1

CYFRA 21-1 EIA

IVD

Kullanım Talimatları. NSE2011-05

REF 211-10

EN EXPLANATION OF SYMBOLS

BG ОБЯСНЕНИЕ НА СИМВОЛИТЕ

CS VÝZNAM SYMBOLŮ

DA SYMBOLFORKLARING

DE ERKLÄRUNG DER SYMBOLE

EL ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΩΝ ΣΥΜΒΟΛΩΝ

ES SIGNIFICADO DE LOS SÍMBOLOS

ET SÜMBOLITE SELGITUS

FR EXPLICATION DES SYMBOLES

HR OBJAŠNJENJE SIMBOLA

HU JELMAGYARÁZAT

IT SPIEGAZIONE DEI SIMBOLI

LT SIMBOLIŲ PAAIŠKINIMAI

LV SIMBOLU SKAIDROJUMS

NL VERKLARING DER SYMBOLEN

NO SYMBOLFORKLARING

PL OBJAŚNIENIE SYMBOLI

PT EXPLICAÇÃO DOS

SÍMBOLOS RO

SEMNIFICAŢIA

SIMBOLURILOR RU

ОБОНАЧЕНИЯ

SE

SYMBOLFÖRKLARI

NG SK VÝZNAM

SYMBOLOV SL

RAZLAGA

SIMBOLOV

SR OBJAŠNJENJE SIMBOLA

TR SEMBOLLERİN AÇIKLAMALARI

Use By/Годно до/Použitelné do/ Holdbar

til /Verwendbar bis/ Ημερομηνία

λήξης/Fecha

de caducidad / Kõlblik kuni / Utiliser jusque/Rok

valjanosti / Felhasználható/Utilizzare entro/

Sunaudoti iki /Izlietot līdz/Houdbaar

tot/Brukes innen/Użyć przed/

Prazo de validade/Expiră la/

Использовать до/Använd före/ Použite´né

do/ Uporabno do/ Upotrebljivo do/Son

Kullanma Tarihi

Batch code/Номер на партида/ Číslo

šarže/ Lotnummer/

Chargenbezeichnung/Αριθμός

Παρτίδας/Código de lote/Partii kood /Code

du lot/ Kod serije/ Sarzsszám /Codice del

lotto/ Partijos kodas/Partijas kods/Lot

nummer/Partikode/ Kod partii / Código do

lote/Număr de lot/ Номер лота/

Lotnummer/Číslo šarže/Številka serije/ Kod

partije/ Parti Kodu

2

IVD

REF

Date of manufacture /Дата на

производство/Datum výroby/

Produktionsdato/Herstellungsdatum /

Ημερομηνία παραγωγής/Fecha de

fabricación/Valmistamise kuupäev/

Date de fabrication /Datum proizvodnje/

Gyártási idő/Data di produzione/

Pagaminimo data /Ražošanas datums /

Productiedatum /Fremstillingsdato/

Data produkcji /Data de fabrico /Data

fabricaţiei/Дата производства/

Tillverkningsdatum /Dátum výroby/ Datum

izdelave/Datum proizvodnje/Üretim tarihi

In Vitro Diagnostic Medical Device/

Медицински уред за диагностика

ин витро/Diagnostický zdravotnický

prostředek in vitro/ Medicinsk udstyr til

in vitro-diagnostik/ In-vitro-Diagnostikum /

Ιατροτεχνολογικό προϊόν για διάγνωση

In Vitro/Dispositivo médico para

diagnóstico in vitro/ In vitro diagnostiline

meditsiiniseade/Dispositif médical de

diagnostic in vitro/Diagnostički medicinski

uređaj In Vitro/ In vitro orvosdiagnosztikai

eszköz/Dispositivo medico per test

diagnostici in vitro/In Vitro Diagnostinė

Medicinos Priemonė/Medicīniska ierīce

in vitro diagnostikai/ In vitro-diagnostisch

medisch instrument/ In vitro diagnostisk

medisinsk utstyr/Wyrób medyczny do

diagnostyki in vitro/Dispositivo Médico

de Diagnóstico In Vitro/Dispozitiv medical

pentru diagnostic in vitro/Только для

диагностики In Vitro/Endast för in

vitro-diagnostik/ Zdravotnícka pomôcka na

diagnostiku in vitro/In vitro diagnostični

pripomoček/Diagnostički medicinski

uređaj In Vitro/<96> testleri için yeterlilik

içerir

Catalogue number/Каталожен номер/

Katalogové číslo/Katalognummer/

Bestellnummer/Αριθμός καταλόγου/

Número de catálogo/Kataloogi number/

Numéro de catalogue/Kataloški broj/

Katalógusszám/Numero di catalogo/

Katalogo numeris/Numurs katalogā/

Catalogusnummer/Katalognummer/

Numer katalogowy/Número do catálogo/

Număr de catalog/Номер по каталогу/

Produktnummer/Katalógové číslo/

Kataloška številka/Kataloški broj/

Katalog numarası

2oC

8oC Temperature limitation/

Температурни граници/

Teplotní omezení/

Temperaturbegrænsning /

Temperaturbegrenzung /

Περιορισμοί θερμοκρασίας/

Límites de temperatura /

Temperatuuri piirang/

Limite de température/ Temperaturno

ograničenje/ Hőmérsékletre

vonatkozó korlátozás/ Limiti di

temperatura /

Temperatūriniai apribojimai /

Temperatūras ierobežojums/

Temperatuurbeperking/

Temperaturbegrensninger/

Temperatury graniczne/

Limite de temperatura /

Limite de temperatură/

Температурный режим/

Temperaturbegränsning/

Teplotné obmedzenie

Omejitev temperature/

Temperaturno ograničenje/

Sıcaklık sınırlaması /

Contains sufficient for <96> tests/Съдържа

достатъчно количество за тестове

<96>/Lze použit pro <96> testů/Indeholder

tilsttrækkeligt/Inhalt ausreichend für <96>

Prüfungen/Περιεχόμενο επαρκές για

«96» εξετάσεις/Contenido suficiente para

<96> ensayos/Kogusest piisab <96> testi

läbiviimiseks/Contenu suffisant pour “96”

tests/Sadrži dovoljno za <96> testova/A

doboz tartalma <96> vizsgálat elvégzéséhez

elegendő/Contenuto sufficiente per “96”

