Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

16
ANTI-b 2 -GLYCOPROTEIN I AUTOANTIBODIES AND ATHEROSCLEROSIS EIJI MATSUURA, KAZUKO KOBAYASHI, JUNKO KASAHARA, TATSUJI YASUDA and HIROFUMI MAKINO Department of Cell Chemistry and Department of Medicine III, Okayama University Graduate School of Medicine and Dentistry, Okayama, Japan TAKAO KOIKE Department of Medicine II, Hokkaido University Graduate School of Medicine, Sapporo, Japan YEHUDA SHOENFELD Department of Medicine B, The Research Unit of Autoimmune Diseases, Chaim Sheba Medical Center, Tel Hashomer, Israel b 2 -Glycoprotein I (b 2 -GPI) is a major antigen for antiphospholipid antibodies (aPL) pres- ent in patients with antiphospholipid syndrome (APS). We previously reported that b 2 -GPI speci®cally binds to oxidized low-density lipoprotein (oxLDL). Further, a ligand speci®c for b 2 -GPI, oxLig-1, puri®ed from the extracted lipids of oxLDL was identi®ed as 7-ketocholesterol-9-carboxynonanoate (i.e., 9oxo9(7ketocholest5en3byloxy) nonanoic acid) OxLig-1 was recognized by b 2 -GPI and subsequently by anti-b 2 -GPI auto- antibodies. Binding of liposomes containing oxLig-1 to macrophages were signi®cantly enhanced in the presence of both b 2 -GPI and an anti-b 2 -GPI autoantibody derived from (NZW BXSB) F1 mouse, an animal APS model, or from APS patients. Anti-b 2 -GPI autoantibodies derived from APS patients with episodes of arterial thrombosis were detected in ELISA, using a solid phase b 2 -GPI complex with oxLig-1. It was also reported that LDL-receptor-de®cient mice that were fed a chow diet and immunized with b 2 -GPI had an accelerated atherosclerosis and that b 2 -GPI was abundantly expressed within subendothelial regions and intimal-medial borders of human atherosclerotic plaques. All of these observations strongly suggest that autoimmune atherogenesis linked to b 2 -GPI interaction with oxLDL and autoantibodies may be present in APS. Keywords: Autoantibodies, antiphospholipid syndrome, cholesteryl ester, b 2 -glycoprotein I, macrophage, oxidized low-density lipoprotein 51 Received June 1, 2001. Address correspondence to Eiji Matsuura, Department of Cell Chemistry, Okayama University Graduate School of Medicine and Dentistry, 2-5-1 Shikata-cho, Okayama 700-8558, Japan. E-mail: [email protected] Intern. Rev. Immunol., 21: 51±66, 2002 Copyright # 2002 Taylor & Francis 0883-0185/02 $12.00 +.00 Int Rev Immunol Downloaded from informahealthcare.com by UB Mainz on 11/05/14 For personal use only.

Transcript of Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

Page 1: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

������������ ����� � ����������������� ���� ���� ����

���� ������� ����� � ������� ���� �������������� ������ ��� �� ���� ����� ���������� ���� � ������� ��� ���������� �������� ����������� ���������� �������� �� � �������� ��� ������������������ �����

���� � ������������� �������� ��� ������ ���������� �������� �� � ��������� ������ �����

������ �� ���������������� �������� �� � !������ ���� "�������� ���������� ��� � �#� ������� ������� �� ��� ���� ������

�$%���������� � &�$%�'�( �� � ��)� ����*�� � ����� �� ����� ����#���� &�'+( ����%��� �� �������� ,�� ����� �� ����� ������� &"'�(- .� ��������� ������� � ���$%�'� �����/����� #���� � 0���1�� �,%������� ��������� &0+�+(- 2��� ��� � ��*��������/� � �$%�'�� 0+�*%3� ����/�� �� � � �0������� ������ 0+�+ ,�� ������/�� ��4%���� �������%5%���#0�������� &�-�-� 5�0�5�&4����� �����6����7����0�(������ ����( �0+�*%3 ,�� ���*��1�� #� �$%�'� ��� ��#��8������ #� ����%�$%�'� ���%����#����- ������* ������� ��������* 0+�*%3 � ����� �*�� ,��� ��*��/�������� ����� �� � � �������� #� �$%�'� ��� �� ����%�$%�'� �������#�� ������� ��&9:.��;��( 23 ����� �� ������ "'� ����� � �� "'� ��������- "���%�$%�'��������#���� ������� �� "'� �������� ,�� ������� �������� � ��#��� ,����������� �� <+��"� ����* � ���� � ��� �$%�'� �����0 ,�� 0+�*%3- �� ,�� ��� �������� �� +�+%�������%��/����� ���� � �� ,��� �� � � , ���� ��� ������1�� ,�� �$%�'� �� �� ����������� �� ���������� ��� � �� �$%�'� ,�� �#�������� �0������� ,�� ����#���� ����� ��*��� ��� �������%������ #����� ���� �� ���������� ���8���- "�� � ��� #��������� ����*�� ��**��� � �� ��������� �� ��*������ ������ ��$%�'� ���������� ,�� 0+�+ ��� �������#���� ��� #� ������� �� "'�-

�������� "������#����� ����� �� ����� �������� � �������� �������$%*��������� �� ����� �*�� 0���1�� �,%������� ���������

63

!������� ���� 3� $==3-"������ ������������ � <�)� ��������� ���������� ���� � �������� �������

���������� �������� �� � �������� ��� ���������� $%6%3 � �����%� � �������4==%>66>� �����- <%����? ��)�����@��-������%�-��-)�

����� ��� ������-� $3? 63ABB� $==$

�����* � � $==$ ���� C 2������

=>>7%=3>6D=$ E3$-== F-==

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 2: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

� ��������� ����� �� ����� ����#���� &�'+(� �-�-� ����%���������� ����#���� &��+( ��� ����� ������*������ &+"(� ,�� ���%��� �������� ����������� ��� �� �������� ���D� ����� � ��#������ ��������� ��������� ���� ��� �� ,��� ���*��1�� �� ��������,�� ���� �� ����� ������� &"'�( G3�7H- �,����� � � �������%#��%�������� ��� ��� *���� ��� ������ �������#�� � ������%���� � � ������� ��� ����� �������-�'+ ,��� ��������� ��������� � #� �������� � � �� ������� #��

