Slide 1

SPEKTOFOTOMETRI UV-VIS LANGSUNG DAN TIDAK LANGSUNGNathasya SitepuSPEKTROFOTOMETRI UV-VISUNTUK ANALISIS KUANTITATIF OBAT

PrinsipRadiasi UV dan sinar tampak diserap oleh molekul organik aromatik,molekul yang mengandung ikatan rangkap (elektron-) terkonjugasi dan atau atom yang memiliki pasangan elektron bebas (elektron-n)(disebut gugus kromofor),menyebabkan transisi elektron pada orbital terluarnya dari tingkat energi dasar ketingkat energi tereksitasi lebih tinggi.

Besarnya serapan radiasi tersebut sebanding dengan banyaknya molekul analit yang menyerap dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatifDefenisi Spektrofotometer UV-VisSpektrum UV-Vis adalah alat untuk mengukur transmitan atau absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang.Jika radiasi yang monokromatik melewati larutan yang mengandung zat yang dapat menyerap,maka radiasi ini akan dipantulkan,diabsorbsi oleh zatnya dan sisanya ditaransmisikan.Io = Ir + Ia + ItPengaruh Ir dapat dihilangkan dengan menggunakan blanko/control,sehingga :Io = Ia + It

Faktor yang mempengaruhi spektrum serapanJenis Pelarut (polar,non polar)pH larutanKadar Larutan,jika konsentrasi tinggi akan terjadi polimerisasi yang menyebabkan maksimum berubah atau harga Io < IaTebal larutan,jika digunakan kuvet dengan tebal berbeda akan memberikan spectrum serapan yang berbeda.Lebar celah.Makin lebar celah (slit width) maka makin lebar pula serapan (band width),cahaya makin polikromatis, resolusi dan puncak-puncak kurva tidak sempurnaJenis PelarutPemilihan pelarut pada penggunaan spektrofotometer UV-Vis sangatlah penting, yakni pelarut yang digunakan tidak boleh mengadsorbsi cahaya pada daerah panjang gelombang dimana dilakukan pengukuran sampel.Pelarut yang umum digunakan adalah air, etanol, methanol, dan n-heksan, karena pelarut ini transparan pada daerah UVBerikut adalah pelarut yang sering digunakan dalam spektro UV-Vis :

Serapan pelarut terhadap udara yang diukur pada pengukuran analit tidak lebih dari 0.4 dan dianjurkan kurang dari 0.2.Pelarut menyebabkan solvatasi molekul yang mengakibatkan pergeseran batokromik ataupun hipsokromik.Adsorbsi radiasi * dan n* sangat peka terhadap efek pelarut. Pelarut polar hipsokromik

pH larutanSenyawa organik ada yang bersifat basa (mengandung gugus-NH2) dan ada pula yang bersifat asam (asam karboksilat,fenol). Seringkali untuk melarutkan senyawa ini digunakan pelarut yang bersifat asam (HCl 0,1N) atau basa (NaOH 0,1N).Pelarut ini diharapkan tidak berpengaruh besar terhadap maksimum atau daya serapnya (a).Beberapa senyawa diketahui sangat sensitif dengan adanya perubahan pH.contoh : vit B1.

Pada senyawa yang sangat sensitive oleh perubahan pH maka penetapan kadar senyawa ini dilakukan pada titik isobestis (panjang gelombang dimana suatu senyawa dengan konsentrasi sama,tetapi pH tidak sama memberikan serapan yang sama.)

Hal Hal yang Harus Diperhatikan dalam Spektrofotometer UV-Vis adalah :Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-VisPemilihan panjang gelombangPembuatan kurva bakuPembacaan absorbansi sampel atau cuplikanSampel harus dalam keadaan jernih.Tidak memiliki endapanTidak ada partikel koloid ataupun suspensi

Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis.Cara yang digunakan adalah dengan merubah menjadi senyawa lain atau direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang digunakan harus memenuhi beberapa persyaratan yaitu :Reaksinya selektif dan sensitif.Reaksinya cepat, kuantitatif, dan reprodusibel.Hasil reaksi stabil dalam jangka waktu yang lama.Waktu operasionalCara ini biasa digunakan untuk pengukuran hasil reaksi atau pembentukan warna. Tujuannya adalah untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil. Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu pengukuran dengan absorbansi larutan.

