Ίρις Σπηλιοπούλου

Αναπληρώτρια Καθηγήτρια

Εργαστήριο Μικροβιολογίας

Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Πατρών

Micrococcaceae

• Planococcus (citreus, halobius)

• Micrococcus (luteus, lylae, varians, roseus, agilis, kristinae, nichinomyaensis, sedentarius, halobius)

• Rothia (Stomatococcus mucilaginosus)

• Staphylococcus : 38 είδη

Gram-θετικοί κόκκοι

Micrococcus Staphylococcus

Bacitracin (0.04U)

Gram (+) κόκκος

Καταλάση (+)

Staphylococcal Species

S. aureusS. intermediusS. hyicusS. schleiferi subsp. coagulans

S. saprophyticusS. cohnii subsp. cohnii S. cohnii subsp. urealyticumS. sciuri

(-) PYR broth hydrolysis (+)

S. captitusS. captitus subsp. urealyticus S. warneriS. homminis

S. caprae

S. epidermidisS. hyicus

(-) Alkaline phsophatase (+)

(-) Alkaline phsophatase (+)

S. schleiferi subsp. schleiferiS. simulans S. caprae

S. lugdunensis

S. haemolyticusS. simulansS. capitus subsp. urealyticusS. auricularis

S. xylosus

(-) Tube Coagulase (+)

(R) Polymyxin B (S)

(-) Voges-Proskauer (+)

(R) Novobiocin (S) (R) Novobiocin (S)

(-) b-glucosidase (+)

S. cohnii subsp. urealyticum

(-) Ornithine (+)

Ταυτοποίηση CNS με βάση την αντοχή τους σε αντιβιοτικά

Είδος Αντοχή σε

S. saprophyticus Novobiocin/ fosfomycin

S. cohnii/ S. xylosus Novobiocin/ lincomycin

S. sciuri Novobiocin/ lincomycin/ streptogramin A

Alexander Fleming1928

Βραβείο Nobel 1945

Πώς αποκτούν αντοχή στα αντιβιοτικά οι Σταφυλόκοκκοι;

Vancomycin, Teicoplanin

Quinolones

Penicillins

Cephalosporins

Monobactams

Carbapenems

Erythromycin (Macrolides)

Chloramphenicol

Clindamycin

Aminoglycosides:Gentamicin, TobramycinKanamycinAmikacin, Netilmicin

ΑντιβιόγραμμαΧημειοθεραπευτικά

Α: έλεγχος και αναφορά

Cefoxitin (30μg) (Oxacillin 1μg)Penicillin (10 units)

Erythromycin (15 μg)Clindamycin (2 μg)Fusidic acid (10 μg)Sulfamethoxazole- Trimethoprim (SXT: 1.25/23.75 μg)

B: έλεγχος και επιλεκτική αναφορά

Gentamicin (10 μg)Kanamycin (30 μg)Netilmicin (30 μg)Tobramycin (10 μg)Vancomycin (30 μg)Teicoplanin (30μg)Ciprofloxacin (5 μg)Rifampin (5 μg)Tetracycline (30 μg)Linezolid (30 μg)Quinupristin/dalfopristin (15 μg)

Ο: επί πλέον για καλλιέργειες ούρων

Norfloxacin (10 μg)Nitrofurantoin (300 μg)

Minimum inhibitory

concentration (MIC)

Minimum inhibitory concentration (MIC)

• E testOX

Μέθοδος των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ

1. Müller-Hinton agar: 4 mm, pH 7.2 7.4 ∼ σε RT

2. Εναιώρημα: 0.5 McFarland (1.5 X108 CFU/mL)

Στέλεχος αναφοράς: S. aureus ATCC 25923

Συχνότητα ελέγχου: μια φορά την εβδομάδα

Όταν αλλάζουμε κάποιο αντιδραστήριο

Επώαση 24 ώρες στους 350C

※ β-λακταμικά αντιβιοτικά

Ανθεκτικές στις -λακταμάσες

• Methicillin

• Oxacillin

• Cloxacillin

• Dicloxacillin

Σύνθεση κυτταρικού τοιχώματοςπολυμερισμός

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

τρανσπεπτιδάσες

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

5 gly

NAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAGNAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAGNAMA

L-ala

D-glu

L-lys

D-ala

D-ala

NAG

Οι β-λακτάμες μοιάζουν με το διμερές: D-ala-D-ala, συνδέονται με το ένζυμο, και αναστέλλουν τη γεφύρωση

Β-λακτάμη

PBP PBP

PBP

λυσίνες

Δομή της

κασέτας

SCCmec

διάμετρος (mm) Cefoxitin (30 g)

