MICROSCOPIE ELECTRONICA

1

puterea cea mai mare de rezoluţie puterea cea mai mare de rezoluţie a unui microscop optica unui microscop optic = = 0,2μ0,2μ

2

Principiul M.E. 1924 De Br1924 De Broglioglie e - - comportarea comportarea

dualistă undadualistă unda - corpuscul a - corpuscul a particulelor încărcate electric . particulelor încărcate electric .

D = λ / N x sinαD = λ / N x sinα

Λ =h /M * v( plank/masa. Viteza)Λ =h /M * v( plank/masa. Viteza)

3

4

Microscopul electronic de transmisie

5

tunul electronic este tunul electronic este sursa electronilor de sursa electronilor de inalta energie, lentile inalta energie, lentile electromagnetice, electromagnetice,

camera in care se camera in care se introduce preparatulintroduce preparatul

lentila proiectorlentila proiector ecranul fluorescent pe ecranul fluorescent pe

care se formeaza care se formeaza imaginea.imaginea.

Principiul MET

Electronii care strElectronii care străbat preparatul sunt ăbat preparatul sunt deviaţi în funcţie de grosimea şi densitatea deviaţi în funcţie de grosimea şi densitatea preparatuluipreparatuluistructurile mai dense vor produce un structurile mai dense vor produce un

grad mai mare de dispersie a electronilor grad mai mare de dispersie a electronilor – zone electronodense, mai întunecate – zone electronodense, mai întunecate

structurile mai subţiri vor permite o structurile mai subţiri vor permite o treceretrecere mai uşoară a electronilor – zone mai uşoară a electronilor – zone electronoclareelectronoclare

6

Interactiunea electroni- preparat

7

Caracteristicile M.E.

Puterea de mPuterea de măărirerire Puterea de rezolutiePuterea de rezolutie

Puterea maxima de marire utila Puterea maxima de marire utila este de aproximativ 1 milion de ori.este de aproximativ 1 milion de ori.

8

Caracteristicile M.E.

Puterea de rezoluţiePuterea de rezoluţie Teoretic, puterea maxima de rezolutie Teoretic, puterea maxima de rezolutie

==1- 2 Å.1- 2 Å.1 1 ÅÅ= 10= 10-10-10 m m Practic , puterea de rezolutie este de Practic , puterea de rezolutie este de

1/ 10 din grosimea sectiunii 1/ 10 din grosimea sectiunii examinate examinate ~~ 60 Å. 60 Å.

9

Caracteristicile M.E.

Numai pentru preparatul microscopic Numai pentru preparatul microscopic permanent!permanent!

Imaginea finala este MONOCROMA Imaginea finala este MONOCROMA

zone electronodense si zone electronodense si electronoclareelectronoclare

10

11

ETAPE

RecoltareRecoltare FixareFixare DeshidratareDeshidratare ClarificareClarificare ImpregnareImpregnare

IncluzieIncluzie SectionareSectionare Diferentierea Diferentierea

structurilor prin structurilor prin contrastarecontrastare

Montare pe Montare pe grilagrila

12

Criterii pentru aprecierea unei imagini corecte

Absenţa spaţiilor astructurateAbsenţa spaţiilor astructurate Continuitatea membranelorContinuitatea membranelor Aspectul particular al unor organiteAspectul particular al unor organite Aspectul general este acelaşi de fiecare Aspectul general este acelaşi de fiecare

dată, indiferent de fixatorul sau metoda dată, indiferent de fixatorul sau metoda folosităfolosită

13

MICROSCOAPE ELECTRONICE MicroscopulMicroscopul electronic cu baleiaj electronic cu baleiaj sau sau

scanning.scanning. imagini tridimensionale ale suprafetelor imagini tridimensionale ale suprafetelor

celulelor, tesuturilor sau chiar a organelorcelulelor, tesuturilor sau chiar a organelor acelaşi principiu al interacţiunii cu un acelaşi principiu al interacţiunii cu un

fascicul de electronifascicul de electroni importanţi pentru obţinerea imaginii sunt importanţi pentru obţinerea imaginii sunt

electronii “reflectaţi” pe suprafaţa electronii “reflectaţi” pe suprafaţa preparatuluipreparatului

14

MICROSCOPIE DE BALEIAJ

15

Ingheţare - fracturare

Permite vizualizarea suprafeţelor Permite vizualizarea suprafeţelor rezultate prin clivajul anumitor structuri rezultate prin clivajul anumitor structuri (ex: clivajul membranei celulare)(ex: clivajul membranei celulare) se realizează un mulaj metalic sau de se realizează un mulaj metalic sau de

carboncarbon

16

Ingheţare - fracturare

17