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Hémoglobineopathies – Quand est-ce que nous cherchons quoi?

Dr. phil. nat. S. Brunner-Agten Yverdon, 19. Mars 2013

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Hémoglobine

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Gènes d’hémoglobine

h"p://amc)app1.amc.sara.nl/EDUwiki/images/d/d8/Hb)composi=on.gif?

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Fraction d’hémoglobine (HPLC)

α2δ2!

α2β2!

α2β2!

α2γ2!

Hémoglobineopathies

!  3% de la population mondiale sont porteurs sains !  50’000 personnes affectées vivent en Suisse !  Dont 200-300 souffrent d’une hémoglobineopathie

sévère !  Elles font partie des maladies héréditaires

monogénétiques les plus fréquentes !  (souvent) transmises récessivement !  Groupe hétérogène des maladies génétiques

Huber?A?et?al,?Swiss?medical?forum,?2004?

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Classification des hémoglobineopathies Hémoglobine anormale Changement qualitative structurelle de l’hémoglobine Thalassémie diminuation quantitative de la synthèse des hémoglobines

β-Thalassémie α-Thalassémie

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1èrePhase?Labo?générale?

2ème?Phase?Analyses?

biochimiques?

3ème?Phase?Analyses?

moléculaires?

Algorithme diagnostique

1er?Phase?Labo?générale?

2ième?Phase?Analyses?

biochimique?

3ième?Phase?Analyses?

moléculaires? 8

Hémogramme Frottis Nombre des réticulocytes État de fer Paramètres d’inflammation Paramètres d’hémolyse

1er?Phase?Labo?générale?

?

Algorithme diagnostique

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Informations cliniques autres informations (AF, ethnie, transfusions, grossesse) Stabilité d’hémoglobine

Algorithme diagnostique

1er?Phase?Labo?générale?

2ième?Phase?Analyses?

biochimique?

3ième?Phase?Analyses?

moléculaires?

2ième?Phase?Analyses?

biochimique?

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!ZnPP (Zinc-Protoporphyrine)!

Thalassémie vs. manque de fer!

Algorithme diagnostique

1er?Phase?Labo?générale?

2ième?Phase?Analyses?

biochimique?

3ième?Phase?Analyses?

moléculaires?

3ième?Phase?Analyses?

moléculaires?

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Détection des α-Thalassémie délétionaire → gap-PCR (Multiplex PCR)

α+ ( �α3.7kb, �α4.2kb )

α0 (��SEA , ��MED , ��THAI, �(α)20.5kb, ��FIL)

Examens de base de biologie moléculaire

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Détection des 22 hémoglobineopathies les plus fréquentes → β-strip

Examens de base de biologie moléculaire

http://www.ams.ac.ir/aim/0144/image1big.jpg!

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Examens de base de biologie moléculaire

Détection des 5 δβ- et HPFH-délétions dans le cluster des gène de la globine β%

→ gap-PCR

HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3

(δβ)0-Sicilian/Mediterranean et Hb-Lepore

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"  Détection des variantes d’hémoglobine → séquençage du gène de la globine α- ou β

Examens de base de biologie moléculaire

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Additif de l’algorithme

4ième?Phase?MLPA?/?Array?CGH?

1er?Phase?Labo?générale?

2ième?Phase?Analyses?

biochimique?

3ième?Phase?Analyses?

moléculaires?

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critères pour les analyses MLPA / array CGH

Array CGH du gène de la globine alpha

!   Anémie hypochrome microcytaire (MCH < 27 pg)

!   Pas d’érythropoièse ferriprive

!   pas d’hémoglobinopathie (HbA2 et HbF normale)

!   Détection des corps d’inclusion de HbH

Array CGH du gène de la globine beta

!   HbF clairement augmentée (>5%)

!   Avec ou sans anémie hypochrome microcytaire

!   pas d’hémoglobinopathie

(HbA2)

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Array CGH

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"  Analyses des données avec GenPix Pro

Array CGH interprétation

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"  Analyses des données avec SignalMap

interprétation du array CGH

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cas 1 - hémogramme

Femme, 28 ans Pas d’érythropoïèse ferriprive

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cas 1 - HLPC

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cas 1 - examens de base en biologie moléculaire

"  Résultats négatives pour:

!  α+-Thalassémie (-α3.7kb, -α4.2kb) avec un α gène délété

!  α0-Thalassémie (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

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cas 1 - Array CGH

31.7 kb Délétion

α0-Thalassémie hétérozygote (Thalassamia minor)