�, �� �� ,����� ��������� � �� ��� � �� �����%#�����* ���������� ���� ����*��� � �'+- �� 355=� � ��� *���� �������*���� GI�BH������������� ������� � �� ��+ ,��� �������� � �$%*��������� �&�$%�'�( �����0�� ,�� ���������� &�+(- <������� �� ������������ �� �$%�'� �� � ��)� ����*�� � ��+ ������� �� �������� ,�� "'�G4�5H-<�������*���� ������� ��� ����#��� �� � �� �� �������� ������

����� �,%������� ��������� &+�+( ���������� �� � � ��� ��%������ ���� ����� � � � ���������� �� ���������� G3=H- "��#��� � �������� ���/�� +�+� ��� �� 0���1�� +�+ &0+�+( ����������� � � �������� ������� ��� �� �� � � ��������� ��������������* �� ���������� G33�3$H- � �� ��� 0������� ���/����� +�+ �� #��� ������ � ���� � ������� ��� �� �� ���������� G37H��� ��**����� #� � � �������� 0+�+ ��������� �� � � ����� � ��� �� ���������� ���8�� ������-J������ �� ��- G3IH ������� � �� ��+ ������ �� �+< �������� ��* �

����%����� ,�� ���������� ��� &��"(%���/�� +�+- +����� � �������� � � , ��� ����%������� #��,��� ����%�$%�'� ��� ����%0+�+����#���� �� � � "'� �������� G36H- �� ,�� ��� � ,� � �� ����%�$%�'�����#���� ���� #� � ������ � �������� � ��#��� �� �+< ���������, ����� �*� ����%0+�+ ,�� �� ��������� ,�� �������� � ��#���G3BH- .� ��� � �����/� ���������� ���* ��$�%0���1�� ����������������� �$%�'�� ��� ����%�$%�'� ����#����� ��� �� ���������� #� �$%�'� ��� �� ����%�$%�'� ����#�� �� 0+�+ ������ #������ �*�� G34H- ��� ,�� ��� �� ��� ������ ��**�����* � �� ��� �'+ �� "'�

�������� ��� �������� � ��������� 0���1�� '+� � � �� *��������#� ������ ������ #��,��� 0���1�� '+� ��� ��������� �������G3>�35H ��� � �� � ��������� 0���1�� � �� ������- �-�-� 3%�����%���%$%&6%0�������(%� �� ������� ���� &'�J'�(� , �� �� ��0���1�� �� 3%��������%$%���� �����%� �� ������� ����&'"'�(� ���� �� 0������ +�+ G$=�$3H- "*����� � �� #���%*����� � ��*��� �����/� � �$%�'�� ������� 0+�*%3� ,�� ������� ����$�%0+�+� ��� ��� ��������� ,�� � ��������1�� �� 4%���� ��������%5%���#0�������� G$$H- " ����#����� ,�� ��� � ,� � �� �������

6$ � �������� �� ��

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 3: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

� ����%�$%�'� �������#���� �0������� � � �����0 �$%�'� ���0+�*%3 ���� #� ������������ �����������-.� ��� � ,�� � �� ������� ��������* 0+�*%3� � ����

0+�+� ,��� ������ ����� �� #� ����� �*��� #� � ������ ������������ #� �$%�'� ��� ����%�$%�'� ����#���� G$$H- 2��� ��� ����%�$%�'� �������#���� ������� �� "'� �������� ,�� ������� ��%������ � ��#��� ,��� �������� �� <+��" ����* � ���� � ��� �$%�'������0�� ,�� 0+�*%3-�� � �� �������� ,� ,��� �����, �� ��*������ 0+�+ ��� � �

����#����� � �� �������#���� ���� �����#��� � � � �� ��%� ��%#��� �� � � "'� �������� #� �������#���� ���*����* �$%�'� ��%���0�� ,�� 0+�*%3� ������� ������ � 0���1�� � �� ������-

���� ��������

� �� ��� ���������� � ������� �������� � � � ������ ������* �� � �������� ���*� �� ��*������ &2�*��� 3(- ������ ����������� ����� ������ ��������� ,�� �� �������� ������ +�+� ��� +�+�� � � �������� ����� � � � ������� � �� ����������� �� ��������*�� �����- "� ��������� ������ +�+ ������ ����� � ��� ����������� � �� �������� �� � � �� ������ ����������* ������� � ��%������ ���� ����� ����� ��� ��� � �� ����� +�+ ��� � � ������- "��� ��� ������ �� � � 0������� ���/����� ������1�� #� � ��� ����� ������� �������� ������- 0+�+� ������� �� ������ +�+� ������� � ���*������ ���� �� ������� ���� ��� ��� �������� �� ������ ������������� �������� ������ #� ����������* ������� �������� ������ ���� �������%3 &J�"�%3( ��� ������������� �� ���� �������%3&��"�%3( �� ���� ����� ����� G$7H- ��������� 0���1�� +�+ ��� ������������ ������� ������ � ������������ ������%3 &��'%3( G$IH��� ����� �*� ����%����������* ���� &���2( G$6H� , �� ��������� ������������ � � ������ ��� � ���� ,�� � � � �������������� � � ������ ����� �*�� ��������* �� �������� �� �0������� ������*�� ������� " &�!"(-��� ������ ����� ��� � ������������ ��*����� �� ������

����� � ������ ��� ���������� #� �������� ��� �� �29%� ��� �+%I��� #� *�,� ����� ��� �� '��2 ��� ������ #�����* <�2%����*�,� ���� &��%<�2( G$BH� ��� #���� /#�#���� *�,� ����&#%2�2(- ��� ����� ��� �������� �� ��)���� ���� ����� ����������� �*��� ����������� ���� ������ ��� ������� � � ������� �� /����� ��������- ���������� �������� ��� ����������� �� �� �������� ��� �� � � ������� � ��� ��##�� ��#�������� %������ ����� ���� � ��� &����#( *��� ��*������* ����%������ ��� ������ �����- ����� �������������� ������� #�����*