2. Pemilihan panjang gelombangPanjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Ada beberapa alasan mengapa harus menggunakan panjang gelombang maksimal, yaitu :-Pada panjang gelombang maksimal, kepekaannya juga maksimal karena pada panjang gelombang maksimal tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar.-Disekitar panjang gelombang maksimal, bentuk kurva absorbansi datar/landai dan pada kondisi tersebut hukum lambert-beer akan terpenuhi.- Jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali, ketika digunakan panjang gelombang maksimal

3. Pembuatan kurva baku Kurva baku merupakan hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi. Bila hukum Lambert-Beer terpenuhi maka kurva baku berupa garis lurus.

4. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikanAbsorban yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,8 atau 15% sampai 70% jika dibaca sebagai transmitans. Anjuran ini berdasarkan anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan T adalah 0,005 atau 0,5% (kesalahan fotometrik).

Tipe metode analisis kuantitatifMetode UV pada = 200 400 nm- langsung- tidak langsungMetode Visible (kolorimetri) pada = 400-800 nm- langsung- tidak langsungSpektro UV langsungSederhana, akurat, sensitif, Kekurangan : ada kemungkinan terinterferensi oleh komponen lain dalam sampel yang menyerap sinar UV diatasi dengan pemisahan komponen sebelum pengukuran, contohnya kromatografi kolom.

Spektro UV tidak langsungDilakukan apabila senyawa memiliki serapan yang terlalu rendah kurang sensitif atau dalam sampel terdapat komponen lain yang memberikan serapan pada yang sama, misalnya pada sampel cairan biologis.Dilakukan modifikasi kimia obat agar terjadi perubahan karakteristik serapannya. Contohnya : senyawa yang hanya memiliki cincin fenil sederhana dapat diperbaiki sensitivitasnya dengan cara oksidasi. Spektro Vis (Kolorimetri) LangsungHanya beberapa senyawa yang menyerap sinar pada daerah visibel (400-800 nm).Umumnya tidak memakai pemisahan terlebih dahulu (berbeda dengan metode UV langsung) karena jarang ditemukan komponen lain yang menyerap cahaya tampak.Contoh : gentian violet, fenolftalein, dantron

Spektro Vis Tidak Langsung Diperbaiki sensitivitas serapannya dengan memodifikasi senyawa, contohnya dengan diazotasi dan kopling. Fransiska L. Nugroho0906488496

Prosedur Analisis Kuantitatif untuk Spektrofotometer UV-Vis langsungAnalisis Kuantitatif1.Senyawa Tunggal : Dengan membandingkan absorban senyawa yang dianalisis dengan reference standard pada panjang gelombang maksimum. 2. Senyawa multikomponen : mengukur absorban campuran pada panjang gelombang maksimum masing-masing

A. Pembuatan Larutan StandarBuatlah konsentrasi larutan standar sesuai dengan faktor ekstinsi (konsentrasi dari larutan standar memiliki nilai serapan yang berkisar antara 0,2 sampai 0,8). Gunakan pelarut yang sesuai seperti yang tertera pada Farmakope. Pelarut yang digunakan harus tersedia berlebih sehingga dapat digunakan untuk melarutkan sampel. Pengenceran harus menggunakan pipet volume dan labu ukur secara kuantitatif.

22B. Pembuatan Spektrum SerapanMasukkan larutan standar dengan konsentrasi 10 ppm ke dalam kuvet. Lakukan pembilasan 2 kali. Isi kuvet dengan larutan standar mencapai 2/3 dari volumenya. Lakukan pengukuran serapan dari panjang gelombang 220 nm sampai 300 nm dengan interval 5 nm. Tentukan panjang gelombang maksimumnya. Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Spektrofotometer single beam :setiap perubahan panjang gelombang kuvet harus diisi blanko dahulu untuk menolkan serapan pengukuran serapan larutan uji. Spektrofotometer double beamcukup satu kali menolkan serapan dengan mengisi kedua kuvet dengan blanko kuvet yang letaknya lebih dekat dengan praktikan diganti isinya dengan larutan uji.