Résultats du array GCH

Résultats du array GCH

Délétions chez 9 patients sur 13 (170-284 kb): "  5 x tout le cluster des gène de la globine α "  2 x élément de régulation HS-40 "  1 x HBA2, HBA1 et HBQ1 "  1 x HBZ, HBM, HBA2 et HBA1

4 x séquençage (HBA1 et HBA2): "  1 x mutation hét. dans le HBA2 (polyadenylation) "  3 x rien

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cas 2 - hémogramme

33-jähriger Mann homme, 33 ans

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cas 2 - HPLC

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cas 2 - examens de base en biologie moléculaire

"  Résultats négatives pour :

!  5 délétion δβ- et HPFH dans le gène de la globine β (HPFH-1, HPFH-2, HPFH-3, (δβ)0-Sicilian/Mediterranean and Hb-Lepore)

!   α+-Thalassemia (-α3.7kb, -α4.2kb) !   α0-Thalassemia (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

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cas 2 - Array CGH

>1 Mb Deletion

δβ�Thalassémie hétérozygote (Thalassamia minor)

Résultats du array GCH

Résultats du array GCH

Délétions chez 7 patients sur 13 (170-284 kb): "  3 x délétion de HBD et HBB (> 1 Mb, 48.4 kb, 13.5 kb) "  2 x ~13.4 kb Sicilian/Mediterranean (δβ)0-Thalassémie "  1 x 32 kb (proximale ~13.4 kb Sicilian/Mediterranean (δβ)0-Thalassémie, distal 18 kb downstream) "  1x HPFH-2 "  1x Croatian (εγδβ)0-Thal

6x séquençage du promoteur (de HBG1 et HBG2): "  3 x mutation hét. du promoteur du γ-globine "  3x rien

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cas 3 - hémogramme

homme, 36 ans

33% Unbek. Variante

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cas 3 - HLPC

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cas 3 – examens de base en biologie moléculaire

"  Identification de la variante de l’ Hb:

!  c.364G>C dans le gène de la globine bêta�!   ���#������ ����!�������!��!  ���'"�"��'"' �%$��"����#�#�����������"�

�'��"������#��

D‘où vient l‘hypochromie?

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cas 3 - examens de base en biologie moléculaire

"  Détection d’une α�thalassémie délétionale → gap-PCR (Multiplex PCR)

!  �α3.7kb �'"' �%$��"��(α+ -thalassémie)

HbD Punjab en combinaison avec une α+-Thalassémie

cas 4 - hémogramme

Variante in CAF

femme, 36 ans

cas 4 – HPLC et CAF

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cas 4 - examens de base en biologie moléculaire

"  Résultats négatives pour:

!  α+-Thalassémie (-α3.7kb, -α4.2kb) avec un α gène délété

!  α0-Thalassémie (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

!  MLPA du gène de la globine α !  Séquençage de la globine α et β%

cas 4 – analyses de biologie moléculaire

"  Identification de la variante de l’ Hb:

!  c.41C>A dans le gène de la globine delta�!   ����� ������� ���������!  ���'"�"��'"' �%$��"����#�#�����������"�

�'��"������#��

cas 5 - hémogramme

Variante in CAF

femme, 44 ans

cas 5 – HPLC et CAF

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cas 5 - examens de base en biologie moléculaire

"  Résultats négatives pour:

!  α+-Thalassémie (-α3.7kb, -α4.2kb) avec un α gène délété

!  α0-Thalassémie (--αSEA, --αTAI, --αFIL, --αMED, -(α)20.5kb)

!  MLPA du gène de la globine α

cas 5 – analyses de biologie moléculaire

"  Identification de la variante de l’ Hb:

!  c.287C>T dans HBA2�!   ������ ����!  ���'"�"��'"' �%$��"����#�#�����������"�

�'��"������#��

cas 5 - hémogramme

femme, 49 ans avec un fils diagnostiqué avec une HbS hét.

cas 5 - HPLC

cas 5 – analyses de biologie moléculaire

"  Identification de la variante de l’ Hb:

!  c.151_152insGGAGCC dans HBA1�!   ��������#��!  ����"��'��"������#�����

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résumée "  Diagnostique en

étape est important "  Ne pas toujours tout,

mais ne pas toujours un seul test

"  Diagnose = combinaison de biologie moléculaire et hématologie

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conclusion

"  Migration → prévalence des hémolgobinopathies augmente

"  Aujourd’hui: plus de possibilités au niveau diagnostique → plus de diagnoses définitives

"  Pas de thérapie sans diagnose "  Conseil génétique

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Merci beaucoup pour votre attention