INSTRUCTIONS FOR HRP IgG

LOUISVILLE APL DIAGNOSTICS, INC.

2622 NASA Pkwy Ste G2, Seabrook TX 77586 USALAPL a2GPI HRP ELISA Kit

Una prueba de Enzimo Inmunoensayo

Para la deteccin de Anticuerpos Anti-2 Glicoprotena I

IgG, IgM, e IgA

Para uso Diagnstico In VitroAsistencia TcnicaTel: 770-455-7129

Fax: 770-455-6499

Atencin al Cliente: 800-624-3192

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Website: www.louisvilleapl.com

Fabricado por:

TheraTest Laboratories, Inc.

1111 North Main Street

Lombard, IL 60148MANUAL DE INSTRUCCIONESLAPL a2GPI HRP ELISA Kit

INDICE

Pgina

1 Uso al que est destinado3 2 Explicacin del ensayo3 3 Principio del mtodo4 4 Componentes44.1 Contenido del Kit LAPL -2GPI HRP ELISA44.2 Precauciones54.3 Almacenado y conservacin del kit64.4 Recoleccin y almacenaje de las muestras6 5 Procedimiento de la prueba6A. Material suministrado6B. Material requerido pero no suministrado7C. Preparacin de Reactivos7

D. Procedimiento del ensayo8

E. Notas al procedimiento9 6 Clculo de Resultados10A. Determinacin de los valores de absorbancia10

B. Clculo de la actividad de anticuerpo anti-2GPI10

7 Control de calidad y aceptabilidad de los resultados10 8 Limitaciones del procedimiento11 9 Valores esperados11

10 Gua de intrerpretacin12

Tabla 1: Sensibilidad, especificidad, y acuerdo13

Tabla 2: Porcentaje de muesras positivas13Tabla 3: Distribucin de isotipos simples14

Tabla 4: Relacion entre resultados positivos y negativos14

Tabla 5: Sensibilidad, especificidad, y acuerdo15

Figura 2-a: Isotipo IgM15

Figura 2-b: Isotipo IgG16

Figura 2-c: Isotipo IgA16

Figura 3: Relacin entre anti-2GPI y aCL1711 Caractersticas1711.1 Presicin dentro del ensayo17

11.2 Presicin entre ensayos17

12 Bibliografa181 uso al que esta destinadoEl Kit LAPL-2GPI HRP ELISA (IgM, IgG, IgA) es un test de diagnstico in vitro para la medicin de autoanticuerpos IgM, IgG e IgA en suero humano dirigidos contra la 2glicoprotena I (2GPI) srica. Esta medicin ayuda en el diagnstico del sndrome de anticuerpos antifosfolpidos (APS) o de ciertos desrdenes trombticos autoinmunes secundarios al lupus eritematoso sistmico (SLE).

2 Explicacion del ensayoLa 2GPI es un polipptido de cadena simple con un peso molecular aproximado de 50 kD (no-reducido) y 70 kD (reducido). Est presente en el plasma en una concentracin de alrededor de 200 g/ml. Se ha demostrado que la 2GPI inhibe la va intrnseca de la coagulacin sangunea, la agregacin de plaquetas mediada por ADP, y la actividad protrombinasa de las plaquetas activadas (1). En general los autoanticuerpos contra fosfolpidos, en particular la cardiolipina, estn asociados con trombosis, prdida fetal recurrente, inflamacin del sistema nervioso central, trombocitopenia, y otras manifestaciones. Generalmente se encuentran agrupadas en el denominado sndrome de anticuerpos antifosfolpidos (APS) (2, 3,4). La evidencia ha puesto de manifiesto que algunas molculas de anticuerpo antifosfolpido reconocen la cardiolipina mientras que otras reconocen un complejo formado por cardiolipina y una protena portadora, 2GPI (5 - 8). Otros estudios han demostrado que gran parte de los anticuerpos reconocen molculas de 2GPI a una densidad alta (9) bloqueadas a una fase slida irradiada con rayos X (10).