saggi/Turinys skirtas atlikti <96> tyrimus/

Saturs pietiekams <96> testiem/Inhoud

voldoende voor “96” testen/til ”96” test/

Tilstrekkelig innhold for <96> prøver/

Wystarczy na wykonanie <96> testów/

Conteúdo suficiente para “96” ensaios/

Conţinut suficient pentru 96 de teste/

Содержит достаточные количества для

«96» определений/Innehåller tillräckligt till

“96” antal tester/Obsah postačuje na tento

počet testov: <96>/Vsebina zadostuje za

<96> testov/Sadržina dovoljna za <96>

testova/<96> testleri için yeterlilik içerir

3

CONT

Consult Instructions for Use/

Прочетете инструкцията за

употреба/Konzultujte s návodem

k použití/Se brugsanvisning/Siehe

Gebrauchsanweisung/Συμβουλευτείτε

τις Οδηγίες σχετικά με τη χρήση/

Consulte las instrucciones de uso/

Vt kasutusjuhendit/Consulter le mode

d’emploi /Pročitajte upute za uporabu/

Olvassa el a használati utasítást/

Consultare le istruzioni per l’uso/ Dėl

naudojimo žiūrėkite instrukcijas / Izlasiet

lietošanas instrukciju /Raadpleeg de

instructies voor gebruik/ Les instruksene

før bruk/Sprawdzić w instrukcji użycia/

Consulte as Instruções de Utilização/

Consultaţi instrucţiunile de utilizare/

Обратитесь к инструкции по

применению/Se bruksanvisning/

Prečítajte si návod na používanie/

Pročitajte uputstvo za upotrebu/

Kullanım Talimatlarına Bakınız

Contents of kit/Съдържание на набора/

Obsah soupravy/ Kittets indhold / Inhalt

des Kits /Περιεχόμενα του κιτ/Contenido

del kit/ Komplekt sisaldab/Contenu du

kit/Sadržaj opreme/A készlet tartalma /

Contenuto del kit/Rinkinio turinys /

Komplekta saturs / Inhoud van de set/

Settets innhold /Zawartość zestawu/

Conteúdo do kit/Conţinutul setului/

Компоненты набора/ Kit innehåll/

Obsah súpravy/Vsebina kompleta /Sadržaj

opreme/ Kitin içindekiler

Biological risks/Биологическа

опасност/Biologická rizika/Biologisk

fare/Biologische Gefahren/Βιολογικοί

κίνδυνοι/Riesgos biológicos /

Bioloogilised ohud /Risques biologiques/

Biološkli rizici /Biológiai kockázatok/Rischi

biologici /Biologinis pavojus /Bioloģiskais

risks/Biologische risico’s /Biologiske

risikoer/Zagrożenie biologiczne/Riscos

biológicos / Biologisk risk/Pericole

biologice/Биологическая опасность/

Biologicky rizikové/Biologické riziká /

Biološkli rizici /Biyolojik riskler

ORIG HUM

ORIG MOU

ORIG BOV

+

Human/С човешки произход/Lidské/

Humant/Human/δείγματα αναφοράς/

Humano/ Inimpäritolu /Humaine/ Ljudskog

porjekla /Humán/Origine Umana /

Žmogaus kilmės/Cilvēku izcelsmes/

Human/ Menneske/ Ludzka /Humano/

Origine umană/Человеческого

происхож дения/Human/Ľudské/

Humanega izvora / Ljudskog porekla /İnsan

From mouse/С миши произход/Myší/

Fra mus / Maus /απο ποντίκι/de ratón/

Hiirtelt/De souris / Mišijeg porjekla /

Egérből/ Murino/Pelės kilmės/No peles/

Van muizen/Fra mus / Mysia /Do rato/De

la şoareci/Мышиного происхож дения/

Från mus / Myšie/ Mišjega izvora / Mišijeg

porekla /Fareden

Bovine/С говеж ди произход/

Hovězí/Bovin/Rind /από βοοειδή/

Bovino/Veistelt/Bovine/Rogate stoke/

Szarvasmarha /Bovino/Jaučio/No

liellopa/Bovien/Bovin/Wołowy/Bovino/

Origine bovină/крупного рогатого

скота/Från ko/Hovädzie/Govejega

izvora /Rogate krupne stoke/Bovin

Reconstitute with/Разтваряне с/

Rozřeďte pomocí/Rekonstitueres med /

Rekonstituieren mit /Ανασύσταση με/

Reconstituir con/ Lahjendamine/

Reconstituer avec/Rekonstituirajte s /

Feloldáshoz/Ricostituire con/Atkurti,

ištirpdant su/Atšķaidīt ar/Reconstitutie

met/Rekonstitueres med/Odtworzyć

za pomocą/Reconstituir com /A se

reconstitui cu/Растворить в/

Rekonstituera med/Rozrieďte pomocou/

Rekonstituirajte z/s /Ponovno formiranje

sa /Yeniden oluşturulur

Manufacturer/Производител/Výrobce/

Producent/Hersteller/ Kτασκευαστής/

Fabricante/Tootja /Fabricant/Proizvođač/

Gyártó/Fabbricante/Gamintojas /

Ražotājs/Fabrikant/Produsent/

Producent/Fabricante/Producător/

Производитель/Tillverkare/ Výrobca /

Izdelovalec/Proizvođač/Üretici

4

TR

CYFRA 21-1 EIA

Kullanım Talimatları Enzim immunometrik tahlil kiti

96 test için

KULLANIM AMACI

CYFRA 21-1 EIA kiti, insan serumunda çözünür 19 stokeratin fragmanının

kantitatif tespiti için amaçlanmıştır. Bu tahlil, akciğer kanseri hastalarının

tedavisinde ve hastalığın seyri esnasında hastalığın izlenmesi için bir yardımcı

olarak kullanılmaktadır. CYFRA 21-1 hastası için seri testlerin değerleri ,

akciğer kanserinin izlenmesi için kullanılan diğer yöntemlerle birlikte

kullanılmalıdır.

ÖZET VE TAHLİLİN AÇIKLAMASI

Sitokeratin 19, en az yirmi farklı sitokeratin polipeptit ailesinin bir üyesidir.

Sitokeratin epitel hücrelerinin(1, 2) ara filaman yapısını oluşturur. Sitokeratin

filamanları çok az çözünebilmektedir,ancak proteolitik bozulmanın ardından

çözünür sitokeratin fragmanları oluşur ve vücut sıvılarına salınır.

CYFRA 21-1, serumdaki (3-6). sitokeratin 19 fragman düzeyini belirleyen bir

kittir. CYFRA 21-1 EIA, sitokeratin 19 için spesifik iki monoklonal antikoru (BM

19.21 ve KS 19.1) baz alır. Sitokeratin 19 fragmanlarının yüksek seviyeleri,

akciğer kanseri (5, 9-12) ve aynı zamanda mesane kanseri (13) gibi diğer

kanserli olan hastalardan alınan serumlarda görülür. CYFRA 21-1'in akciğer

kanseri olan hastalarda, tedavi esnasında , hastalığın seyrinin izlenmesinde

ve nüksünün saptanmasında (11,14-17) faydalı olduğu bildirilmiştir.

TEST PRENSİBİ

CYFRA 21-1 EIA, sitokeratin 19 (7-8) çözünür fragmanlarının iki ayrı antijenik

determinanına karşı yönelik iki monoklonal antikoru (farelerden elde edilen) baz

alan, rekabetçi olmayan katı faz immuno analiz kitidir. Kalibratörler, kontroller ve

hasta numuneleri, streptavidin ile kaplanmış mikro-Anti-CYFRA 21-1 MAb etiketli

horseradish peroxidase (HRP) ve biyotinile edilmiş anti-CYFRA 21-1 MAb ile

birlikte inkübe edilir. Yıkama işleminden sonra, her kuyucuğa Substrat/kromojen (

hidrojen peroksit ve 3,3', 5,5' tetrametil benzidin) tamponu eklenir ve enzim

reaksiyonunun devam etmesine izin verilir.Eğer antijen mevcut ise, enzim

reaksiyonu esnasında mavi renk gelişecektir. Renk gelişimi yoğunluğu,

örneklerdeki CYFRA 21-1 miktarı ile orantılıdır.

Renk yoğunluğu, bir mikroplaka spektrometre vasıtasıyla 620 nm de( veya

opsiyonel olarak stop solüsyonunun eklenmesinden sonra 405 nm de) saptanır.

5

Kalibrasyon eğrileri, her tahlil için, her bir kalibratörün konsantrasyonuna karşı

gelen absorbans değerinin işaretlenerek çizilmesiyle oluşturulmaktadır. Hasta

numunelerinin CYFRA 21-1 konsantrasyonları, kalibrasyon eğrisi

oluşturulduktan sonra okunur.

REAKTİFLER

• Her CYFRA 21-1 EIA kiti, 96 test için yeterli reaktifleri içerir.

• Kit son kullanım tarihleri, kit kutusunun dış tarafında bulunan etiketlerde belirtilmiştir.

• Son kullanım tarihi geçen kitleri kullanmayın.

• Farklı lot numaralı kit reaktiflerini karıştırmayın.

• Kiti 2–8°C de muhafaza edin.Dondurmayın.

• Açılan reaktifler, orijinal kaplarında muhafaza edildiğinde ve öngörüldüğü gibi

işlendiğinde kontamine olmadan, aşağıda verilen tabloya göre stabildir.

Kullandıktan sonra hemen 2–8°C ye getirin

Bileşen Miktar Muhafaza ve ilk

kullanımdan sonra

stabilite

MICROPLA

Mikroplaka 1 Plaka 2—8°C’de plaka üzerinde

belirtilen son kullanma tarihine

kadar

12 x 8 streptavidin kaplı kırılabilir kuyucuklar.Açıldıktan sonra , kullanılmayan

stripleri hemen içinde kurutucu olan alüminyum torbalarına koyun. Kuru tutmak

için dikkatlice kapatın.

