Filoviridae και ο ιός ΕΒΟ LA

Filoviridae Filoviridae και ο ιός και ο ιός ΕΒΟΕΒΟLALA

Παρουσίαση στα Παρουσίαση στα Ειδικά Θέματα Ειδικά Θέματα

Κυτταρικής Κυτταρικής ΒιολογίαςΒιολογίας

Διδάσκουσα: Διδάσκουσα: Ι.ΠαπασίδερηΙ.Παπασίδερη

Κυριλής φώτηςΚυριλής φώτηςΑ.Μ. 220065Α.Μ. 220065

Επισκόπηση του σεμιναρίουΕπισκόπηση του σεμιναρίου• Δομή του ΙούΔομή του Ιού

• Γονιδίωμα του ΙούΓονιδίωμα του Ιού

• Κύκλος αντιγραφής Κύκλος αντιγραφής τουτου

• Πρωτεΐνες που Πρωτεΐνες που συμμετέχουν σε συμμετέχουν σε αυτήναυτήν

• Οικολογία Οικολογία

• ΠαθογένεσηΠαθογένεση

Ηλεκτρονική μικροσκοπία του Μarburg

Φωτογραφίες Δομής του Ebola από ηλεκτρονική μικροσκοπία

ΜΕΡΟΣ Β: ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΤΟΥ ΕBOLA

Σχεδιάγραμμα του ιού. Παρατηρούμε τις περιοχές των γονιδίων του, το σχήμα και τα ετεροδιμερή των γλυκοπρωτεΐνών του.

Γονιδίωμα του ΕΒΟ-Ζ. Διακρίνουμε το μέγεθός του, τις περιοχές που εντοπίζονται τα γονίδιά του(πράσινο χρώμα), και τις κόκκινες περιοχές, που είναι διαγονιδιακές.

Το γονιδίωμά του, λοιπόν... Αποτελείται από (-)ssRNA Περιέχει 7 πρωτεΐνες Και παρουσιάζεται

επικάλυψη γονιδίων,

γνωστό ως

gene overlapping.

Το γονίδιο 4 μεταγράφεται από δύο ανοιχτές περιοχές. Πρώτα παράγεται μία μικρή γλυκοπρωτεΐνη, sGP, και μετά με RNA editing και μεταγραφικό frameshifting εκφράζεται η τελική GP.

Οι πρωτεΐνες του Ιού. GP(αποτελείται από τα GP1 και 2):

ΔΙΑΜΕΜΒΡΑΝΙΚΗ ΓΛΥΚΟΠΡΩΤΕΪΝΗ ΝΡ: ΝΟΥΚΛΕΟΚΑΨΙΔΙΚΗ ΠΡΩΤΕΪΝΗ,

ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΣΥΝΑΡΜΟΛΟΓΗΣΗ ΤΟΥ ΦΑΚΕΛΟΥ.

VP24: άγνωστης λειτουργίας VP30: φέρει την παραγωγή IFN VP35: anti-terminator της μεταγραφής VP40: απαραίτητη για την δόμηση του καψιδίου και

την ωρίμανση του ιού ΙΙΚΗ ΠΟΛΥΜΕΡΑΣΗ λ.

Sequensing της GP2 πρωτεΐνης

1. Είσοδος στο ξενιστικό κύτταρο.

Έρχεται σε επαφή με τα υγρά του σώματος και εισάγεται στα κύτταρα μέσω βλέννας ή κατ’ευθείαν στο αίμα.

2. Προσρόφηση.

Η γλυκοπρωτεΐνη GP1 δένει με έναν κυτταρικό υποδοχέα. Τεράστια συνεισφορά της GP2.

Μεσολαβούν πολλοί κυτταρικοί συμπαράγοντες, όπως ο fotolate υποδοχέας α.

Οι πρωταρχικοί στόχοι του EBOLA είναι -Μονοπυρηνικά φαγοκύτταρα-Monocytes

ΜΕΡΟΣ Γ: ΟΙ ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ ΤΟΥ EBOLA

ΠΡΩΤΕΙΝΗ GP

ΜΕΜΒΡΑΝΗ ΚΥΤΤΑΡΟΥ

ΙΙΚΗ ΜΕΜΒΡΑΝΗ

3. Ενδοκύττωση.