En estudios recientes se ha demostrado que la medicin de anticuerpos IgM e IgG anti-2GPI puede ser ms especfica para el diagnstico de pacientes con APS, que la medicin de anticuerpos anticardiolipina (rev. en 4 y 11). Adems, se mostr que un gran nmero de pacientes con SLE tienen IgA anti-2GPI, lo que est en correlacin con su presencia en manifestaciones del APS (12) (Ver Valores Esperados).

La distribucin de los isotipos en los pacientes puede variar con el grupo tnico y la manifestacin de la enfermedad. Se ha observado que la anticardiolipina IgG y la anti-2GPI tienen relativamente alta especificidad para el APS (13). Para los anticuerpos anticardiolipina se mostr que la IgG se encuentra como el isotipo dominante en las poblaciones hispana y frico-americana, y la IgA en la frico- caribea. Se encontr que la anticardiolipina IgM est asociada a la anemia hemoltica en pacientes espaoles (14) y mexicanos (15). Se mostr que el isotipo IgA es el prevalente en pacientes de SLE con manifestaciones del APS (12). La presencia de los tres isotipos de anti-2GPI tiene una mayor especificidad para APS que cualquier isotipo aislado (Ver Gua de Interpretacin).

3 PRINCIPIOS DEL METODOEl Kit LAPL -2GPI HRP ELISA (IgM, IgG, IgA) es un inmunoensayo enzimtico de fase slida. Para la medicin de anticuerpos anti- 2GPI, los pocillos (blanco y recubierto de 2GPI) se incuban en paralelo con muestras de sueros diluidos, calibrador, control positivo, y control negativo. Durante la incubacin, los anticuerpos presentes en la muestra se unen a la fase slida. Luego, los pocillos son lavados y se agregan anticuerpos anti-inmunoglobulina humana, especficos a un isotipo, marcados con peroxidasa de rbano. Despus de la incubacin con el conjugado enzimtico, los anticuerpos marcados no unidos se remueven por aspiracin y lavado. Se agrega un cromgeno y la presencia de anticuerpos es detectada por un cambio de color ledo en un lector de ELISA. El valor de absorbancia en el pocillo control (blanco) se sustrae del valor obtenido del pocillo recubierto con 2GPI.

4 ComponentEs4.1 Contenido del Kit LAPL -2GPI HRP ELISA (IgM, IgG, IgA)Pocillos Recubiertos de Antgeno para la medicin isotipo-especfica para cada isotipo. Cada unidad de prueba consiste de un par de pocillos. La tira a la izquierda (L), est recubierta con 2GPI y la tira a la derecha (R) sirve como control blanco que va a ser sustrado para obtener una densidad ptica neta (Fig. 1). Una tira se define como una columna vertical de ocho pocillos. En cada marco (placa) hay seis tiras de blancos y seis tiras de pocillos recubiertos con 2GPI. Las tiras estn organizadas verticalmente en el marco con las orillas orientadas hacia abajo. Se pueden guardar las tiras no utilizadas y el marco para ser utilizadas posteriormente. Se deben colocar en su bolsa con el paquete de desecante, se sella y se almacenan a 2-8C.Concentrado de Lavado 10X - Tampn concentrado con Tween 20.

Conjugado Enzimtico Anti-IgM - IgM anti-humana (Fcespecfica) conjugada con peroxidasa de rbano (color azul) y 0.2% ProClin 300.

Conjugado Enzimtico Anti-IgG - IgG anti-humana (Fc especfica) conjugada con peroxidasa de rbano (color verde) y 0.2% ProClin 300.

Conjugado Enzimtico Anti-IgA - IgA anti-humana (especfica a la cadena ) conjugada con peroxidasa de rbano (color rojo) y 0.2% ProClin 300.

Cromgeno - 3,35,5 tetrametilbenzidina en tampn con perxido de hidrgeno.

Reactivo de Parada - cido fosfrico 2M.

Control Positivo - Suero humano conteniendo anticuerpos IgG, IgM e IgA anti 2GPI y 0.2% ProClin 300. Referirse a la hoja de datos adjunta para las caractersticas de su desempeo.

Control Negativo - Suero humano conteniendo 0.2% ProClin 300. Referirse a la hoja de datos adjunta para las caractersticas de su desempeo.

