Intraserie (n=20)Media (U/L)

SDCV (%)

42,00,471,11

1160,420,36

Interserie (n=20)41,10,761,85

1151,611,40

L-Alanina + α-Cetoglutarato Glutamato + PiruvatoALT

Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+LDH

GPT (ALT)NADH. Cinético UV. IFCC rec. Líquido

GPT (ALT)-LQ

Determinación cuantitativa de alanina aminotransferasa GPT (ALT)IVDConservar a 2-8ºC

PRINCIPIO DEL MÉTODO

SIGNIFICADO CLÍNICOLa ALT es una enzima intracelular, se encuentra principalmente en las células del hígado y el riñón. Su mejor aplicación es en el diagnóstico de las enfermedades del hígado.Se observan niveles elevados en enfermedades hepáticas como la hepatitis, enfermedades de los músculos y traumatismos. Cuando se emplean en conjunción con la AST ayuda en el diagnóstico de infartos de miocardio, ya que el valor de la ALT se mantiene dentro de los límites normales y aumenta en los niveles de AST1,4,5.El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

R 1Tampón

R 2Substrato

PRECAUCIONES

PREPARACIÓN

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDADTodos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.Indicadores de deterioro de los reactivos:- Presencia de partículas y turbidez.- Absorbancia del blanco a 340 nm < 1,00.

MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.- Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS Suero o plasma1. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO 1.

2.3.

4.5.

6.

RT (mL) 1,0Muestra (µL) 100

Mezclar, incubar 1 minuto.Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha elcronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto(∆A/min).

CÁLCULOS

Factor para convertir a25ºC 30ºC 37ºC

CONTROL DE CALIDADEs conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA4,5

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

INTERFERENCIAS

NOTAS SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores.

BIBLIOGRAFÍA

La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutámico pirúvica (GPT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato con formación de glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH:

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de ALT en la muestra ensayada1.

TRIS pH 7,8Lactato deshidrogenasa (LDH)L-AlaninaNADHα-Cetoglutarato

100 mmol/L1200 U/L

500 mmol/L0,18 mmol/L

15 mmol/L

R1: H290-Puede ser corrosivo para los metales.Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del producto.

Reactivo de trabajo (RT): Mezclar: 4 vol. (R1) Tampón + 1 vol. de (R2) Substrato.Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 72 horas a temperatura ambiente(15-25ºC).

Condiciones del ensayo:Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.Pipetear en una cubeta:

340 nm1 cm paso de luz

25ºC / 30ºC / 37ºC

∆A/min x 1750 = U/L de ALT

Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).

Factores de conversión de temperaturasLos resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:

HombresMujeres

25ºCHasta 22 U/LHasta 18 U/L

30ºC29 U/L22 U/L

37ºC40 U/L32 U/L

En recién nacidos normales se han descrito valores de referencia hasta el doble del de los adultos, debido a su inmadurez hepática, estos valores se normalizan aproximadamente a los tres meses.Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

Rango de medida: Desde el límite de detección 0 U/L hasta el límite de linealidad 400 U/L.Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.Precisión:

Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,00052 ∆A / min.Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticassignificativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:Coeficiente de regresión (r)2: 0,99597.Ecuación de la recta de regresión: y=1,1209x + 1,390.Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.

PRESENTACIÓN

Temperaturade medición

25ºC30ºC37ºC

1,000,760,55

1,321,000,72

1,821,391,00

Los anticoagulantes de uso corriente como la heparina, EDTA oxalato o fluoruro no afectan los resultados. La hemólisis interfiere con la determinación1.Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la deter-minación de la ALT2,3.

1.

2.3.4.5.

Murray R. Alanine aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1088-1090.Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. AACC 1999.Tietz N. W. et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.

Ref: 41280

Ref: 41282

Ref: 41283

R1: 1 x 60 mLR2: 1 x 15 mLR1: 1 x 240 mLR2: 1 x 60 mLR1: 1 x 480 mLR2: 1 x 120 mL

08/01/16BEIS45-ETel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Cont.

Intra-assay (n=20)Mean (U/L)

SDCV (%)

42,00,471,11

1160,420,36

Inter-assay (n=20)41,10,761,85

1151,611,40

L-Alanine + α-Ketoglutarate Glutamate + PiruvateALT

Piruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+LDH

GPT (ALT)NADH. Kinetic UV. IFCC rec. Liquid

GPT (ALT)-LQ

1.