C. Pembuatan Kurva KalibrasiAtur panjang gelombang sesuai dengan yang diperoleh pada poin B di atas.Isi kedua kuvet dengan larutan blanko, bilas dua kali, kemudian isi 2/3 dari volume kuvet, nolkan serapannya (baseline).Isi kuvet dengan larutan standar. Catat serapan yang terbaca.Ulangi percobaan langkah 3 dengan menggunakan larutan standar berikutnya dengan konsentrasi yang berbeda. Catat serapan yang terbaca.

NoKonsentrasi (ppm)Serapan1`.............23456Dari kurva kalibrasi konsentrasi vs serapan, diperoleh persamaan garis hasil regresi linier yaitu :y = a + bxy = serapana = intersepb = slope/kemiringanx = konsentrasiD. Pembuatan Larutan SampelTimbang 100 mg sampel, masukkan dalam labu ukur 100,0 ml. Tambahkan pelarut yang sesuai hingga garis batas, kocok. Saring, buang 10 ml filtrat pertama dan tampung filtrat berikutnya. Pipet 10,0 ml filtrat yang diperoleh, masukkan dalam labu ukur 100,0 ml dan encerkan dengan pelarut yang sesuai hingga garis batas, kocok hingga homogen.

E. Pengujian SampelMasukkan larutan sampel ke dalam kuvet, bilas dua kali, isi kuvet 2/3 dari volumenya.Ukur serapannya pada panjang gelombang maksimumnya dan catat. Hitung kadar sampel dengan menggunakan persamaan regresi linier y = a + bx yang diperoleh dari kurva kalibrasi. Selain itu, juga bisa digunakan rumus dengan membandingkan serapan sampel terhadap serapan larutan standar yang nilainya mendekati. Bila diketahui faktor ekstinsi , maka dapat dicari , lalu masukkan harga a dalam Perhitungkan pula faktor pengenceran pada pembuatan sampel.

Rieka WidihasputriAnalisis MultikomponenPrinsip analisis multi komponen dengan metode Spektrofotometri UV-Vis adalah kaliberasi tiap-tiap komponen dengan memakai larutan standar. Dikenal ada dua macam larutan standar yaitu larutan standar murni dan larutan standar campuran. Larutan standarcampuran teknik pembuatan dan dampak kesalahannya sudah jelas lebih rumit.

Cara modern dalam perhitungan analisis muti komponen / 3 komponen adalah carapembanding spectra pada setiap interval panjang gelombang yang sempit (2nm) padarentang panjang gelombang pengukuran. Perhitungan kadar masing-masing komponendapat dilakukan dengan dua cara statistic yaiu : dengan cara LSQ (Least Squares Methods)atau dengan MLH (Maximum Likelihood). Kedua metode tersebut tidak memerlukankurva baku standar murni. Semua perhitungan LSQ dan MLH untuk analisismultikomponen berasal dari persamaan Lambert-Beer yang merupakan hukum dasarspektrofotometri UV-Vis.

Hukum Lambert-Beer menyatakan hubungan antara serapan dan panjang jalanmelewati medium yang menyerap , dan hubungan antara konsentrasi spesies penyerap dantingkat absorbsi. Hokum ini menyatakan absorban zat terlarut adalah proporsional dengan konsentrasi sebagaiA = . b. CA = absorban = koefisien ansorbansi molarC = konsentrasi solute ( mol/L)b = tebal curvet

Prinsip dasar dari analisis multikomponen dengan spektrometri absorpsi molekular yaitu bahwa total absorbansi larutan adalah jumlah absorbansi dari tiap-tiap komponennya. Hal ini tentu saja akan berlaku jika komponen-komponen tersebut tidak berinteraksi dalam bentuk apapun. Secara teori bisa saja terdapat banyak komponen tetapi dalam praktek, lebarnya puncak absorpsi dalam spektrometri UV-sinar tampak memastikan bahwa tidak ada panjang gelombang yang cukup sesuai untuk penentuan sampel dengan jumlah komponen yang banyak. Dalam latihan ini, akan dipelajari dua komponen, yaitu cobalt dan kromium.