CAL CYFRA 21-1 A

CYFRA 21-1 Calibrator A 1 x 8 mL 2–8°C’de şişe

üzerinde belirtilen son

kullanma tarihine kadar

Fostat tamponlu tuz solüsyonu, büyükbaş hayvan serum albümini, inert sarı boya ve

azid ihtiva etmeyen antimikrobiyal koruyucu içerir. Kullanıma hazırdır. Numune

dilüsyonu için kullanılmalıdır.

6

Component Quantity Storage and stability

after first use

CYFRA 21-1 Calibrators B-F 5 şişe, Sulandırıldıktan sonra

liyofilize 2–8°C’de 4 hafta

-20°C veya daha düşük sıcaklıkta 4 ay

CAL CYFRA 21-1 B 1 x 1 mL

CAL CYFRA 21-1 C 1 x 1 mL

CAL CYFRA 21-1 D 1 x 1 mL

CAL CYFRA 21-1 E 1 x 1 mL

CAL CYFRA 21-1 F 1 x 1 mL

Fosfat tamponlu tuz çözeltisi içinde CYFRA 21-1 antijeni içeren liyofilize kalibratörler,

büyükbaş serum albümini, inert sarı boya ve azid ihtiva etmeyen antimikrobiyal

koruyucu içerir.Kullanımdan önce distile ya da deiyonize su ile sulandırın

NOTE: Doğru CYFRA 21-1 konsantrasyonu lota özeldir ve her şişenin etiketinde

belirtilmiştir.

CYFRA Controls(kontroller)

2 şişe, Sulandırıldıktan sonra

liyofilize 2–8°C’de 1 hafta

-20°C veya daha düşük

sıcaklıkta 4 ay

CONTROL CYFRA 21-1 1

CONTROL CYFRA 21-1 2

1 x 1 mL

1 x 1 mL

Liyofilize kontroller, insan serum matrisi içinde CYFRA 21-1 antijeni ve azid

ihtiva etmeyan antimikrobiyal koruyucu içerir. Kullanımdan önce distile ya da

deiyonize su ile sulandırın

7

Component Quantity Storage and stability

after first use

BIOTIN Anti-CYFRA 21-1

Biotin Anti-CYFRA 21-1 1 x 15 mL 2—8°C de şişe

üzerinde

belirtilen son kullanım

tarihine kadar

Biyotin Anti-CYFRA fare monoklonal antikoru, yaklaşık 1.25 µg/ mL. dir.Tris-

HCl tamponlu tuz solüsyonu (pH 7.2), büyükbaş serum albümin, bloklama

ajanı, deterjan, inert mavi boya ve azid ihtiva etmeyen antimikrobiyal koruyucu

içerir. Kullanımdan önce Tracer ile karıştılır.

CONJ Anti-CYFRA 21-1

Tracer, HRP Anti-CYFRA 21-1 1 x 0.75 mL 2—8°C şişe üzerinde

belirtilen son kullanım

tarihine kadar

Fare monoclonal antikor HRP Anti-CYFRA 21-1stok solüsyonu yaklaşık 42

µg/mLdır. Azid ihtiva etmeyen antimikrobiyal koruyucu içerir . Kullanımdan

önce Biotin Anti-CYFRA 21-1 ile karıştırılır.

SUBS TMB

8

Component Quantity Storage and stability

after first use

TMB HRP-Substrate 1 x 12 mL 2—8°C şişe üzerinde

belirtilen son kullanım

tarihine kadar

Hidrojen peroksit tamponu ve 3,3’,5,5’ tetrametilbenzidin (TMB) içerir.

Kullanıma hazırdır.

STOP

Stop Solution (solüsyonu) 1 x 15 mL 2—8°C şişe üzerinde

belirtilen son kullanım

tarihine kadar

0.12 M Hidroklorik asit içerir. Kullanıma hazırdır.

9

Component Quantity Storage and stability

after first use

WASHBUF 25X

Wash Concentrate 1 x 50 mL 2—8°C şişe üzerinde

(yıkama konsantresi) belirtilen son kullanım

tarihine kadar

Tween 20 li Tris-HCL tamponlu tuz solüsyonu. Koruyucu olarak Germall II içerir.

Kullanımdan önce distile ya da deiyonize su ile 25 kez dilüe edilir.

Kararsızlıkl (bozunma) Belirtileri TMB HRP-Substrate renksiz ya da hafif mavimsi olmalıdır. Mavi renk belirginleşmişse reaktif kontamine olmuştur ve atılmalıdır. UYARILAR VE ÖNLEMLER In Vitro Diagnostic kullanım içindir: • Prospektüsteki talimatları takip edin. Bu prospektüsteki talimatlardan herhangi bir sapma olursa, tahlil sonuçlarının güvenilirliği garanti edilemez.. • Tüm hasta örnekleri potansiyel enfeksiyonlu olarak ele alınmalıdır. İnsan kaynaklı reaktifler ve hasta örneklerinin , OSHA Kanla bulaşan Patojenler Standartına(19) uygun olarak işlenmesi önerilir. Enfeksiyöz ajanlar içeren ya da içerdiği süphelenilen metaryaller için, Biyogüvenlik düzeyi 2 (20) ya da diğer uygun biyogüvenlik uygulamaları , kullanılmalıdır. • Hidrojen peroksit veya hidroklorik asit içeren reaktifler ile temastan kaçınınız. Bu reaktiflerin herhangi biri ile temas olması halinde, su ile iyice yıkayın. • Tüm atık malzemelerin ortadan kaldırılması (imhası) için yerel kurallara uyun. Dikkat Insan kaynaklı reaktif hazırlanmasında kullanılan her bir donor öğesi, test edilmiş ve HIV-1/2 Antikoru, HCV antikoru ile Hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) için reaktif olmadıkları saptanmıştır. Hiçbir yöntem kan yoluyla bulaşan hastalıkların varlığını tamamen ekarte edemediği için, insan kaynaklı ürünler, potansiyel bulaşıcı olarak ele alınarak işlenmeli ve imha edilmelidir.

9

ÖRNEK TOPLAMA VE KULLANMA

CYFRA 21-1 EIA , insan serumu ile kullanım için tasarlanmıştır. Kanı

venipuncture tekniği ile damardan alın ve serumu genel prosedürlere göre

ayırın. Numuneler 2-8°C de 1 gün muhafaza edilebilir. Daha uzun süreli

periyotlar için -40°C ya da daha düşük sıcaklılarda muhafaza edin. Numuneleri

tekrar tekrar dondurup çözmekten kaçının.Doğru büyüklükte tüp seçin.

Donmuş örnekleri oda sıcaklığına getirin ve analizden önce hafifçe çevirerek

iyice karıştırın. Elektrik titreşimli mikserler (Vortex) kullanılarak numunelerin

karıştırılması işlemi en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır.

PROSEDÜR

Kit ile verilmeyen , Gerekli Malzemeler

1. Mikroplaka Çalkalayıcı

Çalkalama orta kuvvette olmalı , yaklaşık 900-1100 titreşim/dakika

2. Mikroplaka Yıkama Cihazı 350 µL / kuyucuk / yıkamadevri minimum dolum hacimli 1 ve 6 yıkama

döngüsü yapabilen otomatik plaka yıkayıcı

Eğer otomatik mikroplaka yıkayıcısı kullanılmazsa, Nunc Immuno-8

manuel strip yıkayıcı tavsiye edilir.

3. Mikroplaka Spektrofotometresi

620 nm ve / veya 405 nm dalga boyuna ve 0-3.0 absorbans aralığına sahip olan mikroplaka spektrofotometresi

4. Hassas Pipetler

Mikrolitrelik hacimleri dağıtmak için, tek kullanımlık plastik uçlu. 100 µL

için 8-kanallı pipet veya tek kullanımlık plastik ipuçları ile dispenser

(dağıtıcı) pipet tavsiye edilir, ancak gerekli değildir. Mililitre hacimlerin

dağıtılması için pipetler.