S. aureus/lugdunensis 19* 20**

CoNS 24* 25**

* Αναφέρεται ως oxacillin/methicillin-ανθεκτικό** Αναφέρεται ως oxacillin-ευαίσθητοCoNS, coagulase-negative staphylococciM100-S14 (M2, M7); Table M100-S14 (M2, M7); Table

2C2C

Έλεγχος αντοχής στην oxacillin με τη μέθοδο των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ

20-25mm: Latex test για την PBP2a

Staphylococcus - OxacillinMIC (µg/ml): Ε

ΜΕ ΑS. aureus 2 - 4CoNS 0.25 - 0.5

DD (mm): Ε ΜΕ ΑS. aureus 10 11-12 13CoNS 17 - 18

M100-S14 (M2, M7); Table 2CM100-S14 (M2, M7); Table 2C

38

25

17,2 17,814,7

2328 28

44 4549

36

4550,4

73

6468

64

73 73 74 75

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

MRSAMR-CNS

Συχνότητα απομόνωσης στελεχών MRS στο ΠΓΝΠ

S. aureus

Penicillin

[1950s]

Penicillin-resistant

S. aureus

Αντοχή στα αντιβιοτικά του S. aureus

Methicillin

[1970s]

Methicillin-resistant

S. aureus (MRSA)

Vancomycin-resistant

enterococci (VRE)

Vancomycin

[1990s]

[1997]

Vancomycin

intermediate-resistantS. aureus (VISA)

Vancomycin-

resistantS. aureus

Πώς δρουν τα γλυκοπεπτίδια;Κυτταρικό τοίχωμα σταφυλοκόκκων

R__D-ala

** * * *

N C C O

H O

CH3

Vancomycin

Αντοχή στα γλυκοπεπτίδια

M

L-ala

D-gln

X-NH2

D-ala

D-ala

GM

G

G

M

M

G

MG

GM

MG

M

L-ala

D-gln

X-NH2

D-ala

D-lactate or D-serine

G

γλυκοπεπτίδιο

Μειωμένη ευαισθησία στα γλυκοπεπτίδια

Vancomycin Intermediate S. aureus

• Μέθοδος των δίσκων:– Vancomycin: ≥ 15 mm ευαίσθητο

– Teicoplanin: ≥ 14 mm ευαίσθητο

• Etest: BHIA 200μL από 2 McF, 48 h επώαση– Vancomycin/teicoplanin: ≥ 8 μg/ml ανθεκτικό

– Teicoplanin: ≥ 12 μg/ml ανθεκτικό

• Πληθυσμιακή ανάλυση (100 μl από 2 McF)– Vancomycin: ≤ 2 (4) μg/ml ευαίσθητο ≥ 16 (32) μg/ml

ανθεκτικό

– Teicoplanin: ≤8 μg/ml ευαίσθητο ≥ 32 μg/ml ανθεκτικό

http://images.google.com/imgres?imgurl=www.sbrown.myip.org/deity/images/grim-reaper.jpg&imgrefurl=http://communities.msn.co.uk/Wiccapool&h=348&w=211&sz=10&tbnid=AoF-NWaPyxsJ:&tbnh=115&tbnw=70&prev=/images%3Fq%3Dgrim%2Breaper%26hl%3Den%26lr%3D%26ie%3DUTF-8%26oe%3DUTF-8

VISA

MIC=8μg/ml

Μάιος 1996: Ιαπωνία

Χρόνος εμφάνισης αντοχής σε Vancomycin και Linezolid

Vancomycin Linezolid

Πρώτη κλινική εφαρμογή 1956 1997

USFDA έγκριση 1958 2000

Πρώτοι ανθεκτικοί enterococci

1988 1998

Πρώτα VISA/GISA 1996 NA

Πρώτος ανθεκτικός S. aureus

2002 2001

Moellering – January 2003

3,76,5

13,3

02,8

6,4

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

2001 2002 2003

Μέση ευαισθησία (52)Αντοχή (38)

Μελέτη της αντοχής στα γλυκοπεπτίδια σε 1337 στελέχη σταφυλοκόκκων (Λάρισα, Πάτρα, Αθήνα).

