KOMPOSISI NUTRISI & AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI 4 VARIETAS TOMATRolina Zahhara Tambunan

MAGISTER ILMU PANGANUNIVERSITAS SUMATERA UTARA 2014

ABSTRAK0Sampel: 4 varietas tomat pekarangan rumah di

Portugis. 0Metoda: Teknik kromatografi0Komponen yang dianalisis :

, 1. Nutrisi makro

2. Antioksidan hidrofil

3. Antioksidan lipofilik

setiap profil gula dan asam lemak

vitamin C, fenolik, flavonol dan anthocyanin

tokoferol, -β karoten dan Likopen.

0Evaluasi aktivitas antioksidan melalui:

Pengurangan daya

inhibisi pemutihan -β karoten

inhibisi pembentukan

TBARS

Pencarian aktivitas DPPH

1. Varietas tomat bulat nilai EC50 ≤ 1,63 mg/mlsenyawa fenolik (fenolik 31.23 mg ClAE/g ekstrak,

flavonols 6.36 mg QE/g ekstrak, anthocyanin 3.45 mg ME / g ekstrak)

karotenoid ( -karoten β 0,51 mg/100 g dan likopen 9,49 mg/100 g)

HASIL EVALUASI menunjukkan tomat bulat memiliki aktivitas antioksidan paling kuat

• 1.44 mg/ 100 g

• 15.53%

• 3.18 g/ 100 g

• 3.42 g/ 100 g

FRUKTOSA GLUKOSA

tocopherols-linolenic αacid

2. Varietas tomat kuning

Tomat perkebunan timur laut Portugis berkontribusi sebagai sumber antioksidan.

mencegah penyakit kronis terkait

stres oksidatif, seperti kanker dan

penyakit arteri koroner.

BAHAN & METODA

Komposisi Antioksidan

Komposisi Antioksidan

Sistem HPLC

Barros, dkk (2010)

1. PROSEDUR PENETAPAN KANDUNGAN

Tocopherols

HPLC detektor fluoresen. eksitasi 290 nm emisi 330 nm

Kolom fase normal Polyamide II250 × 4.6 mm; pada 30ºC.

Fase gerak: n-hexane & ethyl acetate (70:30, v/v) Laju alir: 1 ml/min.

Perhitungan sesuai respon fluoresen C Tocopherol mg per 100 g sampel.

1. PROSEDUR PENETAPAN KANDUNGAN

Tocopherols

HPLC detektor fluoresen. eksitasi 290 nm emisi 330 nm

Kolom fase normal Polyamide II250 × 4.6 mm; pada 30ºC.

Fase gerak: n-hexane & ethyl acetate (70:30, v/v) Laju alir: 1 ml/min.

Perhitungan sesuai respon fluoresen C Tocopherol mg per 100 g sampel.

1. PROSEDUR PENETAPAN KANDUNGAN

Tocopherols

HPLC detektor fluoresen. eksitasi 290 nm emisi 330 nm

Kolom fase normal Polyamide II250 × 4.6 mm; pada 30ºC.

Fase gerak: n-hexane & ethyl acetate (70:30, v/v) Laju alir: 1 ml/min.

Perhitungan sesuai respon fluoresen C Tocopherol mg per 100 g sampel.

1. PROSEDUR PENETAPAN KANDUNGAN

Tocopherols

HPLC detektor fluoresen. eksitasi 290 nm emisi 330 nm

Kolom fase normal Polyamide II250 × 4.6 mm; pada 30ºC.

Fase gerak: n-hexane & ethyl acetate (70:30, v/v) Laju alir: 1 ml/min.

C Tocopherol dalam mg per 100 g sampel segar.

0Menggunakan 2,6-dichloroindophenol0Absorban spektrofotometer pada 515 nm0Perhitungan berdasarkan kurva kalibrasi asam L-

askorbat otentik (0.006-0.1 mg/ml), dinyatakan sebagai mg asam askorbat per 100 g berat segar.

2. Ascorbic acid

3. Carotenoids. -carotene dan lycopeneβ

Pengukuran absorban pada 453, 505, 645, dan 663 nm

Perhitungan:-β carotene (mg/100 ml) = 0.216 × A663 – 1.220 × A645 - 0.304 × A505 + 0.452 × A453;

lycopene (mg/100 ml) = − 0.0458 × A663 + 0.204 × A645 - 0.304 × A505 + 0.452 × A453,

Dinyatakan dalam mg per 100 g berat kering

4. Phenolics.

0Aduk bubuk kering halus (20 mesh; ~1g) dengan 50 ml metanol pada 25 ºC, 150 rpm selama 1 jam.