������$������������� �������������� ��� ��������������� 67

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 4: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

���

�������������� �������

������������ ����������-

6I

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 5: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

������%$ &� <�$(� �� � �������������� ���� ��*������* � � *��� G$4H���� ����� *�,� ������� *���%3 &<*�%3( �������* � � � <�$ �0%������� G$>H� ��� #��� �������� ������/��- 2��� ��� �� ,�� #������� �� ���������� #��,��� ��I= ��� ��I= ��*��� ��� ������� �� ��%�������� �� ���������� ��� � �� ��� �0������� � � � ���� ������ �������� ���� ����� ����� G$5H� ��� ������ ������ ���� ��������� ����� �*��- �� �� ��� #��� � �* � � �� 0+�+ �� �#��� � ����������� � �� �� ������� ������� #� ������ 0��� &9�( G7=H-"� ��*������� #���* ���������� ,�� �� ���� ������ 0+�+%������� ����� �*��� �� �������� ����� ��� ���������� ��*%������ ��������-

��������� ����������� �� ���

� �����*� +�+ �������� ������� �#�� 4== �������� � �� %������� B== ��� � �������� 3B== � ������� ������� 3>6 ���%*���������� ��� 3 ����������� � &���( ��������* I67B �������� �������� G73H- �� 0������ +�+ �� �� �0������� �����0 ��%����- �� � � ������ ��� ��� ��� ��#)����� � 0������ ��� ���#����� �,� � ��*����� ������� ��1��� �� 3I � ��� 66= ���#� 0������� ������ G7$H-" ��� ������ +�+ 0������ �� � � #�����,� � ��� ���%

����������� ���� ����� � ����� � #��� ����� ������� ��*�������������* ���� ���� ��� ������ � �� ��� #���� ��)�*���� � � �������� &���������� ���� ������( � � � � ��� G77H- � ���%����������� ���� ����� �� � ������� ������� � �� ������� ��� ���%*��������� ��� ��#)��� � ��� ����������������� 0������ ��� �������������� �� � ��� �������� � �� ������ � � �0���� ����*�-!������� �� ,�� ������� � �� �, 0���1�� ����� �������� �-�-� 5% �37% ���0�������������� ���� &5%���< ��� 37%���<� ������������(�������� ���0���� ���������%��������� ������� � &''"!�(� � ����%���������� ��*����� *���� ������ � ����� ����#����� ��� ������ ����%��*������ � � ������*�� ������� ��7B G7IH- ��� � � �����%����� ����� �������� 0+�+ �� ���� � � ������ 0+�+ ��� � �''"!� ���������� � ���#� ������* �� ���� ������-+������ ���� �� � ���������� �������������� ���� ���� �� +�+ ���

�� ������� ������ �� � � ������� ����� G76H- �� ������ 0���1�� +�+�� �������� ������0�������������� ���� &� �%�'��<( ��� � %�������� ���0�������������� ���� &� �%���<( ,��� �������� ������ ����������� 0������ ������� G7BH- � �%�'��< ,�� ��%����� � ���������� ��������%������� *�,� ���� G74H- � ������� ����� �������� � 0�������� ��� �� �� ���������� 0���1�� �� � � 4 ���%���- 4% ���0�� ������� &#� ��� ��� ������/��( �� � � ��)�

������$������������� �������������� ��� ��������������� 66

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 6: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

0������ ���� �� ����� ������ �� +�+ 0������� ,�� 4%���� ���%����� ��������* �� ����� ���*�� G7>H- !����� ������� ��������� � �� ���%����� ������ ������ 4�% ���0�� ������� ��* � #� ��������� ,�� �� ��������� ���� �� ���������� G75H- "� ����� ���*�� �� +�+ 0���%���� � �������� � 4%���� �������� ������ 5%0������� ��������� � �������� �������� GI=H� ,��� �������� �� � � ��� �#������������ 0���1�� � �������� �������� GI3�I$H- "� � ������ 0������� �*� ���#��� 0������� ���������� ��� � �� ��������� *��������-� �������� ���/�� +�+� ��� �� ��"%���/�� +�+� ����������

+�+� ��� ��$�%�������� 0+�+ ,��� ,����� �0������ �� �� �0����%������ ���� ��������� +�+ � �������* � � ��� ������ � � ����������� �� ����������- "��* � ��� +�+�� ����� ������ ��$�%�� ��� ������ +�+ 0������� ��������* �� �* �� ��������#��+�+ ����*� GI7H- �� ������ ����� � 0���1�� +�+ � �� � �������� ���������� ��� �������� ��������� ,�� +�+ 0���1�� #� ������ +�+ �0������� �� �������� �� ���������� ���8���- ����#���� +�+ ,�� ��� ������� ������� ����� ������ � ,�� ��$�%�� ������ � � �#����� ������ ������� �� *��������* 0��������� ���/�� +�+,�� ������� ��������� GIIH- ��� �� *������ �*������� �#�� � � ��� ��$�%0+�+ �� �� �������*�� #������ 0+�+ �� #��� ��� ���� ������� ������ ��� 0+�+ �0������� �� �� ���������� ��%���� �0 �#��� ������ ��� � � � ����� ������ ��� ������*������������� ��$�%0+�+ GI6H- ��� ��$�%�������� 0+�+ ��* � #�� ��� �����#�� ���� � � ����*���� +�+ � �� � �� � �����������/�� +�+� ��� �� ��"%+�+- �� ���� +�+ ��* � #� �������������0���1�� #� �������� ��$�%�� �� ������������� � � ��)� �����%��������* ������� ��������� ������ GIB�I4H-