Pada 1 ( maksimum zat 1), zat 2 juga mempunyai serapanPada 2 ( maksimum zat 2), zat 1 juga mempunyai serapanSpektrum serapan campuran zat 1 dan zat 2 adalah merupakan jumlah dari dua kurva individu.

Gambar 1. Spektrum serapan gabungan larutan dua zat; 1 ( maksimum zat 1); ( maksimum zat 2)

Cara kerjaPada 1, hitung daya serap zat 1 (a11) dan daya serap zat 2 (a21)Pada 2. Hitung daya serap zat 1 (a12) dan daya serap zat 2 (a22)Buat spektrum serapan sampel, amati serapan pada 1 dan 2Pada 1, serapan yang terbaca adalah serapan total zat 1 dan zat 2, demikian pula pada 2

Cara hitungTahapan perhitungan 1. Pembuatan Spektrum Serapan untuk mengetahui masing-masing panjang gelombang maksimum komponen-komponen dalam sampel.

Gambar 2. Spektrum serapan gabungan larutan standar parasetamol 10 ppm (242,5 nm) dan kofein 10 ppm (273,6 nm) dalam air2. Menghitung daya serap komponen-komponen pada panjang gelombang maksimumnya sendiri dan panjang gelombang maksimum komponen lainnya.3. Membuat spektrum serapan sampel.

Gambar 3. Spektrum serapan sampel parasetamol dan kafeinMenghitung kadar masing-masing komponen menggunakan rumus multikomponen berdasarkan data daya serap yang diperoleh. Contoh cara perhitungannya :Kadar parasetamol sebenarnya= 20,020 ppmKadar kofein sebenarnya= 2,020 ppmDaya serap parasetamol pada 1 (273,6 nm)= 64Daya serap parasetamol pada 2 (242,4 nm)= 15Daya serap kofein pada 1 (242,4 nm)= 25Daya serap kofein pada 2 (273,6 nm)= 52Serapan pada 1 (A1)= 1,32Serapan pada 2 (A2)= 0,403

Prosedur

Persiapan LarutanDengan menggunakan larutan stok yang tersedia (0,4M cobalt(II) sebagai cobalt(II) nitrate dan 0,1M kromium (III) sebagai kromium(III) nitrate) buat 9 larutan satndar berikut dalam 25 ml tabung standar.

Setiap larutan dibuat menjadi 0,1M dengan menambahkan 2,5 mL dari 1,0M asam nitrit dari dispenser yang tersedia ke dalam tiap 25 ml tabung standar.

Penentuan Panjang Gelombang yang SesuaiPanjang gelombang sebaiknya dipilih yang mana memaksimalkan perbedaan absortivas dari dua komponen pada masing-masing panjang gelombang. Untuk menentukan panjang gelombang yang sesuai scan spektrum dari larutan berikut pada range panjang gelombang 630-370nm dengan menggunakan larutan asam nitrit 0,1M sebagai larutan acuan.1. 0,08M Co(II)2. 0,02M Cr(III)3. larutan yang mengandung 0,08M Co(II) dan 0,02 Cr(III)Baik Hitachi U-2000 maupun Shimaddzu UV-240 dapat digunakan. Spektrum harus terekam secara otomatis. Harus dapat teramati bahwa panjang gelombang yang sesuai terjadi pada 510 nm (?max untuk cobalt) dan 575nm (?max untuk chromium) dan tidak ada interaksi penting yang terjadi antara kedua komponen ini. Penentuan Absortipvitas dengan menggunakan Plot Hukum Beer.Ukur absorbansi dari tiap larutan 1 -6 pada kedua panjang gelombang yang telah dipilih di atas. Plot absorbansi vs konsentrasi untuk memperoleh empat grafik Hukum Beer. Dengan mengukur kemiringan dari tiap garis, tentukan absoprtivitas tiap komponen pada tiap panjang gelombang.

