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Le dosage de lrsquoheacutemoglobine A1c principale forme drsquoheacutemoglobine glyqueacutee caracteacuteriseacutee par la

fixation non enzymatique de glucose agrave lrsquoextreacutemiteacute N-terminale (val) des chaicircnes β de la

globine constitue aujourdrsquohui un eacuteleacutement essentiel de la prise en charge du patient diabeacutetique

Sa valeur reflegravete de faccedilon reacutetrospective la glyceacutemie moyenne des 4 agrave 8 semaines passeacutees en

raison de sa formation cumulative et irreacuteversible

Crsquoest pourquoi il est neacutecessaire drsquoobtenir des taux drsquoHbA1c fiables et donc drsquoutiliser des

meacutethodes performantes valideacutees et traccedilables agrave la meacutethode de reacutefeacuterence internationale de

lrsquoIFCC

Diffeacuterents interfeacuterents sont habituellement rencontreacutees lors du dosage de lrsquoHbA1c

- LrsquoHb glyqueacutee labile (LA1c) proportionnelle agrave la glyceacutemie et intervenant particuliegraverement en cas

de diabegravete deacuteseacutequilibreacute ou de deacutecouverte de diabegravete

- LrsquoHb carbamyleacutee (cHb) obtenue apregraves fixation drsquoacide isocyanique (deacuteriveacute de lrsquoureacutee) formeacutee

preacutefeacuterentiellement chez les patients souffrant drsquoinsuffisance reacutenale chronique

- Une Hb fœtale eacuteleveacutee

- Certains variants de lrsquoheacutemoglobine

Deacuteriveacutes de lrsquoHb

- Une eacutetude anteacuterieure avait deacutemontreacute lrsquoabsence drsquointerfeacuterence de lrsquoHb glyqueacutee jusqursquoagrave

LA1c = 59 et de lrsquoHb carbamyleacutee jusqursquoagrave 25 avec le Variant II Cependant les auteurs

ne citent pas les conditions pour consideacuterer la diffeacuterence significative ou non significative En

analysant leurs reacutesultats on voit que lrsquoeacutecart permis eacutetait 02 drsquoHbA1c et non pas 05

- La limite technique sur lrsquoautomate Tosoh G8 LA1c+cHblt5

HbF

- Malgreacute que la limite de validation technique annonceacutee dans lrsquoinsert du kit du Variant II soit agrave

10 lrsquointerfeacuterence (sous-estimation) nrsquoest cliniquement importante que lorsque

HbF ge 20 (biais relatif moyen = -033)

- Tosoh G8 absence drsquointerfeacuterence jusqursquoagrave 30

Variants de lrsquoHb

- Pas drsquointerfeacuterence en cas drsquoheacuteteacuterozygotie HbS HbC HbD HbE et Hb O-Arab (Variant II)

- Sur-estimation en cas drsquoheacuteteacuterozygotie Hb Hope (Variant II) Hb Raleigh Hb Graz Hb

Sherwood Forest (eacutevalueacutes sur lrsquoancienne trousse du Variant )

- Sous-estimation en cas drsquoheacuteteacuterozygotie Hb Lepore HbJ Baltimore (Variant II) Hb G

Philadelphia Hb O Podova Hb Camden (eacutevalueacutes sur lrsquoancienne trousse du Variant)

- Pas drsquointerfeacuterence en cas drsquoheacuteteacuterozygotie drsquoHb Hope Hb Raleigh Hb Lepore et Hb G

Philadelphia (Tosoh G8)

- Autres variants rares dont lrsquointerfeacuterence avec le dosage de lrsquoHbA1c par les meacutethodes de

chromatographie par eacutechange drsquoions est connue K Bartrsquos H N I Deer Lodge Okayama

MarseilleLong Island Andrew-Minneapolis Osier Fukuyama Tatras Lisbon Malmo

Tacoma Funnin-Lubbock Olomuc Hifiyama Le Lamntin Graz Hokueto

INTRODUCTION

Pour le Variant II

LA1c Pas drsquointerfeacuterence (la limite de 86 nrsquoest pratiquement jamais atteinte)

cHb Pas drsquointerfeacuterence si respect de la limite de validation technique (cHble28)

HbF Preacutesence drsquoune leacutegegravere sous-estimation si HbF gt10 qui nrsquoest cliniquement importante

que lorsque HbF ge 20

Variants de lrsquoHb lrsquoeffet deacutepend du pattern de migration de chacune des formes glyqueacutee et non

glyqueacutee sur le chromatogramme Reacutesultats reportables (HbS HbC HbD HbE et Hb O-Arab)

ou non reportables (Hb Hope Hb Lepore Hb J Baltimore)

Nous recommandons le dosage de lrsquoHbA1c sur le Tosoh G8 si

- cHb gt 28 (valeur associeacutee agrave des taux drsquoureacutemie eacuteleveacutee gt 260 mgdL chez des patients IR)