Το PH του κυττάρου γίνεται πιο όξινο κατά την ενδοκύττωσή του.

Η GP2p, λειτουργεί ως συμπαράγοντας στη συγχώνευση της μεμβράνης του με του κυττάρου.

Συμμετέχει πληθώρα πρωτεϊνών του κυττάρου, που ακόμη δεν έχει διασαφηνιστεί ποιες είναι

Απελευθέρωση του γονιδιώματος του ιού στο κύτταρο.

4α. Σύνθεση πρωτεϊνών λ, VP35, VP40

Απαιτεί την παρουσία της ιικής πολυμεράσης λ.

Η VP30 πρωτεΐνη, επιτρέπει Downstream μεταγραφή των γονιδίων, από το πρώτο γονίδιο.

Η VP35 πρωτεΐνη δρα αναχαιτίζοντας την κυτταρική άμυνα.

4β. Σύνθεση των GP πρωτεϊνών

Είναι πολύπλοκη μετα-μεταγραφική διεργασία

Γίνεται γλυκοζυλίωση των πρωτεϊνών Πρωτεολυτικό μάτισμα από

πρωτεάσες Ακετυλίωση

Οι γλυκοπρωτεΐνες του Ebola

Οι GP1 και GP2 πρωτεΐνες συμμετέχουν στην αναδόμηση και αυτόματη συναρμολόγηση του καψιδίου, καθώς και στην είσοδο του ιού στο κύτταρο.

sGP, μοναδική, διαλυτή πρωτεΐνη αγνώστου λειτουργίας

Βιοσύνθεση των γλυκοπρωτεϊνών

Οπότε, το πλήρες ιόσωμα περιλαμβάνει:

ssRNA,NP,VP30, VP35, VP24, λ Τελικά, κατά την απελευθέρωση καταστρέφεται το κύτταρο ξενιστής, δίνοντας περίπου 30-300 νέους ιούς, οι οποίοι θα προσβάλλουν τα γειτονικά κύτταρα. Έχει παρατηρηθεί(εργαστηριακά) το φαινόμενο της Lysis from without.

ΜΕΡΟΣ Ε: Αλληλεπιδράσεις με το ανοσοποιητικό σύστημα

Στοχεύει κύτταρά του, τα οποία μεταφέρουν τα νέα ιοσώματα σε όλους τους ιστούς.

Υπάρχει πρώιμη μόλυνση και των δενδριτικών κυττάρων, οπότε αργοπορεί συγκεκριμένη ανοσοποιητική δράση (ανοσοαπάντηση)

Αλληλεπιδράσεις με το ανοσοποιητικό σύστημα

Μόλυνση και καταστροφή των μακροφάγων και των ουδετερόφιλων

Δεν υφίσταται καμμία ανοσολογική απάντηση, αφού οι πρωτεΐνες του ιού (η VP35) καταστέλλουν τα IFN γονίδια

Παθογένεση

Οι γλυκοπρωτεΐνες του είναι υπεύθυνες για τη παθογένεση

Στοιχεία αποδυκνείουν πως τα συμπώματα, αν όχι όλα, τα περισσότερα, δεν είναι προκαλούμενα απ’ευθείας από τον ιό, αλλά η παθολογία του είναι απόρροια μια σειράς αποκρίσεων.

Παθογένεση

Ολική ανοσοαπόκριση Ενεργοποίηση των μακροφάγων και των

μονοκυττάρων Απελευθέρωση προλοιμωξιακών σημάτων Κυτοκινίνες, TNF, IFN. Συντριβή των ενδοθηλιακών εμποδίων Το αίμα εισέρχεται σε όλους τους ιστούς,

πέφτει η πίεση σοκ.

Αιμορραγικός πυρετός Ebola 2-21 ημέρες επώασης Συμπτώματα ίωσης

Ύστερα: εξανθήματα, κόκκινα μάτια, εσωτερική και εξωτερική αιμμοραγίαΘάνατος σε τεράστια ποσοστά: 58-94% των περιπτώσεων

Biological Level 4

ΟΙΚΟΛΟΓΙΑ ΤΟΥ EBOLA O φυσικός του

ξενιστής είναι άγνωστος.

