书书书

　　ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３４２２Ｘ．２０１５．０６．００１

基金项目：昆明医科大学２０１３年研究生创新基金（２０１３Ｎ１５）

作者单位：６５０１１８昆明医科大学第三附属医院干部医疗科（付凤莲），中西医结合肿瘤临床研究中心（蒋永新、刘珊、王红）；昆明医科大学海

源学院病理教研室（程荫）

通信作者：蒋永新，Ｅｍａｉｌ：５９８１０４３７４＠ｑｑ．ｃｏｍ

·论著·

蒿甲醚激活 ＰＰＡＲγ途径抑制小鼠 Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞体外增殖和侵袭机制研究

付凤莲　蒋永新　程荫　刘珊　王红

　　【摘要】　目的　研究青蒿素类衍生物蒿甲醚（ＡＲＥ）对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株（ＬＬＣ）体外生长和侵袭的影响，探讨其可能的作用机制。方法　采用ＭＴＴ法观察ＡＲＥ对ＬＬＣ细胞生长的抑制效应。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测对照组、ＡＲＥ组、ＧＷ９６６２［过氧化物酶体增殖物激活受体 γ（ＰＰＡＲγ）特异性抑制剂］组和ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组４组ＬＬＣ细胞的侵袭力。实时 ＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测４组细胞 ＰＰＡＲγ、ＮＦκＢｐ６５、Ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡ和蛋白表达。结果　ＡＲＥ呈时间和剂量依赖性方式抑制 ＬＬＣ细胞生长，２４、４８、７２ｈＡＲＥ对ＬＬＣ的ＩＣ５０值分别为２７１．２９、１８９．０８、６５．９９μｇ／ｍｌ。４组中ＡＲＥ组的荧光值最低，为１７４４．６７，对照组为６８８７．００，ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组为４５９７．００，ＧＷ９６６２组为１００１２．６７，表明ＡＲＥ组侵袭力最弱，而且相比对照组侵袭力明显减弱（ｔ＝１２．４１１，Ｐ＝０．０００）。ＡＲＥ组、ＧＷ９６６２组ＰＰＡＲγｍＲＮＡ相对表达量分别为２．２７６±０．５３４和０．３６２±０．２０６，与对照组相比差异均有统计学意义（ｔ＝４．７８５，Ｐ＝０．００１；ｔ＝２．３９５，Ｐ＝０．０４４）；ＡＲＥ组ＰＰＡＲγ蛋白表达量为２７６８８．３３±３５９３．０６，比对照组（１７７１６．３３±２２７３．９５）、ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组（２１８１６．００±１６４４．０７）高（ｔ＝５．１５９，Ｐ＝０．００１；ｔ＝３．０３８，Ｐ＝０．０１６）。ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡ表达量在 ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组（０．３４６±０．１４９）最低，其次为 ＡＲＥ组（０．３９２±０．１８７），ＧＷ９６６２组最高（１．７２０±０．３３８），ＡＲＥ组与对照组和ＧＷ９６６２组相比差异有统计学意义（ｔ＝３．５９２，Ｐ＝０．００７；ｔ＝７．８５１，Ｐ＝０．０００）。Ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡ和蛋白在各组的表达差异没有统计学意义（Ｆ＝１．１８１，Ｐ＝０．３７６；Ｆ＝０．６４７，Ｐ＞０．０５）。结论　蒿甲醚可以通过上调ＰＰＡＲγ表达抑制ＮＦκＢ的途径来抑制ＬＬＣ细胞体外增殖和侵袭，提示ＰＰＡＲγ可能为肺癌治疗提供一个新的靶点。　　【关键词】　青蒿素类；肺肿瘤；过氧化物酶体增殖物激活受体；核因子κＢ受体活化因子

ＡｒｔｅｍｅｔｈｅｒｉｎｈｉｂｉｔｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｖｉａｔｈｅｍｅｄｉａｔｉｏｎｏｆｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｇａｍｍａａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｉｎＬｅｗｉｓｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ　ＦｕＦｅｎｇｌｉａｎ，ＪｉａｎｇＹｏｎｇｘｉｎ，ＣｈｅｎｇＹｉｎ，ＬｉｕＳｈａｎ，ＷａｎｇＨｏｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｐｅｃｉａｌＭｅｄｉｃａｌＴｒｅａｔｍｅｎｔ，ＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｉｓｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０１１８，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＪｉａｎｇＹｏｎｇｘｉｎ，Ｅｍａｉｌ：５９８１０４３７４＠ｑｑ．ｃｏｍ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ（ＡＲＥ），ｏｎｅｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆＬｅｗｉｓｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ（ＬＣＣｓ）ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＡＲＥｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＬＬＣｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙＭＴＴ．ＴｈｅｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＴｒａｎｓｗｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎａｓｓａｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌ，ＡＲＥ，ＧＷ９６６２［ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒγ（ＰＰＡＲγ）］ａｎｄＧＷ９６６２＋ＡＲＥｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＰＰＡＲγ，ＮＦκＢｐ６５，Ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｂｏｖｅｍｅｎｔｉｏｎｅｄｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＡＲＥｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＬＬＣｓｉｎｔｉｍｅａｎｄｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ，ｔｈｅＩＣ５０ｖａｌｕｅｏｆｗｈｉｃｈｉｎ２４，４８，ａｎｄ７２ｈｗｅｒｅ２７１．２９，１８９．０８，６５．９９μｇ／ｍｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｖａｌｕｅｏｆＡＲＥｇｒｏｕｐｗａｓ１７４４．６７，ａｎｄｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓ６８８７．００，４５９７．００ｏｆＧＷ＋ＡＲＥｇｒｏｕｐ，ａｓｗｅｌｌａｓ１００１２．６７ｏｆＧＷ９６６２ｇｒｏｕｐ．ＩｔｍａｎｉｆｅｓｔｅｄｔｈｅｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓｏｆＡＲＥｇｒｏｕｐｗａｓｔｈｅｗｅａｋｅｓｔ，ｗｈｉｃｈｄｅｃｌｉｎｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｔ＝１２．４１１，Ｐ＝０．０００）．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＰＰＡＲγ

·１０４·国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６

ｍＲＮＡｉｎＡＲＥａｎｄＧＷ９６６２ｇｒｏｕｐｗｅｒｅ２．２７６±０．５３４ａｎｄ０．３６２±０．０２６，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＰＰＡＲγｍＲＮＡｌｅｖｅｌｉｎｂｏｔｈｏｆＡＲＥａｎｄＧＷ９６６２ｇｒｏｕｐｒｅａｃｈｅｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（ｔ＝４．７８５，Ｐ＝０．００１；ｔ＝２．３９５，Ｐ＝０．０４４）．ＰＰＡＲγｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＡＲＥｇｒｏｕｐ，ＧＷ９６６２＋ＡＲＥｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ２７６８８．３３±３５９３．０６，２１８１６．００±１６４４．０７，１７７１６．３３±２２７３．９５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎＡＲＥｇｒｏｕｐｔｈａｎｔｈａｔｉｎｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＧＷ＋ＡＲＥｇｒｏｕｐ（ｔ＝５．１５９，Ｐ＝０．００１；ｔ＝３．０３８，Ｐ＝０．０１６）．ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＧＷ９６６２＋ＡＲＥｇｒｏｕｐｗａｓ０．３４６±０．１４９，ｗｈｉｃｈｉｎＡＲＥｇｒｏｕｐａｎｄＧＷ９６６２ｇｒｏｕｐｗｅｒｅ０．３９２±０．１８７ａｎｄ１．７２０±０．３３８，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｂｅｔｗｅｅｎＡＲＥ，ａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｒＧＷ９６６２ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（ｔ＝３．５９２，Ｐ＝０．００７；ｔ＝７．８５１，Ｐ＝０．０００）．Ｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＣａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓａｍｏｎｇｔｈｅｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｆ＝１．１８１，Ｐ＝０．３７６；Ｆ＝０．６４７，Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＡＲＥｍａｙｒｅｓｔｒａｉｎＮＦκＢｔｈｒｏｕｇｈｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＰＰＡＲγｔｏｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｖｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＬＬＣｉｎｖｉｔｒｏ，ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｓｔｈａｔＰＰＡＲγｍａｙｂｅａｎｏｖｅｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】　Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｓ；Ｌｕｎｇｎｅｏｐｌａｓｍｓ；Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；ＲｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ

　　近年来，多项研究［１３］表明曾经用于治疗疟疾的

一线中药青蒿素类衍生物有明显的抗肿瘤活性，但具

体机制尚不十分明确。过氧化物酶体增殖物激活受

体 γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒγ，ＰＰＡＲγ）是一类配体依赖的核转录因子，其在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭转移和逆转肿瘤细胞耐药等方

面发挥重要作用［４７］。本课题组前期研究发现蒿甲醚

（ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ，ＡＲＥ）与顺铂联用可协同抑制小鼠肺癌３ＬＬ细胞株的生长，ＡＲＥ还能增强 Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠的免疫功能，改善其生命质量。联合应用 ＡＲＥ与顺铂可促进肿瘤细胞坏死、诱导凋亡，这可能与细胞周期

阻滞及调控细胞凋亡相关基因的表达有关［８］，但

ＡＲＥ抗癌作用的具体机制尚不十分明晰。本研究旨在探索 ＡＲＥ的抗癌机制与 ＰＰＡＲγ信号途径可能的关系。

１　材料与方法１１　材料

小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株（ＬＬＣ）为昆明医科大学第三附属医院肿瘤研究所传代保存。

１２　主要试剂与仪器注射用ＡＲＥ由昆明制药集团股份有限公司提

供，产品批号：２０１１１２２８０１。ＰＰＡＲγ特异性抑制剂ＧＷ９６６２购自美国 Ｓｉｇｍａ公司，产品编号：Ｍ６１９１。ＦＢＳ、ＤＭＥＭ高糖培养基购自美国 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司。ＱＣＭＴＭ２４ｗｅｌｌＣｅｌｌＩｎｖａｓｉｏｎＡｓｓａｙ（Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ）（ＥＣＭ５５４）购自美国Ｃｈｅｍｉｃｏｎ公司，该试剂盒本身配备有２４孔板、细胞分离液、４×ＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ和ＣｙＱｕａｎｔＧＲＤｙｅ，每个２４孔板带１２个有包被基质胶的聚碳酸酯膜小室，ＣｙＱｕａｎｔＧＲＤｙｅ与细胞的核酸结合能发绿色荧光。ｑＲＴＰＣＲ试剂盒为广州复能公司产品。ＰＰＡＲγ一抗（产品编号：０７４６６）、核转录因子κＢ