2.3.

4.5.

6.

WR (mL) 1,0Sample (µL) 100

R 1Buffer

R 2Substrate

TRIS pH 7,8Lactate dehydrogenase (LDH)L-AlanineNADHα-Ketoglutarate

100 mmol/L1200 U/L

500 mmol/L0,18 mmol/L

15 mmol/L

340 nm1 cm light path

25ºC / 30ºC / 37ºC

∆A/min x 1750 = U/L of ALT

MenWomen

25ºCup to 22 U/Lup to 18 U/L

30ºC29 U/L22 U/L

37ºC40 U/L32 U/L

Conversion factor to25ºC 30ºC 37ºC

Assaytemperature

25ºC30ºC37ºC

1,000,760,55

1,321,000,72

1,821,391,00

1.

2.3.4.5.

Murray R. Alanine aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1088-1090.Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. AACC 1999.Tietz N. W. et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.

08/01/16BEIS45-ITel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Ref: 41280

Ref: 41282

Ref: 41283

R1: 1 x 60 mLR2: 1 x 15 mLR1: 1 x 240 mLR2: 1 x 60 mLR1: 1 x 480 mLR2: 1 x 120 mL

Cont.

Quantitative determination of alanine aminotransferase GPT (ALT)IVD

PRINCIPLE OF THE METHOD

The rate of decrease in concentration of NADH, measured photometrically, is proportional to the catalytic concentration of ALT present in the sample1.

CLINICAL SIGNIFICANCEThe ALT is a cellular enzyme, found in highest concentration in liver and kidney. High levels are observed in hepatic disease like hepatitis, diseases of muscles and traumatisms, its better application is in the diagnosis of the diseases of the liver.When they are used in conjunction with AST aid in the diagnosis of infarcts in the myocardium, since the value of the ALT stays within the normal limits in the presence of elevated levels of AST1,4,5.Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate clinical and other laboratory data.

REAGENTS

PRECAUTIONS

PREPARATION

STORAGE AND STABILITYAll the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. Signs of reagent deterioration:- Presence of particles and turbidity.- Blank absorbance (A) at 340 nm < 1,00.

ADDITIONAL EQUIPMENT- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 340 nm.- Thermostatic bath at 25ºC, 30ºC ó 37º C (± 0,1ºC).- Matched cuvettes 1,0 cm light path.- General laboratory equipment.

SAMPLESSerum or plasma1: Stability 7 days at 2-8ºC.

PROCEDURE

CALCULATIONS

Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 µmol of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed in units per litre of sample (U/L).Temperature conversion factorsTo correct results to other temperatures multiply by:

QUALITY CONTROLControl sera are recommended to monitor the performance of assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents and technique for problems.Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.

REFERENCE VALUES4,5

Normal newborns have been reported to show a reference range of up to double the adult, attributed to the neonate’s hepatocytes. These values decline to adult levels by approximately 3 months of age.These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS

Sensitivity: 1 U/L = 0,00052 ∆A / min.Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagents (x).The results obtained using 50 samples were the following:Correlation coefficient (r)2: 0,99597.Regression equation: y=1,1209x + 1,390.The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.

INTERFERENCESAnticoagulants currently in use like heparin, EDTA, oxalate and fluoride do not affect the results. Hemolysis interferes with the assay1. A list of drugs and other interfering substances with ALT determination has been reported2,3.

NOTES

PACKAGING

BIBLIOGRAPHY

Store at 2-8ºC

Alanine aminotranferase (ALT) or Glutamate pyruvate transaminase (GPT) catalyses the reversible transfer of an amino group from alanine to α- ketoglutarate forming glutamate and piruvate.The piruvate produced is reduced to lactate by lactate dehydrogenase (LDH) and NADH:

R1: H290-May be corrosive to metals.Follow the precautionary statements given in MSDS and label of the product.

Working reagent (WR): Mix: 4 vol. (R1) Buffer + 1 vol. (R2) Substrate.Stability: 21 days at 2-8ºC or 72 hours at room temperature (15-25ºC).

Assay conditions:Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Constant temperature: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Adjust the instrument to zero with distilled water or air.Pipette into a cuvette:

Mix, incubate for 1 minute.Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and read absorbances at 1 minute intervals thereafter for 3 minutes.Calculate the difference between absorbances and the average absorbance differences per minute (∆A/min).