Έχουν υποστηριχτεί οι πίθηκοι, κατώτερα ζώα, ακόμη και φυτά

Ο Ebola δεν είναι αερομεταφερόμενος ιός

Δεν γνωρίζουμε... Γιατί κάποιοι

έχουν επιζήσει; Υπάρχει

μεγαλύτερη ανοσοαπόκριση σε κείνουν που επιζούν. Αλλά σε κάποιους υπήρξε μικρότερη.

Ο ιός μπορεί να μείνει μέχρι τρεις μήνες στα κύτταρα του ξενιστή

Αντιμετώπιση

Δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία για τον ιό.Πλασμιδιακή μεταγωγή, Θεραπεία με

υποκατάστατα του ιού.Με μεταγγίσεις αίματος, στεροειδή.

Ebola σαν βιολογικό όπλο

Η Ρωσία μέχρι το 1992 παρήγαγε και είχε τεράστιες ποσότητες του ιού στα εργαστήρια και διεξήγαγε πειράματα γενετικής σε αυτόν, ώστε να υφίσταται ποικιλότροπες μεταλλαγές

Ο Ιάπωνας τρομοκράτης Aum Shinrikyo αποκαλύφθηκε πως προσπάθησε να εμπορευτεί την αγορά του ιού.

Για να κλείσουμε...

Γίνεται τεράστια έρευνα στους Filoviridae, και αυτό γιατί είναι οι πιο θανατηφόροι ιοί και δεν αντιμετωπίζονται.

Έχουν μικρό γονιδίωμα, και 7 πρωτεΐνες. Μπορεί να επιτευχθεί καλλιέργειά τους για

μελέτη τους Ο κύκλος αντιγραφής του είναι ταχύς,

αποδοτικός και παρόμοιος με των Rabdoviridae

Filoviridae και ο ιός ΕΒΟLA

Παρουσίαση στα Ειδικά Θέματα Κυτταρικής ΒιολογίαςΔιδάσκουσα: Ι.Παπασίδερη

Κοκκαλιάρης Κ.Α.Μ. 220053

Η ΑΝΤΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΙΩΝ MARBURG & EBOLA ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΑ ΕΝΔΟΘΗΛΙΑΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ

Οι ιοί Marburg και Ebola, μέλη της οικογένειας των Filoviridae, προκαλούν αιμορραγικές ασθένειες στους ανθρώπους και γενικά στα πρωτεύοντα

Η ασθένεια μπορεί να χαρακτηριστεί ως μία παντροπική ασθένεια που συνήθως έχει ως συμπτώματα ένα βίαιο σοκ συνοδευόμενο από αιμορραγία, που φτάνει στις περισσότερες περιπτώσεις έως και τον θάνατο

Ο MBG, που συνιστά και τον πρωτότυπο φιλοϊό, απομονώθηκε το 1967 μετά από τις εξάρσεις αιμορραγικών πυρετών σε ανθρώπους στην Γερμανία και τη Γιουγκοσλαβία

Μελέτες που έγιναν στο παρελθόν πρότειναν μία μη ειδική καταστροφή του ενδοθηλίου σαν τον επικρατέστερο μηχανισμό

Ενδοθηλιακά κύτταρα σχηματίζουν την εσωτερική επιφάνεια των αγγείων και διαδραματίζουν έναν ρόλο κλειδί στην διατήρηση της πίεσης και της ομοιόστασης

Αυτά τα κύτταρα σχηματίζουν ένα επιλεκτικό εμπόδιο που ουσιαστικά αποτελεί ένα μέσο ελέγχου της ανταλλαγής μικρών διαλυτών ουσιών και μακρομοριακών μη διαλυτών ουσιών μεταξύ του αίματος και στο μεσοκυττάριο υγρό των ιστών