（ＮＦκＢ）Ｐ６５一抗（产品编号：０６４１８）、Ｃａｓｐａｓｅ３氨基酸１０４～１１７一抗（产品编号：ＡＢ３６４０）、β肌动蛋白（βａｃｔｉｎ）一抗（产品编号：０４１１１６）和羊抗兔二抗（产品编号：ＡＰ３０７Ｐ）为美国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司产品。主要仪器包括Ｔｈｅｒｏｍ普通酶标仪、Ｔｅｃａｎ荧光酶标仪、Ｌｅｉｃａ荧光显微镜、ＡＢＩＰＣＲ仪和定量ＰＣＲ仪。１３　方法１３１　细胞培养：将 ＬＬＣ细胞接种于含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基中，置于含５％ＣＯ２、３７℃的培养箱中常规培养，每１～２天换液１次。１３２　ＭＴＴ法测定 ＡＲＥ及 ＧＷ９６６２对 ＬＬＣ细胞生长的抑制作用：取对数生长期的细胞，消化离心后进

行细胞计数，调整细胞密度为 ５×１０４个／ｍｌ，以２００μｌ／孔接种于９６孔板中央孔内，周边孔加磷酸盐缓冲液。实验分为空白组只加培养基；溶剂组为培养

细胞或培养细胞加０．１％ＤＭＳＯ；实验组分别加入不同浓度的 ＡＲＥ或 ＧＷ９６６２。每种实验药物（ＡＲＥ和ＧＷ９６６２）设６个浓度，每个浓度设６个复孔。实验组ＡＲＥ的浓度梯度为１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３μｇ／ｍｌ（６０ｍｇＡＲＥ先用５ｍｌ生理盐水完全溶解，再用５５ｍｌ培养基稀释至１ｍｇ／ｍｌ，使用前用培养基稀释到所需浓度），ＧＷ９６６２的浓度梯度为 ４０、２０、１０、５、２．５、１．２５μｍｏｌ／Ｌ（５ｍｇＧＷ９６６２用４５０μｌＤＭＳＯ充分溶解，使用前先取５０μｌ母液，用５０ｍｌ培养基稀释配成４０μｍｏｌ／ＬＧＷ９６６２）。待细胞贴壁生长达８０％左右，吸去旧的培养液，加药孔分别加入不同浓度的含药培

养基２００μｌ，分别培养２４、４８、７２ｈ。到达培养时间后，每孔加入新鲜配制的５ｍｇ／ｍｌＭＴＴ溶液２０μｌ，继续培养 ４ｈ后取出，小心吸去孔内液体，各孔加入ＤＭＳＯ１５０μｌ，振荡１０ｍｉｎ，使沉淀充分溶解。用酶标仪测定波长为４９０ｎｍ处的吸光度（Ａ）值，并求均值。

·２０４· 国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６

根据如下公式计算抑制率并求出半数抑制浓度

（ＩＣ５０）：抑制率 ＝［１－（Ａ实验组 －Ａ空白组）／（Ａ溶剂组 －Ａ空白组）］×１００％，ｌｇＩＣ５０＝Ｘｍ－Ｉ［Ｐ－（３－Ｐｍ－Ｐｎ）／４］，Ｘｍ为 ｌｇ最大剂量，Ｉ为 ｌｇ（最大剂量／相邻剂量），Ｐ为抑制率之和，Ｐｍ为最大抑制率，Ｐｎ为最小抑制率。

１３３　Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法检测４组细胞侵袭力：取对数生长期细胞，以２×１０５个／ｍｌ的密度接种于６孔板，每孔加入２ｍｌ细胞悬液。待 ６孔板中细胞融合度达８０％左 右 时 分 别 加 入 以 下 药 物，ＧＷ９６６２组：２０μｍｏｌ／ＬＧＷ９６６２２ｍｌ，ＡＲＥ组：１２５μｇ／ｍｌＡＲＥ２ｍｌ，ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组：先用 ４０μｍｏｌ／ＬＧＷ９６６２１ｍｌ处理３０ｍｉｎ后，再加入２５０μｇ／ｍｌＡＲＥ１ｍｌ，对照组：仅更换培养基。培养２４ｈ后，将４组细胞分别消化离心（离心半径为１５ｃｍ，转速为１０００ｒ／ｍｉｎ）５ｍｉｎ，用磷酸盐缓冲液洗 １～２遍，再分别以不含ＦＢＳ的 ＤＭＥＭ培养液重悬细胞进行计数，调整细胞密度为５×１０５个／ｍｌ，每个小室接种２５０μｌ。向小室下层（即２４孔板中）加入含１０％胎牛血清的 ＤＭＥＭ培养液５００μｌ，将 ２４孔板置于培养箱中培养。２４ｈ后小心吸出小室上层的细胞悬液，将每个小室置于其