5. Distile veya deiyonize su

CYFRA 21-1 Kalibratörlerin, CYFRA 21-1 kontrollerin yeniden oluşturulması

(sulandırılması) ve dilüe yıkama solüsyonunun hazırlanması için.

10

Prosedür ile ilgili notlar

1. Prospektüsün tam olarak anlaşılması , CYFRA 21-1 EIA kitinin doğru

kullanımını sağlamak için gereklidir. Kit ile birlikte verilen reaktifler,

tamamlayıcı bir öğe olarak kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Farklı lot

numaralarına sahip kitlerdeki özdeş reaktifleri karıştırmayın. Kit

reaktiflerini, kit kutusunun dışına basılmış olan son kullanma tarihinden

sonra kullanmayınız.

2. Reaktiflerin kullanımdan önce oda sıcaklığına (20–25°C) gelmesine izin

verilmelidir. Dondurulmuş numuneler iyice çözüldükten sonra hafifçe çevirerek

, nazik bir şekilde karıştırılmalıdır. Elektrik titreşimli mikserler (Vortex)

kullanılarak numunelerin karıştırılması işlemi en fazla 1 saniye ile sınırlı

olmalıdır. Doğru büyüklükte tüp seçin

3. Tahlil esnasında ve sonrasında numuneleri açık bir şekilde saptayabilmek

için , numunelerin ve kalibratörlerin pipetlemeye başlamadan önce , striplerin

işaretlenmesi tavsiye edilir.

4. Katı faz bağlı antikor-antijen komplekslerinden reaktiflerin ve

bağlanmamış ve bağlanmış antijenin ayrılması için tam ve etkili bir

yıkama gerekliliği EIA da en önemli adımlardan biridir. Etkili bir yıkama

sağlamak için her yıkama döngüsünde , tüm kuyucukların en üst

kenarına kadar yıkama solüsyonu ile dolduğundan, yıkama solüsyonunun

iyi bir akış oranıyla verildiğinden, yıkama döngüsü aralarında ve

sonrasında kuyucukların aspirasyonunun tam anlamıyla yapılıp tamamen

boş olduklarından nemin olun.Eğer sıvı kalmışsa , plakayı ters çevirin ve

dikkatlice kurutma kağıdına dokundurun.

- Otomatik strip yıkayıcı: Özenli temizlik ve bakım için üreticinin

talimatlarını izleyin, her inkübasyondan sonra ve önce gerekli olan

sayıda yıkama işlemi yapın.

800 uL'lik bir dağıtma hacmili overflow modu be strip işlem modu

özellikle tavsiye edilir. Yıkama solüsyonu Aspirasyon / yıkama

cihazında uzun süre bırakılmamalıdır, iğneler sıvı boşaltma ve

apirasyon sonucu tıkamış olabilir.

5. TMB HRP-Substrate kontaminasyona karşı son derece hassastır.TMB HPR- Substrat’ın optimal stabilitesi için ve reaktifin kontaminasyonunu engellemek için tercihen tek kullanımlık plastik tepsiye veya temizlenmiş hazneye gerektiği kadar şişeden dökünüz. Temiz tek kullanımlık pipet uçları (veya dispenser pipet uçları) kullandığınızdan emin olunuz.

6. Numuneler ve reaktiflerle çalışırken, temiz tek kullanımlık pipet ucu ve uygun hassas pipetleme tekniği kulandığınızdan emin olunuz. Sıvının taşmasını önlemek için, pipet ucunun sıvı yüzeyine temas etmesine izin vermeyiniz. Numune ve TMB HRP çalışırken özenli pipetleme tekniği büyük

önem taşır.

11

Reaktiflerin Hazırlanması Hazırlanmış Reaktiflerin Stabilitesi CYFRA 21-1 Calibrators(kalibratörler) 4 hafta 2–8°C de

4 ay -20°C veya daha düşük

Her şişeye tam olarak 1.0 mL distile su ekleyin. Hazırladıktan sonra en az 15 dakika bekletin ve kullanmadan önce nazikçe karıştırın. NOT: Kalibratörlerin konsantrasyonu etiketlerde belirtilmektedir ve sonuçların hesaplanmasında kullanılır. Yalnızca hafifçe döndürerek veya tersine çevirerek karıştırın. Elektrik titreşimli mikserler (Vortex) kullanılarak kalibratörlerin karıştırılması işlemi en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır.

CYFRA 21-1 Controls(kontroller) 4 hafta 2–8°C de

4 ay -20°C veya daha düşük

Her şişeye tam olarak 1.0 mL distile su ekleyin. Hazırladıktan sonra en az 15 dakika bekletin ve kullanmadan önce nazikçe karıştırın. NOT: Kontrollerin aralıkları etiketlerde belirtilmektedir .Yalnızca hafifçe döndürerek veya tersine çevirerek karıştırın. Elektrik titreşimli mikserler (Vortex) kullanılarak kontrollerin karıştırılması işlemi en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır.

Wash Solution (yılkama solüsyonu) 2 hafta, 2–25°C de

kapalı bir kap içerisinde

50 mL yıkama konsantresini bir kap içerisine dökün ve 1200 mL distile ya da deiyonize su ekleyerek 25 kez dilüe tamponlanmış yıkama solüsyonu elde edin.

Antibody Solution (Antikor antikor solüsyonu) 1 gün, 2–8 °Cde

Gerekli miktarda antikor solüsyonu hazırlamak için, Strip başına1 mL Biotin Anti-CYFRA 21-1ile 50 µL Tracer, Anti-CYFRA 21-1 yi karıştırın. (Aşağıdaki tabloya bakın):

12

Strip Sayısı Tracer, HRP Anti-CYFRA 21-1

(µL)

Biotin Anti-CYFRA 21-1

(mL)

1

50

1

2 100 2

3 150 3

4 200 4

5 250 5

6 300 6

7 350 7

8 400 8

9 450 9

10 500 10

11 550 11

12 600 12

Anitkor solüsyonunun hazırlanması için, temiz plastik veya cam tüp kullandığınızdan emin olun.

TAHLİL PROSEDÜRÜ

Her kalibratör, kontrol ve numunenin tespiti için çift performans gerçekleştirin. Her testte bir kalibrasyon eğrisi olmalıdır. Bütün reaktifler ve numuneler kullanılmadan once oda sıcaklığına (20-25 °C) getirilmelidir.

1. Teste CYFRA 21-1 kalibratörlerini, kontroller 1 & 2, yıkama solüsyonu ve antikor solüsyonunu hazırlayarak başlayın. Temiz kapların kullanılması oldukça önemlidir. Talimatları dikkatlice takip edin.

2. Gerekli olan mikroplaka striplerini, bir strip çerçevesine yerleştirin. (Kalan stripleri hemen içinde kurutucu olan alüminyum torbaya koyun ve ağzını sıkıca kapatın). Yıkama solüsyonu ile, her stribi bir kez yıkayın. 30 dakika içerisinde çalışılmayacak stripleri yıkamayın.

3. Örnekleri hafifçe çevirerek karıştırın. 1 saniyeden fazla Vortex işlemi yapmayın.

50 şer µL CYFRA 21-1 kalibratörünü (CAL A, B, C, D, E, veF), Kontrol 1 & 2 yi ve bilinmeyen örneklerini (unknowns-Unk) aşağıdaki şemaya gore stripteki kuyucuklara pipetleyin.

13

A Cal

A

Cal

E

1st

Unk

B Cal

A

Cal

E

1.

Unk

C Cal

B

Cal

F

2.

Unk

D Cal

B

Cal

F

2.

Unk

E Cal

C

C1

F Cal

C

C1

G Cal

D

C2

H Cal

D

C2

1 2 3 4 5 6 7 v.s.

4. 100 µL lik 8-kanallı hassas pipet ( ya da 100 µL lik hassas pipet) kullanarak, her kuyucuğa 100 µL Antikor solüsyonu ekleyin.

Sıvının taşmasını önlemek için pipet ucunun sıvı yüzeyine temas etmesine izin vermeyiniz.

5. Mikroplaka çalkalayıcı kullanarak plakayı, sürekli çalkalanmasını sağlayarak , oda sıcaklığında (20-25°C) 1 saat (± 5 dakika) inkübe edin.