Η αντιγραφή του ιού που προκαλεί την καταστροφή του ενδοθηλίου είναι ένας μηχανισμός που πιθανά ευθύνεται για τον αιμορραγικό πυρετό και το σύνδρομο σοκ που τυπικά ακολουθούν την μόλυνση από τον ιό Marburg

Να διευκρινιστεί ότι η οικογένεια των Filoviridae περιλαμβάνει τον ιό Marburg (MBG), τους δύο συγγενικούς ιού Ebola (EBO) και τον ιό Reston (RES), που πρόσφατα απομονώθηκε

Οι ιστολογικές και παθοφυσιολογικές παράμετροι που είναι σήμερα γνωστές για την ασθένεια που καλείται αιμορραγικός πυρετός και προκαλείται από τους εν λόγω ιούς, δεν είναι επαρκείς ώστε να εξαχθούν συμπεράσματα για τα προκαλούμενα συμπτώματα

Η μόλυνση από φιλοϊούς έχει συγκεκριμένα παθολογικά χαρακτηριστικά, που είναι κοινά στα μέλη των τριών οικογενειών, και συνοδεύονται από αιμορραγικούς πυρετούς διαφορετικών τύπων

Κάποιοι από τους τύπους αιμορραγικών πυρετών που έχουν χαρακτηριστεί σχετικά πρόσφατα είναι ο “πυρετός της Λάσα”, ο αιμορραγικός πυρετός που συνοδεύεται από κάποιο σύνδρομο νεφρικής ανεπάρκειας, και ο αιμορραγικός πυρετός Dungue

Πρέπει να τονιστεί ότι οι φιλοϊοι εμφανίζουν τα υψηλότερα ποσοστά θνησιμότητας που ξεκινούν από 35% και φτάνουν έως και 90% για τον ιό Ebola τύπου Ζαΐρ, και τις πιο σοβαρές εμφανίσεις αιμορραγικών πυρετών

Η λύση των ενδοθηλιακών κυττάρων παρατηρείται κατά την εξέλιξη του συνδρόμου σοκ που εντοπίζεται στον πνεύμονα και συχνά σχετίζεται με φαινόμενα θρομβώσεων στο ευρύτερο διαγγειακό σύστημα

Έχει γίνει η υπόθεση ότι αυτό προκαλείται από την καταστροφή των ενδοθηλιακών κυττάρων, που προκαλείται ως απάντηση στην μόλυνση από τον ιό

Για να οριστεί το αν η δυσλειτουργία και η επακόλουθη καταστροφή των ενδοθηλιακών κυττάρων μπορεί να προκληθεί από την μόλυνση από φιλοϊό, έγινε εξέταση της ανοσολογικής απάντησης στον ιό Marburg σε καλλιέργειες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων ομφάλιου λώρου (HUVEC) καθώς και σε οργανική καλλιέργεια ανθρώπινων αγγείων από ομφάλιο λώρο

Τα δεδομένα έδειξαν ότι ο ιός Marburg εντοπίσθηκε και στα δύο συστήματα και προτάθηκε ότι η καταστροφή που παρατηρείται στα ενδοθηλιακά κύτταρα κατόπιν μόλυνσης από τον ιό οφείλεται στον πολλαπλασιασμό του ιού

Για να αποδειχτεί ότι τα ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα του ομφάλιου λώρου (HUVEC) που προσβάλλονται από τον ιό Marburg (MBG) είναι μολυσματικά, εκτελέσθηκε η μέθοδος plaque assays σε Ε6 κύτταρα από καλλιέργειες μολυσμένων ενδοθηλιακών κυττάρων, τα οποία συλλέχθηκαν 8 έως 144 ώρες μετά την μόλυνση.

Για λόγους σύγκρισης, παράλληλα έγινε προσπάθεια να διευκρινιστεί η καθορισμένη κυτταρική πορεία που ακολουθείται κατά την ανάπτυξη-πολλαπλασιασμό του ιού εντός του κυττάρου καθώς και δευτερευόντως την πορεία μετα-μόλυνσης άλλων γειτονικών ή μη κυττάρων

Η μορφολογία των HUVEC και των Ε6 τα οποία είναι μολυσμένα με τον ιό Marburg και στα οποία ο ιός αρχίζει να πολλαπλασιάζεται, δεν εμφανίζουν σημαντικές διαφορές.

