Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία...
60
Ίρις Σπηλιοπούλου Αναπληρώτρια Καθηγήτρια Εργαστήριο Μικροβιολογίας Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Πατρών
description
Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους: Σταφυλόκοκκοι. Ίρις Σπηλιοπούλου Αναπληρώτρια Καθηγήτρια Εργαστήριο Μικροβιολογίας Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Πατρών. Micrococcaceae. Planococcus (citreus, halobius) - PowerPoint PPT Presentation
Transcript of Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία...
Ίρις Σπηλιοπούλου
Αναπληρώτρια Καθηγήτρια
Εργαστήριο Μικροβιολογίας
Τμήμα Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Πατρών
Micrococcaceae
• Planococcus (citreus, halobius)
• Micrococcus (luteus, lylae, varians, roseus, agilis, kristinae, nichinomyaensis, sedentarius, halobius)
• Rothia (Stomatococcus mucilaginosus)
• Staphylococcus : 38 είδη
Gram-θετικοί κόκκοι
Micrococcus Staphylococcus
Bacitracin (0.04U)
Gram (+) κόκκος
Καταλάση (+)
Staphylococcal Species
S. aureusS. intermediusS. hyicusS. schleiferi subsp. coagulans
S. saprophyticusS. cohnii subsp. cohnii S. cohnii subsp. urealyticumS. sciuri
(-) PYR broth hydrolysis (+)
S. captitusS. captitus subsp. urealyticus S. warneriS. homminis
S. caprae
S. epidermidisS. hyicus
(-) Alkaline phsophatase (+)
(-) Alkaline phsophatase (+)
S. schleiferi subsp. schleiferiS. simulans S. caprae
S. lugdunensis
S. haemolyticusS. simulansS. capitus subsp. urealyticusS. auricularis
S. xylosus
(-) Tube Coagulase (+)
(R) Polymyxin B (S)
(-) Voges-Proskauer (+)
(R) Novobiocin (S) (R) Novobiocin (S)
(-) b-glucosidase (+)
S. cohnii subsp. urealyticum
(-) Ornithine (+)
Ταυτοποίηση CNS με βάση την αντοχή τους σε αντιβιοτικά
Είδος Αντοχή σε
S. saprophyticus Novobiocin/ fosfomycin
S. cohnii/ S. xylosus Novobiocin/ lincomycin
S. sciuri Novobiocin/ lincomycin/ streptogramin A
Alexander Fleming1928
Βραβείο Nobel 1945
Πώς αποκτούν αντοχή στα αντιβιοτικά οι Σταφυλόκοκκοι;
Vancomycin, Teicoplanin
Quinolones
Penicillins
Cephalosporins
Monobactams
Carbapenems
Erythromycin (Macrolides)
Chloramphenicol
Clindamycin
Aminoglycosides:Gentamicin, TobramycinKanamycinAmikacin, Netilmicin
ΑντιβιόγραμμαΧημειοθεραπευτικά
Α: έλεγχος και αναφορά
Cefoxitin (30μg) (Oxacillin 1μg)Penicillin (10 units)
Erythromycin (15 μg)Clindamycin (2 μg)Fusidic acid (10 μg)Sulfamethoxazole- Trimethoprim (SXT: 1.25/23.75 μg)
B: έλεγχος και επιλεκτική αναφορά
Gentamicin (10 μg)Kanamycin (30 μg)Netilmicin (30 μg)Tobramycin (10 μg)Vancomycin (30 μg)Teicoplanin (30μg)Ciprofloxacin (5 μg)Rifampin (5 μg)Tetracycline (30 μg)Linezolid (30 μg)Quinupristin/dalfopristin (15 μg)
Ο: επί πλέον για καλλιέργειες ούρων
Norfloxacin (10 μg)Nitrofurantoin (300 μg)
Minimum inhibitory
concentration (MIC)
Minimum inhibitory concentration (MIC)
• E testOX
Μέθοδος των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ
1. Müller-Hinton agar: 4 mm, pH 7.2 7.4 ∼ σε RT
2. Εναιώρημα: 0.5 McFarland (1.5 X108 CFU/mL)