������ ��� ��� ����� ������ �� ���� � �� �����

���� ������ ������� ��������� � �� �� � � ���������� ����#������������� � #� ��+ �� � � "'� �������� �� � �� �*����� �$%�'� ��� ��� �� ��� ������ � �� ������- �$%�'�� � 6=%��� ������ ,�� ����# ������ ������ 34K� �� ������� �� ����� ���� ������ ������0������� $== �*��� ��� ,�� /��� ������#�� �� 35B3 GI>H- ��������$%�'� �� ������� �� � � ��������� �������� ��� �� � ��������J+�+� ��� ��+� ��� ��������� ��������� ������ �� ����� �$%�'� ����� ����*����� �� ����������� � &��%�(- �$%�'� #���� � ������������ ��#�������� ��� �� � �� ������� ������� ����������� ������������ ���������� ��� �� �#��� � � ��������� #�� ��*������ ��� %,��� ��� ��#����� ��������� �������� ��� �� ��� &"�'(%�����%���� �**��*���� GI5�6IH- !�������� ,� ��� ������� � �� �$%�'� ���� �� �#���� ���� � ��������� ������ � �������� G66H-

6B � �������� �� ��

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 7: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

�� 355I� �� ,�� � ,� � �� ������� ���*��1�� #� ��+ �� � � "'��������� ���� ������ ��� , �� �$%�'� ��������� ,�� 0�*���������������� ������ &���#0������ ���D� 0�*���� ��� �� ��� � ������#��� �������� ���������( �� ,��� �� ,�� � ����� ���#������������* ������ � �� ������ G6BH- ��� ��������� ,� ������������ �� �$%�'� �����/����� #��� � �� 0���1�� ������ ������ 0+�*%3�������� �� ��$�%0+�+ ��� � �� � � �$%�'� �����0 ,�� 0+�+���� 0���1�� ����� ��*���� ��� �� 0+�*%3� �� ��#��8������ ���*���� #�����%�$%�'� �������#����- 0+�*%3 ,�� ����/�� #� �, ���� � ������� � ����*��� � ��� �'+�� ��� ��� ��������� ,�� /����� ����%��/�� �� 4%���� ��������%5%���#0�������� �-�-� 5�0�5�&4����� �����6����7����0�( ������ ����( #� 9�! �������� ������� ����������� &2�*��� $� 2�*��� 7( G$$H-

� �������� �������� �� ��������������������������� ���� ���� ����

� �������� ���/�� +�+ ��� #� ������� ����� �� #� ����� �*�� ����������%�������� ���������� ��������* �� �� ���� ������ G64H-

����� � ��%����� � ����*��� � & +�( ����� �0������ �� +�+���� 0+�*%3- +����� ,��� ������ � � ������ ������ �������� �� � ����D��� ���D7=K �������,���� &3$=?>=?3=?6� �������(� ��� ������� ,�� �$����-

������$������������� �������������� ��� ��������������� 64

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 8: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

���

��

�"���������

0+�*%3

&4%���� ��������%5%���#0��������L5�0�5�&4��

��� �����6����7

����0�(

����������(-3�9�!0+�*%3&7==��1����� 7(?��6�43&��3���%B(�I-4>�I-B5&��3���%7(L37�9�!&46-6��1�

���� 7(?��$=$�6�345-4�347-I�3BI-6�3$4-3�4$-I�66-$�6=-I�6=-$�I6->�I7-6�75-5�7>-4�7B-B�7B-3�$5-$�$>-5�$>-I�$6-7�

$6-=�$I-$�$7-$�$7-=�35-7�34-4�3$-I-L�D1&2�%��(?643G&�

��(���7B�65�6��8�����643H-

6>

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 9: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

"� ����� 0+�+� ,� ���� 0+�*%3% ��� � �� ������������%���%����� ��� ������� � ��� #�����* � ����� �*��- ' �� ������������%������� ��� ��,� � #��� � ����� �*�� ��� ������*�� �������&�(G6>H� , ��� 0+�*%3 ��� �� ���� � #� � ��)� ��*��� � ������*����������- �� �������� � � #�����* 0+�*%3%������� � ����%� �*�� ��*��/������ ��������� , �� 0+�*%3%������� ,��� ������������������ ,�� �$%�'� ��� ����%�$%�'� �������#���� &2�*��� I(- �� #�����* ��* � #� �������� #� � � 2�� �������- �� ,�� �������� �� � � ������ #� ����� �*�� ������ �����0�� ��������*0+�+ � ��* � � 2�� ���� � ������� ��������� ����� �*�� ����� ����� G65�B=H� ��� ���� ���������� � � �� ��*���� ������&2�*��� 6( GB3�B7H-

��� � � � �������� �� ����������� �����������������

�� ,�� �������� ������� � �� ��� �'+ ���*��1� ������� 0���1��� �� ������ ��� �$%�'� G3>�35H- �� �������� ,� � ,�� � �� ���%����#���� �*����� � ���� � ��� �$%�'� �����0�� ,�� 0+�*%3 ,����������� �� ���� "'� �������� ����* ������� �������� � ��#������ � �� � ��� ,�� � *� ��������� #��,��� ������ ����%�$%�'�%0+�*%3 ����#����� ����%�$%�'� ����#����� ��� �$%�'�%��������� ��+G$$H- �� ,�� ��� ������� � �� ����� J� , �� ������� � � � �� %�����%#�����* ��*�� GBI�B6H� �� ������*��� �� �� ������ �� , �� �������� ���*��1�� #� �'+ �� "'� ��������� ����� GBB�B4H- �� ���%����� ��**����� � �� ������� � ����%�$%�'� �������#���� ������ ��

����� � �$%�'� ��� ����%�$%�'� ����#��%��������� #�����* 0+�*%3��������* ������� � ����� �*��- ������* 0+�*%3%������� � ��������� �*�� &�44I"-3 �����( �� � � �������� � �#����� �$%�'� &$== �*���(��� ����%�$%�'� �������#�� &.�%�"+%3(-

������$������������� �������������� ��� ��������������� 65

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 10: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

���

���"����#����� ������

� $%�'��������%�$%�'��������#��%��������0+�+������#������ �*��-

B=

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 11: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

� � �$%�'� �����0 ,�� � �����#�� ����� ��*���- 2��� ��� ��� �����0��� �� #� ���� #� ������� #�����*� #�� )��� #� ������������ ��%���������� � �0�������* ����*�������-