Τα αποτελέσματα αυτά αποδεικνύουν ότι τα ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι δεκτικά (αποτελούν στόχο) του ιού Marburg

Είναι γενικά αποδεκτό ότι η εξέλιξη του συνδρόμου σοκ βρίσκεται σε άμεσο συσχετισμό με την απώλεια της ακεραιότητας του ενδοθηλιακού ιστού, που οφείλεται κυρίως στον αυξανόμενο ρυθμό εισόδου των ιοσωμάτων στα κύτταρα του ενδοθηλίου

Στην ασθένεια Marburg αυτό μπορεί να οφείλεται σε ορισμένους μηχανισμούς

α.) λύση των ενδοθηλιακών κυττάρων οφειλόμενη στην αντιγραφή του ιού,

β.) μαζική απελευθέρωση των ανοσολογικών παραγόντων από μη ειδική (φαγοκύτωση) και ειδική (αντιγραφή ιού) ενεργοποίηση των ανοσολογικών κυττάρων και

γ.) οξειδωτικός τραυματισμός ή μη ειδική ανοσολογική απάντηση όπως αναφέρθηκε προηγουμένως

Σχετικά νωρίς μετά την μόλυνση παρατηρούνται τεράστιες περιοχές στις οποίες εντοπίζονται κυτταρικές καταστροφές, οι οποίες ακολουθούνται από μία γενικευμένη καταστροφή των ενδοθηλιακών κυττάρων κατά την εξέλιξη της μόλυνσης

Ο αναπτυσσόμενος ιός είναι άκρως μολυσματικός και τα ιϊκά κομμάτια που εντοπίζονται στα μολυσμένα ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι πανομοιότυπα με αυτά των Ε6 κυττάρων

Η καταστροφή των ενδοθηλιακών κυττάρων που παρατηρείται στα μετέπειτα στάδια της μόλυνσης κρίνεται πλέον επαρκής για να ξεκινήσει η αγγειακή πήξη και να παρουσιαστούν συμπτώματα θρόμβωσης (DIC) σε συνδυασμό με την κατανάλωση των πηκτικών παραγόντων όπως αρχικά συζητήθηκε για την μέθοδο μόλυνσης των φιλοϊών

Η ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΙΑΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ Η ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΜΙΑΣ ΜΕΘΟΔΟΥ ΑΝΟΣΟΦΘΟΡΙΣΜΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΙΟ EBOLA, ΤΥΠΟΣ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΙΟ EBOLA, ΤΥΠΟΣ RESTON, ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΗ ΜΙΑΣ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΗΣ RESTON, ΜΕ ΤΗΝ ΧΡΗΣΗ ΜΙΑΣ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΗΣ ΝΟΥΚΛΕΟΠΡΩΤΕΪΝΗΣ- ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ ΝΟΥΚΛΕΟΠΡΩΤΕΪΝΗΣ- ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΕΚΦΡΑΣΗΣ ΣΕ ΚΥΤΤΑΡΑ HeLaHeLa

• Αναπτύχθηκε μία έμμεση μέθοδος-ανάλυση του Αναπτύχθηκε μία έμμεση μέθοδος-ανάλυση του ανοσοφθορισμού (IFA) με σκοπό την ανίχνευση ανοσοφθορισμού (IFA) με σκοπό την ανίχνευση αντισωμάτων για τον ιό Ebola, τύπος Reston (EBO-αντισωμάτων για τον ιό Ebola, τύπος Reston (EBO-R), χρησιμοποιώντας τις κυτταρικές σειρές HeLa R), χρησιμοποιώντας τις κυτταρικές σειρές HeLa όπου παρατηρείται και η έκφραση των EBO-R όπου παρατηρείται και η έκφραση των EBO-R νουκλεοπρωτεϊνών (ΝΡ)νουκλεοπρωτεϊνών (ΝΡ)