6. İnkübasyondan sonra aspire edin ve her stribi 6 kez yıkayın.

7. 4. Basamaktaki prosedürün aynısını uygulayarak her kuyucuğa 100 µL of TMB HRP-Substrate ekleyin. TMB HRP-Substrate mümkün olduğu kadar hızlı bir şekilde kuyucuklara ilave edilmelidir, ilk ve son kuyucuklara ilave edilme işlemleri arasında süre 5 dakikayı geçmemelidir.

8. Sürekli çalkalayarak, oda sıcaklığında 30 dakika (± 5 dakika) inkübe edin. Direkt güneş ışığına maruz bırakmaktan kaçının.

9. Hemen mikroplaka spektrofotometresinde 620 nm absorbansta okuyun.

Opsiyon

Laboratuar 620 nm absorbans okuyabilen bir mikroplaka spektrofotometresine sahip değilse, aşağıdaki Alt.9 maddesi 9. maddeye alternatiftir :

Alt. 9. 100 µL Stop solüsyonu ekleyin, karıştırın ve stop slolüsyonu eklendikten sonraki 15 dakika içerisinde mikroplaka spektrofotometresinde 405 nm absorbansta okuyun.

14

CONJ Anti-CYFRA 21-1

BIOTIN Anti-CYFRA 21-1

Protokol Sayfası CYFRA 21-1 EIA

REF 211-10

Bileşenleri kullanımdan hemen once hazırlayın. Yıkama ve inkübasyon koşullarını talimatlara uygun olarak kullanın.

Adım Şişe/Plaka Prosedür

1. CYFRA 21-1 kalibratörlerinin hazırlanması

CYFRA 21-1 kontrollerin hazırlanması

Yıkama Solüsyonunun hazırlanması

Antikor Solüsyonununun hazırlanması

CAL CYFRA 21-1

B, C, D, E, F CONTROL CYFRA 21-1

1, 2

WASHBUF 25X

Her şişeye 1 mL distile su ekleyin.Nazikçe

çalkalayın ve en az 15 dakika beklemeye bırakın.

NOT: Her kalibratör / kontrolün tam konsantrasyonu

etiketinde belirtilmiştir. Elektrik titreşimli mikserler

(Vortex) kullanılarak numunelerin karıştırılması işlemi

en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır. 50 mL yıkama konsantresini 1200 mL distile ya da deiyonize su ile dilüe edin.

Her strip için 50 µL Tracer, HRP Anti-CYFRA 21-1 ile 1mL Biotin Anti-CYFRA 21-1 yi karıştırın:

Strip Tracer, HRP Anti- Biotin Anti-

Numarası CYFRA 21-1 (µL) CYFRA 21-1 (mL)

1 50 1

2 100 2

3 150 3

4 200 4

5 250 5

6 300 6

7 350 7

8 400 8

9 450 9

15

10 500 10

11 550 11

12 600 12

2. Yıkama

3. Kalibratörleri, Kontrolleri

ve numuneleri ekleyin

4. Antikor Solüsyonu ekleyin

5. Inkübasyon

6. Yıkama

MICROPLA

CAL CYFRA 21-1

A, B, C, D, E, F CONTROL CYFRA 21-1

1, 2 ANTIBODY SOLUTION

MICROPLA

MICROPLA

Her kuyucuğu manuel ya da otomatik yıkayıcı

kullanarak yıkama solüsyonuyla bir kez yıkayın.

Her kuyucuğa 50 µL . Elektrik titreşimli mikserler

(Vortex) kullanılarak numunelerin karıştırılması işlemi

en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır.

Her kuyucuğa 100 µL

20-250C de çalkalayarak 1 saat

Her kuyucuğu manuel ya da otomatik yıkayıcı kullanarak, yıkama solüsyonuyla altı kez yıkayın.

7. TMB HRP-Substrate ekleyin SUBS TMB Her kuyucuğa 100 µL

8. Inkübasyon

9. Absorbansı okuyun

Alt.9 Stop Solusyonu ekleyin

Alt.10 Karıştırma

Alt.11 Absorbansı okuyun

MICROPLA

MICROPLA

STOP

MICROPLA

MICROPLA

20-250C de çalkalayarak30 dakika

620 nm

Her kuyucuğa 100 µL

20-250C de

405 nm de 15 dakika içerisinde

16

Ölçüm Aralığı

CYFRA 21-1 EIA konsantrasyon ölçüm aralığı 0.5 ila yaklaşık 50 ng/mL dir.

Eğer CYFRA 21-1 konstantrasyonları benilen ölçüm aralığının üzerindeyse,

analiz öncesi numunelerin CYFRA 21-1 Calibrator A ile dilüe edilmesi önerilir.

("seyreltilmiş numuneler ile sonuçların hesaplanması"na bakın).

Kalite Kontrol

CYFRA 21-1 Kontrol 1 ve 2, her bir deney serisinin doğrulamanması için

kullanılmalıdır.. Beklenen sonuç aralıkları, flakon etiketleri üzerinde

belirtilmiştir.

CYFRA 21-1 tahlil sonuçları;

- Çift çalışılan kontrollerin ortalama değerleri, belirtilen aralıklar

içindeyse,

- Çift çalışılan kalibratör B-F ve kontrol tekrarlanan absorbans okumalarının CV'si %15'i aşmamışsa,

- Çift çalışılan kontrollerin tekrarlanan konsantrasyon değerlerinin CV'si %15'i aşmamışsa, - Çift çalışılan kalibratör A (sıfır) ün tekrarı diğerlerinden 0.06 OD

birimden fazla değilse,

geçerli kabul edilmelidir

Geçersiz kalibratör ve kontrol değerlerine sahip olan tahlil sonuçları varsa,

plaka yıkayıcı ve okuyucu performansları, pipetlerin doğruluğu, reaktiflerler

tamamiyle kontrol edilerek tekrarlanmalıdır. Her laboratuvar ayrıca, tahlilin

kesinliğini sağlamak için bir kontrol olarak , farklı seviyelerde kendi serum

havuzlarını hazırlayabilir.

Referans Materyali

Hiçbir yagın referans malzemesi CYFRA 21-1 antijeni için kullanılabilir olmadığından , CYFRA 21-1EIA Kalibratör değerleri iç referans standartlarına karşı saptanır.

SONUÇLARIN HESAPLANMASI Yerleşik veri hesaplama programlı bir mikroplaka spektrofotometresi

kullanılmışsa , spektrofotometrenin klavuzuna bakın ve her CYFRA 21-1

kalibratörünün etiketinde belirtilen konsantrasyonu kullanarak bir program

oluşturun.CYFRA 21-1sonuçlarının otomatik hesaplanması için, cubic

spline curve fit metodunun kullanılması önerilir. Kalibratör A, 0 ng/mL.

değeriyle eğri içine dahil edilmelidir.

Bu prospektüste gösterilen CYFRA 21-1 sonuçları, Molecular Devices

SOFTmax® PRO software kübik spline fit eğrisi kullanılarak hesaplanmıştır.

Bu eğri, veri noktalarının her bir çifti arasında, kübik denklem uyumu

oluşturur. Kübik denklem genel formu: y=A+Bx+Cx2+Dx3.

17

Manuel değerlendirme için kalibrasyon eğrisi, CYFRA 21-

1konsantrasyonuna (nm/mL'de) karşılık gelen her CYFRA 21-1

kalibratörünün elde edilen absorbans değeri (A) çizilerek

oluşturulur.Bilinmeyen CYFRA 21-1 konsantrasyonları, her hasta

numunesinin ortalama absorbans değeri kullanılarak, kalibrasyon

eğrisinden okunabilir.

Sonuç Örnekleri

Numune Kalibratör

Değerleri

(ng/mL)

Abs değer

ortalaması

(A)

CYFRA 21-1

ng/mL

Calibrator A

0

0.041 Calibrator B 1.4 0.151 Calibrator C 5.0 0.405 Calibrator D 14.8 1.080 Calibrator E 24.1 1.635 Calibrator F 47.6 2.721

Numune 1 0.259 2.9

Numune 2 1.366 19.4

Örnek,tahil sonuçlarını determine etmek için bu eğriyi kullanmayın.

