8.7 2.8 0.0

Cuba8 198 41.0 51.0 8.0 0.0 0.0

México9 37 78.8 18.2 0.0 0.0 3.0

Venezuela10 176 32.4 51.1 14.2 2.3 0.0

Venezuela11 90 43.4 51.1 3.3 0.0 2.2

Venezuela12 42 50.0 35.7 2.4 0.0 11.9

Colombia13 92 55.5 34.8 4.3 5.4 0.0

Distribución de frecuencias haplotípicas en las Américas (Tomado de Cardoso y col, 2006).

A ustedes, por su amable atención