Calibrador. El Calibrador contiene suero humano con anticuerpos IgG, IgM e IgA anti-2GPI y 0.2% ProClin 300. Referirse a la hoja de datos adjunta para las caractersticas de su desempeo. 4.2 Precauciones 1.Solamente para el uso de diagnstico in vitro.

2.No pipetear con la boca.

3.No coma, beba o fume en las reas se trabajo.

4.Lvese las manos copiosamente despus de utilizar especmenes y reactivos del kit.

5.No usar componentes despus de la fecha de expiracin.

6.No mezclar los reactivos de diferentes lotes.

7.Evite la contaminacin microbiana de los reactivos.

8.Evite la exposicin de los reactivos a excesivo calor o luz durante su almacenamiento.

9. No permita que el cromgeno tenga contacto con metales o agentes oxidantes.

10. Los sueros utilizados para preparar el Calibrador y los Controles Positivo y Negativo, fueron obtenidos de sangre humana. Cuando fueron probados por mtodos aprobados por la FDA, se determin que no son reactivos a la presencia de HIV (Virus de Inmunodeficiencia Humana), al antgeno de la Hepatitis C y al antgeno de superficie de la Hepatitis B (HBsAg). Aun as, estos mtodos no pueden ofrecer completa seguridad que el HIV, el virus de la hepatitis u otros agentes infecciosos estn ausentes. Estos materiales y todos los especmenes de pacientes se debern manejar como si fueran capaces de transmitir enfermedades infecciosas.

11. Utilice cristalera descartable o material plstico desechable, o lave todos los materiales de acuerdo a las prcticas de laboratorio aceptadas como normales.

4.3 Almacenado y consevacion del kit1.Al recibirse, almacene todos los reactivos a 2-8C. No congelar los reactivos.

2.Antes de utilizarse, llevar los reactivos a temperatura ambiente (18-30C) por 30 minutos.

3.Evite la luz solar directa.

4.La Solucin de Lavado, cuando se almacena a 2 - 8C, es estable hasta la fecha de expiracin del kit.

4.4 Recoleccin y almacenaje de las muestrasNo se requiere una preparacin especial del paciente. Para evitar la hemlisis, obtenga un espcimen sanguneo completo utilizando tcnicas aceptables. Permita que la sangre se coagule y separe el suero por centrifugacin dentro de 24 horas despus de la obtencin. La hemlisis y la lipemia no afectan el desempeo de la prueba. Si se evita la contaminacin microbiana, se pueden almacenar a 2-8C hasta diez das. NO CONGELE la sangre que no est separada. Si el ensayo no se va a realizar dentro de los diez das, despus de la obtencin de la muestra, el suero debe ser separado del cogulo y almacenado a -20C. No utilice suero que ha sido descongelado ms de una vez o que ha sido inactivado por calor. Las muestras de suero han sido probadas para mostrar su estabilidad a temperatura ambiente y se observ que son estables por cinco das, sin prdida aparente de la actividad de los anticuerpos.

5 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBAA. Material suministrado

Item#Componente No. / Vol.

1Placas (12 tiras de 8 pocillos cada una)4 x 96 pocillos

2Concentrado de Lavado 10X2 x 100 ml

3Conjugado Enzimtico anti-IgM1 x 27 ml

4Conjugado Enzimtico anti-IgG1 x 27 ml

5Conjugado Enzimtico anti-IgA1 x 27 ml

6Cromgeno2 x 27 ml

7Reactivo de Parada2 x 27 ml

8Control Positivo. IgM, IgG, IgA1 x 0.3 ml

9Control Negativo1 x 0.3 ml

10Calibrador IgM, IgG, IgA1 x 0.3 mlB. Material requerido pero no suministradoMicropipetas de precisin que descarguen 10 l, 100 l y 1 ml (2%) con puntas de plstico desechablesPipetas multicanal ajustables (8 or 12 canales)

