VAJA 3

FOTOSINTEZNI PIGMENTI

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

Fotosintezni pigmenti

Klorofili: klorofil aklorofil b

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

Karotenoidi karoteni (β-karoten)ksantofili (lutein, violaksantin, zeaksantin, anteraksantin, …)

karotenoidi

klorofil b

klorofil a

antenskikompleks

reakcijskicenter reakcijski

center

svetlobasvetloba

zman

j še v

a nje

e ne r

gije

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

Fotosintezni pigmenti sodelujejo pri absorpciji svetlobe

klorofil a bakterioklorofil aklorofil b

Klorofili

Ksantofili:

lutein

Karoteni:

β-karoten

Karotenoidi

neoksantin

valovna dolžina (nm)

abso

rpci

jaIRUV

spekter vidne svetlobe

bakterioklorofil aklorofil b

klorofil a

2) Ločba - kromatografijaSilikagel G(stacionarna faza)

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

Vaja 4.1: Absorpcijske lastnosti asim. pigmentov

1) Ekstrakcija

hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4

kloroform

15 mm10

0 m

m30

mm

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

2) Ločba - kromatografija

ab

retenzijski faktorRf = b / a

+ aceton – 5mlheksan/ dietileter/ aceton (6: 3 :2)(mobilna faza)

centrifugiranjesupernatant

Merjenje absorpcijskih spektrov na spektrofotometru(350-700 nm)

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

monokromatskavpadna svetloba

monokromatorsvetlobni vir prizma

vzorecprepuščena svetloba detektor zapisovalnik /

računalnik

Spektrofotometer

Absorbanca:

A = log I0 / I A = ε • c • l Beer-ov zakon

c = koncentracija, l = dolžina poti, ki jo opravi svetloba skozi vzorec, ε = molarni ekstincijski količnik

valovna dolžina (nm)

abso

rpci

jaIRUV

spekter vidne svetlobe

bakterioklorofil aklorofil b

klorofil a

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

Vaja 4.2: Kvantitativno določevanje asim. pigmentov

hladen aceton tema, MgHCO3, Na2SO4 Izmerimo volumen

ekstrakta (V)

vakuum

vakuumska filtracija

Vzorec znane mase (G)

Meritev absorpcije na spektrofotometru pi 470, 645 in 662 nm

klorofil a: Ca = 11.24 x A662 - 2.04 x A645

klorofil b: Cb = 20.13 x A645 - 4.19 x A662

karotenoidi: Cx+c = (1000 x A470 - 1.9 x Ca - 63.14 x Cb) / 214

Dokončne vsebnosti pigmentov v mg g-1 dobimo po upoštevanju sveže mase tkiva (ali še bolje suhe mase, če smo jo določili), iz katerega smo naredili ekstrakt = G (g) in ob upoštevanju volumna ekstrakta, t.j. volumna porabljenega acetona = V (ml).

Cy x Vkončna koncentracija: C = --------------------

G x 1000

y = a, b, x+c

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006

SPAD vrednost

Klo

rofil

(μg

cm-2

)

Merjenje klorofila s klorofilmetrom (SPAD Minolta)

Fiziologija rastlin – laboratorijske vaje 2005/2006