Measuring range: From detection limit of 0 U/L to linearity limit of 400 U/L.If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10 withNaCl 9 g/L and multiply the result by 10.Precision:

SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.

Intra-série (n=20)Moyenne (U/L)

SDCV (%)

42,00,471,11

1160,420,36

Inter-série (n=20)41,10,761,85

1151,611,40

Alanine + α-Cétoglutarate Glutamate + PyruvateALT

Pyruvate + NADH + H+ Lactate + NAD+LDH

GPT (ALT)NADH. Cinétique UV. IFCC rec. liquide

GPT (ALT)-LQ

R 1Tampon

R 2Substrats

1.

2.

3.

4.5.

6.

RT (mL) 1,0Échantillon (µL) 100

Facteur de conversion à25ºC 30ºC 37ºC

TRIS pH 7,8Lactate déshydrogénase (LDH)L-AlanineNADHα-Cétoglutarate

100 mmol/L1200 U/L

500 mmol/L0,18 mmol/L

15 mmol/L

340 nm1 cm d’éclairage

25ºC / 30ºC / 37ºC

∆A/min x 1750 = U/L d’ALT

HommesFemmes

25ºCJusqu’à 22 U/LJusqu’à 18 U/L

30ºC29 U/L22 U/L

37ºC40 U/L32 U/L

Températurede mesure

25ºC30ºC37ºC

1,000,760,55

1,321,000,72

1,821,391,00

1.

2.3.4.5.

Murray R. Alanine aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1088-1090.Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. AACC 1999.Tietz N. W. et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.

08/01/16BEIS45-F

Réf: 41280

Réf: 41282

Réf: 41283

R1: 1 x 60 mLR2: 1 x 15 mLR1: 1 x 240 mLR2: 1 x 60 mLR1: 1 x 480 mLR2: 1 x 120 mL

Cont.

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNETel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

Détermination quantitative d’alanine amino transférase GPT (ALT)IVD

PRINCIPE DE LA METHODE L’alanine amino transférase (ALT) initialement appelée transaminase glutamique pyruvique (GPT) catalyse le transfert réversible d’un groupe animique d’alanine vers l’alpha-cétoglutarate à formation de glutamate et de pyruvate. Le pyruvate produit est réduit en lactate en présence de lactate déshydrogénase (LDH) et NADH:

La vitesse de réduction de la concentration en NADH au centre, déterminée photométriquement, est proportionnelle à la concentration catalytique d’ALT dans l’échantillon1.

SIGNIFICATION CLINIQUEL’ALT est une enzyme intracellulaire, qui se trouve principalement dans les cellules du foie et des reins. Son meilleur avantage est le diagnostic de maladies du foie.On l’observe en grandes quantités dans le cadre de maladies hépatiques, telles que l’hépatite, les maladies du muscles et des infarctus du cœur, étant donné que la valeur de l’ALT reste dans les limites standards et augmente dans les niveaux de AST1, 4,5.La diagnostique clinique doit être réalisée en prenant en compte les données cliniques et de laboratoire.

REACTIFS

PRÉCAUTIONS

PREPARATION

CONSERVATION ET STABILITETous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette, et si les flacons sont maintenus hermétiquement fermés à 2-8ºC, à l’abri de la lumière et des sources de contamination. Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée.Indices de détérioration des réactifs:- Présence de particules et turbidité.- Absorbation du blanc à 340 nm < 1,00.

MATERIEL SUPPLEMENTAIRE- Spectrophotomètre ou analyseur pour les lectures à 340 nm.- Bain thermostable à 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC).- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage.- Equipement classique de laboratoire.

ECHANTILLONSSérum ou plasma1. Stabilité de l’échantillon: 7 jours à 2-8ºC.

PROCEDURE

CALCULS

Unités: L’unité internationale (UI) correspond à la quantité d’enzymes qui converti 1 µmol de substrats par minute, dans des conditions standard. La concentration est exprimée en unité/litre (U/L).

Facteurs de conversion de températuresLes résultats peuvent se transformer à d’autres températures, en multipliant par:

CONTROLE DE QUALITEIl est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les valeurs ont été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120 et 1002210).Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument, les réactifs et le calibreur.Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer les mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne correspondraient pas aux attentes.

VALEURS DE REFERENCE 4, 5

Chez les nouveau-nés en bon état de santé, on a détecté des valeurs presque doublés par rapport à celle relevées chez les adultes, état donné leur maturité hépatique, ces valeurs redeviennent normales dans les trois mois.Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque laboratoire de définir ses propres valeurs de référence.