���� �������� �� ����������� �� ������������� ���� ��������

"� ���������� ��* � #� �������� #� � ���� ������ ���������� #� �����������- �� ,�� ������� � �� ����#���� �*����� ������� 0+�+ ���*��1� ��������� �� �� ���������� ������ #�� �� ������� �������� ��� � � ��)� ����*���� ������� ��� ������� �� ��������* � � 0������� ���/����� +�+ GB>H- ��" �� �� ��� ������ ����� ���0������� ��� ��)�*���� � � � ������ �������� ���������� � � ������ � ����#���� �� ���� ���� GB5�43H- �� ,��� ,� � �� ��+ �� �+< �������� ����%����� ,�� ��"%���/�� +�+G3$H- +���� �� � �� ������� ���� ,����� ����� � � , ��� ����%������� #��,��� ����%�$%�'� ��� ����%0+�+ ����#���� �� � � "'��������� G36H ��� � ,� � �� ����%�$%�'� ����#���� ���� #� � ������� �������� � ��#��� �� �+< ��������� , ��� �*� ����%0+�+ ����%#���� ,��� �� ��������� ,�� �������� � ��#��� G3BH-.� #������ � �� ��������� � �� � � ���������� �������#����

�*����� � �����0 �$%�'� ��� 0+�*%3 �� "'�� ���������� �� � ��������� "'�� ��� �* �� ��������� ,�� � ����� ��������� ��#��� #�� �� ����� � ��#��� &����#��� �� ����(- 2��� ��������� 0+�+ ������� �� ��������� ,�� � � ����� ��������� ��#��� �� "'� ��������- �� ,�� � ,� � �� +�+%�������%��/��������� �� � � , ���� ��� ������1�� ,�� �$%�'� �� �� ������������� ���������� G4$H- .� ��� ��� � �� �$%�'� ,�� �#�������� �0%������� ,�� �� ��#���� ����� ��*��� ��� �������%������ #����� ���� �� ���������� ���8���� ��� � �� �� �%�����1�� ,�� ��%����� ��� ,�� ��I%������� ���� ����� G47H- ��� � ��� �� ��%�������* �������������� �������� �� ��������� ��� ������������* �$%�'� ��� 0+�+ �� � � �� ��*������ �� "'�-

��� ����

G3H �-+- ���� �-�- ����� "-<- � ������ M-�- <���� �- +�1� ��� �-!-J- ��* ��� ��#��� �� �������� ����� ���� �������? �������* ��������� ,�� � � ���%����� ���������� ����� ������*�����- �� ��� � � ���? 3=$3�3=$7� 35>7-

G$H <-9- ������� "-<- � ������ �-+- ���� �-�- '����� �-�- ����,�� %N��*� �- +�%1� ��� �-!-J- ��* ��� "������������� ����#����? �������� #� ����������������� ��������� ,�� � ��#��� �� �������� ����� ���� �������- ������ �?3$33�3$3I� 35>7-

������$������������� �������������� ��� ��������������� B3

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 12: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

G7H �-!-J- ��* ��� <-9- ������ ��� "-<- � ������ � �������������� �������- � ��������� � ��? I>B�I>5� 35>B-

GIH �- ������ '- �������� �- �������� �-�- ������� �-�- �� ������ '-�-�- ��� �����%J�������� - ���#��� !-2-"- :,��� ��� <-�- ������� "������������� ����#����&"�"( �������� �� � ���������� #�� � � ������ ������ �����- ������ ���?36II�36I4� 355=-

G6H �-'- ��9���� !-�- ������� �-9- � �������� ��� �-"- M������ "���%� �� ���������#���� ��� �������� �*����� � �����0 ����*�� � �� �������� � �����%#�����*�� �#��� ��*������? �$%*��������� � &����������� �(- !��� "��� ���� #�� $#�� ��? I3$=�I3$I� 355=-

GBH <- ��������� N- �*���� �� �- 2�)���� M- �� ���,� ��� - M���� "������������������&�( ��� ���������� ���*���� ��������� �������- ������ �� ? 344�34>�355=-

G4H "- �������� <- ��������� M- �� ���,�� "- 2�)������ �- ������ �- M#���� � ��� - M���� "���#���� � �$%*��������� � ��� �������� ������������ �� �������� ,�� �������� ����� ���� �������- ��������� ����� � �!? 3IBB�3I4I� 355B-

G>H �- "�����%��*��� ��� "-!- ��#���� � ������ ��� ������/����� ����� �%� ����������� ��������- ����� �? 7BI�7B4� 355B-

G5H <- ��������� N- �*���� �� - N������ �-"- ������� ��� - M���� "�����������������#���� ���*��1� �$%*��������� � ��������� ������� #� ����������* ,�� ��0�*�� ���/�� ���� � ��� ������- � �%� ��� � ��!? I64�IB$� 355I-

G3=H �-�- ��,� ��� �-+- ��������� � ������������������ ��� � �� �������� ����� ����#����- �������O� '��������� �������� ��������� 37� ������- ��?M-�- �����#�� ��� ��- 9�, N��? �����,%����� ���- $=6>�$=B5� 355I-

G33H �-+- .��1��� ��� �- �����#��*� !�� 0���1�� �, ������� ��������� �� �� ��%*������- � &��� ����� ��? 34>6�345$� 3553-

G3$H �-+- ��������� N-M- �� �-M- ���� ��� �-�- ��,�� ������* ���� � ����� �*��� �� �������� ������ ��� ��*������� ���������� �, ������� ���������� ��%�����* ������� � ������� ��������- !��� "��� ���� #�� ' $#�� � ? 777�774�3545-

G37H M-�- �O������ �-<- "������ �-<- ������� �- .��* ��� "- � ���� �0������%�����/�������� �� ���� ������ �� ���������� ��� �� ������� � 0���1�� �,%����������������- &����������� !�? 3$3B�3$$6� 355B-

G3IH �- J������� �- "�� ��� �- ��� ������� �- +�������%!��� M- " ��� - '���������������� #��,��� ����#���� � 0������ �,%������� ��������� ��� ����������� �� �������� ����� ���� �������- ������ ���? 5$7�5$6� 3557-

