Post on 07-Jul-2015
Απομόνωση ανθρώπινου DNA - 2
Γουρζής Στάθης – Φυσικός Συνεργάτης ΕΚΦΕ Λευκάδος 2008 – 2012 Εργαστήρια Φυσικών Επιστημών Γυμνασίου – ΛΤ Μεγανησίου Λευκάδος
Στο πείραμα αυτό θα προσπαθήσουμε να απομονώσουμε
ζωικό DNA, και μάλιστα
από ανθρώπινα νύχια …
Θα χρειαστούμε λοιπόν ανθρώπινα νύχια, υγρό απορρυπαντικό πιάτων και αλάτι …
… νεράκι …
… ένα καμινέτο, με τρίποδα και πλέγμα θέρμανσης …
… το MultiLogPro και τον αισθητήρα της θερμοκρασίας …
… δοκιμαστικούς σωλήνες και βάση στήριξης …
… μεταλλική βάση στήριξης, μικρή μεταλλική ράβδο,
σύνδεσμο, χωνί,
δακτύλιο και φίλτρο διήθησης …
… ζυγαριά, λαβίδα, ύαλους ρολογιού και γυάλινο αναδευτήρα …
… και παγωμένη αλκοόλη του εμπορίου, ισοπροπανόλη και μπλε οινόπνευμα …
Βάζουμε 20 ml υγρό σαπούνι σε ένα μικρό ποτήρι ζέσης …
… και το ρίχνουμε σε ένα ποτήρι ζέσης των 250 ml …
… όπου το αραιώνουμε στα 200 ml με νερό βρύσης …
Από αυτή την ποσότητα παίρνουμε πάλι 20 ml …
… και ζυγίζοντας λίγο αλάτι …
… μια κουταλιά, περίπου 5 g …
… παίρνουμε, τώρα, τα 20 ml του αραιωμένου διαλύματος, ( με το υγρό σαπούνι ), …
… και τα αραιώνουμε πάλι στα 100 ml με νερό βρύσης …
Προσθέτουμε τα 5 g αλάτι, που ζυγίσαμε προηγουμένως …
… και ανακατεύουμε με τη ράβδο …
Ανοίγουμε το MultilogPro …
… και συνδέουμε τον αισθητήρα της θερμοκρασίας …
Ανοίγουμε και το πρόγραμμα MultiLab…
Στο μενού «Καταγραφέας», επιλέγουμε «Πίνακας ελέγχου» …
… και βλέπουμε στην πρώτη κάρτα, τον αισθητήρα σωστά συνδεδεμένο …
Στο «Ρυθμό δειγματοληψίας», επιλέγουμε «10 μετρήσεις ανά δευτερόλεπτο» …
… και στο «Χρόνο καταγραφής», επιλέγουμε «Συνεχής» …
… και ξεκινάμε τις μετρήσεις … Βάζουμε τον αισθητήρα της θερμοκρασίας στο διάλυμα του σαπουνιού με το αλάτι …
Ρυθμίζουμε τη φλόγα από το καμινέτο, ώστε να καίει αρκετά έντονα …
… και το πρόγραμμα ξεκινά την καταγραφή της θερμοκρασίας …
Από τη θερμοκρασία περιβάλλοντος, κοντά στους 20ο βαθμούς Κελσίου,
προχωράμε πολύ γρήγορα στους 28ο βαθμούς Κελσίου …
Προσθέτουμε τώρα το δείγμα των νυχιών στο διάλυμα του σαπουνιού με το αλάτι …
… και ανακατεύουμε πάλι με τη ράβδο …
Η θερμοκρασία του διαλύματος ανεβαίνει ραγδαία …
… και φτάνει γρήγορα στους 48ο βαθμούς Κελσίου …
Σε ένα ακόμα λεπτό έχει φτάσει τους 61ο βαθμούς Κελσίου …
Συνεχίζουμε να ανακατεύουμε το διάλυμα τακτικά …
Συναρμολογούμε, τώρα, την βάση με το χωνί, που θα μας διευκολύνει
στην διήθηση του τελικού διαλύματος …
… και τοποθετούμε το χωνί, μαζί με το φίλτρο διήθησης …
Σε 6, περίπου, λεπτά η θερμοκρασία έχει φτάσει
στους 90ο βαθμούς Κελσίου …
… και συνεχίζει να αυξάνεται πολύ γρήγορα …
Ο προβολέας του εργαστηρίου μας δίνει πάντα, μια πιο εποπτική θεώρηση του πειράματος …
Κοντά στα 8 λεπτά, από την στιγμή που ξεκινήσαμε την θέρμανση,
το μείγμα μας αρχίζει να βράζει …
… και είναι φυσικό, αφού στα 8 λεπτά που προηγήθηκαν,
φτάσαμε τους 100 βαθμούς κελσίου …
Σταματάμε την θέρμανση και «κρατάμε» ώρα …
… ενώ η θερμοκρασία αρχίζει να πέφτει, πάλι με ραγδαίο τρόπο,
όπως ανέβαινε όση ώρα είχαμε ανοιχτό το καμινέτο …