CARACTERISTIQUES DE LA METHODE

Sensibilité analytique: 1 U/L = 0,00052 ∆A/min.Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs commerciaux (x). Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:Coefficient de corrélation (r)2: 0,99597. Equation de la Coubre de régression: y=1,1209x + 1,390.Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.

INTERFERENCESLes anticoagulants à utilisation courante tels que l’héparine, l’EDTA oxalate ou le fluorure n’ont aucune incidence sur les résultats. L’hémolyse interfère avec les résultats1.Différentes drogues ont été décrites ainsi que d’autres substances qui interfèrent dans la détermination de l’AST2, 3.

REMARQUESSPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce réactif dans différents analyseurs.

BIBLIOGRAPHIE

PRESENTATION

Conserver à 2-8ºC

R1: H290- Peut être corrosif pour les métaux.Suivez les conseils de prudence donnés en SDS et étiquette.

Réactif de travail (RT): Mélanger: 1 vol. de (R2) Substrats + 4 vol. (R1) Tampon.Stabilité: 21 jours à 2-8ºC ou 72 heures à température ambiante (15-25ºC).

Conditions de test:Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Température: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée ouair.Pipetter dans une cuvette:

Mélanger et incuber pendant 1 minute.Lire l’absorbation (A) initiale de l’échantillon, mettre en route le chronomètre et lire l’absorbation à chaque minute pendant 3 minutes. Calculer la moyenne de l’augmentation d’absorbation par minute (∆A/min).

Gamme de mesures: Depuis la limite de détection de 0 U/L, jusqu’à la limite de linéarité de 400 U/L.Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer 1/10 avec du ClNa 9 g/L et multiplier le résultat final par 10.Précision:

Intra-ensaios (n=20)Média (U/L)

SDCV (%)

42,00,471,11

1160,420,36

Inter-ensaios (n=20)41,10,761,85

1151,611,40

L-Alanina + α-quetoglutarato Glutamato + PiruvatoALT

Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+LDH

GPT (ALT)NADH. Cinético UV. IFCC rec. Líquido

GPT (ALT)-LQ

1.

2.3.

4.5.

6.

RT (mL) 1,0Amostra (µL) 100

R 1Tampão

R 2Substrato

TRIS pH 7,8Lactato desidrogenase (LDH)L-AlaninaNADHα-quetoglutarato

100 mmol/L1200 U/L

500 mmol/L0,18 mmol/L

15 mmol/L

340 nm1 cm passo de luz25ºC / 30ºC / 37ºC

∆A/min x 1750 = U/L da ALT

HomensMulheres

25ºCaté 22 U/Laté 18 U/L

30ºC29 U/L22 U/L

37ºC40 U/L32 U/L

Fator de conversão para25ºC 30ºC 37ºC

Ensaiostemperatura

25ºC30ºC37ºC

1,000,760,55

1,321,000,72

1,821,391,00

1.

2.3.4.5.

Murray R. Alanine aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1088-1090.Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. AACC 1999.Tietz N. W. et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.

08/01/16BEIS45-PTel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com

SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Réf: 41280

Réf: 41282

Réf: 41283

R1: 1 x 60 mLR2: 1 x 15 mLR1: 1 x 240 mLR2: 1 x 60 mLR1: 1 x 480 mLR2: 1 x 120 mL

Cont.

Determinação quantitativa de alaninaminotransferaseGPT (ALT)IVD

PRINCÍPIO DO MÉTODOA alaninaminotransferase (ALT) ou Glutamato-piruvato-transaminase (GPT) catalisa a transferência reversível de um aminogrupo da alanina para α-quetoglutarato que forma glutamato e piruvato. O piruvato produzido é reduzido a lactato por lactato desidrogenase (LDH) e NADH:

A taxa de diminuição na concentração de NADH, medida fotometricamente, é proporcional à concentração catalítica de ALT presente na amostra1.

