Αρχές των αιματολογικών αναλυτών

Κυριακή ΜανιάτηΤεχνολόγος Ιατρικών Εργαστηρίων

19ος αιώνας

Ποσοτικοί προσδιορισμοίχημικών στοιχείων

σε ορό και πήγμα

Η έννοια της σύγχρονης μέτρησηςΗ έννοια της σύγχρονης μέτρησης

Karl Vierordt

Μέτρηση αριθμού των κυττάρων

(Μετρική πλάκα Newbauer)

Μέτρηση:•Λευκών•Ερυθρών•Αιμοπεταλίων

Αιμοσφαιρίνη (Hb)

Πρότυπη μέθοδος:

•Μέθοδος της κυανιομεθαιμοσφαιρίνης (HiCN)

Μέθοδος αναφοράς:

•Φωτομετρική μέθοδος

Αιματοκρίτης (Ht)

Αιματοκρίτης του Maxwell Wintrobe (μακροαιματοκρίτης):

Αριστερά φυσιολογικό δείγμα και στα δεξιά διάφορα παθολογικά.

Τριχοειδές σωληνάριο

με δ:1,2-2,4mm και μ:75mm (Μικροαιματοκρίτης)

1949: Wallace H. Coulter

Αρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή ή Αρχή Coulter

1947: Gucker

Αρχή σκεδασμού ακτίνας φωτός(light scatter) ή Οπτική αρχή

Πρώτα βήματα στις Αυτόματες Μετρήσεις

1949: Wallace H. CoulterΑρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή

ή Αρχή Coulter

παλμός ύψους

1956: Πρώτος αιματολογικός αναλυτής(Μοντέλο Α Coulter Counter)

Μετρούσε 5000 σωματίδια/sec. Απαρίθμηση κυττάρων

Ανάλυση ως προς των όγκο των κυττάρων(ύψος παλμού)

1956: Πρώτος αιματολογικός αναλυτής(Μοντέλο Α Coulter Counter)

Μετρούσε 5000 σωματίδια/sec. Απαρίθμηση κυττάρων

Ανάλυση ως προς των όγκο των κυττάρων(ύψος παλμού)

1949: Wallace H. CoulterΑρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή

ή Αρχή Coulter

Μέτρηση όγκου των κυττάρων – Καταχωρητής παλμών - ΙστογράμματαΜέτρηση όγκου των κυττάρων – Καταχωρητής παλμών - Ιστογράμματα

RDW

MCV

Καμπύλη ερυθρών

1949: Wallace H. CoulterΑρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή

ή Αρχή Coulter

1957Χρήση λυτικού αντιδραστηρίου (σαπωνίνη)

1957Χρήση λυτικού αντιδραστηρίου (σαπωνίνη)

Δείγμα ολικού αίματος

•Ερυθρά•Λευκά

•Αιμοπετάλια

ΣαπωνίνηΣαπωνίνη

Επιτυχής ηλεκτρονική μέτρηση λευκώνΕπιτυχής ηλεκτρονική μέτρηση λευκών

1949: Wallace H. CoulterΑρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή

ή Αρχή Coulter

Η αρχή παραμένει Τα λυτικά αντιδραστήρια βελτιώθηκαν

Η αρχή παραμένει Τα λυτικά αντιδραστήρια βελτιώθηκαν

Λυτικά διαφορικής συρρίκνωσης

1949: Wallace H. CoulterΑρχή μεταβολής της ηλεκτρικής αντίστασης ή Ηλεκτρονική αρχή

ή Αρχή Coulter

Λυτικά διαφορικής συρρίκνωσης

ΛυτικόΛυτικό

μέγεθος

πλή

θος

Λεμφοκύτταρα

ουδετερόφιλαΜ. μονοπύρηνα

μέγεθος

Λεμφοκύτταραουδετερόφιλα

Μ. μονοπύρηνα

πλή

θος

Μικροσκόπιο

Αιματολογικός αναλυτής

Κυψελίδα ροής

του Crossland – Taylor(1953)

Μετρήσεις:

•απορρόφησης

•σκεδασμού

•φθορισμού

1947: Gucker

Αρχή σκεδασμού ακτίνας φωτός(light scatter) ή Οπτική αρχή

Εξέλιξη των βασικών αρχών

και νέες τεχνολογίες

μικροφασματοφωτομετρία

Μέτρηση απορρόφησης του

φωτός από τις ενδοκυττάριες ουσίες

Οπτική λυχνία υπεριώδους

φωτός

μικροσκόπηση

Δεκαετία ‘50-’60Δεκαετία ‘50-’60

Μετρήσεις απορρόφησης

Μετρήσεις φθορισμούΜετρήσεις φθορισμού

Ουσίες φθορισμού:

