PROTENA C REACTIVA (CRP)Dr. Fernando Semprtegui Octubre 2011. 1. CRP e infeccin La protena C reactiva (CRP) es de origen heptico y su produccin se incrementa por accin de las citocinas pro-inflamatorias: TNF-, IL-6, IL-1. Estas citocinas son, a su vez, producidas por fagocitos activados: macrfagos y clulas dendrticas. Los fagocitos se activan cuando contactan con patgenos va toll-like receptors (TLRs). El contacto con TLRs provoca una seal de membrana que conduce a la activacin de factores de transcripcin como el NF-B el cual, al translocarse al ncleo, participa en la transcripcin de los genes de citocinas pro-inflamatorias. De modo que el incremento de CRP en el suero sanguneo es un indicador de actividad de fagocitos debida a infeccin bacteriana o viral. Debe tenerse en cuenta, precisamente, que hay TLRs para bacterias y virus. En general los TLRs para virus son intracelulares, como el TLR3 para RNA viral de doble cinta y el TLR7 para el RNA viral de una sola cinta. Precisamente, el virus del sarampin es un virus RNA de una sola cinta. El RNA viral en contacto con los TLRs intracelulares provoca una seal de membrana que conduce a la activacin de factores de transcripcin como el NF-B ya mencionado y el dmero IRF3-IRF7 que permite la expresin de interferones alfa y beta que desencadenan mecanismos antivirales. La CRP y otras protena de origen heptico que tambin se producen por accin de las citocinas pro-inflamatorias, salen a la circulacin y funcionan como opsoninas para favorecer la actividad fagoctica de macrfagos, clulas dendrticas y polimorfonucleares neutrfilos (PMNs). 2. CRP e inflamacin CRP podra estar incrementada en ausencia de infeccin bacteriana o viral. Se trata de estados de inflamacin crnica en los que se mantiene incrementada produccin de citocinas. En estas situaciones debe sospecharse la presencia de focos ocultos de inflamacin, tales como los de las clulas espumosas (macrfagos activados por LDL) que se encuentran en la ntima de los vasos sanguneos como parte de los ateromas. En sujetos con inflamacin crnica la absorcin de hierro podra afectarse debido al incremento de hepcidina (Wang 2011). En nuestros estudios en Quito, en adultos mayores con sobrepeso/obesidad, hemos encontrado altas concentraciones de CRP (Sempertegui 2011) asociadas con aumentada concentracin de hepcidina en el suero y anemia (Dao 2011). La accin sostenida de las citocinas pro-inflamatorias en estos individuos conduce a prdida de la protena muscular. Recprocamente, el ejercicio puede recuperar el msculo y disminuir los niveles de CRP (Ogawa 2010). En adultos mayores, la elevada concentracin de CRP se relaciona con mayor mortalidad (Giovannini 2011). Aunque los focos inflamatorios vasculares son una fuente de citocinas pro-inflamatorias en esta edad, hay otras situaciones como la adiposidad pues las clulas adiposas pueden producir IL-6 y TNF- (Meijer

2011), disminucin de las hormonas esteroideas, depresin, enfermedad peri-odontal, asociadas a inflamacin crnica (Singh 2010). Sin embargo, en diversos estudios epidemiolgicos no se ha podido establecer la causa de persistente inflamacin en el envejecimiento. 3. Protocolo para medicin semi-cuantitativa de CRP en suero sanguneo Usaremos suero sanguneo fresco: Extraer 5 mL de sangre venosa, permitir que se retariga el cogulo, centrifugar y separar el suero en otro tubo. Preparar dos diluciones de suero con solucin salina isotnica: 1/2 y 1/4. Para eso, tomar 100 L de suero y aadir 100 L de solucin salina (dilucin 1/2) y disponer en un tubo rotulado. Luego, tomar 100 uL de suero y aadir 300 L de solucin salina (dilucin 1/4) y disponer en otro tubo rotulado. De cada tubo tomar 50 L con micropipeta y disponer sobre una placa de vidrio limpia en la que previamente se han delimitado dos crculos con marcador. Agitar el reactivo de ltex (usaremos un kit fabricado por la empresa Omega Diagnostics, Scotland, UK) y disponer una gota con el gotero sobre el suero ya depositado en cada crculo. Mezclar con un palillo diferente en cada crculo hasta que el reactivo cubra todo el crculo. Suavemente rote la placa por dos minutos y examine visualmente si hay aglutinacin. Corra simultneamente un control negativo y uno positivo. El control negativo debe ser negativo en las dos diluciones. El control positivo debe ser positivo en las dos diluciones. El lmite de sensibilidad del kit es de 6 mg/litro. Es decir, si no hay aglutinacin en ninguna de las dos diluciones la concentracin de CRP es 6mg/litro. Si hay aglutinacin en una o en las dos diluciones se tomar la dilucin como factor de clculo. Si, por ejemplo, la prueba es positiva en la dilucin 1/2, se multiplicar 2X6= 12 mg/litro de CRP. Si la prueba es positiva en las dos diluciones, entonces la concentracin de CRP es 4X6=24 mg/litro. En este ltimo ejemplo lo aconsejable es realizar una dilucin mayor (1/8), pero no lo haremos por dos razones: una, el kit es costoso y, otra, 24 mg/litro es alta concentracin de CRP y nos proporciona una idea acerca de los mecanismos inflamatorios asociados a su produccin el lmite normal es 6mg/litro). En una hoja aparte discuta los resultados de su muestra y entregue al ayudante cuando l seale. Referencias Dao MC, Sempertegui F, Estrella B, Hamer DH, Tucker K, Rodriguez A, Dallal G, Griffiths JK, Meydani SN. Hepcidin in elderly Ecuadorians: A link between inflammation, BMI, and iron status. Experimental Biology Meeting, Washington DC, April 2011, Abstract 2946. Giovannini S, Onder G, Liperoti R, Russo A, Carter C, Capoluongo E, Pahor M, Bernabei R, Landi F.Interleukin-6, C-Reactive Protein, and Tumor Necrosis Factor-Alpha as Predictors of

Mortality in Frail, Community-Living Elderly Individuals. Am Geriatr Soc. 2011 Aug 24. doi: 10.1111/j.1532-5415.2011.03570.x. [Epub ahead of print]. Meijer K, de Vries M, Al-Lahham S, Bruinenberg M, Weening D, Dijkstra M, Kloosterhuis N, van der Leij RJ, van der Want H, Kroesen BJ, Vonk R, Rezaee F. Human primary adipocytes exhibit immune cell function: adipocytes prime inflammation independent of macrophages. PLoS One. 2011 Mar 23;6(3):e17154. Ogawa K, Sanada K, Machida S, Okutsu M, Suzuki K.Resistance exercise training-induced muscle hypertrophy was associated with reduction of inflammatory markers in elderly women. Mediators Inflamm. 2010;2010:171023. Epub 2010 Dec 28. Semprtegui F, Estrella B, Tucker KL, Hamer DH, Narvaez X, Semprtegui M, Griffiths JK, Noel SE, Dallal GE, Selhub J, Meydani SN.Metabolic syndrome in the elderly living in marginal peri-urban communities in Quito, Ecuador. Public Health Nutr. 2011 May;14(5):758-67. Epub 2010 Oct 19. Singh T, Newman AB.Inflammatory markers in population studies of aging. Ageing Res Rev. 2011 Jul;10(3):319-29. Epub 2010 Dec 8. Wang J, Pantopoulos K. Regulation of cellular iron metabolism. Biochem J 2011; 434:365-381.