- HbF entre 10 et 30

- Deacutetection agrave lrsquoeacutetat heacuteteacuterozygote drsquoun variant de type Hb Hope Hb Raleigh Lepore et Hb G

Philadelphia

Cas particulier des insuffisants reacutenaux Malgreacute tous ses inconveacutenients chez les IR lrsquoHbA1c reste le marqueur

de controcircle glyceacutemique agrave long-terme preacutefeacutereacute par les cliniciens De mecircme qursquoil est utiliseacute dans les essais

cliniques pour les eacutetudes de correacutelation avec les complications du diabegravete Chez cette cateacutegorie de patients

le monitoring du diabegravete peut eacutegalement ecirctre assureacute par dosage de la glycoheacutemoglobine totale

Un pourcentage de 0063 de cHb est consideacutereacute geacuteneacuteralement eacutequivalent agrave 1 mmolL drsquoureacutee (6mgdL)

Mais en routine des difficulteacutes sont rencontreacutees dans lrsquointerpreacutetation de la valeur de lrsquoHbA1c agrave cause de la

fluctuation du taux drsquoureacutee (insuffisance aigue vs chronique Preacutelegravevement preacute- ou post- dialyse )

lrsquoeacuterythropoiumlegravese acceacuteleacutereacutee (injections drsquoEPO ) la dureacutee de vie diminueacutee des GR les transfusions sanguines

reacutepeacuteteacutees lrsquoaneacutemie drsquoorigine meacutedicamenteuse ferriprive

En preacutesence drsquoun variant de lrsquoHb agrave lrsquoeacutetat heacuteteacuterozygote le monitoring du diabegravete peut eacutegalement

ecirctre fiablement assureacute par dosage de lrsquoHbA1c par meacutethode drsquoeacutelectrophoregravese capillaire ou

immuno-essai ou bien de la glycoheacutemoglobine totale

En preacutesence drsquoun variant de lrsquoHb agrave lrsquoeacutetat homozygote il est recommandeacute drsquoutiliser un autre

marqueur tel que la fructosamine (ADA) sauf si proteacuteinurie pertes proteacuteiques par voie

digestive ictegravere cirrhose heacutepatique dysfonction thyroiumldienne administration de

glucocorticoiumldes Ce marqueur nrsquoest pas influenceacute par le raccourcissement de la dureacutee de vie

des GR (en cas drsquoaneacutemie heacutemolytique dreacutepanocytose heacutemorragie)

OBJECTIFS

CONCLUSIONS amp DISCUSSION

Insert de Kit HPLC 270-210NU

CD rom manuel drsquoinstruction du Variant II BIORAD

E Lavalard et al Evaluation de lrsquoanalyseur Variant IIreg eacutequipeacute de la nouvelle trousse 270-2101 NU (Bio-Rad) pour le dosage de lrsquoHbA1c Biol Clin 2009 67 (1) 55-65

Jaisson S et al Comparaison des interfeacuterences analytiques sur le dosage de lrsquoHbA1c par deux analyseurs de chromatographie liquide haute pression Ann Biol Clin 2011 69 (1) 63-9

Lynn Bry Effects of Hemoglobin Variants and Chemically Modified Derivatives on Assays for Glycohemoglobin Clinical ChemistryFebruary 2001 vol 47 no 2 153-163

Qing Li et al Haemoglobin A1c measurement in patients with Chronic Kidney Disease Clinical Biochemistry 47 (2014) 481ndash484

Marijn Speeckaert Are there better alternatives than haemoglobin A1c to estimate glycaemic control in the chronic kidney disease population Nephrol Dial Transplant (2014) 29 2167-2177

Rohlfing CL et al The Effect of Elevated Fetal Hemoglobin on Hemoglobin A1c Results Five Common Hemoglobin A1c Methods Compared With the IFCC Reference Am J Clin Pathol 2008 May129(5)811-4

Jaisson S et al Interference of the most frequent haemoglobin variants on quantification of HbA1c comparison between the LC-MS (IFCC reference method) and three routinely used methods Diabetes Metab 2013

Sep39(4)363-9

Chia-Ni Lin Todd J Effects of hemoglobin C D E and S traits on measurements of HbA1c by six methods Clinica Chimica Acta 413 (2012) 819ndash821 Emery Department of Pathology University of Utah Health Sciences

Center Salt Lake City UT United States

Randie R Little et al Effects of Hemoglobin (Hb) E and HbD Traits on Measurements of Glycated Hb (HbA1c) by 23 Methods Clinical Chemistry 548 1277ndash1282 (2008)

Randie R Little Effects of 49 Different Rare Hb Variants on HbA1c Measurement in Eight Methods Journal of Diabetes Science and Technology 2015 Vol 9(4) 849ndash856