Van-αρνητικά

Αντιβιοτικό Δράση Θέση σύνδεσηςAminoglycosides -κτόνο 30S, 50S

Tetracyclines -στατικό 30S

Chloramphenicol - στατικό 50S

Erythromycin - στατικό 50S

Clindamycin - στατικό 50S

Quinupristin/dalfopristin - κτόνο 50S

Linezolid - στατικό 50S

Αντιβιοτικό Δράση Θέση σύνδεσηςAminoglycosides -κτόνο 30S, 50S

Tetracyclines -στατικό 30S

Chloramphenicol - στατικό 50S

Erythromycin - στατικό 50S

Clindamycin - στατικό 50S

Quinupristin/dalfopristin - κτόνο 50S

Linezolid - στατικό 50S

Αναστολείς πρωτεϊνοσύνθεσης

50S

30S

αμινογλυκοσίδες

χλωραμφενικόλη

τετρακυκλίνες

χλωραμφενικόλη

μακρολίδες

μακρολίδες κλινταμυκίνη

αμινοξύ κωδικόνιο tRNA mRNA

streptogramins

Η Clarithromycin έχειMethoxy group

Macrolides: Erythromycin, Azithromycin, Clarithromycin

39

Μηχανισμός Γονίδιο Φαινότυπος Erythro Clinda

Αντλία εκροής msrA ΜS R S

Τροποποίηση ριβοσώματος

erm MLSB R S*

Τροποποίηση ριβοσώματος

erm MLSB R Rconstitutive

msrAmsrA = macrolide streptogramin resistance= macrolide streptogramin resistanceermerm = erythromycin ribosome methylase= erythromycin ribosome methylase

**επαγωγή για τη διάγνωση της αντοχήςεπαγωγή για τη διάγνωση της αντοχής

Staphylococcus spp. Erythromycin / Clindamycin

Επαγώγιμη αντοχή στην clindamycin (erm-mediated)

Δίσκος 2 g clindamycin15 mm - 26 mm από δίσκο 15 g erythromycin

“D Test” – θετική δοκιμασία

15 - 26 mm15 - 26 mm

“D Test” – αρνητικό

ΌΧΙ επαγωγή

(msrA-erythromycin resistance)

Aminoglycosides• Gentamicin

• Tobramycin• Kanamycin• Amikacin• Netilmicin• (Streptomycin)• (Neomycin)

AminoglycosidesΈτος ανακάλυψης

Προέλευση

Streptomycin

Neomycin

Kanamycin

Gentamicin

Tobramycin

Amikacin

Sisomicin

Dibekacin

Netilmicin

Micromonicin

Astromicin

Isepamicin

Arbekacin

1944

1949

1957

1963

1968

1972

1970

1971

1975

1975

1977

1978

1990

Streptomyces griseus

Streptomyces fradiae

Streptomyces kanamyceticus

Micromonospora purpurea

Streptomyces tenebrarius

Ημισυνθετικό παράγωγο Kanamycin A

Micromonospora inyoensis

Dideoxy παράγωγο Kanamycin B

N-ethyl παράγωγο Sisomicin

Micromonospora samamiensis

Micromonospora olivasterospora

παράγωγο Gentamicin B

παράγωγο Kanamycin B

Κύριοι φαινότυποι αντοχής σε αμινογλυκοσίδες και υπεύθυνα ένζυμα

Φαινότυπος Γονίδια ενζύμων

Gentamicin/kanamycin/ tobramycin/amikacin

aac-(6’)-Ie+aph (2’’)

Kanamycin aph(3’)-IIIa

Tobramycin/kanamycin/gentamicin/amikacin

ant (4’)-Ia

UNIVERSITY HOSPITAL OF PATRASDEPT. OF MICROBIOLOGYPROF. G. DIMITRACOPOULOSTEL. 0610-999665/663

PATIENT NAME : ------------- HOSP. WARD : INTENSIVE CARE UNIT NEWSPECIMEN TYPE : BLOODCULTURE BLOOD ORIGIN:COLLECT. DATE: 14/1/2007STRAIN NUMBER: ADM. DATE:MICROORGANISM IDENTIFIED: Staphylococcus epidermidis

Antibiotics Results MIC ug/ml

PENICILLIN Resistant >0.25

CEFOXITIN Resistant >128

NOVOBIOCINE SUSCEPTIBLE

ERYTHROMYCIN Resistant >32

CLINDAMYCIN SUSCEPTIBLE <0.06

GENTAMICIN SUSCEPTIBLE <0.06

NETILMICIN SUSCEPTIBLE <0.03

KANAMYCIN SUSCEPTIBLE <16

CIPROFLOXACIN SUSCEPTIBLE <0.06

FUSIDIC ACID Resistant >8

TRIMETHOPRIM/SULFAMETHOXAZOLE SUSCEPTIBLE <0.50

VANCOMYCIN SUSCEPTIBLE <4

The responsible of the Department

Strain resistant to all beta-lactams.

Γ. Δημητρακόπουλος

Ε. Πετεινάκη

Β. Χίνη

Α. Φωκά

Μ. Κατσικογιάννη

R.S.MattaR.S.MattaΝα δίνεις Ανώδυνο φως 1955Να δίνεις Ανώδυνο φως 1955