Penentuan Absorptivitas dengan menggunakan Campuran dari Komposisi yang telah diketahui.Prinsip dari teknik ini adalah dengan jalan mengambil dua larutan campuran yang telah diketahui komposisinya dan mengukur absorbansi dari tiap larutan campuran pada tiap panjang gelombang yang telah dipilih.

Kemudian pada tiap panjang gelombang, absorptivitas dari tiap komponen dapat diperoleh dari pasanag persamaan simultan. Untuk latihan ini gunakan larutan campuran 8 dan 9.

Perbandingan AbsorptivitasSekarang Anda memiliki dua pasang absorptivitas yang ditentukan dengan cara yang berbeda. Tabulasikan hasil dari (c) dan (d) diatas. Diskusikan dengan asisten lab mengenai perbedaan yang terjadi, khususnya mengenai metode yang digunakan untuk memperoleh data tersebut.

Analisa Standar yang Tidak DiketahuiTujuan dari latihan ini adalah mengambil larutan campuran yang diketahui komposisinya, menggunakan dua pasang absorptivitas dari (c) dan (d), untuk menganalisa campuran ini dan untuk menentukan pasangan absorptivitas mana yang memberikan analisa lebih baik.Ukur absorbansi larutan 7 pada tiap panjang gelombang yang terpilih dan gunakan absorptivitas yang diperoleh dari (c) dan (d) diatas untuk menentukan konsentrasi Co dan Cr dalam larutan tidak diketahui ini. Bandingkan hasil yang diperoleh dengan konsentrasi sesungguhnya.

Rindi Irsan ArtomoAnalisis Sediaan LainPendahuluanMetode spektrofotometri merupakan cara yang sensitif tetapi tidak selektif Tujuan:Meningkatkan rasio analit thd material yg mengganggu pengukuran Meningkatkan akurasi dan presisi analisisMemindahkan zat uji dalam pelarut yang sesuai untuk pengukuranContd PendahuluanTeknik pemisahan yang biasanya digunakan adalah :Ekstraksi : padat-cair dan cair-cairDestilasiKromatografiEkstraksi padat cairPrinsip : melarutkan zat uji dalam sampel padat dgn pelarut yg dapat melarutkan dengan baik zat uji dan sesedikit mungkin melarutkan komponen lainnyaProsedur umum: penggojokan sampel padat mengandung zat uji langsung dgn pelarut dan pemisahan dilakukan dgn penyaringan, dekantasi atau sentrifugasiProses harus diulangi sesering mungkin hingga mencapai perolehan kembali yang kuantitatifEkstraksi cair-cairPrinsip :Pemisahan zat cair berdasarkan koefisien distrribusi (Kd) dan rasio distribusi (D) analit dlm pelarut organik/airPelarut harus sesedikit mungkin melarutkan zat pengotor dan sebanyak mungkin melarutkan zat ujiProsedur umum : tambahkan pelarut dalam larutan sampel, lakukan penggojokkan agar tercapai keseimbangan. Lalu biarkan memisah, pisahkan dua lapisan cairan tersebutPreparasi sampel serbuk, tablet, dan kapsulSampel berupa serbuk digerus homogen terlebih dahulu dalam lumpangMasukkan kertas perkamen dalam timbangan, kemudian tara timbanganTimbang sampel sebanyak 500 mg (estimasi zat aktif 20%, maka = 20% x 500 mg = 100 mg sampel yang diambil)Masukkan serbuk sampel (100 mg) ke dalam labu ukur 100 ml. Semprot sisa serbuk di perkamen dengan pelarut yang digunakanIsi labu ukur hingga volume, kemudian kocok hingga larut. Ad kan hingga batas ukur C = 100 mg = 1000 ppm 100 mlBila ada endapan atau kekeruhan, saring larutan. Buang 20 ml filtrat pertama dan tampung sisa filtratPipet 10 ml filtrat dengan pipet volume, kemudian masukkan dalam labu ukur 100,0 ml. Tambahkan pelarut hingga garis batas, kocok homogen C = 10 ml x 1000 ppm = 100 ppm 100 mlPipet 10 ml dengan pipet volume masukkan dalam labu ukur 100,0 ml yang baru. Cukupkan sampel botol sedikit demi sedikit dengan botol semprot, aduk homogenC = 10 ml x 100 ppm = 10 ppm 100 mlMasukkan larutan uji kedalam kuvet yang sudah dibilas dua kali dengan larutan uji. Masukkan larutan uji sampel sampai 2/3 tinggi kuvet kemudian ukur serapannya pada panjang gelombang maksimum ( maks)Preparasi sampel potio/elixir