Kesin CYFRA 21-1 konsantrasyonu her kalibratör şişesinin etiketinde belirtilmiştir.

18

Not: Hastanın izlenmesi esnasında ,CYFRA 21-1 sonuçları hesaplamasının

değerlendirme metodları sürekli kullanılmalıdır.

Dilüe numunelerin sonuçlarının hesaplanması

Ölçüm aralığının üstünde kalan CYFRA 21-1 konsantrasyonlu numuneler,

CYFRA 21-1 kalibratör A ile dilüe edilebilir.. ½ oranında dilüsyon önerilir.

- 1/2 dilüsyon = 100 µL numune + 100 µL CYFRA 21-1 Kalibratör A

Dilüe edilmiş numunenin CYFRA 21-1 konsantrasyonu daha sonra

aşağıdaki gibi hesaplanır:

- Dilüsyon 1/2 : 2 x ölçülen değer

PROSEDÜR LİMİTLERİ

Akciğer kanseri tanılı hastalar, sağlıklı bireylerdeki ile aynı aralıkta CYFRA 21-

1 değerine sahip olabilir. Yüksek CYFRA 21-1 seviyeleri, ayrıca bazı iyi huylu

solunum hastalıkları (13,18), ve börek yetmezliği gibi maling (habis) olmayan

hastalıklarına sahip kişilerde de bulunabilir. Bu nedenle CYFRA 21-1 seviyesi,

maling hastalığın varlığı ya da yokluğu için kesin bir kanıt olarak kullanılamaz,

CYFRA 21-1 EIA kanser taramalarında kullanılmamalıdır. Test sonuçlarının ,

hastalık tanısındaki diğer araştırma ve prosedürlerle bağlantılı olarak

yorumlanması gerekir ve CYFRA 21-1 testi herhangi bir klinik muayenenin

yerini almamalıdır. Tahlilin performansı,küçük hücreli akciğer kanseri (SCLC),

büyük hücreli karsinom, Evre I ve II akciğer kanserlerinde valide edilmemiştir.

Tamponun belirli bloke edici maddeler içermesine rağmen, hasta serumundaki

anti-reaktif antikorlar (insan anti-mouse antikoru (HAMA) veya heterofilik

antikorlar) bazen test ile etkileşime girebilirler.. Aşırı karıştırma işlemi, hatalı

(yalnış) düşük CYFRA 21-1 değerlerine neden olabilir, bu nedenle elektrik

titreşim mikserleir (Vortex) kullanılarak yapılan numunelerin karıştırılması

işlemi , en fazla 1 saniye ile sınırlı olmalıdır. Örnekler alikot ise , karıştırma

esnasında baskıyı engellemek için tüpün boş kısmını sınırlandırın.

20

BEKLENİLEN DEĞERLER

875 örnekte belirlenen CYFRA 21-1 düzeylerinin dağılımı , aşağıdaki tabloda

gösterilmiştir:

CYFRA 21-1 Tahlil Değerlerinin Dağılımı

Olgular 0 – 1.8

ng/mL

1.9 – 5.0

ng/mL

5.1 – 20.0

ng/mL

> 20.0

ng/mL

SAĞLIKLI GÖRÜNEN

Tüm Normaller

240

228

12

0

0

TEHLİKESİZ KOŞULLAR İyi Huylu Akciğer Hastalığı

75

71

4

0

0

CHF 40 30 10 0 0

İyi Huylu Karaciğer Hastalığı 40 38 2 0 0

İyi Huylu Böbrek Hastalığı 40 4 32 4 0

Kanser

Akciğer Kanseri

120

47

36

24

13

Mesane Kanseri 40 17 3 12 8

Meme Kanseri 40 32 6 1 1

Servikal Kanser 40 24 13 3 0

Özafagus SC Kanseri 40 13 18 7 2

Gastrointestinal kanser 40 25 10 4 1

Baş ve Boyun Kanseri 40 30 9 1 0

Prostat Kanseri 40 37 1 2 0

Yumurtalık Kanseri 40 23 10 5 2

CHF: Konjestif kalp yetmezliği; SC: Yassı Hücreli

Bu çalışmada , sağlıklı bireylerin %95'i , 1.8 ng/mL'in altında bir CYFRA

21-1 değerine sahip idi. Her Laboratuarın, ilgili popülasyon için, kendi

referans değerlerini oluşturmaları önerilir.

AKCİĞER KANSERİ TANILI HASTALARINDA HASTALIĞIN SEYRİNİN

İZLENMESİ

CYFRA 21-1 EIA etkinliğinin, retrospektif klinik bir çalışmayla akciğer kanserli

hastalarda hastalığın seyrinin izlenmesinde yardımcı olduğu tespit edilmiştir.

Üçüncü derece kanser merkezlerinden toplanan seri serum numunelerindeki

CYFRA 21-1 seviye değişimi, hastalık durumunun değişimi ile kıyaslandı. 100

hastayı kapsayan bir çalışmada , hasta başına ortalama 4.1 gözlem sayısıyla

toplamda 314 gözlem çifti alınmıştır. 100 akciğer kanseri olgusu, 95 'i küçük

olmayan (NCSLC) , 5'i ise küçük hücreli (SCLC) akciğer kanseri olarak

sınıflandırıldı. NSCLS nin 90'ı ayrıca, adenokarsinom (68), skuamöz hücreli

21

karsinom (19) ve büyük hücreli karsinom (3) olarak sınıflandırıldı. 100

akciğer kanser olgusunun 79'nun , aşağıdaki tabloda gösterildiği gibi evre

bilgileri vardı. Bu çalışmada, sadece 5 hastada Evre I veya II olduğu için, bu

alt grup populasyonda CYFRA 21-1 performansı yeterince

değerlendirilmemiştir.

Hasta Sayısı

Evre I 2

Evre II 3

Evre III 36

Evre IV 38

Toplam (Evre Bilgisiyle) 79

Bilinmeyen 17

Evresiz 4

Toplam Akciğer Kanser Olgusu 100

CYFRA 21-1 in pozitif değişimi, öndeki değerden en az %50 artış olduğundan,

ölçülebir bir artış olarak tanımlandı. 1.8 ng / ml normal referans aralığının

altındaki değere sahip olan gözlem çiftleri, önemli bir değişime sahip olmayan

olarak tanmlandı. Bu değişim düzeyi, biyolojik değişkenlik (14) ve tahlilin

değişkenliği olarak dikkate alınır.

Hastalığın ilelemesiyle ilişkili olmayan CYFRA 21-1 değerlerindeki önemli bir

değişime sahip olmayan hasta seri numuneleri %87 ya da 200/229 iken ,

hastalığın ilerlemesiyle ilişkili pozitif değişime sahip olan hasta numuneleri

%46'sı ya da 39/85'ti. Toplam uyum %76 veya 239/314'tü. Aşağıdaki tabloda,

veriler 2 x 2 formatında sunulmuştur. Ardışık Çift Başına Hastalık Durum Değişimi

CYFRA 21-1

konsantrasyonunda artış İlerleme İlerleme Yok Toplam

>50% 39 29 68

<50% 46 200 246

Toplam 85 229 314

Klinisyenler, isterlerse CYFRA 21-1 konsantrasyonundaki değişiklik %

oranlarını kendi tercihlerine göre hassasiyet ve özgünlük arasında

değiştirerek kullanabilirler.

21

Aşağıdaki tabloda, test edilen populasyon için ( hastalığı ilerleyen

hastalardan 85 ardışık çift ve hastalık ilerleyişi olmayan hastalardan 229

ardışık çift) negatif öngörülen değerler (NPV) ve pozitif öngörülen değerler

(PPV) ile birlikte, CYFRA 21-1 EIA konsantarasyonlarındaki çeşitli değişim

yüzdesinde CYFRA 21-1 EIA nın hassasiyet ve özgünlük sonuçları

gösterilmektedir.

.• Hassasiyet , yüksek CYFRA 21-1'e sahip , hastalık ilerlemesi olan

hastaların oranı olarak ifade edilir.