Puntas de pipeta (tips)Tubos de ensayoCronmetroPipetas (1ml, 5ml y 10ml)Reservorio para pipetear reactivos con pipetaEspectrofotmetro para placas de microtitulacin de 96 pocillos, de longitud de onda simple o doble (lectora de ELISA)Dispositivo de vaco con trampa ajustado con una pipeta Pasteur para la aspiracin de los pocillos (opcional)Agua Desionizada (Utilice agua CAP Tipo I o grado USP)C. Preparacin de Reactivos:1.Solucin de Lavado - Cuando el Concentrado de Lavado 10X se almacena en fro, puede ocurrir cristalizacin. Para mejores resultados, diluya 1:10 la botella entera y revise que no haya cristales antes de utilizarse. Si se almacena a 2-8C, la Solucin de Lavado es estable hasta la fecha de expiracin del kit. El tampn de lavado diluido tambin se utiliza como diluyente de especmenes.

2.Cromgeno - Para manejar la solucin de cromgeno se debe utilizar cristalera o material de plstico desechables. Alternativamente, todo el material no desechable empleado debe ser lavado copiosamente de acuerdo a las prcticas generales de laboratorio. Evite la contaminacin y vuelva a poner el cromgeno sobrante en su botella original. No utilice cromgeno que ha cambiado de color a azul.

3.Especmenes, Control Positivo, y Control Negativo - Los Especmenes y Controles deben de ser diluidos 1/100 antes de utilizarse. Utilice pipetas de alta precisin. Por ejemplo, pipetee 10 l de suero en 990 l (o 1 ml) de tampn de lavado diluido (dilucin 1/100). Deseche cualquier espcimen diluido que no se utiliz despus de que el procedimiento de la prueba se ha completado.

4.Calibrador 2GPI - El Calibrador debe diluirse 1/100 para pruebas con un punto de calibracin.

D. Procedimiento Del EnsayoReferirse al ejemplo sugerido en Fig. 11.Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (18-25C) antes de utilizarse.

2. El Calibrador y los Controles Positivo y Negativo deben incluirse en todos los ensayos.

3.Marque las posiciones de las muestras (por ejemplo, Calibrador, Control Positivo, Control Negativo, y Especmenes) en la hoja de trabajo.

4.Determine el nmero de tiras necesarias. Las tiras no utilizadas deben guardarse en la bolsa y sta sellarse para su uso posterior.

5. Diluya todas las muestras, calibrador, y controles 1/100 (por ejemplo: 10 l en 990 l o 1 ml) en tampn de lavado diluido y mezcle bien.Pipetee 100 l del calibrador y los controles diluidos en cada par de pocillo (pocillo recubierto con antgeno y blanco del espcimen).Pipetee 100 l de cada muestra diluida en cada par de pocillo (pocillo recubierto con antgeno y blanco del espcimen). Para mejores resultados pipetee todos los materiales en un plazo no mayor de 5 minutos del inicio del ensayo. Este paso se facilita utilizando pipetas multicanal o pipeteadores repetitivos.6.Incube la placa por 30 ( 5) minutos a temperatura ambiente (18-25C). Aspire o decante la Muestra de todos los pocillos y lave la placa tres veces con 200-400l de solucin de lavado. Se puede utilizar en estre paso una lavadora automtica de placas.

7.Pipetee 100 l de los Conjugados Enzimticos apropiados en cada pocillo. Complete este paso dentro de 5 minutos, para la corrida entera.

8. Incube por 30 ( 5) minutos a temperatura ambiente (18-25C).

9. Aspire o decante los Conjugados Enzimticos de todos los pocillos y lave la placa como se indica en el paso 6 arriba.

10. Dispense 100 l de cromgeno en cada pocillo. Incube la placa por 15(1) min. a temperatura ambiente(18-30C). Los pocillos recubiertos con 2 GPI, incubados con el Control Positivo y el Calibrador, van a desarrollar un color azul.

11. Pipetee 100 l de Reactivo de Parada en cada pocillo y mezcle golpeando levemente el lado de la placa. El color azul cambia a amarillo.

12. Determine la absorbancia de cada pocillo a 450 nm utilizando un espectrofotmetro de longitud de onda simple o doble (lectora de ELISA). Los valores de absorbancia debern medirse dentro los 30 minutos siguientes al trmino del ensayo. Para lecturas dobles, ajuste el blanco a 630nm. Siga las instrucciones provistas con su instrumento.