G36H 2-�- ��� ���� �-�- �������� �-"- M ���� ��� 2- ��)��� �-�- ���1%:���%8���� <- �������� ��� �-!-J- ��* ��� +��� ����%������� #��,��� ����#���� ��$%*���������%� ��� 0���1�� �,%������� ��������� �� �������� ,�� ����� �� ����� �������- �� � ��������� � ��? 4IB�4I5� 355>-

G3BH 2-�- !���� �- "���*���� - "������ �-"- M ���� ��� 2-�- ��� ��� ��� �-!-J-��* ��� "������� ������� �� ����� ��� �������� ����� �� ����� �������? "�%������� ,�� ����%�$%*��������� � ����#���� #�� �� ,�� ����#���� �*�����0���1�� �,%������� ���������- �� � ��������� � ��? >>7�>>>� 355>-

G34H N- ��������� <- ��������� :- ������� - M��� ���� �- 9�� � ��� - M���� ��%�������� �$%*��������� � ��� �������������� ����#���� �� 0��������� ��%�/�� �,%������� ��������� ������ #� ����� �*��- &��� �%� ������ � �"�?6B5�647� 3554-

G3>H �- �P���� <- ������� <- ����� '- !������ +-M- �������� 9-�- :���Q��� !- ��������#��-�- '�����*���� �-.- ����� � .- '������� ��� �-+- .��1���� "���� �� ����� ��%��#���� ��� �������� �*����� ������� 0���1�� � �� ������- !��*�����

B$ � �������� �� ��

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 13: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

���������� #� ������� ����#���� � ������� � 0���1�� �,%������� �����%����- � &��� ����� � !�? >36�>$6� 355B-

G35H �- �P���� <- ������� �-.- ����� � .- '������� ��� �-+- .��1���� � ������� ���� ����� �� ����� ����#���� ��� ������� 0���1�� � �� ����� ��� �$*��������� 3 &��� � �� �������(- !��� "��� ���� #�� $#�� !�? 3=76B�3=7B3�3554-

G$=H �- �P���� �-"- ����� <- ������� �- ���#�� 9- +�����*��� �- ��##���*������ �-"-��������� '- 2�������� <-"- ������� +-M- �������� .- '������� ��� �-+- .��1����������� �������#���� �����/� � 0���1�� � �� ������ � 0���1�� � �%� �����%������ ������� �� �#�� ����� �*� ������ 0���1�� �,%������� ���%�������- � &��� ����� � �"�? 334�3$>� 3555-

G$3H "-�- .����� 9- +�����*��� �- 9���#� M-2- 2����� �- �P���� �-+- .��1����.- '�������� �- �� ,����� !-�- ������ .- � �� �- ��##���*������ "-�- 2%*����� ��� �-"- ��������� ���������� ������/����� #� ���� ����������� 0�%��1�� � �� ������ �� ��������� 0���1�� �, ������� ��������� � �� ����������������� ����� ����������� ��� �������� � � ��� �������� �� ���- � ���� &��� � ���? 37654�37B=4� 3554-

G$$H M- M#���� �� <- ��������� R- +��� �- 2�����,�� M- M�� ���� �- ���*���� - "�����9- �������� - N������ �-J- J����� ��� - M���� " �����/� ��*��� � �$%*���%������ � �������� �������#��%��������� ������ 0���1�� �, ������� ���%������ #� ����� �*��� � ���� ��� � I$? B54�4=5� $==3-

G$7H �- 2����*���� !- .�� "- ���*��������� �- '������� "-M- +����� ��� �- 9��������������� ��������� �0���� � 0���1�� �, ������� ��������� ������� � ����� �� ���������� ���� ����� ����� � �0����� �� ���� ��������- �����������������"�? $37�$35� 3557-

G$IH �-�- ��� ��*� �-"- ��������� "-�- J������� �-�- ������ �- 9���#� 2- '�� ����!- �������� �-�- �� ,���1 ��� "-�- 2*������ ��������� ���/�� �, ���������������� ������� ������ � �������� ������ 3 �� ���� ���� ����� ����� ������ ������ �����- !��� "��� ���� #�� $#�� ��? 637I�637>� 355=-

G$6H -�- !�)���� ��� � "- "�����#�� �-�- ������ �-"- ��������� �- 9���#� "-�- 2*��%��� ��� "-�- +����� �������� ���� ����� ���� �0������� *��������� �������� �*� ����%����������* ����� #� ���/�� �,%������� ����������- "������� ���? $6I�$64� 355=-

G$BH "- 9������ �- ����*�,�� �- N���� ���� �- 9�� ���� !- ������ M- N������� - 9�������� �- 91���� M- M�����% �������� �- M�,���� 9- ���*�� �� � ��%*�� ����� ��� N- �����1�,�� +����1���� ������%#�����* ��������� *�,� ����%���� *�,� ���� �� ���� ������ ��������- '���#�� ���� ��%<�2 ��� � ������ ������ �� ����������- &����������� !�? $44>�$4>B� 355B-

G$4H 9- .�����#�� �- M���#���� �� N- � ������� M- M�,��%M,���� N- �� ����- ����#�� �- .�����#�� �- "���,�� �- M��%� - ��1���� N- N�1��� ��� !- 9�*���� <�$ 9�*��� � M������%���� ������������ ����� ��*������ �0������� � �����#��������� ����� ���� � ��� � &����#D9���%�( *���- &��� ��� � ��?3>$�353� 3555-

G$>H 2-�- ������*� �-�- +,�� �-�- M������� �-9- � ��������� "- ������ �-�- "�������� +-�- M �� �*���� 9�, �9" ��1��� ���*����* <*�%3 �!9" �� �#��� ����������� ������ ���������� ��� ��*�,� ���� ��)���- "����� ��� � �? 3I7>� 3555-

G$5H 2- ��� � �- �� �#���� �-M- ��� ��� <- "������ ��� '- +�##�� !������� �� ��������� �� ���� #� �� �#���� ��I= ��*������*-"������ �!�? $==�$=7� 355>-