• Özgünlük , yüksek olmayan CYFRA 21-1'e sahip , hastalık

ilerlemesi olmayan hastaların oranı olarak ifade edilir.

• PPV , yüksek CYFRA 21-1'li , hastalık ilerlemesi olan hastaların

oranı olarak ifade edilir.

• NPV , yüksek olmayan CYFRA 21-1'li , hastalık ilerlemesi

olmayan hastaların oranı olarak ifade edilir.

CYFRA 21-1

Konsantarsyonundaki artış yüzdesi(%)

Hassasiyet

(%)

Özgünlük

(%)

PPV

(%)

NPV

(%)

30 52.9 84.3 55.6 82.8

40 48.2 85.6 55.4 81.7

50 45.9 87.3 57.4 81.3

60 44.7 88.2 58.5 81.1

70 43.5 89.5 60.7 81.0

PERFORMANS ÖZELLİKLERİ

Kesinlik

Klinik ve Laboratuar Standartları Enstitüsü (CLSI) klavuzu EP5-A2(21)

adına, CYFRA 21-1 çalışılarak bir hassas çalışma gerçekleştirildi.İki farklı

laboratuarda, 20 gün boyunca günde iki ayrı zamanda iki kez tekrarla iki

farklı lotlu reaktifle kullanılarak dört serum numune paneli tahlil edilmiştir. İki

laboratuvarlardan gelen kombine veriler aşağıda özetlenmiştir. *

22

Örnek Reaktif N Ortalama kon. çalışmada çalışmada Toplam Toplam

Lot ng/mL SD (ng/mL) CV % SD (ng/mL) CV %

1

1

160

2.69

0.10

3.7

0.16

6.1

2 160 2.91 0.15 5.1 0.25 8.4

2 1 160 7.28 0.31 4.3 0.50 6.9

2 160 7.63 0.31 4.1 0.56 7.3

3 1 160 17.4 0.42 2.4 0.92 5.3

2 160 18.6 0.48 2.6 0.91 4.9

4 1 160 33.4 0.88 2.6 1.62 4.9

2 160 35.7 1.37 3.8 1.99 5.6

* Örnek Veriler; Laboratuarların sonuçları bu verilerden farklı olabilir.

CYFRA 21-1 için belirlenen total hassasiyetin <%8.6 CV olduğu saptanmıştır.

Saptama ve miktar sınırı

CYFRA 21-1 EIA kitinin saptama limiti 0.12 ng / ml olarak belirlenmiştir.

NCCLS CLSI klavuzu EP17-A (22) , LoD deney tasarımı için kullanılmıştır.

Saptama sınırı (LoD) %95 güven aralığının üst sınırına karşılık gelir ve

sıfırdan ayırt edilebilen en düşük CYFRA 21-1 antijen konsantrasyonunu ifade

eder. CYFRA 21-1 EIA kitinin nicelendirme limiti, 0.21 ng / ml olarak

belirlenmiştir.

Nicelendirme sınırı (LoQ) bir numunedeki en düşük analitik miktara karşılık

gelir, bu tam olarak en yüksek izin verilebilir 17.78 tutarsızlık yüzdesiyle

kantifiye edilebilir

Düzelme

CYFRA 21-1 EIA tahlili ortalama düzelmesi 100 ± %20’dir. Bilinen

Konsantrasyonlu CYFRA 21-1 in normal insan serum numunesine

eklenmesiyle elde edilen antijen solüsyon dilüsyonları ile bir çalışma

gerçekleştirildi.. CYFRA 21-1 konsantrasyonu, CYFRA 21-1 EIA tahlili

kullanılarak saptandı ve sonuçlar % düzelme olarak hesaplandı. Bu

çalışmadan elde edilen örnek veriler, aşağıdaki tabloda özetlenmiştir*:

23

Örnek Endojen Tahlil Değeri (ng/mL)

EklenenCYFRA 21-1 Antijen

(ng/mL)

Gözlemlenen CYFRA 21-1

Tahil Değeri (ng/mL) Yüzde Düzelme**

%

1

0.5

2

2.3

93

5 5.4 100

16 15.4 91

38 39.9 103

2 0.5 2 2.5 99

5 5.2 96

16 16.4 97

38 39.6 102

3 0.6 2 2.6 102

5 5.4 99

16 16.1 95

38 42.0 108

4 0.5 2 2.4 95

5 5.3 98

16 17.6 104

38 43.1 111

5 0.5 2 2.4 96

5 5.4 100

16 17.1 101

38 39.2 101

* Örnek Veriler; Laboratuarların sonuçları bu verilerden farklı olabilir.

**% Düzelme=OGözlemlenen CYFRA 21-1 Konsantrasyonu (ng/mL)/Endojen CYFRA 21-1 Kons. (ng/mL)

+ CYFRA 21-1 Eklenen(ng/mL)

Yukarıda gösterilen dört ayrı spiked konsantrasyonu karşında ortalama düzelme %100 olarak bulunmuştur.

High Dose Hook

High dose hook fenomendir, bu sayede çok yüksek düzeydeki numuneler

tahlilin dinamik aralıkları içinde okunabilir. Yüksek olmayan dose hook efekti

serumlarda 1100 ng/mL CYFRA 21-1 antijene kadar saptanmıştır.

24

Dilüsyon Doğrusallığı

CLSI klavuzu EP6-A (23) den sonra CYFRA 21-1'in modellenmesi için bir

çalışma yapılmıştır. Yükselmiş CYFRA 21-1 değerli serum numuneleri ,

CYFRA 21-1 A Kalibratörüyle (sıfır) dilüe edildi. CYFRA 21-1 konsantrasyonu,

her dilüsyon için saptandı ve yüzde(%) düzelme olarak hesaplandı. Bu

çalışmadan elde edilen örnek veriler, aşağıdaki tabloda özetlenmiştir *.

Örnek Son Dilüsyon Faktörü

Elde edilen değer (ng/mL)

Beklenen değer (ng/mL)

Düzelme yüzdesi** (%)

A

Dilüsyonsuz

42.400

42.400

100.0

1:1.25 35.969 33.920 106.0

1:2.5 17.540 16.960 103.4

1:5 8.513 8.480 100.4

1:10 4.078 4.240 96.2

1:20 2.165 2.120 102.1

1:40 1.010 1.060 95.3

1:100 0.416 0.424 98.1

B Dilüsyonsuz 44.446 44.446 100.0

1:1.25 36.524 35.557 102.7

1:2.5 17.967 17.778 101.1

1:5 8.292 8.889 93.3

1:10 3.855 4.445 86.7

1:20 2.090 2.222 94.0

1:40 1.013 1.111 91.2

1:100 0.494 0.444 111.1

C Dilüsyonsuz 43.511 43.511 100.0

1:1.25 36.738 34.809 105.5

1:2.5 18.202 17.404 104.6

1:5 8.606 8.702 98.9

1:10 4.094 4.351 94.1

1:20 2.164 2.176 99.5

1:40 1.005 1.088 92.4

1:100 0.399 0.435 91.7

* Örnek Veriler; Laboratuarların sonuçları bu verilerden farklı olabilir. **% Düzelme= CYFRA 21-1 Elde edilen konsantrasyon x100 / Beklenen konsantrasyon

Ağırlıklı polinom regresyon ile hesaplanan nonlineerlik, 0.5 ila 50.0 ng/mL ölçüm

aralığında ≤ % 10' dur.

25

Analitik Özgünlük

CYFRA 21-1 EIA tahlilinin ortalama tahlil özğünlüğü 100 ± %15’tir. Kontrol

serumları ile belirtilen konsantrasyonlardaki aşağıdaki bileşenleri ihtiva eden

serumlar ile kıyaslama yapılarak bir düzelme çalışması yapıldı. CLSI kılavuzu

EP7-A (24) , etkileşim deney tasarlaması için kullanıldı. Aşağıdaki maddeler ve

konsantrasyonları test edildi ve test ile herhangi bir etkileşim bulunmadı.