Στέλεχος αναφοράς: S. aureus ATCC 25923
Συχνότητα ελέγχου: μια φορά την εβδομάδα
Όταν αλλάζουμε κάποιο αντιδραστήριο
Επώαση 24 ώρες στους 350C
※ β-λακταμικά αντιβιοτικά
Ανθεκτικές στις -λακταμάσες
• Methicillin
• Oxacillin
• Cloxacillin
• Dicloxacillin
Σύνθεση κυτταρικού τοιχώματοςπολυμερισμός
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
τρανσπεπτιδάσες
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
5 gly
NAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAGNAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAGNAMA
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
NAG
Οι β-λακτάμες μοιάζουν με το διμερές: D-ala-D-ala, συνδέονται με το ένζυμο, και αναστέλλουν τη γεφύρωση
Β-λακτάμη
PBP PBP
PBP
λυσίνες
Δομή της
κασέτας
SCCmec
διάμετρος (mm) Cefoxitin (30 g)
S. aureus/lugdunensis 19* 20**
CoNS 24* 25**
* Αναφέρεται ως oxacillin/methicillin-ανθεκτικό** Αναφέρεται ως oxacillin-ευαίσθητοCoNS, coagulase-negative staphylococciM100-S14 (M2, M7); Table M100-S14 (M2, M7); Table
2C2C
Έλεγχος αντοχής στην oxacillin με τη μέθοδο των δίσκων και διάχυσης σε άγαρ
20-25mm: Latex test για την PBP2a
Staphylococcus - OxacillinMIC (µg/ml): Ε
ΜΕ ΑS. aureus 2 - 4CoNS 0.25 - 0.5
DD (mm): Ε ΜΕ ΑS. aureus 10 11-12 13CoNS 17 - 18
M100-S14 (M2, M7); Table 2CM100-S14 (M2, M7); Table 2C
38
25
17,2 17,814,7
2328 28
44 4549
36
4550,4
73
6468
64
73 73 74 75
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
MRSAMR-CNS
Συχνότητα απομόνωσης στελεχών MRS στο ΠΓΝΠ
S. aureus
Penicillin
[1950s]
Penicillin-resistant
S. aureus
Αντοχή στα αντιβιοτικά του S. aureus
Methicillin
[1970s]
Methicillin-resistant
S. aureus (MRSA)
Vancomycin-resistant
enterococci (VRE)
Vancomycin
[1990s]
[1997]
Vancomycin
intermediate-resistantS. aureus (VISA)
Vancomycin-
resistantS. aureus
Πώς δρουν τα γλυκοπεπτίδια;Κυτταρικό τοίχωμα σταφυλοκόκκων
R__D-ala
** * * *
N C C O
H O
CH3
Vancomycin
Αντοχή στα γλυκοπεπτίδια
M
L-ala
D-gln
X-NH2
D-ala
D-ala
GM
G
G
M
M
G
MG
GM
MG
M
L-ala
D-gln
X-NH2
D-ala
D-lactate or D-serine
G
γλυκοπεπτίδιο
Μειωμένη ευαισθησία στα γλυκοπεπτίδια
Vancomycin Intermediate S. aureus
• Μέθοδος των δίσκων:– Vancomycin: ≥ 15 mm ευαίσθητο
– Teicoplanin: ≥ 14 mm ευαίσθητο
• Etest: BHIA 200μL από 2 McF, 48 h επώαση– Vancomycin/teicoplanin: ≥ 8 μg/ml ανθεκτικό
– Teicoplanin: ≥ 12 μg/ml ανθεκτικό
• Πληθυσμιακή ανάλυση (100 μl από 2 McF)– Vancomycin: ≤ 2 (4) μg/ml ευαίσθητο ≥ 16 (32) μg/ml
ανθεκτικό
– Teicoplanin: ≤8 μg/ml ευαίσθητο ≥ 32 μg/ml ανθεκτικό
VISA
MIC=8μg/ml
Μάιος 1996: Ιαπωνία
Χρόνος εμφάνισης αντοχής σε Vancomycin και Linezolid
Vancomycin Linezolid
Πρώτη κλινική εφαρμογή 1956 1997
USFDA έγκριση 1958 2000
Πρώτοι ανθεκτικοί enterococci
1988 1998
Πρώτα VISA/GISA 1996 NA
Πρώτος ανθεκτικός S. aureus
2002 2001
Moellering – January 2003
3,76,5
13,3
02,8
6,4
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
2001 2002 2003
Μέση ευαισθησία (52)Αντοχή (38)
Μελέτη της αντοχής στα γλυκοπεπτίδια σε 1337 στελέχη σταφυλοκόκκων (Λάρισα, Πάτρα, Αθήνα).