0Filtrasi dengan kertas Whatman No. 4. 0Residu diekstrak dengan penambahan metanol 50 ml.0Ekstrak dievaporasi pada 35ºC dibawah tekanan lebih

(rotary evaporator Büchi R- 210), 0Dilarutkan ulang pada metanol di 50 mg/ml0Disimpan pada 4 ºC untuk analisis fenolat dan

antioksidan.

0Ekstrak dikonsentrasikan pada 0.625 mg/ml (250 l) μdicampur dengan HCl 0.1% pada 95% ethanol (250

l) dan HCl 2% (4550 l). μ μ

0Setelah 15 menit absorben diukur pada 280, 360 and 520 nm.

0Absorban (A) pada 280 nm digunakan untuk mengestimasi kandungan fenolat, A360 nm digunakan untuk mengestimasi flavonols, dan A520 nm digunakan untuk mengestimasi anthocyanins (Mazza et al., 1999).

0Chlorogenic acid : untuk menghitung kurva standard (0.2-3.2 mM) dan hasil dinyakatakan dalam mg chlorogenic acid equivalents (ClAE) per g ekstrak.

0Quercetin: untuk menghitung standard kurva (0.2-3.2 mM) dan hasil dinyatakan dalam mg quercetin equivalents (QE) per g ekstrak.

0Malvidin 3-glucoside : untuk menghitung kurva standard (0.1-2.3 mM) dan hasil dinyatakan dalam mg malvidin 3-glucoside equivalents (ME) per g ekstrak.

Hasil dinyatakan dalam mg/ g esktrak

Aktivitas Antioksidan

ELX800 Microplate Reader (Bio-Tek)

Pinela dkk., 2011

0DPPH pemulungan radikal aktivitas.0ELX800 Microplate Reader (Bio-Tek).0Campuran reaksi dalam setiap satu dari 96 sumur terdiri

dari satu konsentrasi berbeda dari ekstrak (30 μl) dan larutan metanolat dengan air (80: 20 v/v, 270 μl) mengandung radikal DPPH (6 × 10-5 mol/l).

0Campuran didiamkan selama 60 menit di dalam gelap. 0Penurunan radikal DPPH adalah ditentukan dengan

mengukur penyerapan pada 515 nm (Pinela dkk., 2011).

1. DPPH radical-scavenging activity

0The radical scavenging activity (RSA) dihitung sebagai persentase perubahan warna DPPH menggunakan persamaan:

% RSA = [(ADPPH-AS)/ADPPH] × 100 AS: absorban larutan ketika ekstrak sampel ditambahkan

pada level tertentu, ADPPH: absorban larutan DPPH.

0Konsentrasi ekstrak: 50% aktivitas pemulungan radikal (EC50) dihitung dari grafik % RSA terhadap konsentrasi ekstraksi.

0Trolox sebagai standard.

0Konsentrasi berbeda ekstrak (0.5 ml) dicampur dengan buffer natrium fosfat (200 mmol/l, pH 6.6, 0.5 ml) dan kalium ferricyanide (1% w/v, 0.5 ml).

0Campuran diinkubasi di 50 ºC selama 20 menit, dan asam trikloroasetat (10% w/v, 0.5 ml) ditambahkan.

0Campuran (0.8 ml) dituangkan dalam 48-well, seperti juga air deionisasi (0.8 ml) dan feri klorida (0,1% w/v, 0.16 ml), dan absorbansi diukur pada 690 nm.

0Konsentrasi ekstrak yang menyediakan 0,5 absorbansi (EC50) dihitung dari grafik absorbansi di 690 nm terhadap konsentrasi ekstrak .

2. Reducing power

Trolox sebagai Standard

0 -carotene (2 mg) dilarutkan pada chloroform (10 ml). β02 mL dipipet ke labu.0Setelah klorofom diuapkan pada 40ºC keadaan vakum,

linoleic acid (40 mg), pengemulsi Tween 80 (400 mg), dan air distilasi (100 ml) ditambahkan ke labu dengan pengadukan yang kuat.

0Aliquots (4.8 ml) emulsi ini dipindahkan ke dalam tabung yang berbeda mengandung konsentrasi ekstrak berbeda (0.2 ml).

