CRÉATEUR DE LA COSMÉTIQUE VÉGÉTALE®

02/04/2009 y v e s - r o c h e r . c o m

® Marque déposée par Yves Rocher

Développement d’une méthode de quantification de xanthones dans des extraits de coques de mangoustan (Garcinia mangostana L.) par HPTLC-UV

Bénédicte PortetResponsable du laboratoire de Phytochimie

Aline GilbertTechnicienne phytochimiste

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Sommaire

2-Le Mangoustan (Garcinia mangostana L.)

Présentation de la plante

Rappel sur les xanthones : des molécules polyphénoliques atypiques

1-Objectifs de l’étude

3-Présentation de la méthode HPTLC-UV

Détection et révélation des xanthones

Quantification des xanthones

4-Applications

Etude de la variabilité de la teneur en xanthones dans différents lots

de coques

Comparaison des résultats obtenus avec une méthode HPLC-UV

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Objectifs de l’étude

1-Développement d’une méthode d’analyse par HPTLC-UV rapide et efficace pour réaliser

le contrôle qualité de coques de mangoustan.

2- Application de la méthode à l’évaluation de plusieurs lots de plante

3-Comparaison des résultats des dosages de la teneur en xanthones avec ceux obtenus en HPLC-UV.

Zone de récolte

2-Le Mangoustan (Garcinia

mangostana L.)

Présentation de la plante

Rappel sur les xanthones : des

molécules polyphénoliques atypiques

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DESCRIPTION :

-Originaire d’Asie du Sud-Est

-Arbre pouvant atteindre 20 m de haut

-Fruit : coque épaisse, pulpe blanche

CONSTITUANTS PRINCIPAUX

Tannins, anthocyanes

Xanthones

α-mangoustine et -mangoustine

UTILISATIONS / PROPRIETES (Bibliographie):

-Partie la plus utilisée : Les fruits (et coques du fruit)

-Utilisation en alimentaire (pulpe du fruit)

-Utilisations traditionnelles pour ses propriétés

médicinales (coques du fruit) : antibactériennes,

anti-fongiques, anti-oxydantes et anti-inflammatoires.

Le Mangoustan, Fruit du Garcinia mangostana L. (Clusiaceae)

α-mangoustine -mangoustine

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Les principales xanthones des coques du mangoustan

α-mangoustine

-mangoustine

-mangoustine

9-hydroxycalabaxanthone

Molécules polyphénoliques prénylées

max (UV): vers 250 et 320 nm

Plaque (HP)TLC Si60 vs RP18

Détection UV: 254, 366 nm

Révélation: réactif de NEU

245-260 nm 245-260 nm

245-260 nm 245-260 nm

320 nm 320 nm

320 nm

290-330 nm

3-Présentation de la méthode

HPTLC-UV

Détection et révélation des xanthones

Quantification des xanthones

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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque Si60

Plaque : TLC Si60

Système : CHCl3/MeOH 90/10 (v/v)**

Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml

Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU

Système non adapté, les xanthones migrent au front de solvant

mauvaise séparation !!

**Rec.Nat.Prod (2009), 3:4, 178-186

Journal of AOAC international 2008, 91,5, 1145-1148

α-mangoustine

-mangoustine

-m

an

go

us

tin

e

α,-

-ma

ng

ou

sti

ne

s

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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque RP18

Plaque : TLC RP18

Système : CH3CN/Eau/HCOOH 50/50/5 (v/v/v)

Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml

Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU

Système non adapté, les xanthones ne migrent pas suffisamment

mauvaise séparation !!

α-mangoustine

-mangoustine

-m

an

go

us

tin

e

α,-

-ma

ng

ou

sti

ne

s

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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par TLC-UV sur plaque RP18

Plaque : TLC RP18

Système : CH3CN/Eau/HCOOH 70/27/3 (v/v/v)

Dépôt: 2µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 1mg/ml

Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU

Système adapté, les xanthones sont séparées !!

α-mangoustine

α,-

-ma

ng

ou

sti

ne

s

-m

an

go

us

tin

e

-mangoustine

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Analyse d’extraits éthanoliques de coques de mangoustan par HPTLC-UV sur plaque RP18

Plaque : HPTLC RP18

Système : CH3CN/Eau/HCOOH 80/17/3 (v/v/v)

Dépôt: 25µl d’une solution éthanolique (EtOH absolu) à 0,02mg/ml

Révélation :366 nm après pulvérisation du réactif de NEU

Système mieux adapté, les principales xanthones sont séparées

α-MNG

-MNG

-MNG

9-hydro

4-Applications

Etude de la variabilité de la teneur en

xanthones dans différents lots de coques

Comparaison des résultats obtenus avec

une méthode HPLC-UV

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Mise au point de la méthode de quantification par HPTLC-UV

Scan de la plaque en UV à deux longueurs d’onde: 320 nm et 280 nm

Quantification réalisée sur 5 lots de coques de mangoustan (extrait EtOH), zone de collecte

et saisonnalité identique Étude de la variabilité en fonction de l’année.