G7=H .- ������� �0���1�� ���������� ��� ������ 0���- &��� (��� ������ � �? $4I�$>=�355B-

������$������������� �������������� ��� ��������������� B7

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 14: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

G73H �- �����#��*� +, ������� ��������� 0������ ��� ��� ��� #��*���� ��*��/�����-� ���� &��� � ���? $=5B7�$=5BB� 3554-

G7$H +-�-2�*� �- '��� ������ �� �-+-.��1�������-�����#��*�9���1������ 0�������������*� ������� #��� �� �������� �%3==- � ���� ��� � ��? 3IBB�3I44� 35>4-

G77H �- <����#����� �- ���*���� �- R�� ��#��*�� ��� <- M����� "��0������ �����, ������� ���������? +�� �������������� ���� ����� ��� ������� < ���*�������� ���� ����- � ���� ��� � ��? I56�6=5� 35>4-

G7IH +- 9�*�� '- ���1� �-�- "�����1� �- � �� ��� !-�- <����� �0���1�� +�+ ��*%������ ����� �*� *��� �0������� � ��* ��*��� ��������� ''"!�- &��� !�?$$5�$I=� 355>-

G76H "- .��������� !- �� ��� �� 9- ��#������ "- '����� � !- +���1 ��� .- ������ ������0���1�� +�+ ������� �������� �**��*���� � ��* ��������� � �� ������ "$-������������ )����� *��� ���� � ��? 3373�337>� 3556-

G7BH +- M��� ������� .- ������� �- ���� ��� !- - ����� " ��� � � ��/���* � ����*�� �, ������� ��������� 0������ #� � � ��������� � �������% ���� �������� �����%0������ ������� ����* �'+�- ���� ������� � ���? 45�>5�3557-

G74H �- ��� ����� �- �� ����� '- ���� �-M- ��� ���� ��� '-<- �������� � �������� ������0��������������� �� 0���1�� �, ������� ��������� �������������������%������� *�,� ����- � ���� &��� � ���? 35I=6�35I3=� 355>-

G7>H "-�- ��,�� �-+- +��*� !- - ���� ��� .- ������� 4%�������0�� ������� ������ ������� �� 0���1�� �, ������� ��������� ��� ���� �� ���������� ���8��-� ���� ��� � ��? 347=�34I6� 3554-

G75H "-�- ��,� ��� .- ������� �0������� ��� �� ����������- ���������������� ���?3�$>� 3555-

GI=H �- M����� "- M������ +- ����� ��� �-�- �� ��� ������/����� � �������%#������� ���� �� �����%0���1�� �, ������� ���������- +��# ��� � �"�? $B5�$4$�355$-

GI3H �- M����� "- M������ +- ����� ��� �-�- �� ��� +���� �����%#��� ���� �������* �����%������1�� ���0������ ������� ���� ������ ����������- � ���� ��� � � ? 3>4B�3>>B� 3556-

GI$H �- ����� "- !������� �- �������� "- M����� ��� �-2- �� �0������ ������� � �������� �������� ��� ��������� � �������� �� ����� �*��� �� �����0��,�� �������� ��� ��� ������� �� ���� �� ���������� ������- � ���� ��� � ��?37I4�37B=� 3554-

GI7H �-"- M��������� �-+-�- ���%+������� "-2-�- ������ � ��� '-9-�- ���������������� ����������� �,%�������%��������� ��������#����� � �����%�������0������? "��������� � � �� �������� � �������* �,%������� ���������-&��� &��� � ��? $=BB�$=4$� 355$-

GIIH �- '��� ������ �� +-�- 2�*� �- - R���� ��� �- �����#��*� �0������� ���/����� +�+? �������� #��,��� ����%�������� ��� �����%�������� ���/�����- ��� ,���� � � ��# $�%&&'() <? >7�>4� 355=-

GI6H �- N��%���������� .- '�������� �-<- !������� �- '��� ������ �� -<- ����,� �-������� �-+- .��1��� ��� �- �����#��*� <������� � �������� 0��������� ��%�/�� �, ������� ��������� �� �� ���������� ������ ��##�� ��� ���- � &��� ����� � ��? 3=>B�3=56� 35>5-

GIBH <- < ���,���� �-�- � ���� ��� '-+- 20� ������ ������������ 0��������� ���%/�� �, ������� ���������- � &��� ����� � !�? 3I57�36=3� 355I-

GI4H �- +��# ��� �-�- +����� "����� �� ���#��� ������������� � �������� � ����/����� �,%������� ���������- +��# ��� � ���? 3$$�3$B� 355I-

BI � �������� �� ��

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 15: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

GI>H �-<- �� ���1�� M- ����� ��� �- ������ �#�� ��� #�� �� �#�������� ���������%������ �$%*�#���� ��� ����������- "��������������-���� ��? 435�4$I� 35B3-

GI5H �- .���� �$%*��������� � &����������� �( ����������� ,�� � �� �������������- �� � ������� � � ? 633�636� 35>I-

G6=H <- '�1� ������� � �����/� �����%#�����* ������ �� ���� ����� #� �/����� ����*��� � ����* ������%��� ����- ��? �- '������� ��-� '�������� #�%�*���� Q����- '��*���? �0�� '����� >34�>$=� 3545-

G63H <- '�1 ��� �-�- M������ � #�����* �$%*��������� � � ���� ����� ���%�������? ������#���� ���* ������� ������- +��# ���� � �"�? 3>7�3>B� 3545-

G6$H �- 9���� <-�- ������� '-�- ������ �- ���� �- .���� �-�- M����� ��� !-2-:,���� '�� ��#����� �������� ���� ��������� �� �� �#���� #� �$%*��������� �-������� ������� ����� ���? 3I$�3I5� 35>B-

G67H �- �� ��#�� �$%���������� �? " ������ �� �#��� � � ������ ��������� � ���������� #�� ��*������ ��� ,��- ������ ? 3=>B�3=53� 35>6-

G6IH �- 9���� �- .��� ��� �-�- M������ �$%���������� � &��%�( �� �#��� � � �������������� ���� ��������� �����* "�'%������� �**��*����- ���������������� �?3=5�33I� 35>4-