SIGNIFICADO CLÍNICOA ALT é uma enzima celular, encontrada em concentrações mais elevadas no fígado e rins. São observados altos níveis em doenças hepáticas como a hepatite, doenças musculares e traumatismo, sendo a sua melhor aplicação no diagnóstico de doenças do fígado.Também são utilizadas em conjunto com apoio AST nos diagnósticos de enfartes do miocárdio, uma vez que o valor da ALT permanece dentro dos limites normais na presença de níveis elevados de AST1,4,5.Não devem ser feitos diagnósticos clínicos com base nas descobertas do resultado de um único teste, mas devem integrar dados clínicos e outros dados laboratoriais.REAGENTES

PRECAUÇÕES

PREPARAÇÃO

CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADETodos os componentes do kit são estáveis até à data de validade que consta da etiqueta quando armazenados bem fechados a 2-8ºC protegidos da luz e quando as contaminações são evitadas durante a sua utilização. Não utilizar os reagentes após passar o prazo de validade. Sinais de deterioração dos reagentes:- Presença de partículas e turvação.- Absorvência nula do branco (A) a 340 nm < 1,00.

EQUIPAMENTO ADICIONAL- Espectrómetro ou colorímetro a medir a 340 nm.- Banho termostático a 25ºC, 30ºC ou 37º C (± 0,1ºC).- Cuvettes equiparadas 1,0 cm passo de luz.- Equipamento de laboratório geral.

AMOSTRASSoro ou plasma1: Estabilidade durante 7 dias a 2-8ºC.

PROCEDIMENTO

CÁLCULOS

Unidades: Uma unidade internacional (UI) é a quantidade de enzima que transforma 1 µmol de substrato por minuto, em condições padrão. A concentração é expressa em unidades por litro de amostra (U/L).Fatores de conversão de temperaturaPara corrigir resultados para outras temperaturas, multiplicar por:

CONTROLO DE QUALIDADESão recomendados soros de controlo para monitorizar o desempenho dos procedimentos dos ensaios: SPINTROL H Normal e Patológico (Ref. 1002120 e 1002210).Se os valores de controlo estiverem foram do intervalo definido, verifique o instrumento, reagentes e técnicas para detetar problemas.Cada laboratório deve estabelecer o seu próprio esquema de Controlo de Qualidade e as ações corretivas no caso de os controlos não estarem de acordo com as tolerâncias aceitáveis.

VALORES DE REFERÊNCIA4,5

Os recém-nascidos normais mostraram um intervalo de referência de até o dobro de um adulto, atribuído aos hepatócitos dos neonatos. Estes valores decrescem para os valores dos adultos por volta dos 3 meses de idade.Estes valores servem apenas como referência. Cada laboratório deve estabelecer o seu próprio intervalo de referência.

CARACTERÍSTICAS DO MÉTODOIntervalo de medição: Do limite de deteção de 0 U/L até ao limite de linearidadede 400 U/L.Se os resultados obtidos forem superiores ao limite de linearidade, diluir a amostra 1/10 com NaCl 9 g/L e multiplicar o resultado por 10.Precisão:

Sensibilidade: 1 U/L = 0,00052 ∆A/min.Exactitude: Os resultados obtidos utilizando reagentes SPINREACT (y) não demonstraram diferenças sistemáticas quando comparados com outros reagentes comerciais (x).Os resultados obtidos utilizando 50 amostras foram os seguintes:Coeficiente de correlação (r)2: 0,99597.Equação de regressão: y=1,1209x + 1,390.Os resultados das características de desempenho dependem do analisador utilizado.

INTERFERÊNCIASOs anticoagulantes atualmente em utilização como a heparina, EDTA, oxalato e o fluoreto não afetam os resultados. A hemólise interfere com o ensaio1. Uma lista de medicamentos e outras substâncias que interagem com a determinação de ALT foi descrita2,3.

NOTAS

BIBLIOGRAFIA

APRESENTAÇÃO

Armazenar a 2-8ºC.

R1: H290-Pode ser corrosivo para os metais.Seguir os conselhos de prudência dados em SDS e etiqueta.

Reagente de trabalho (RT): Mistura: 4 vol. (R1) Tampão + 1 vol. (R2) Substrato.Estabilidade: 21 dias a 2-8ºC ou 72 horas à temperatura ambiente (15-25ºC).

Condições dos ensaios:Comprimento de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Ajustar o instrumento para zero com água destilada ou ar.Pipeta numa cuvette:

Misturar e incubar durante 1 minuto.Ler a absorvência inicial (A) da amostra, iniciar o cronómetro e ler absorvências em intervalos de 1 minuto e, depois, por 3 minutos.Calcular a diferença entre absorvências e as diferenças de absorvência médias por minuto (∆A/min).

O SPINREACT tem instruções para vários analisadores automáticos.