27 hemoglobin variants that interfere with measurement of glycated hemoglobin by ion-exchange chromatography Color Atlas of Hemoglobin disorders College of American Pathologists 2003 Chicago

Cas W Weykamp et al The Analytical Goals for Hemoglobin A1cMeasurement in IFCC Units and National Glycohemoglobin Standardization Program Units Are Different Clinical Chemistry 578 (2011)

httpwwwngsporg

httpwwwuptodatecom Management of hyperglycemia in patients with type 2 diabetes and pre-dialysis chronic kidney disease or end-stage renal disease

REVUE DE LA LITTERATURE

REFERENCES

Interfeacuterences analytiques observeacuteesdans le dosage de lrsquoHbA1c

- Veacuterifier expeacuterimentalement lrsquoinfluence de lrsquoHb glyqueacutee labile (LA1c) et de lrsquoHb carbamyleacutee

(cHb) sur le dosage de lrsquoHbA1c sur lrsquoautomate Variant II (BioRad)

- Confronter les reacutesultats aux donneacutees de la litteacuterature et revoir ce qui a deacutejagrave eacuteteacute publieacute comme

eacutetudes portant sur les interfeacuterences causeacutees par les deacuteriveacutes de lrsquoHb (LA1c et cHb) lrsquoHb fœtale

et les variants de lrsquoHb notamment avec les meacutethodes de seacuteparation utilisant le principe de

chromatographie liquide haute pression

- Eacutetablir des limites techniques pour la validation des reacutesultats drsquoHbA1c dans notre laboratoire

- Envisager des alternatives pour le dosage de lrsquoHbA1c en cas de deacutepassement des limites

techniques pour les deacuteriveacutes de lrsquoHb et lrsquoHb fœtale et en cas de deacutetection drsquoun variant de lrsquoHb

(eacutevaluation du Tosoh G8)

METHODOLOGIE

A Les essais expeacuterimentaux ont porteacute sur lrsquoobservation des effets de la glycation et de

lrsquoeacutelimination de lrsquoHb glyqueacutee labile ainsi que de la carbamylation in vitro drsquoeacutechantillons

parvenant au laboratoire pour des analyses de routine

Glycation Incubation agrave 37degC dans une solution glucoseacutee agrave 05M (10 gdL)

Carbamylation Incubation des GR (laveacutes x3) pendant 3h agrave 37 degC dans du tampon phosphate de sodium

015M (pH 74) contenant des concentrations croissantes de KCNO (0625 agrave 5 mmolL)

B Les articles reacuteviseacutes portent sur des eacutetudes comparatives notamment avec la meacutethode de

reacutefeacuterence IFCC (RP-HPLCMS ou RP-HPLCCE) Lrsquoeacutevaluation de la preacutesence ou non drsquoune

interfeacuterence significative est baseacutee sur le critegravere du laquo biais relatif moyen raquo de la meacutethode par

rapport agrave celle de reacutefeacuterence pour chaque facteur interfeacuterent

RESULTATS

Les reacutesultats des essais sur le Variant II montrent

Lrsquoabsence drsquointerfeacuterence significative de lrsquoHb glyqueacutee labile jusqursquoagrave 86

Lrsquoabsence drsquointerfeacuterence significative de lrsquoHb carbamyleacutee jusqursquoagrave 28

NB Nous avons jugeacute la preacutesence drsquoune interfeacuterence significative si lrsquoeacutecart par rapport au teacutemoin exceacutedait lrsquoerreur totale admissible

TE ce qui correspond agrave ~ 05 drsquoHbA1c (NGSP) ou 5 mmolmol (IFCC)

TE = 67 (meacutethodes NGSP) 86 (meacutethodes IFCC)

Laboratoire Hospitalier Universitaire de Bruxelles - Site Anderlecht

Service de Chimie Meacutedicalechimieerasmeulbacbe

Najla El Bizri MD Beacuteatrice Gulbis MD PhD Freacutedeacuteric Cotton PharmD PhD

Figure 1 Aspect des chromatogrammes obtenus sur lrsquoautomate Variant II avant et apregraves glycation in vitro pour des eacutechantillons de sang

total contenant un taux drsquoHbA1c de 62 (A) de 73 et 95 (B)

Figure 2 Aspect des chromatogrammes obtenus sur lrsquoautomate Variant II avant et apregraves carbamylation in vitro (T 3h) pour des eacutechantillons

de sang total contenant un taux drsquoHbA1c de 6 (A) 92 (B) et 136 (C)

Tableau 1 Influence de la carbamylation in-vitro sur le dosage de lrsquoHbA1c reacutesultats agrave des valeurs croissantes de KCNO

A B

A B C

Figure 3 Aspect des

chromatogrammes

sur le Variant II en

preacutesence de variants

de lrsquoheacutemoglobine

(reacutesultats reportables

non reportables)