Prosedur...Kalibrasi potio setara dengan x mg zat uji (kira-kira 50 ml)Kira-kira sekitar 50 ml potio di sari berturut-turut dengan pelarut yang sesuaiKumpulkan sari, encerkan dengan air secukupnya hingga 200,0 mlCampur, saring, buang 20 ml filtrat pertamaEncerkan 10,0 ml filtrat dengan air secukupnya hingga 50,0 ml dlm labu ukurUkur serapannya pada maks

Preparasi sampel emulsi

Prosedur...Pecah Sediaan emulsi dgn menggunakan SF, uapkan. Saring ambil residuResidu yang diperoleh di sari berturut-turut dengan pelarut yang sesuaiKumpulkan sari, encerkan dengan air secukupnya hingga 200,0 mlCampur, saring, buang 20 ml filtrat pertamaEncerkan 10,0 ml filtrat dengan air secukupnya hingga 50,0 ml dlm labu ukurUkur serapannya pada maks

Preparasi sampel suspensi

Prosedur..Pecahkan suspensi menggunakan etanol, kemudian saringResidu yang diperoleh di sari berturut-turut dengan pelarut yang sesuai (padat-cair)Kumpulkan sari, encerkan dengan air secukupnya hingga 200,0 mlCampur, saring, buang 20 ml filtrat pertamaEncerkan 10,0 ml filtrat dengan air secukupnya hingga 50,0 ml dlm labu ukurUkur serapannya pada maks

Preparasi sampel salep

Prosedur...Larutkan Sediaan salep dgn menggunakan PE, uapkan. Saring ambil filtratFiltrat yang diperoleh di sari berturut-turut dengan pelarut yang sesuaiKumpulkan sari, encerkan dengan air secukupnya hingga 200,0 mlCampur, saring, buang 20 ml filtrat pertamaEncerkan 10,0 ml filtrat dengan air secukupnya hingga 50,0 ml dlm labu ukurUkur serapannya pada maks

ASVINASTUTI RIKASIH0906531216Spektrofotometri Derivatif

Spektrofotometri DerivatifSpektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektrum pada spektrofotometri UV-Vis (Connors, 1982).Metode spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk analisis kuantitatif maupun kualitatif.Spektrum yang dialih bentuk ini menghasilkan profil yang lebih rinci yang tidak terlihat pada spektrum normal.

Kegunaan spektrofotometri derivatif adalah (Mulja, 1995):Apabila menghadapi campuran dua komponen yang spektrumnya saling tumpang tindih, maka analisis kuantitatif cara derivatif menjadi metoda yang bisa dipilih.Analisis kuantitatif campuran dua komponen yang keruh.Analisis kuantitatif campuran dua komponen yang merupakan isomeri (kecuali isomer optis aktif atau rasemik).Spektrum derivatif dapat dipakai untuk maksud kualitatif atau sebagai data pendukung.