Endojen Seum Etkileşimleri Test Konsantrasyonu

Triglycerides 30 mg/mL

Billirubin 0.2 mg/mL

Hemoglobin 5 mg/mL

Total Protein 120 mg/mL

Kemoterapik ilaç etkileşimleri Test Konsantrasyonu

Carboplatin 500 µg/mL

Cisplatin 165 µg/mL

Dexamethasone 10 µg/mL

Doxorubicin 1.16 µg/mL

Leucovorin 2.68 µg/mL

Methotrexate 45 µg/mL

Paclitaxel 3.5 ng/mL

Potentansiyel etkileşim klinik kondisyonları

CYFRA 21-1 EIA tahlili, ayrıca tahlil özgünlüğünün belirlenmesi için HAMA ve

Romatoid Faktör (RF) içeren numuneler kullanılarak değerlendirildi. HAMA

pozitif altı numune ve RF pozitif beş numune, her numunenin içinde yaklaşık 5

ve 25 ng/mL CYFRA 21-1 spiked antijenli %düzelme için değerlendirildi.Ortalama

düzelme sonuçları aşağıdaki tablıda özetlenmiştir.*

Klinik kondisyon Numune sayısı Ortalama % düzelme

HAMA

6

98

RF 5 101

* Örnek Veriler; Laboratuarların sonuçları bu verilerden farklı olabilir.

26

GARANTİ

Fujirebio Diagnostics tarafından önerilmeyen , prosedürdeki herhangi bir

değişiklik ya da modifikasyon, sonuçları etkileyebilir, bu durumda Fujirebio

Diagnostics, kullanım uygunluğunun ve satılabilirliğinin garantisi de dahil olmak

üzere, zımmi ve meşru olarak ifade edilen tüm garantileri redder.

REFERANSLAR

1. Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human

cytokeratins: patterns of expression of specific cytokeratins in normal epithelia,

tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24

2. Hesse M, Magin TM, Weber K. Genes for intermediate filament proteins and

the draft sequence of the human genome: Novel Keratin genes and a surprisingly

high number of pseudogenes related to keratin genes 8 and 18. J Cell Sci

2001;114:2569-2575

3. Bodenmüller H, Ofenloch-Hähnle B, Lane EB, Dessauer A, Böttger V, Donié

F. Lung Cancer associated Keratin 19 fragments: Development and Biochemical

Characterization of the new Serum Assay Enzymun-Test CYFRA 21-1. Int J

Biol Markers 1994;9:75-81

4. Bodenmüller H. The Biochemistry of CYFRA 21-1 and other cytokeratin-

tests.

Scand J Clin Lab Invest Suppl 1995;221:60-66

5. Stieber P, Dienemann H, Hasholzner U, Müller C, Poley S, Hofmann K,

Fateh-Moghadam. Comparison of Cytokeratin Fragment 19 (CYFRA 21-1)

Tissue Polypeptide antigen (TPA) and Tissue Polypeptide Specific Antigen (TPS)

as Tumor Markers in Lung Cancer.

Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:689-694

6. Bodenmüller H, Donié F, Kaufmann M, Banauch D, The tumor markers TPA,

TPS, TPAcyk and CYFRA 21-1 react differently with the keratins 8, 18 and

19. Int J Biol Markers 1994;9:70-74.

7. Böttger V, Stasiak PC, Harrison DL, Mellerick DM, Lane EB. Epitope

mapping of monoclonal antibodies to keratin 19 using keratin fragments,

synthetic peptides and phage peptide libraries. Eur J Biochem 1995;231(2):475-

85.

8. Stigbrand T et al. Epitope specificity of 30 monoclonal antibodies against

cytokeratin antigens: the ISOBM TD5-1 Workshop. Tumor Biol 1998;19(2):

132-52.

9. Stieber P, Hasholzner U, Bodenmüller H, Nagel D, Sunder-Plassmann L,

Dienemann H, Meier W, Fateh-Moghadam A. CYFRA 21-1. A new marker in lung

cancer. Cancer 1993;72(3):707-13.

27

10. Ebert W, Dienemann H, Fateh-Moghadam A, Scheulen M, Konietzko N,

Schleich T, Bombardieri E. Cytokeratin 19 fragment CYFRA 21-1 compared with

carcinoembryonic antigen, squamous cell carcinoma antigen and neuron-

specific enolase in lung cancer. Results of an international multicentre study. Eur

J Clin Chem Clin Biochem 1994;32(3):189-99.

11. Stieber P, Zimmermann A, Reinmiedl J, Müller C, Hoffmann H, Dienemann

H. CYFRA 21-1 in the early diagnosis of recurrent disease in non small cell lung

carcinomas (NSCLC). Anticancer Res 1999;19(4A): 2665-8.

12. Pujol JL, Molinier O, Ebert W, Daurès JP, Barlesi F, Buccheri G, Paesmans

M, Quoix E, Moro-Sibilot D, Szturmowicz M, Bréchot JM, Muley T, Grenier J.

CYFRA 21-1 is a prognostic determinant in non-small-cell lung cancer: results of

a meta-analysis in 2063 patients. Br J Cancer 2004;90(11):2097-105.

13. Stieber P, Dienemann H, Hasholzner U, Fabricius PG, Schambeck C,

Weinzierl

M, Poley S, Samtleben W, Hofmann K, Meier W, et al. Comparison of CYFRA

21-1, TPA and TPS in lung cancer, urinary bladder cancer and benign diseases.

Int J Biol Markers 1994;9(2):82-8.

14. Trapé J, Perez de Olaguer J, Buxó J, López L. Biological Variation of

Tumor Markers and Its Application in the Detection of Disease Progression in

Patients with Non-Small Cell Lung Cancer. Clin Chem 2005;51:219-222

15. Volmer RT, Govindan R, Graziano SL, Gamble G, Garst J, Kelley MJ,

Christenson RH. Serum CYFRA 21-1 in Advanced Stage Non-Small Cell Lung

Cancer: An early measure of Response. Clin Cancer Res 2003; 9:1728-1733.

16. Holdenrieder S, Stieber P, von Pawel J, Raith H, Nagel D, Feldmann K,

Siedel D. Early and Specific Prediction of the Therapeutic Efficacy in Non-Small

Cell Lung Cancer Patients by Nucleosomal DNA and Cytokeratin-19 Fragments.

Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006; 1075:244-257.

17. Holdenrieder S, von Pawel J, Dankelmann E, Duell T, Faderl B, Markus A,

Siakavara M, Wagner H, Feldmann K, Hoffmann H, Raith H, Nagel D, Stieber P.

Nucleosomes, ProGRP, NSE, CYFRA 21-1, and CEA in monitoring First- Line

Chemotherapy of Small Cell Lung Cancer. Clin Cancer Res:2008; 14(23):

7813-7821.

18. Nakayama M, Satoh H, Ishikawa H, Fujiwara M, Kamma H, Ohtsuka M,

Sekizawa K. Cytokeratin 19 Fragment in Patients With Nonmalignant Respiratory

Diseases. Chest: 2003; 123: 2001-2006.

19. US Department of Labor, Occuptional Safety and Health Administration,

29 CFR Part 1910.1030, Occupational Exposure to Blood Borne Pathogens.

20. US Department of Health and Human Services: Biosafety in Microbiological

and Biomedical Laboratories: 4th Edition Washington DC: US Government

Printing Office May, 1999.

28

CY

FR

A 2

1-1

EIA

Pro

d. N

o. 211-1

0,

2011-0

5.

F5

96

3,

r1

21. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), Evaluation of Precision

Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline –

Second Edition. EP5-A2 (2004).

22. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), Protocols for

Determina- tion of Limits of Detection and Limits of Quantitation;

Approved Guideline. EP17-A (2004).

23. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), Evaluation of the

Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical

Approach; Approved Guideline. EP6-A.

24. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), Interference Testing in

Clinical Chemistry, Approved Guideline, EP7-A.

CanAg ® is a registered trademark of Fujirebio Diagnostics AB

Fujirebio Diagnostics AB

Elof Lindälvs gata 13

SE-414 58 Göteborg

Sweden

Phone + 46 31 85 70 30

Fax + 46 31 85 70 40

info@fdab.com

www.fdab.com