E. Notas al Procedimiento

Almacenaje - Guarde las tiras no utilizadas en la bolsa con desecante y selle la bolsa. Almacene a 2-8C.

Lavado - Cada fila de pocillos puede ser lavada con un pipeteador multicanal. Los pocillos pueden ser aspirados utilizando un aparato apropiado de vaco ajustado con una pipeta Pasteur. Alternativamente se pueden utilizar sistemas de lavado semiautomticos comerciales. Independientemente del mtodo, deje secar los pocillos sobre papel absorbente despus del lavado final. Solamente utilice agua grado reactivo (CAP tipo 1 o grado USP).

Fig. 1 Ejemplo ubicacin del Calibrador, Control Positivo y Control NegativoPipeteo - Para evitar la contaminacin entre muestras, es esencial pipetear el control positivo, el control negativo, el calibrador, y los especmenes de prueba con puntas de pipeta diferentes. Utilice un pipeteador multicanal calibrado para pipetear el conjugado enzimtico, la solucin de lavado, el cromgeno, y el reactivo de parada.

Arreglo de Placas - Para minimizar la confusin que resulta del desajuste de las tiras del marco, escriba un smbolo que identifique la naturaleza de las tiras en la orilla texturizada antes de empezar el ensayo.

6 - CALCULO DE RESULTADOS

La mayora de lectoras de ELISA son compatibles con computadoras y los datos se pueden calcular con la ayuda de programas para computadora. Revise peridicamente que el programa escogido muestre los mismos resultados que los obtenidos por clculos manuales (validacin).A. Determinacin de los valores de absorbancia:La absorbancia neta para cada muestra es calculada sustrayendo el valor de absorbancia del pocillo blanco (R) del valor de absorbancia del pocillo recubierto con antgeno (L). Para pruebas especficas de clase, cada espcimen tiene un blanco por separado, y es sustrado para obtener la absorbancia neta.

Ejemplo:

Absorbancia para el pocillo blanco = 0.150

Absorbancia del Espcimen en el pocillo recubierto con 2GPI = 1.150

Absorbancia neta de la anti-2GPI es 1.150 - 0.150 = 1.000Nota: Si la absorbancia en el pocillo blanco es mayor que en el pocillo recubierto con 2GPI, la absorbancia neta se debe de considerar como cero.

B. Clculo de la actividad de anticuerpo anti-2GPI

El clculo de X unidades de anticuerpo en el espcimen se basa en el principio siguiente: Unidades en el Calibrator = X (Unidades en el espcimen)Absorbancia en el Calibrator Absorbancia en el espcimenCon esta frmula se calcula un Factor de Conversin.1) Factor de Conversin=Nmero unidades anti-2GPI en calibrador Valor neto de absorbancia calibrador (D.O.)

2) Factor de Conversin X absorbancia en el espcimen = nmero de unidades en el espcimen.

El desempeo de los calibradores y controles se provee en la hoja de datos dentro del kit en uso. Si el valor de absorbancia de un espcimen es igual o mayor de 2.0, ste debe de ser diluido al menos 1/10 adicional y deber volverse a probar. De otra manera el resultado deber reportarse como >n.

7 CONTROL DE CALIDAD Y ACEPTABILIDAD DE RESULTADOS

Los Controles Positivo y Negativo deben correrse cada vez que se realice el ensayo. El rango de valores de absorbancia de los Calibradores y el rango de unidades para los Controles deben estar dentro del rango determinado en la hoja de datos adjunta. Si los valores obtenidos estn fuera de este rango, la corrida entera se debe descartar y la prueba se debe repetir.

8 - LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO1)El diagnstico no deber basarse exclusivamente en el resultado positivo del ensayo. Los resultados deben interpretarse en conjuncin con toda la informacin clnica a disposicin del mdico (historial del paciente, exmen fsico y otros procedimientos de diagnstico).

2)El tratamiento del paciente no se debe iniciar solamente sobre la base en una prueba positiva para 2GPI. La informacin clnica de apoyo deber estar disponible.