• Η εν λόγω μέθοδος εμφανίζει αυξημένη ειδικότητα Η εν λόγω μέθοδος εμφανίζει αυξημένη ειδικότητα για την ανίχνευση των EBO-R IgG αντισωμάτων και για την ανίχνευση των EBO-R IgG αντισωμάτων και στα υπεράνοσα κουνέλια και στους πιθήκους που στα υπεράνοσα κουνέλια και στους πιθήκους που συνελλέχθησαν κατά την διάρκεια ενός ξεσπάσματος συνελλέχθησαν κατά την διάρκεια ενός ξεσπάσματος του EBO-R στις Φιλιππίνες το 1996του EBO-R στις Φιλιππίνες το 1996

• Αξιοσημείωτο είναι το γεγονός ότι η χρησιμοποιούμενη Αξιοσημείωτο είναι το γεγονός ότι η χρησιμοποιούμενη μέθοδος IFA παρουσιάζει και αυξημένη ευαισθησία για τα μέθοδος IFA παρουσιάζει και αυξημένη ευαισθησία για τα μελετούμενα αντισώματα για τον EBO-R σε σχέση με την IFA μελετούμενα αντισώματα για τον EBO-R σε σχέση με την IFA που μελετά την έκφραση στην κυτταρική σειρά HeLa των που μελετά την έκφραση στην κυτταρική σειρά HeLa των αντίστοιχων νουκλεοπρωτεϊνών του Ebola, τύπος Ζαΐραντίστοιχων νουκλεοπρωτεϊνών του Ebola, τύπος Ζαΐρ

• Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας υποδεικνύουν ότι Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας υποδεικνύουν ότι αυτή η νέα ανοσοφθοριστική μέθοδος-ανάλυση θα αποτελέσει αυτή η νέα ανοσοφθοριστική μέθοδος-ανάλυση θα αποτελέσει ένα πολύ χρήσιμο εργαλείο για επιδημιολογικές μελέτες όσον ένα πολύ χρήσιμο εργαλείο για επιδημιολογικές μελέτες όσον αφορά τον ιό Ebola και την μολυσματική δράση του πρωτίστως αφορά τον ιό Ebola και την μολυσματική δράση του πρωτίστως σε πιθήκουςσε πιθήκους

• Φυσικά, αναμένεται αν όχι η άμεση επέκταση των Φυσικά, αναμένεται αν όχι η άμεση επέκταση των αποτελεσμάτων στους ανθρώπους, τουλάχιστον η αποτελεσμάτων στους ανθρώπους, τουλάχιστον η πραγματοποίηση των βασικών βημάτων για την ανάπτυξη μίας πραγματοποίηση των βασικών βημάτων για την ανάπτυξη μίας μεθόδου με αντίστοιχη ευαισθησία και ειδικότητα κατάλληλη μεθόδου με αντίστοιχη ευαισθησία και ειδικότητα κατάλληλη για τους ανθρώπουςγια τους ανθρώπους

• Χρησιμοποιήθηκαν 16 συγγενείς πίθηκοι που εξήχθησαν από Χρησιμοποιήθηκαν 16 συγγενείς πίθηκοι που εξήχθησαν από αντίστοιχη αναπαραγωγική μονάδα (μονάδα Α) στις Φιλιππίνες αντίστοιχη αναπαραγωγική μονάδα (μονάδα Α) στις Φιλιππίνες και που είχαν αντιμετωπίσει το επιδημιολογικό ξέσπασμα του και που είχαν αντιμετωπίσει το επιδημιολογικό ξέσπασμα του 1996. 1996.

• Επίσης μελετήθηκαν 96 πίθηκοι από τους οποίους Επίσης μελετήθηκαν 96 πίθηκοι από τους οποίους απομονώθηκε δείγμα ορού και που προέρχονταν από άλλη απομονώθηκε δείγμα ορού και που προέρχονταν από άλλη μονάδα αναπαραγωγής (μονάδα Β) των Φιλιππινών όπου δεν μονάδα αναπαραγωγής (μονάδα Β) των Φιλιππινών όπου δεν είχε αναφερθεί κανένα ξέσπασμα του ιού Ebola.είχε αναφερθεί κανένα ξέσπασμα του ιού Ebola.