Σε 5, περίπου, λεπτά φτάνει στους 67ο βαθμούς Κελσίου …
… ενώ μετά από 15, περίπου, λεπτά έχει πέσει κοντά στους 50ο βαθμούς Κελσίου …
… όπως φαίνεται και από το MultiLog Pro …
Παγώνουμε, για αρκετή ώρα, το διάλυμα του δείγματος,
με το σαπούνι και το αλάτι …
… και κάνουμε την διήθηση με το φίλτρο …
Τώρα είμαστε έτοιμοι, για το τελικό στάδιο του πειράματος μας,
που είναι η απομόνωση του DNA των ζωικών κυττάρων, που έχουμε προσθέσει στο μείγμα μας …
Προσθέτουμε μερικά ml, από το επεξεργασμένο μείγμα,
στους δοκιμαστικούς σωλήνες …
Δοκιμάζουμε πρώτα με λευκό οινόπνευμα, αρκετά παγωμένο,
που περιέχει υψηλή ποσότητα αιθανόλης …
Παρατηρούμε το DNA να περνά προς την επιφάνεια,
αλλά σε πολύ μικρές ποσότητες, σαν φυσαλίδες…
Τώρα βάζουμε ισοπροπανόλη, επίσης αρκετά κρύα …
Παρατηρούμε πάλι το DNA να περνά προς την επιφάνεια,
τώρα σε μεγαλύτερες ποσότητες …
Δοκιμάζουμε και με μπλε οινόπνευμα, επίσης αρκετά παγωμένο,
που περιέχει, και αυτό, υψηλή ποσότητα αιθανόλης …
Εδώ είναι δύσκολο να παρατηρήσουμε το DNA να περνά προς την επιφάνεια …
Τοποθετούμε τα δείγματα μας, στην βάση στήριξης των δοκιμαστικών σωλήνων …
Λευκό οινόπνευμα
Ισοπροπανόλη
Μπλε οινόπνευμα
… και ξαναδοκιμάζουμε με την ισοπροπανόλη …
Αυτή τη φορά, γεμίζοντας
τον δοκιμαστικό σωλήνα με πολύ προσοχή …
… και παρατηρούμε αμέσως το διαχωρισμό των φάσεων και το DNA που ξεχωρίζει …
Βάζουμε το καινούργιο δείγμα, στην βάση στήριξης των δοκιμαστικών σωλήνων …
Λευκό οινόπνευμα
Ισοπροπανόλη Ισοπροπανόλη
Μπλε οινόπνευμα
… και ξαναδοκιμάζουμε με την ισοπροπανόλη, για να βεβαιώσουμε τα αποτελέσματα που πήραμε προηγούμενα …
Παρατηρούμε, πάλι, ότι αμέσως το DNA
αρχίζει να ξεχωρίζει …
Βάζουμε και αυτό το δείγμα, στην βάση στήριξης των δοκιμαστικών σωλήνων …
Λευκό οινόπνευμα
Ισοπροπανόλη
Ισοπροπανόλη
Ισοπροπανόλη
Μπλε οινόπνευμα
Εδώ φαίνονται καθαρά οι διαφορετικές φάσεις, υπενθυμίζουμε με την χρήση της ισοπροπανόλης …
Ξαναπροσπαθούμε με το λευκό οινόπνευμα …
… πάλι με πιο προσεκτικό τρόπο, όταν προσθέτουμε στον δοκιμαστικό σωλήνα …
Μπλε οινόπνευμα
Λευκό οινόπνευμα
Παίρνουμε τώρα το δείγμα που έχει απομείνει, μετά την επεξεργασία,
και προσθέτοντας λίγο νερό …
Προσθέτουμε ισοπροπανόλη, αλλά δεν έχουμε θεαματικά αποτελέσματα,
παρά ελάχιστο DNA, που οδεύει προς την επιφάνεια …
Λευκό οινόπνευμα
Μετά από κάποια ώρα, έχουμε πιο ορατά αποτελέσματα και στους άλλους δοκιμαστικούς σωλήνες, όπου δεν είχαμε έντονη παρατήρηση από την αρχή …
Ισοπροπανόλη
Ισοπροπανόλη
Ισοπροπανόλη
Λευκό οινόπνευμα
Μπλε οινόπνευμα
Ισοπροπανόλη Ισοπροπανόλη
Ισοπροπανόλη
Λευκό οινόπνευμα
Να υπενθυμίσουμε εδώ, ότι για να έχουμε πιο σωστά και ορατά αποτελέσματα, πρέπει να προσέξουμε την θερμοκρασία των αλκοολών που θα προστεθούν στο τελικό διάλυμα,
να είναι, δηλαδή, αρκετά παγωμένες καθώς και τον πολύ προσεκτικό τρόπο, με τον οποίο πρέπει να μπουν στον δοκιμαστικό σωλήνα …
Άμα το δείγμα μας, εκτεθεί σε πιο υψηλή θερμοκρασία, τότε διαλύεται το αποτέλεσμα που έχουμε λάβει στην αρχή,
όσο παραμένει σε χαμηλή θερμοκρασία …
Ισοπροπανόλη Ισοπροπανόλη
Τέλος πειράματος …