3) Los pacientes con serologa positiva para Sfilis incluyendo la prueba de fluorescencia, tambin pueden ser positivos para anticuerpos anti-2 GPI. Se debe conocer la serologa para Sfilis si un espcimen es anormal. 4)Como para cualquier inmunoensayo indirecto de fase slida, el factor reumatoide de cualquier isotipo puede reaccionar con IgG unida a la fase slida, en la forma de anticuerpo anti2GPI. Sin embargo, si la IgG anti-2GPI no est presente, el factor reumatoideo no reacciona con los pocillos recubiertos de antgeno. Los Factores Reumatoideos IgM e IgA pueden enmascarar la presencia de anticuerpos IgG y pueden provocar que aparezcan como anticuerpos IgM y/o IgA en lugar de IgG.

5) Individualmente, cada laboratorio debe verificar los valores normales de los diferentes isotipo, ya que estos pueden variar con la edad y los grupos tnicos. Sin embargo, los valores anormales en personas mayores no se deben atribuir solamente a la edad (16).

9 - VALORES ESPERADOSSe probaron sueros de 100 donadores de sangre al azar y se determinaron los siguientes lmites superiores para normales, para un corte a 98-99 percentil para cada isotipo.

IgM anti-2GPI - 4 M2GPI unidades/ml*IgG anti-2GPI - 25 G2GPI unidades/ml*IgA anti-2GPI - 4 A2GPI unidades/ml*Las unidades son las mismas que las utilizadas para anticuerpos anticardiolipina (Louisville APL Diagnostics, Inc., Seabrook, Texas) (referirse a la hoja de datos adjunta para los valores sugeridos actualmente). Los mismos estndares se han utilizado para calibrar las unidades de anticuerpo anti-2GPI Para cada isotipo, 1U/ml. de anticardiolipina es considerada igual a 1 U/ml de anti-2GPI.

Los especmenes se deben considerar en el rea gris del rango positivo como sigue: IgM de 4-9 unidades, IgG, de 25-40 unidades e IgA, de 4-6 unidades. Estos resultados se deben informar como positivos lmite y se recomienda al mdico considerar la repeticin de la prueba en 4-8 semanas. Es considerado nivel alto: >10 M2GPIU/ml, >40 de G2GPI U/ml, y >10 de A2GPI U/ml.10 GUIA DE INTERPRETACION

La sensibilidad clnica esperada en esta prueba para pacientes con APS se muestra en las Tablas 1-2. Estudios previos han mostrado sensibilidades para IgM e IgG dentro del mismo rango con especificidades de >80% para APS (13). La sensibilidad para APS en pacientes de SLE con manifestaciones severas del sndrome es >90%, cuando la IgA es tambin considerada junto con la IgM e IgG (12). En 100 especmenes de pacientes que se esperaba tuvieran el sndrome de anti-fosfolpido hubo una alta correlacin y una gran concordancia entre los niveles de anticardiolipina y anti-2GPI (Figs. 2 y 3) (p10 M2GPIU/ml, >40 de G2GPI U/ml o >10 de A2GPI U/ml** Arriba de los niveles normales de anticuerpos IgM, IgG e IgA anti-2GPI.

*** Blood Bank Donors (Donadores de Bancos de Sangre)Los anticuerpos contra 2 GPI pueden encontrarse en otros pacientes con enfermedad vascular del colgeno (Tabla 2). Tambin se encuentran en pacientes con sfilis, aunque con menor frecuencia que anticardiolipina. Por lo tanto, en estos pacientes tambin se debe de conocer la serologa para sfilis. Se pueden encontrar como con un solo isotipo o como combinaciones de dos o tres isotipos (Tabla 3). La mayora de pacientes probados tuvo ambos anticuerpos, anticardiolipina y anti-2 GPI (Tabla 4)Tabla 2: Porcentajes de muestras positivas para anticuerpos IgM, IgG e IgA anti-2GPI (Ver Tabla 1 para sensibilidad y especificidad de la enfermedad)DiagnsticoNmero de pruebasAnti-2GPI

% positivo

IgMIgGIgAIgM, IgG, IgA (Cualquier isotipo)