G66H �- ���� M- �� ���,�� �-"- �������� <- ��������� - "������ M- ��,��� ��� -M���� �$%���������� � �� ��������� � �� �#�� ������ � �������� #� ��������������������� ����#����- ��������� ����� � ��? 3B4�34I� 3555-

G6BH <- ��������� N- �*���� �� - N������ �-"- ������� ��� - M���� "�����������������#���� ���*��1� �$%*��������� � ��������� ������� #� ����������* ,�� ��0�*�� ���/�� ���� � ��� ������- � �%� ��� � ��!? I64�IB$� 355I-

G64H �- �����#��*� +, ������� ��������� 0������ ��� ��� ��� #��*���� ��*��/�����-� ���� &��� � ���? $=5B7�$=5BB� 3554-

G6>H M- 9�� ���,�� �- "��� ��� M- ����� ������*�� �������%�������� ������ �������#���� ����� �������� ��������* ������ � �� ������ #� ���� �������������� �*��- � ���� &��� � � �? 6$$B�6$73� 355=-

G65H !-+- ���/� � �- - J������� �-�- �������� ��� �-2- +���%J������� +, ���������������� ����#���� #� ���� ����� �*�� ��������� ,�� �, ������� ���%������ ������ �����0��L � ����#�� ��� ����� �� ���� ������- � �%� ��� � � �? 3=I3�3=65� 35>>-

GB=H �-2- +���%J������� 9- ���1���� �- !������� "- ����� �- +� J�� ��� �- J������� ������� +�+%�� #� ���� ����� �*��? '��������� ���������� � � 2��!��������- ���������������� ���? 3B3�34=� 3554-

GB3H �-�- M � <- ������� 2- '�� �- �����#��* ��� �-+- .��1���� ������� ����#�����*����� +�+ ��� �� �� ���� ����� �*� ������ +�+ �**��*����- ������������ )����� � ��? 3$6>�3$BB� 355$-

GB$H '-"- M������ �-�- !������ '-�- ������ �-"- N���� �-"- .��� ��� !-�- ����� ��%���� �����0�� +�+ ������ �� ��*���� �������� �� ���� ������� �����-������������ )����� *��� ���� � ��? 55=�555� 3556-

GB7H '-�- ��*������� !-"- !*���� -�- M��1������ ��� "- ���*���� <� ����� ����#%���� +�+ �**��*���� �������� #� �����/� ���� ������ �*� 2� ��������-� ���� ��� � � ? 43I�4$I� 3556-

GBIH �-<- ���� ��� �-"- M������ � /� ����� �$%*��������� � ������� � � �%� ����� #�����* ���� &���$>3%���$>>( ��� � ��*�� ���*��1�� #� ������������������#����- � ������ � ���? B67�B65� 355I-

GB6H �- ����� '-�- �� ���� �-�-�- ��� ��� <����� !-�-�- !������� "- �� ����� �-�-"-���������� !-�-.-�- �������� �- M�� ��� '- ���� "� ����� ��� ����� ���� �$%*��������� � � � �� ������ #���� � ��� ������� ���������- ���( � ���? 63BB�634I� 3555-

������$������������� �������������� ��� ��������������� B6

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.

Page 16: Anti-β 2 -Glycoprotein I Autoantibodies and Atherosclerosis

GBBH �- �*���� �� <- ��������� N- �*���� �� �- 9�*��� M- �� ���,�� �-"- ������� ��� - M���� ����� �$%*��������� � �� �� �������������� ����� ���������� ����*������� ������� �0������� #� � #��������� ������- ������ ��? 7$B$�7$4=� 355B-

GB4H �-�- ������� <-�- J������ ��� �-�- ���8���� "���%�$%*��������� � &�$�'�(�������#���� ���*��1� �� ������ � � � /��� ����� �$�'�- !��� "��� ���� #�� ' $#�� !�? 366I$�366IB� 355>-

GB>H .- '�������� �-<- !������� �- N��%���������� �-�- ������� �-�- �� ��� �-.-������� �- '���� ������ �� -<- ����,� �- �����#��* ��� �-+- .��1���� +, ���������������� �����*�� 0������� ���/����� �� ���- !��� "��� ���� #�� ' $#��� ? 374$�374B� 35>5-

GB5H .- '�������� �- N��%���������� �-<- !������� �-.- ������� �-"- �� ��� �- '���%� ������ �� +-M- ������� ��� �-+- .��1���� "������� ��� ������� ����#���������/� � ������� *�������� �����* 0������� ���/����� �, ������� ���%������- ���������������� �"? 7$6�776� 355=-

G4=H �- - ������� �- N��%���������� !- N������ �- ������� �- M������ !- �������M- 9�������� .- '������� ��� �-+- .��1���� "������#�� �*����� 0���1�� +�+��� ��*������ ������� �� ����������- ������ ��!? >>7�>>4� 355$-

G43H �- '�������� �- J������� �- ��������� M- " ��� - '����� "���#���� �� �� ����� #�����* ������� ��� ��������� � ��#��� �� �������� ,�� ���%����� ����� ���� �������- &��� ������ ����������� � �"? 3B�$$� 355B-

G4$H �- ���*�� "- "��� �- ���#���� �- ������ N- +���� "- "��%���� �- +������1�"- � ��� � �- ���#��*� �- M������ �- ������ ��� N- � ������ �������� ������� ���������� �� +�+%�������%��/����� ���� ������1�� ,�� �$%*��������� ��&����������� !�? 33=>�3336� 35>>-

G47H �- ���*�� �- ������� �- ���#���� "- "��� N- +���� �- �� ���������� �- ���� �����- M����� ��� N- � ������ ����������1���� �$%*��������� � &�����%������ �( � ���� �� ���������� ���8���? '������� ����������� � �������*������- &����������� !? $$$4�$$7=� 3555-

BB � �������� �� ��

Int R

ev I

mm

unol

Dow

nloa

ded

from

info

rmah

ealth

care

.com

by

UB

Mai

nz o

n 11

/05/

14Fo

r pe

rson

al u

se o

nly.