他孔，向孔中加入预热的细胞分离液２２５μｌ，在３７℃温育３０ｍｉｎ；在温育过程中倾斜２４孔板来回多次使小室膜底部的侵袭细胞完全被驱散出来，弃除小室。

用４×ＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ以７５∶１的比例稀释 ＣｙＱｕａｎｔＧＲＤｙｅ（例如：４μｌＤｙｅ用３００μｌＢｕｆｆｅｒ来稀释），向含２２５μｌ细胞分离液的孔中加入７５μｌ的 ＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ／Ｄｙｅ混合液，在室温下孵育１５ｍｉｎ。在荧光显微镜下观察４个孔的荧光数。再分别转移每孔中２００μｌ混合液到 Ｇｒｅｉｎｅｒ９６孔板，在荧光酶标仪上 ４８０ｎｍ／５２０ｎｍ（激发光／发射光波长）过滤设置下读数。１３４　ＲＴＰＣＲ检 测 ４组 细 胞 ＰＰＡＲγ、ＮＦκＢ、Ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡ表达：常规培养 ＬＬＣ细胞，待培养瓶中细胞融合度达８０％左右时分别加入以下药物，ＧＷ９６６２组加入２０μｍｏｌ／ＬＧＷ９６６２５ｍｌ，ＡＲＥ组加入 １２５μｇ／ｍｌＡＲＥ５ｍｌ，ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组先用４０μｍｏｌ／ＬＧＷ９６６２２．５ｍｌ预处理３０ｍｉｎ后，再加入２５０μｇ／ｍｌＡＲＥ２．５ｍｌ，而对照组仅予以更换培养液，培养２４ｈ后按照上述方法换液继续培养。４８ｈ后，按照ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＴｒｉｚｏｌ试剂盒提取细胞总 ＲＮＡ，提取ＲＮＡ溶解后，用紫外分光光度仪测ＲＮＡ纯度和浓度（Ａ２６０／Ａ２８０＞２．０）。将 ＲＮＡ按照反转录试剂盒反转录成 ｃＤＮＡ进行定量 ＰＣＲ。ＰＣＲ扩增条件为：９５℃预变性 １０ｍｉｎ，９５℃ 变性 １５ｓ，６０℃ 复性

１ｍｉｎ，共４０个循环。产物用１％的琼脂糖凝胶进行

检测。

１３５　 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 ４组细胞 ＰＰＡＲγ、ＮＦκＢ、Ｃａｓｐａｓｅ３蛋白水平：按上述方法分组处理细胞，培养４８ｈ后，提取细胞总蛋白，经ＢｉｏＲａｄ法定量蛋白，取１０μｇ总蛋白上样，经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）后，转移到ＰＶＤＦ膜上，５％脱脂奶粉室温封闭 ３～４ｈ，４℃与 βａｃｔｉｎ、ＰＰＡＲγ、Ｃａｓｐａｓｅ３氨基酸１０４１１７、ＮＦκＢＰ６５一抗孵育过夜，辣根过氧化酶标记的羊抗兔二抗室温下孵育

２ｈ，充分洗膜后用ＤＡＢ显色并拍照。１４　统计学方法

每组实验均重复３次以上，数据以ｘ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计分析，采用单因素方差分析和ＬＳＤ法，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。２　结果２１　ＡＲＥ和ＧＷ９６６２对ＬＬＣ细胞的生长抑制作用

由图１可见，ＡＲＥ对ＬＬＣ细胞生长有抑制作用，且呈现出一定的剂量和时间依赖性。根据抑制率计

算出 ＡＲＥ对 ＬＬＣ在 ２４、４８、７２ｈ的 ＩＣ５０值分别为２７１．２９、１８９．０８、６５．９９μｇ／ｍｌ。ＧＷ９６６２对 ＬＬＣ没有抑制作用，抑制率见表１。

注：ＡＲＥ为蒿甲醚；ＬＬＣ为小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株

图１　ＡＲＥ对ＬＬＣ细胞抑制作用的量效时效关系曲线

表１　不同浓度ＧＷ９６６２对ＬＬＣ细胞在不同时间的抑制率

ＧＷ９６６２浓度（μｍｏｌ／ｌ） ２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ

４０ －０．６１６ －０．２９４ －０．５０３

２０ －０．５１４ －０．２０２ －０．５０１

１０ －０．５１０ －０．１４４ －０．４５８

５ －０．３１７ －０．０１０ －０．４０１

２．５ －０．１３６ －０．１２４ －０．３３０

１．２５ －０．７１０ －０．１７１ －０．３２５

　　注：ＧＷ９６６２为过氧化物酶体增殖物激活受体 γ特异性抑制剂；

ＬＬＣ为小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞株；－表示 ＧＷ９６６２对 ＬＬＣ细胞生长无抑

制作用

·３０４·国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６

２２　４组细胞侵袭力的变化荧光显微镜下 ４组细胞碎片的荧光见图 ２，

ＧＷ９６６２组细胞碎片的荧光最多，为１００１２．６７，其次为对照组，再次为 ＧＷ＋ＡＲＥ组，ＡＲＥ组最少。ＡＲＥ组的荧光值为１７４４．６７，相比对照组（６８８７．００）明显下降（ｔ＝１２．４１１，Ｐ＝０．０００），而 ＧＷ ＋ＡＲＥ组为４５９７．００，相比对照组稍微下降（ｔ＝５．５２７，Ｐ＝０．００１），但仍要远远高于 ＡＲＥ组（ｔ＝６．８８４，Ｐ＝０．０００）。

注：Ａ为对照组；Ｂ为ＧＷ９６６２组；Ｃ为ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组；

Ｄ为ＡＲＥ组；ＧＷ９６６２为过氧化物酶体增殖物激活受体γ特异性

抑制剂；ＡＲＥ为蒿甲醚

图２　荧光显微镜下４组细胞碎片的荧光×４００

２３　４组细胞ＰＰＡＲγ、Ｃａｓｐａｓｅ３和ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡ相对表达量