• Αυτή η IFA παρουσιάζει έναν αυξημένο αριθμό Αυτή η IFA παρουσιάζει έναν αυξημένο αριθμό πλεονεκτημάτων σε σύγκριση με την IFA που πλεονεκτημάτων σε σύγκριση με την IFA που χρησιμοποιεί μολυσμένα από τον ιό κύτταρα, επειδή χρησιμοποιεί μολυσμένα από τον ιό κύτταρα, επειδή αυτές οι κυτταρικές σειρές μπορούν να προετοιμαστούν αυτές οι κυτταρικές σειρές μπορούν να προετοιμαστούν και ακολούθως να χρησιμοποιηθούν με απόλυτη ασφάλεια και ακολούθως να χρησιμοποιηθούν με απόλυτη ασφάλεια σε εργαστήρια χωρίς εφαρμογή εξειδικευμένων σε εργαστήρια χωρίς εφαρμογή εξειδικευμένων συνθηκών ασφαλείας (biosafety level 4 facilities) που σε συνθηκών ασφαλείας (biosafety level 4 facilities) που σε άλλες περιπτώσεις κρίνονται κάτι παραπάνω από άλλες περιπτώσεις κρίνονται κάτι παραπάνω από απαραίτητεςαπαραίτητες

Filoviridae και ο ιός ΕΒΟLA

Παρουσίαση στα Ειδικά Θέματα Κυτταρικής Βιολογίας

Διδάσκουσα:Ι.Παπασίδερη

Παναγιώτης Καστρίτης

Α.Μ. 220050

Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Αποσπασμένο διαγνωστικό δείγμα από την πρώτη μετάβαση κυττάρων Vero, που παρουσιάζει την επιμηκυμένη μορφή μορίων

Χ 90.000

Είναι πλειομορφικοίΝηματώδειςΡαβδοειδείςΔιάμετρος: 80nmMήκος: 130-140000nmΈχουν περίβλημα

Ηλεκτρονική Μικροσκοπία


Χ 28.000. Χ 66.000.

Διαμορφώσεις windings της εσωτερικής δομής

Χ 39.000


.ΔΟΜΗ ΤΟΥ ΕΒΟLA

Α

Β

ΓΑ: Παρατήρηση στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, λιπιδικός φάκελος και κεντρικό νουκλεοκαψίδιοΒ: Αναδόμηση του νουκλεοκαψιδίουΓ: Φωτογραφία από φωτονικό μικροσκόπιο με ανοσοεντόπιση των πρωτεϊνών του ιού.


Χ 156.000. Χ 43.000


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 2. μόρια ιών που βλαστάνουν από τη μεμβράνη πλάσματος (βέλη) με "τα νουκλεοκαψίδια" Κυτόπλασμα. Λεπτό

τμήμα Χ 37.000.


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 2 Προϊός (βέλη) που αποτελείται πρώτιστα από την άμορφη μήτρα μέσα cytoplasm ενός κυττάρου σε πρωταρχική κυτοπαθολογική κατάσταση

Χ 9.000.


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 3 ασυνήθιστη διαμόρφωση του ενδοκυτοπλασματικού σώματος συνυπολογισμού(προϊού) στο οποίο σφαίρες 5060nm φαίνονται σαν οι άκρες μιας άμορφης μήτρας.

Χ 39.000


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 2 αυτή η πιό χαρακτηριστική διαμόρφωση σωμάτων συνυπολογισμού(προϊών), που αποτελείται από τους ακριβείς κυλίνδρους σε μια άμορφη μήτρα, είναι παρούσα σε ένα ειδάλλως κανονικό κύτταρο

Χ 19.000.