Année de

RécolteRécolte 2009 Récolte 2010 Récolte 2011 Récolte 2012 Récolte 2013

MS % (p/p) 0.50 0.52 0.57 0.55 0.50

320 nm 280 nm

Dosagea-mangoustine Dosage -mangoustine

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Quantification par HPTLC-UV

Courbe d’étalonnage :

Calibration polynomiale par rapport à la hauteur des pics à 320nm pour l’alpha-

mangoustine

Gamme d’étalonnage de l’α-mangoustine comprise entre 60 et 980 ng/spots

Dosage de l’α-mangoustine et des xanthones totales en équivalent α-mangoustine,

solubilisation dans EtOH absolu

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Calibration polynomiale par rapport à la hauteur des pics à 280nm pour la

gamma-mangoustine

Courbe d’étalonnage :

Gamme d’étalonnage de la -mangoustine comprise entre 50 et 525 ng/spots,

solubilisation dans EtOH absolu

Quantification par HPTLC-UV

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0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

25.0

30.0

35.0

40.0

45.0

50.0

Co

ncen

trati

on

en

α-

et -

man

go

usti

nes

en

%/M

S

Alpha-mangoustine Gamma-mangoustine

2009 2010 2011 2012 2013

Concentrations en α- et - mangoustines dans des extraits éthanoliques

de coques de mangoustan en fonction de la date de récolte

Résultats obtenus par HPTLC-UV à 320 nm

Teneur en a-mangoustine comprise entre 31% et 43% (/MS) et en -mangoustine

entre 4 et 6% (/MS)

Variabilité observée pour la teneur en α-mangoustine de 2009 à 2013.

La teneur en -mangoustine reste globalement stable pendant cette période.

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D:\Xcalibur\...\AG\Mangoustan\P01Cneg 9/13/2011 4:34:10 PM

RT: 0.00 - 32.00

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32

Time (min)

0

20000

40000

60000

80000

100000

120000

140000

160000

180000

200000

220000

240000

260000

280000

300000

320000

340000

360000

380000

400000

420000

440000

460000

480000

500000

uA

U

8.21

14.19

5.61

3.49 14.781.95

16.489.082.47 3.86 6.83 13.8919.3217.81 22.94 24.1421.7620.73

4.151.29 13.00

NL:5.20E5

nm=279.5-280.5 PDA P01Cneg

Comparaison des résultats avec une méthode de quantification par HPLC-UV à 280 nm

Colonne : RP-18e Lichrocart-lichrospher

Phase mobile: 20% (A) 0,1% HCOOH, 80% (B) CH3CN

Détection UV: 280 nm

Débit: 1ml/min

α-mangoustine

-mangoustine

9-hydroxycalabaxanthone

-mangoustine

-mangoustine

a-mangoustine

-mangoustine

9-hydroxycalabaxanthone.

Plaque : HPTLC RP18

Système : CH3CN/Eau/HCOOH 80/17/3 (v/v/v)

Scan à 280 nm

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Comparaison des résultats avec une méthode de quantification par HPLC-UV à 280 nm

0

10

20

30

40

50

60

70

Gamma-Mangoustine

Alpha-Mangoustine

Xanthones totales

2009 2010 2011 2012 2013

% d

e x

an

tho

ne

s d

an

s les e

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an

oliq

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ma

ngo

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n /M

S

Xanthones totales: dosage des 4 xanthones d’intérêt en éq. α-mangoustine

Teneurs en α et -mangoustines plus élevées en HPLC vs HPTLC (respectivement +18% et +2%)

Teneurs en xanthones totales très proche en HPLC vs HPTLC (respectivement moy. 56% et 55%)

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Conclusion

1- Première étude de dosage des xanthones par HPTLC-UV sur plaque RP-18.

2- Bonne séparation sur les 4 xanthones étudiées : α-mangoustine, -mangoustine,

-mangoustine et 9-hydroxycalabaxanthone.

3- Résultats de quantification obtenus par HPTLC très proches de ceux obtenus en

HPLC

La méthode mise au point par HPTLC-UV peut donc être utilisée

comme méthode de contrôle pour s’assurer de la qualité de lots

de coques de mangoustan

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Remerciements

Aline GILBERT Jocelyn GIBOULOT Georges-Olivier MAILLET

Christian LUBRANO Jean-Renaud ROBIN Bénédicte PORTET

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Merci de votre attention

Département Innovation du Végétal