４组细胞ＰＰＡＲγ、Ｃａｓｐａｓｅ３和ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡ相对表达量见表２。ＡＲＥ组ＰＰＡＲγｍＲＮＡ表达较对照组显著升高（ｔ＝４．７８５，Ｐ＝０．００１），ＧＷ９６６２组和ＧＷ＋ＡＲＥ组 ＰＰＡＲγｍＲＮＡ表达量较对照组下降（ｔ＝２．３９５，Ｐ＝０．０４４；ｔ＝１．０３７，Ｐ＝０．３３０）。ＡＲＥ组ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡ表达较对照组降低（ｔ＝３．５９２，Ｐ＝０．００７），相比 ＧＷ９６６２组明显下降（ｔ＝７．８５１，Ｐ＜０．０１）。Ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡ表达量各组间差异没有统计学意义（Ｆ＝１．１８１，Ｐ＝０．３７６）。

表２　４组细胞中ＰＰＡＲγ、Ｃａｓｐａｓｅ３、ＮＦκＢｐ６５基因相对表达量（ｘ±ｓ）

组别 ＰＰＡＲγ Ｃａｓｐａｓｅ３ ＮＦκＢｐ６５

对照组 １ １ １

ＧＷ９６６２组 ０．３６２±０．２０６ ４．５７２±４．４７３ １．７２０±０．３３８

ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组 ０．７２３±０．３１４ １．３９５±１．０３４ ０．３４６±０．１４９

ＡＲＥ组 ２．２７６±０．５３４ １．９９６±２．２７２ ０．３９２±０．１８７

　　注：ＧＷ９６６２为过氧化物酶体增殖物激活受体 γ特异性抑制剂；

ＡＲＥ为蒿甲醚；ＰＰＡＲγ为过氧化物酶体增殖物激活受体 γ；ＮＦκＢ为

核转录因子κＢ；Ｃａｓｐａｓｅ３为半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶３

２４　４组细胞 ＰＰＡＲγ、ＮＦκＢＰ６５、Ｃａｓｐａｓｅ３蛋白水平

３种蛋白的表达量见图３和表３。ＰＰＡＲγ蛋白在ＡＲＥ组较对照组明显升高（ｔ＝５．１５９，Ｐ＝０．００１），而ＧＷ９６６２组表达量较对照组降低（ｔ＝２．１２７，Ｐ＞０．０５），ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组ＰＰＡＲγ蛋白水平较ＡＲＥ组下降（ｔ＝３．０３８，Ｐ＝０．０１６），但比对照组表达量高（ｔ＝２．１２１，Ｐ＞０．０５）。Ｃａｓｐａｓｅ３表达量在各组间的差异没有统计学意义（Ｆ＝０．６４７，Ｐ＞０．０５），各组间ＮＦκＢＰ６５蛋白表达水平与ＲＴＰＣＲ结果基本一致。

注：１为对照组；２为ＧＷ９６６２组；３为ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组；４为ＡＲＥ

组；ＰＰＡＲγ为过氧化物酶体增殖物激活受体γ；ＧＷ９６６２为ＰＰＡＲγ

特异性抑制剂；ＮＦκＢ为核转录因子κＢ；Ｃａｓｐａｓｅ３为半胱氨酸

天冬氨酸蛋白酶３

图３　４组细胞中３个蛋白表达水平

表３　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测４组细胞中ＰＰＡＲγ、ＮＦκＢＰ６５、Ｃａｓｐａｓｅ３蛋白的灰度值（ｘ±ｓ）

组别 ＰＰＡＲγ ＮＦκＢＰ６５ Ｃａｓｐａｓｅ３

对照组 １７７１６．３３±２２７３．９５ ５４５２８．６７±５２９６．５８ １０８８３．５４±９４７．７６

ＧＷ９６６２组 １３６０５．００±１２７８．０３ ５８３２５．６７±７１６０．６０ 　１１７６５．５７±１５９７．８４

ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组 ２１８１６．００±１６４４．０７ ４８７８５．００±６９７．６８　 １００２３．４９±６７４．９３

ＡＲＥ组 ２７６８８．３３±３５９３．０６ ４７８５１．００±１７０９．４４ １０４９６．４９±８３７．６４

　　注：ＰＰＡＲγ为过氧化物酶体增殖物激活受体γ；ＧＷ９６６２为ＰＰＡＲγ特异性抑制剂；ＡＲＥ为蒿甲醚；ＮＦκＢ为核转录因子κＢ；Ｃａｓｐａｓｅ３为半胱

氨酸天冬氨酸蛋白酶３

·４０４· 国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６

３　讨论有研究［９１０］报道ＰＰＡＲγ在多种肿瘤组织较正常

组织高表达，与肿瘤临床分期密切相关，提示 ＰＰＡＲγ在肿瘤的发生发展中起重要作用。众多学者［１１１３］发

现ＰＰＡＲγ激动剂如罗格列酮、环格列酮等能通过多种途径抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞凋亡以及抑制细