Van-αρνητικά
Αντιβιοτικό Δράση Θέση σύνδεσηςAminoglycosides -κτόνο 30S, 50S
Tetracyclines -στατικό 30S
Chloramphenicol - στατικό 50S
Erythromycin - στατικό 50S
Clindamycin - στατικό 50S
Quinupristin/dalfopristin - κτόνο 50S
Linezolid - στατικό 50S
Αντιβιοτικό Δράση Θέση σύνδεσηςAminoglycosides -κτόνο 30S, 50S
Tetracyclines -στατικό 30S
Chloramphenicol - στατικό 50S
Erythromycin - στατικό 50S
Clindamycin - στατικό 50S
Quinupristin/dalfopristin - κτόνο 50S
Linezolid - στατικό 50S
Αναστολείς πρωτεϊνοσύνθεσης
50S
30S
αμινογλυκοσίδες
χλωραμφενικόλη
τετρακυκλίνες
χλωραμφενικόλη
μακρολίδες
μακρολίδες κλινταμυκίνη
αμινοξύ κωδικόνιο tRNA mRNA
streptogramins
Η Clarithromycin έχειMethoxy group
Macrolides: Erythromycin, Azithromycin, Clarithromycin
39
Μηχανισμός Γονίδιο Φαινότυπος Erythro Clinda
Αντλία εκροής msrA ΜS R S
Τροποποίηση ριβοσώματος
erm MLSB R S*
Τροποποίηση ριβοσώματος
erm MLSB R Rconstitutive
msrAmsrA = macrolide streptogramin resistance= macrolide streptogramin resistanceermerm = erythromycin ribosome methylase= erythromycin ribosome methylase
**επαγωγή για τη διάγνωση της αντοχήςεπαγωγή για τη διάγνωση της αντοχής
Staphylococcus spp. Erythromycin / Clindamycin
Επαγώγιμη αντοχή στην clindamycin (erm-mediated)
Δίσκος 2 g clindamycin15 mm - 26 mm από δίσκο 15 g erythromycin
“D Test” – θετική δοκιμασία
15 - 26 mm15 - 26 mm
“D Test” – αρνητικό
ΌΧΙ επαγωγή
(msrA-erythromycin resistance)
Aminoglycosides• Gentamicin
• Tobramycin• Kanamycin• Amikacin• Netilmicin• (Streptomycin)• (Neomycin)
AminoglycosidesΈτος ανακάλυψης
Προέλευση
Streptomycin
Neomycin
Kanamycin
Gentamicin
Tobramycin
Amikacin
Sisomicin
Dibekacin
Netilmicin
Micromonicin
Astromicin
Isepamicin
Arbekacin
1944
1949
1957
1963
1968
1972
1970
1971
1975
1975
1977
1978
1990
Streptomyces griseus
Streptomyces fradiae
Streptomyces kanamyceticus
Micromonospora purpurea
Streptomyces tenebrarius
Ημισυνθετικό παράγωγο Kanamycin A
Micromonospora inyoensis
Dideoxy παράγωγο Kanamycin B
N-ethyl παράγωγο Sisomicin
Micromonospora samamiensis
Micromonospora olivasterospora
παράγωγο Gentamicin B
παράγωγο Kanamycin B
Κύριοι φαινότυποι αντοχής σε αμινογλυκοσίδες και υπεύθυνα ένζυμα
Φαινότυπος Γονίδια ενζύμων
Gentamicin/kanamycin/ tobramycin/amikacin
aac-(6’)-Ie+aph (2’’)
Kanamycin aph(3’)-IIIa
Tobramycin/kanamycin/gentamicin/amikacin
ant (4’)-Ia
UNIVERSITY HOSPITAL OF PATRASDEPT. OF MICROBIOLOGYPROF. G. DIMITRACOPOULOSTEL. 0610-999665/663
PATIENT NAME : ------------- HOSP. WARD : INTENSIVE CARE UNIT NEWSPECIMEN TYPE : BLOODCULTURE BLOOD ORIGIN:COLLECT. DATE: 14/1/2007STRAIN NUMBER: ADM. DATE:MICROORGANISM IDENTIFIED: Staphylococcus epidermidis
Antibiotics Results MIC ug/ml
PENICILLIN Resistant >0.25
CEFOXITIN Resistant >128
NOVOBIOCINE SUSCEPTIBLE
ERYTHROMYCIN Resistant >32
CLINDAMYCIN SUSCEPTIBLE <0.06
GENTAMICIN SUSCEPTIBLE <0.06
NETILMICIN SUSCEPTIBLE <0.03
KANAMYCIN SUSCEPTIBLE <16
CIPROFLOXACIN SUSCEPTIBLE <0.06
FUSIDIC ACID Resistant >8
TRIMETHOPRIM/SULFAMETHOXAZOLE SUSCEPTIBLE <0.50
VANCOMYCIN SUSCEPTIBLE <4
The responsible of the Department
Strain resistant to all beta-lactams.
Γ. Δημητρακόπουλος
Ε. Πετεινάκη
Β. Χίνη
Α. Φωκά
Μ. Κατσικογιάννη
R.S.MattaR.S.MattaΝα δίνεις Ανώδυνο φως 1955Να δίνεις Ανώδυνο φως 1955