ΑκριδίνηΠυρονίνηΟραμίνη-Ο

Πυρηνικά οξέα

Φθοριοκυτταρομετρία ροής

Κυτταροχημεία ροής

Μέρη των τεχνολογιώνΜέρη των τεχνολογιών

Κυψελίδα ροής (υδροδυναμικό μέρος)

Οπτικά μέρη:

Φωτεινές πηγές Laser

διατάξεις μέτρησης του οπτικού σήματος

(φωτοδίοδοι και φωτοπολλαπλασιαστές).

Νέες οπτικές τεχνολογίες

Νέες οπτικές τεχνολογίες

Νέες οπτικές τεχνολογίες – Φθοριοκυτταρομετρία ροήςΝέες οπτικές τεχνολογίες – Φθοριοκυτταρομετρία ροής

(αλληλεπίδραση του φωτός με τα κύτταρα

και φαινόμενα φθορισμού, απορρόφησης, σκεδασμού)

Σήμα

Μικρή γωνία (0,5ο-5ο)

Πρόσθιος σκεδασμός

Μεγάλη γωνία (15ο-150ο)

Πλάγιος σκεδασμός

•Όγκος κυττάρου•Δείκτης διάθλασης κυτταροπλάσματος

•Κοκκίωση•Θολερότητα

•Τραχύτητα επιφάνειας κυττάρου

Κυτταρόγραμμα διπαραμετρικής ανάλυσης (απορρόφηση-σκεδασμός)

Νέες οπτικές τεχνολογίες – Κυτταροχημεία ροήςΝέες οπτικές τεχνολογίες – Κυτταροχημεία ροής

(τεχνολογία υδροδυναμικής εστίασης)

Εξελίξεις της ηλεκτρονικής αρχής Υδροδυναμική εστίαση – Υψίσυχνα εναλλασσόμενα ρεύματα

Hb, Ht και ερυθροκυτταρικοί δείκτες

Μέτρηση αιμοσφαιρίνης (Hb): χρήση αντιδραστηρίων ελεύθερων κυανίου

Μέτρηση αιματοκρίτη (Ht)Ht=RBC x MCV

MCV (Μέσος όγκος ερυθροκυττάρων):Διαίρεση του μέσου όρου του ύψους των ηλεκτρικών παλμών

με τον αριθμό των ερυθροκυττάρων

MCH (Μέση πυκνότητα Hb ανά ερυθροκύτταρο):Hb/RBC Χ 10=MCH

MCHC (Μέση συγκέντρωση Hb στα ερυθροκύτταρα του δείγματος):Hb/Ht =MCHC

Υβριδικοί αναλυτές

→Χρήση ηλεκτρονικών και οπτικών μεθόδων→Χρήση ηλεκτρονικών και οπτικών μεθόδων

1. Ηλεκτρονική αρχή

2. Οπτική αρχή

3. Συστήματα υδροδυναμικής εστίασης

4. Βελτιωμένα λυτικά και αντιδραστήρια

5. Φθορίζουσες χρωστικές

6. Φθοριοκυτταρομετρία ροής

7. Κυτταροχημεία ροής

8. Υψίσυχνα εναλλασσόμενα ρεύματα

Διαφορικός λευκοκυτταρικός τύπος 5 υποπληθυσμών

Προσδιορισμός ποσοστού και απόλυτου αριθμού ερυθροβλαστών

% υπόχρωμων ερυθροκυττάρων

ΔΕΚ και οι 3 υποπληθυσμοί τους (άωρα, μέσης ωριμότητας, ώριμα), IRF, δείκτης αιμοσφαιρινοποίησης

Μέτρηση αιμοπεταλίων

Μυελός των οστών

(Μία από τις πρώτες αναλύσεις κυττάρων μυελού

σε αιματολογικό αναλυτή με φθοριοκυτταρομετρία ροής)

Μυελός των οστώνπρόσμιξη αίματος λίπος

Κυτταροπενικός μυελός

Τι επιζητούμε

?

ΣυμπέρασμαΣυμπέρασμα

Η συνεχής εξέλιξη και βελτίωση των τεχνολογιών βοηθούν στο να παίρνουμε πολλά και ακριβή

αποτελέσματα σε ελάχιστο χρόνο, τα οποία συμβάλλουν σε μία έγκυρη διάγνωση.

Σας ευχαριστώ