胞侵袭和远处转移。因此，作者设想 ＡＲＥ抑癌作用机制与ＰＰＡＲγ可能有内在的联系。本研究 ＭＴＴ实验显示ＡＲＥ能抑制 ＬＬＣ细胞的体外增殖，且抑制作用呈剂量和时间依赖性。侵袭实验发现经ＡＲＥ处理后的ＬＬＣ细胞较对照组细胞的侵袭能力明显减弱（Ｐ＜０．０１），证明了 ＡＲＥ能显著抑制肺癌细胞的体外侵袭力。先用ＧＷ９６６２预处理再用ＡＲＥ作用的细胞较对照组细胞侵袭力下降（Ｐ＜０．０１），但比 ＡＲＥ组的侵袭力仍然要高得多（Ｐ＜０．０１），说明 ＧＷ９６６２可以逆转ＡＲＥ对肺癌细胞的侵袭抑制作用。推测可能是ＧＷ９６６２抑制了 ＰＰＡＲγ的活性，ＡＲＥ不能有效地与ＰＰＡＲγ结合进而无法完全发挥抑制肿瘤细胞侵袭力的效应，这提示ＡＲＥ可能是通过激活ＰＰＡＲγ来抑制肺癌细胞体外侵袭的。有研究［１４］证实 ＰＰＡＲγ激活剂曲格列酮可以通过ＰＰＡＲγ途径来抑制乳腺癌细胞的体外生长。祝海等［９］发现曲格列酮作用前列

腺癌细胞ＰＣ３后ＰＰＡＲγ的表达上调，进而呈剂量依赖性抑制癌细胞增殖，加速细胞凋亡。另外，沈波和

聂玉强［１５］用腺病毒转染使肝癌细胞高表达 ＰＰＡＲγ，发现其能明显抑制癌细胞增殖分化，诱导细胞凋亡，

而且能够显著降低肝癌细胞的运动和侵袭能力。

诸多报道阐明 ＰＰＡＲγ的抗癌效应可能与Ｃａｓｐａｓｅ、ＮＦκＢ信号途径相关。刘加军等［１６］研究发

现ＰＰＡＲγ激动剂罗格列酮可显著抑制白血病 ＮＢ４细胞生长，同时检测到 Ｃａｓａｐｓｅ３被活化出现相对分子质量２００００亚单位片段，表明通过 ＰＰＡＲγ信号途径激活 Ｃａｓａｐｓｅ３可能是其诱导 ＮＢ４细胞发生凋亡的重要作用机制之一。Ｌｅｅ等［１７］研究发现ＰＰＡＲγ激动剂能通过上调其表达、抑制 ＮＦκＢ来阻断人前列腺癌细胞生长。

因此，作者设想ＡＲＥ激活ＰＰＡＲγ抑制肺癌细胞增殖和侵袭的机制是否与 Ｃａｓｐａｓｅ３活化、ＮＦκＢ活性受抑制有关联，于是课题组进一步检测用 ＡＲＥ、ＧＷ９６６２、先用ＧＷ９６６２处理再用ＡＲＥ作用的ＬＬＣ以及对照ＬＬＣ这４组细胞 ＰＰＡＲγ、Ｃａｓｐａｓｅ３和 ＮＦκＢｐ６５ｍＲＮＡ和蛋白表达水平，结果表明：ＡＲＥ作用后细胞 ＰＰＡＲγ表达水平较对照组显著升高（Ｐ＜０．０１），说明ＡＲＥ能增强ＬＬＣ细胞中ＰＰＡＲγ的表达；而ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组 ＰＰＡＲγ表达量较对照组下降，

同ＡＲＥ组相比也明显减弱（Ｐ＜０．０１），表明ＧＷ９６６２逆转了ＡＲＥ增强ＰＰＡＲγ表达的作用。另外，ＡＲＥ组ＮＦκＢ表达量较对照组降低（Ｐ＝０．００７），相比ＧＷ９６６２组明显下降（Ｐ＜０．０１），提示可能ＡＲＥ增强ＰＰＡＲγ活性后，通过对抗 ＮＦκＢ来发挥抗肿瘤的作用。但是在ＧＷ９６６２＋ＡＲＥ组，ＮＦκＢ表达量比ＡＲＥ组还要低（Ｐ＞０．０５），因此课题组高度怀疑 ＡＲＥ还可能通过其他途径来抑制肿瘤生长和侵袭。ＮＦκＢ在ＮＳＣＬＣ组织中高表达，能促进肿瘤的发生、进展和上皮向间充质转变，进而促进远处转移［１８］，而敲除

ＮＦκＢｐ６５亚基能通过诱导细胞凋亡显著抑制 Ｌｅｗｉｓ肺癌小鼠移植瘤的生长［１９］。Ｃａｓｐａｓｅ３表达量各组间差异没有统计学意义，推测 ＡＲＥ抗肿瘤效应与Ｃａｓｐａｓｅ３可能没有直接的关联。

本研究证实了ＡＲＥ能抑制肺癌细胞的体外生长和侵袭，显著上调 ＰＰＡＲγ的表达，说明 ＡＲＥ能通过激活ＰＰＡＲγ来发挥抗肿瘤作用。同时，也发现 ＡＲＥ能抑制 ＮＦκＢ的表达量，但这种抑制作用未能被ＰＰＡＲγ特异性抑制剂 ＧＷ９６６２逆转，提示 ＡＲＥ可能既可以通过上调 ＰＰＡＲγ表达抑制 ＮＦκＢ的活性，还可以通过其他途径来抑制 ＮＦκＢ表达。当然，这需要更深层次的研究来揭开这些纷繁复杂的关系网。