Derivatisasi spektrum serapan

Pada spektrofotometri konvensional, spektrum serapan merupakan plot serapan (A) terhadap panjang gelombang (). Pada spektrofotometri derivatif, plot ditransformasikan menjadi :1). dA/d terhadap untuk derivatif pertama2). d2A/d2 terhadap untuk derivatif kedua,dst.Panjang gelombang serapan maksimum suatu senyawa pada spektrum normal akan menjadi panjang gelombang zero-crossing pada spektrum derivatif pertama. Panjang gelombang tersebut tidak mempunyai serapan atau dA/d = 0 (Connors, 1982).

Spektrum serapan hasil derivatisasi

Persamaanspektrum orde nol memenuhi hukum Lambert-Beer, maka didapatkan hubungan persamaan garis antara konsentrasi dengan serapan pada setiap orde derivatif.

Aplikasi Spektrofotometri DerivatifAnalisis farmasetikalDibandingkan dengan penentuan spektrofotometri konvensional, spektrofometri derivatif telah terbukti dalam menghilangkan gangguan dari eksipien dan formulasi pendukung obat-obatan. Spektrofotometri derivatif merupakan pendekatan yang sesuai untuk masalah overlapping dalam analisis farmasi. Contoh penerapanPenerapan Spektrofotometri derivatif dalam pemisahan Enalapril, hidroklorotiazid, dan walsartan dalam sediaan farmasi kompleks

Gambar 2. (a) Spektrum serapan orde nol dari enalapril (A), hidroklorotiazid (B) and Enap HL (C); b) nilai derivatif pertama vs konsentrasi enalapril (c1 = 4.1 g/mL; c2 = 8.2 g/mL; c3 = 12.3 g/mL; c4 = 16.4 g/mL; c5 = 20.5 g/mL, = 225 nm) dan hidroklorotiazid (c1 = 5.2 g/mL; c2 = 10.4 g/mL; c3 = 15.6 g/mL; c4 = 20.8 g/mL; c5 = 26.0 g/mL, = 278 nm) pada campuran.

Gambar 3. (a) Spektrum serapan orde nol dari walsartan (A), hidroklorotiazid (B) and Co-Diovan (C); b) nilai derivatif pertama vs konsentrasi walsartan (c1 = 6,45 g/mL; c2 = 12,9 g/mL; c3 = 19,35 g/mL; c4 = 25,8 g/mL; c5 = 32,25 g/mL, = 261 nm) dan hidroklorotiazid (c1 = 0,96 g/mL; c2 = 1,92 g/mL; c3 = 2,88 g/mL; c4 = 3,84 g/mL; c5 = 4,8 g/mL, = 284 nm) pada campuran.

Gambar 4. (a) Spektrum serapan orde nol dari kandesartan (A), hidroklorotiazid (B) and Biopress plus (C); b) nilai derivatif pertama vs konsentrasi kandesartan (c1 = 2,36 g/mL; c2 = 4,72 g/mL; c3 = 7,08 g/mL; c4 = 9,44 g/mL; c5 = 11,8 g/mL, = 270,4 nm) dan hidroklorotiazid (c1 = 1,92 g/mL; c2 = 3,84 g/mL; c3 = 5,76 g/mL; c4 = 7,68 g/mL; c5 = 9,6 g/mL, = 25,64 nm) pada campuran.Linearitas dan Regresi linierLOD dan LOQ dihitung menggunakan standar estimasi error (SY) dan kemiringan kurva kalibrasi (a) dari persamaan berikut: LOD = 3.3SY/a dan LOQ = 10.0SY/a.

Tabel . Hasil persamaan regresi linier pada masing-masing konstituen campuran.KesimpulanMetode spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan analisis kuantitatif untuk tujuan analisis farmasi yang berkaitan penentuan hidroklorotiazid dengan enalapril, walsartan dan kandesartan.metode ini layak untuk direkomendasikan untuk analisis sediaan komplek yang rutin.