0Tabung diguncang dan diinkubasi di 50ºC dalam penangas air.

0Emulsi ditambahkan ke setiap tabung sesegera mungkin, absorban zero tie diukur di 470 nm.

3. Inhibition of -β carotene bleaching

0 Inhibisi pemutihan -Β karoten dihitung menggunakan persamaan berikut:

(konten -β karoten setelah 2jam uji /konten -βkaroten awal) x 100.

0Konsentrasi Ekstrak menyediakan aktivitas antioksidan 50% (EC50) dihitung dengan interpolasi dari grafik inhibisi pemutihan -β karoten terhadap konsentrasi ekstrak .

0Otak diperoleh dari porcine (Sus scrofa), dibedah dan dihomogenisasi dengan Polytron pada buffer Tris–HCl es (20 mM, pH 7,4) untuk menghasilkan homogenasi jaringan otak 1:2 (w/v) yang disentrifugasi pada 3000g (Centorion K24OR sentrifugasi direfrijerasi) selama 10 menit.

0Aliquot (0, 1 ml) supernatant diinkubasi dengan konsentrasi berbeda dari ekstrak (0.2 ml) dengan pemberian FeSO4 (10 M; 0.1 ml) dan asam askorbat μ(0,1 M; 0.1 ml) pada 37 ºC selama 1 jam.μ

4. Inhibition of lipid peroxidation using thiobarbituric acid reactive substances (TBARS).

0Reaksi dihentikan oleh penambahan asam trikloroasetat (28% w/v, 0.5 ml), diikuti asam thiobarbiturat (TBA, 2%, w/v, 0.38 ml), dan campuran kemudian dipanaskan pada 80 ºC selama 20 menit.

0Setelah sentrifugasi 3000 g selama 10 menit untuk memindahkan protein precipitasi, intensitas warna malondialdehyde kompleks (MDA)-TBA pada supernatan diukur dengan absorbansinya di 532 nm.

0Rasio inhibisi (%) dihitung menggunakan rumus berikut: inhibisi rasio (%) = [(A – B) /A] x 100%,

A dan B: absorbansi kontrol dan larutan senyawa. 0Konsentrasi ekstrak yang menyediakan 50% inhibisi

peroksidasi lemak (EC50) dihitung dari grafik persentase penghambatan TBARS terhadap konsentrasi ekstrak.

0Trolox digunakan sebagai standar.

0Untuk masing-masing 3 ekstrak diperoleh dan semua pengujian dilakukan secara triplo (3 ulangan)

0Hasil dinyatakan sebagai nilai rata-rata dan standard deviasi.

0Hasil dianalisis menggunakan one-way analysis of variance (ANOVA) diikuti uji HSD Tukey menggunakan

= 0.05. α0Analisis dilakukan menggunakan Program SPSS 16.0.

Analisis Statistik

ANOVA, uji HSD Tukey = 0.05α

Kesimpulan0 Pedoman Diet untuk memerangi penyakit kronis, termasuk

kanker dan penyakit arteri koroner, merekomendasikan peningkatan asupan makanan dari tumbuhan, termasuk buah-buahan dan sayur-sayuran sebagai sumber kaya antioksidan.

0 Tomat sebagai salah satu tanaman pangan yang paling serbaguna dan digunakan secara luas bisa memainkan peran penting dalam pangan manusia.

0 Tomat dari pertanian Portugis kaya sumber senyawa antioksidan seperti asam askorbat, karotenoid, khususnya Lycopene, dan senyawa fenolik.

0 Tomat terbukti menjadi yang paling kuat dalam aktivitas antioksidan, senyawa fenolik dan karotenoid.

0 Varietas lokal dikenal sebagai tomat kuning diungkapkan komposisi nutrisinya menarik, mencakup fruktosa, glukosa, -αlinolenat dan total tingkat Tokoferol yang lebih tinggi.

THANK YOU

DPPH

0Untuk menguji adanya aktivitas antioksidan dapat menggunakan metode DPPH.

0Pengamatan terhadap penangkapan radikal DPPH dapat dilakukan dengan mengamati penurunan absorbansi.

0Hal ini dapat terjadi oleh karena adanya reduksi radikal oleh antioksidan (AH) atau bereaksi dengan senyawa radikal lainnya (Yu dkk., 2002 : 1620).