Ｂａｎ等［１３］证实 ＰＰＡＲγ激动剂曲格列酮通过糖原合成酶激酶３β（ｇｌｙｃｏｇｅｎｓｙｎｔｈａｓｅｋｉｎａｓｅ３β，ＧＳＫ３β）介导阻断ＮＦκＢ活性来抑制人结肠癌细胞生长，而ＧＳＫ３β是激活 ＮＦκＢ的一个必需成分。本实验发现ＡＲＥ激活 ＰＰＡＲγ后下调 ＮＦκＢ的表达可能是其抗肿瘤作用的机制，这与 Ｂａｎ等［１３］的实验结论也相

当吻合。ＮＦκＢ是一个重要的转录因子，通过调节多种靶基因如 ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｂａｘ、Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ９和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ等发挥抑制肿瘤细胞生长和促进凋亡的作用。ＰＰＡＲγ与ＮＦκＢ相互作用后阻断后者的激活，这为ＮＦκＢ转位到核内并进一步调控其相关靶基因的表达埋下伏笔。用抑制剂或者ＲＮＡｉ使ＧＳＫ３β失活可以阻止 ＮＦκＢ的 ｐ５和 ｐ５０亚基核转位进而减少ＮＦκＢＤＮＡ结合活性［２０］。

ＡＲＥ为何能介导 ＰＰＡＲγ的表达？如何介导ＰＰＡＲγ的表达？能否充当后者的配体与之结合激活其表达？ＡＲＥ能否与 ＰＰＡＲγ信号通路沟通联系？这些都需要进一步探索。另外，从本研究中可能得到

启示，能调节ＰＰＡＲγ信号级联的药物可能对肿瘤的治疗有巨大前景。

参　考　文　献

［１］ＪｉｒａｎｇｋｕｌＰ，ＳｒｉｓａｗａｔＰ，ＰｕｎｙａｒａｔａｂａｎｄｈｕＴ，ｅｔａｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆ

·５０４·国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６

Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎａｎｄｉｔｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｎｈｕｍａｎｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ［Ｊ］．

ＪＭｅｄＡｓｓｏｃＴｈａｉ，２０１４，９７Ｓｕｐｐｌ２：Ｓ２１５２２１．

［２］ＴｉｌａｏｕｉＭ，ＭｏｕｓｅＨＡ，ＪａａｆａｒｉＡ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆａｒｔｅｍｉｓｉ

ｎｉｎａｇａｉｎｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ［Ｊ］．ＮａｔＰｒｏｄＢｉｏｐｒｏｓｐｅｃｔ，２０１４，４（３）：

１８９１９６．

［３］ＴａｎＷＱ，ＣｈｅｎＧ，ＪｉａＢ，ｅｔａｌ．Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ

ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＡＨＰａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ

（ＡＭＰＫ）ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，２０１４，６９（６）：４６８４７２．

［４］ＫｉｍＳＹ，ＫｉｍＭＳ，ＬｅｅＭＫ，ｅｔａｌ．ＰＰＡＲγｉｎｄｕｃｅｓｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ

ａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｉｎｄ

ｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ３ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｒａｚＪＭｅｄＢｉｏｌＲｅｓ，２０１５，

Ｉｎｐｒｅｓｓ．

［５］ＮｉｃｋｋｈｏＡｍｉｒｙＭ，ＭｃＶｅｙＲ，ＨｏｌｌａｎｄＣ．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ

ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｓｍｏｄｕｌａｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｈｕｍａｎ

ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＭｏｌＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１２，１０（３）：４４１

４５３．

［６］ＳｈｅｎＢ，ＣｈｕＥ，ＺｈａｏＧ，ｅｔａｌ．ＰＰＡＲｇａｍｍａｉｎｈｉｂｉｔｓｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ

ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｅｔａｓｔａｓｅｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＢｒＪＣａｎｃｅｒ，２０１２，

１０６（９）：１４８６１４９４．

［７］ＴｏＫＫ，ＴｏｍｌｉｎｓｏｎＢ．ＴａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅＡＢＣＧ２ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｍｕｌｔｉｄｒｕｇ

ｒｅｓｉｓｔａｎｔ（ＭＤＲ）ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｂｙＰＰＡＲγａｇｏｎｉｓｔｓ［Ｊ］．ＢｒＪＰｈａｒｍａ

ｃｏｌ，２０１３，１７０（５）：１１３７１１５１．

［８］万成亮，蒋永新，寸英丽，等．蒿甲醚与顺铂联用对 Ｌｅｗｉｓ肺癌

小鼠的抑瘤作用及其机制探讨［Ｊ］．昆明医学院学报，２０１１，３２

（３）：２１２６．

［９］祝海，翁博文，徐珞，等．前列腺癌组织 ＰＰＡＲγ及其配体表达

和作用机制的研究［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２０１２，１９（１１）：８４０

８４３．

［１０］ＬｉＭＹ，ＹｕａｎＨ，ＭａＬＴ，ｅｔａｌ．Ｒｏｌｅｓｏｆｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ

ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｌｐｈａａｎｄｇａｍｍａｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｏｎｓｍａｌｌ

ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌ，２０１０，４３（６）：

６７４６８３．

［１１］ＨａｎｎＳＳ，ＴａｎｇＱ，ＺｈｅｎｇＦ，ｅｔａｌ．Ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ

ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｃｉｇｌｉｔａｚｏｎｅｖｉａＥｇｒ１ｒｅｐｒｅ

ｓｅｎｔｓａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．

ＭｏｌＣａｎｃｅｒ，２０１４，１３：１４９．

［１２］ＳａｗａｙａｍａＨ，ＩｓｈｉｍｏｔｏＴ，ＷａｔａｎａｂｅＭ，ｅｔａｌ．Ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅａｇｏ

ｎｉｓｔｓｏｆＰＰＡＲγｅｘｅｒｔｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｉｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．

ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１４，７４（２）：５７５５８５．

［１３］ＢａｎＪＯ，ＫｗａｋＤＨ，ＯｈＪＨ，ｅｔａｌ．ＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢａｎｄＧＳＫ

３βｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｂｙｔｈｅＰＰＡＲ

ａｇｏｎｉｓｔｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ［Ｊ］．ＣｈｅｍＢｉｏｌＩｎｔｅｒａｃｔ，２０１０，１８８（１）：７５

８５．

［１４］李燕，俞红女，白鹰．曲格列酮对人乳腺癌 ＭＤＡＭＢ２３１和

ＭＣＦ７细胞株增殖影响的研究［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２０１３，

２０（１２）：９１８９２１．

［１５］沈波，聂玉强．过氧化物酶体增殖物激活受体 γ抑制肝癌细胞

的增殖生长和侵袭转移［Ｊ］．临床肝胆病杂志，２０１３，２９（９）：

７０２７０６．

［１６］刘加军，刘文达，刘晓丹，等．罗格列酮诱导白血病 ＮＢ４细胞

凋亡的作用及机制探讨［Ｊ］．实用医学杂志，２０１０，２６（１５）：

２６７９２６８１．

［１７］ＬｅｅＮ，ＯｈＪ，ＢａｎＪ，ｅｔａｌ．４Ｏｍｅｔｈｙｌｈｏｎｏｋｉｏｌ，ａＰＰＡＲγａｇｏｎｉｓｔ，

ｉｎｈｉｂｉｔｓｐｒｏｓｔａｔｅｔｕｍｏｕｒｇｒｏｗｔｈ：ｐ２１ｍｅｄｉａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢ

ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１３，１６８（５）：１１３３１１４５．

［１８］ＸｕＳＳ，ＸｉａｎｇＦＧ，ＤａｎｇＳＱ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢａｎｄ

ＳｌｕｇｉｎＮＳＣＬＣａｎｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｎＥＭＴ［Ｊ］．ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＭｏｄｅｒｎＢｉｏ

ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，１２（１７）：３２３２３２３７．

［１９］ＱｕＹ，ＺｈａｎｇＸ，ＷｕＲ．ＫｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＮＦκＢｐ６５ｓｕｂｕｎｉｔｅｘｐｒｅｓ

ｓｉｏｎｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｇｒｏｗｔｈｏｆｎｕｄｅｍｏｕｓｅｌｕｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｘｅｎｏｇｒａｆｔｓｂｙ

ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＢａｘａｐｏｐｔｏｔｉｃｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｎｅｏｐｌａｓｍａ，２０１５，６２（１）：

３４４０．

［２０］ＰｉｖａＲ，ＧｉａｎｆｅｒｒｅｔｔｉＰ，ＣｉｕｃｃｉＡ，ｅｔａｌ．１５ＤｅｏｘｙΔ１２，１４ｐｒｏｓｔａ

ｇｌａｎｄｉｎＪ２ｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｍａｌｉｇｎａｎｔＢｃｅｌｌｓ：ａｎｅｆｆｅｃｔ

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＦκＢａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ

ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００５，１０５（４）：１７５０１７５８．

（收稿日期：２０１４１１２５　　修回日期：２０１５０２１５）

（本文编辑：孙娜）

·读者·作者·编者

本刊有关文稿中法定计量单位的书写要求

本刊法定计量单位具体使用要求参照２００１年中华医学会杂志社编写的《法定计量单位在医学上的应用》第三版一书。注意单位名称与单位符号不可混合使用，如ｎｇ·ｋｇ－１·天 －１应改为ｎｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，组合单位符号中表示相除的斜线多于１条时，应采用负数幂的形式表示，如ｎｇ／ｋｇ／ｍｉｎ应采用ｎｇ·ｋｇ－１·ｍｉｎ－１的形式；组合单位中斜线和负数幂亦不可混用，如前例不宜采用ｎｇ／ｋｇ·ｍｉｎ－１的形式。在首次出现不常用的法定计量单位出用括号加注与旧制单位的换算系数，下文再次出现时只列法定计量单位，人体及动物体内的压力单位使用ｍｍＨｇ或ｃｍＨ２Ｏ，但文中首次出现时用括号加注（１ｍｍＨｇ＝０．１３３ｋＰａ）。正文中时间的表达，凡前面带有具体数据者应采用ｄ、ｈ、ｍｉｎ、ｓ，而不用天、小时、分钟、秒。量的符号一律用斜体字母。

本刊编辑部

·６０４· 国际肿瘤学杂志２０１５年６月第４２卷第６期　ＪＩｎｔＯｎｃｏｌ，Ｊｕｎｅ２０１５，Ｖｏｌ４２，Ｎｏ６