Steffianti gunawan0906555701Contoh Penetapan Kadar Senyawa secara Spektrofotometeri UV-VisAsetaminofenTimbang sekssama lebih kurang 120 mg asetaminofen, masukkan ke dalam labu ukur 500ml, tambahkan 10ml etanol,encerkan dengan airhingga batas dan homogenkan. Pindahkan 5,0 ml larutan ini ke labu ukur 100ml,encerkan dengan air hingga batas dan homogenkan. Ukur serapan larutan uji asetaminofen USP dalam pelarut yang sama pada konsentrasi 12 ppm bersama larutan sampel pada panjang gelombang 244nm, menggunakan air sebagai blanko. Hitung kadar asetaminofen dengan menggunakan rumus:mg asetaminofen = 10C(Au/As)keterangan: C = konsentrasi larutan uji (ppm) Au =serapan sampelParacetamol (Tablet/eliksir)Timbang seksama sejumlah tablet setara dengan 150mg,tambahkan 50ml NaOH 1,0 N, encerkan dengan 100ml air,kocok selama 15 menit,tambahkan air secukupnya hingga 20ml , campurkan, saring. Encerkan 10,0ml filtrat dengan air secukupnya hingga 100ml.Pada 10,0ml tambahkan 10ml NaOH 0,1N, encerkan dengan air secukupnya hingga 100 ml.Ukur serapannya 1cm larutan pada maksimum lebih kurang 257nm. A(1%,1cm) pada maksimum lebih kurang 257 nm adalah 715.KloramfenikolBP th 1980Timbang seksama 100mg,larutkan dalam 500ml air.Pipet 10,0ml larutan,encerkan dengan air sampai 100ml. Ukur serapan larutan pada panjang gelombang max 278nm. A(1%,1cm) pada panjang gelombang maksimum 278 nm = 297,7FI III (kapsul dan salep)Bentuk KapsulSejumlah campuran isi 20 kapsul setara dengan 200mg kloramfenikol,larutkan dalam 800ml air, hangatkan jika perlu hingga larut sempurna, tambahkan air secukupnya hingga 100ml. Encerkan 10ml dengan air secukupnya hingga 100ml, ukur serapan 1cm larutan pada maksimum kurang lebih 278nm; A(1%,1cm) pada maksimum kurang lebih 278 nm adalah 0,298. Bentuk salepSejumlah salep mata yang ditimbang seksama setara dengan 10mg kloramfenikol,larutkan dalam 50ml eter minyak tanah P. Sari berturut-turut dengan 50ml,50ml,50ml dan 30ml air. Kumpulkan sari, encerkan dengan air secukupnya hingga 200ml,campur,saring, buang 20ml filtrate pertama. Encerkan 10ml filtrate dengan air secukupnya hingga 5ml. Ukur serapan 1cm larutan maksimum kurang lebih 278nm. A(1%,1cm) pada maksimum kurang lebih 278nm adalah 0,298.

Klorfeniramin maleat (CTM)Timbang dan serbukkan 20 tablet. Sejumlah serbuk ditimbang seksama setara 3mg klorfeniramin maleat,kocok dengan 20ml asam sulfat 0,1N selama 5 menit. Tambahkan 20ml eter P,kocok hati-hati,saring lapisan asam ke dalam corong pisah kedua. Sari lapisan eter dua kali, tiap kali dengan 10ml asam sulfat 0,1N, saring lapisan asam tiap kali ke dalam corong pisah kedua. Cuci penyaring dengan asam sulfat 0,1N. Pada kumpulan sari asam dan cairan cucian tambahkan natrium hidroksida 1N secukupnya hingga bereaksi alkalis terhadap lakmus P. Tambahkan 2ml natrium hidroksida 1N,sari dua kali,tiap kali dengan 50ml eter P. Cuci tiap sari eter dengan 20ml air yang sama. Sari berturut turutdengan 20ml, 20ml, dan 5ml asam sulfat 0,5N. Kumpulkan sari asam, encerkan dengan asam sulfat 0,5 N secukupnya hingga 50ml. Encerkan 10ml larutan dengan asam sulfat 0,5N secukupnya hiingga 25ml. Ukur serapan 1cm pada maksimum kurang lebih 25nm.A(1%,1cm) pada maksimum kurang lebih 25nm adalah 212.