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 4 υψηλή ενίσχυση των κυλινδρικών δομών που διαμορφώνουν τους περισσότερους συνυπολογισμούς(προϊούς) και αποτελούν την εσωτερική δομή των μορίων ιών

Χ 789000


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 3 αρχική κυτοπαθολογία που χαρακτηρίζεται από τη μιτοχονδριακή διόγκωση και την καταστροφή ενώ η παραγωγή μορίων ιών συνεχίζεται


Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 4. πρόωρη κυτοπαθολογία με τη μιτοχονδριακή καταστροφή που συνδέεται με την ογκώδη κυτταροπλασματική αντικατάσταση με το προερχόμενο από ιό υλικό. Ολόκληρη μεμβράνη πλάσματος που περιλαμβάνεται στη βλάστηση ιών

Χ 16.000. Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 4 υψηλή ενίσχυση της επιφάνειας του κυττάρου που διευκρινίζεται στο σχήμα 13, που παρουσιάζει δημιουργούμενη βλάστηση κατά μήκος ολόκληρης της μεμβράνης πλάσματος όπως παρέχεται από την ογκώδη κυτταροπλασματική μόλυνση

Χ 46.000 Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 2 κυτοπαθολογία συνοδεία την καταστροφή οργανιδίων και την καταστροφή της μεμβράνης πλάσματος (κορυφή)

Χ 37.000. Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Καλλιέργεια κυττάρων Vero, ημέρα 4 τελικό κυτοπαθολογικό στάδιο, που χαρακτηρίζεται από τη πυρηνική και κυτταροπλασματική καταστροφή, κατεστραμμένα οργανίδια και την διάλυση τμήματος μεμβρανών πλάσματος


Λέκιασμα αιματοξυλίνης-εωσίνης-σαφρανίνης του συκωτιού του μολυσμένου χιμπατζή με Ebola (κλίμακα: 100 χιλ.). Τα βέλη δείχνουν τις νεκρωτικές εστιάσεις(περιοχές) του ηπατικού παρεγχύματος. Τα νεκρωτικά ηπατικά

κύτταρα έχουν εξαφανιστεί.

Αρχική ενίσχυση 1189X.


Λέκιασμα αιματοξυλίνης-ηωσίνης-σαφρανίνης του συκωτιού του μολυσμένου χιμπατζή με Ebola(κλίμακα: 10 χιλ.). Το βέλος δείχνει συνκυτιακά κύτταρα με πολλούς πυρήνες(8 πυρήνες). Το ηπατικό κύτταρο είναι στα αριστερά του. Αρχική ενίσχυση 11190.


NP (red). Cell nuclei are stained with Hoechst 33258 (blue).Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Comparison of the sub-cellular distribution of Ebola viral proteins VP40, NP and VP35. Vero E6 cells, 48 hours . DNA blue. The upper panel shows that VP40 membrane Kastritis PL, Kokkaliaris DK, Kirilis LF

Ebola VP40 distribution


Release of filamentous Ebola virus particles from Vero E6 cells. VP40 staining (red) extracellular virions before the development of cytopathic effects


Interferon-alpha treatment inhibits the production of Ebola virus proteins.


Interferon-alpha treatment decreases the Ebola virus induced cytopathic effects in Vero E6 cultures. Phasecontrast image of IFN-alpha treated and non-treated cells 72 hrs post-infection shows an efficient inhibition of rounding up (top right panel).


MCF7 and Vero E6 differs in the virus- and interferon treatment-induced PML expression levels

The Y axis shows the relative fluorescence intensity. The columns represent the mean fluorescence intensity of PML staining per nucleus in interferon-alpha


Ebola virus induces increased PML expression in the infected cells

Double immunofluorescence staining of VP40 and VP35 in MCF7 or NP in Vero E6 cells (red) with PML (green) 48 hrs post-infection. The pictures shows that infected cells express more PML

Η θεραπεία με ιντερφερόνη άλφα, καθυστερεί την ανάπτυξη του ιού in vitro. Συμπερασματικά, ο PML παράγοντας μπορεί να παίζει ρόλο αντι-ιικού σε κύτταρα μολυσμένα με τον ιό Ebola.


ΤΕΛΟΣ ΣΕΜΙΝΑΡΙΟΥ

ΚΑΣΤΡΙΤΗΣ Π. ΑΜ 220050

ΚΟΚΚΑΛΙΑΡΗΣ Κ. ΑΜ 220053

ΚΥΡΙΛΗΣ Φ. ΑΜ 220065

Filoviridae και ο ιός ΕΒΟ LA

Documents

Transcript of Filoviridae και ο ιός ΕΒΟ LA