Donador bando de sangre1002114

Sfilis86912918

Artritis Reumatoidea501461220

Escleroderma44114014

APS clnico10048593672

SLE4827255873

SLE con historial de APS2825257582

SLE con historial de APS severo *17*29358194

APS= sndrome antifosfolpido; la sensibilidad de la prueba de anticuerpo anticardiolipina para el mismo grupo fue de 78% (para detalles refirase tambin a la Fig. 3 adjunta). *subgrupo de l grupo de 28 pacientes en la lnea superior, con SLE e historial de APS

Tabla 3: Distribucin de isotipos simples y combinacin de isotipos en 148 especmenes de pacientes: 100 con sndrome antifosfolpido y 48 con SLE.Isotipo de anticuerpos identificadoNo. positivo2GPINo. positivo para 2GPI con >2 x lmite normal

IgM sola155

IgG sola2413

IgA sola1711

IgM+IgG12N/A

IgM+IgA2N/A

IgG+IgA6N/A

IgM+IgG+IgA32N/A

N/A: no aplicable

Tabla 4: Relacin entre resultados positivos y negativos de prueba con anticardiolipina y anti-2GPI para isotipos IgM, IgG, IgA separados y para cualquier isotipo (IgM, IgG y/o IgA) en 140 especmenes (pacientes con APS y normales).IgMaCL

PositivoNegativo

LAPL a2GPI HRP ELISA KitPositivo457

Negativo781

IgGaCL

PositivoNegativo

LAPL a2GPI HRP ELISA KitPositivo581

Negativo1071

IgAaCL

PositivoNegativo

LAPL a2GPI HRP ELISA KitPositivo2117

Negativo696

Cualquier isotipoaCL

PositivoNegativo

LAPL a2GPI HRP ELISA KitPositivo678

Negativo1253

Tabla 5: Sensibilidad, especificidad, y acuerdo relativos entre anti-2GPI y anticardiolipina (TheraTest EL-ACA), calculado en 140 especmenes probados en paralelo para los dos anticuerpos. Los resultados obtenidos con la prueba de anticardiolipina fueron considerados como 100%. Datos calculados de la Tabla 4 arriba. ParmetroIgM %IgG %IgA %Cualquier isotipo %

Sensibilidad86857885

Especificidad91998587

Acuerdo90928487

Figura 2-a: Isotipo IgM. Correlacin entre los niveles de anti-2GPI (LAPL a2GPI HRP ELISA Kit, calibracin de punto simple) con anticuerpos anticardiolipina (aCL, curva estndar) en especmenes de 100 pacientes con manifestaciones del sndrome antifosfolpido.

Figura 2-b: Isotipo IgG. Correlacin entre los niveles de anti-2GPI (LAPL a2GPI HRP ELISA Kit, calibracin de punto simple) con anticuerpos anticardiolipina (aCL, curva estndar) en especmenes de 100 pacientes con manifestaciones del sndrome antifosfolpido Figura 2-c: Isotipo IgA. Correlacin entre los niveles de anti-2GPI (LAPL a2GPI HRP ELISA Kit, calibracin de punto simple) con anticuerpos anticardiolipina (aCL, curva estndar) en especmenes de 100 pacientes con manifestaciones del sndrome antifosfolpidoFigure 3: Relacin entre 100 especmenes con niveles anormales de anticuerpos anticardiolipina y/o anti-2GPI. Notar la gran similaridad entre los resultados obtenidos entre los dos ensayos como asi tambin la existencia de especmenes que aparecen como normales en solamente uno de los dos ensayos.

11 - CARACTERISTICAS

11.1 Precisin Dentro del Ensayo:La precisin dentro de la corrida se determin ensayando en 42 pares de pocillos, un espcimen que contena autoanticuerpos para cada clase de anticuerpo. Se encontr que el coeficiente de variacin para IgM, IgG e IgA anti-2GPI fue de 6%, 11% y 11% respectivamente.

11.2 Precisin Entre Ensayos:La precisin entre corridas se determin ensayando en 20 corridas, especmenes que contenan niveles altos y bajos de autoanticuerpos. Se encontr que el coeficiente de variacin fue de: IgM 5%; IgG