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Lab. 3 Bacteriología

BIOL 3052

Instructora Suheidy Valentín

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Bacterias

Células procariotas Son muy

pequeñas, miden desde 0.2 a 10 μm.

Reproducción asexual Fisión binaria Conjucación

Bacterial Cell Components

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Árbol filogenético de los Dominios

The Phylogenetic Tree of Life based on Comparative ssrRNA Sequencing.The rooted Tree lands the prokaryotes in two Domains, Archaea and Bacteria. At a taxonomic level, organisms at the tips of the Archaeal branches represent Orders; the tips of the bacterial branches are Phyla. The most important, best known, and diverse groups branching off of the Bacterial limb are the Cyanobacteria, Proteobacteria and Gram positives.

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¿Cómo se clasifican?

Forma y arreglo de las células Morfología de la colonia Tipo de locomoción Pigmentos de la colonia Tinciones Requisitos nutricionales Secuencias moleculares de DNA y

RNA

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Forma de las células

Pared celular Esta hecha de

Peptidoglucano Es porosa Provee protección Dá forma Puede tener una

segunda membrana sobre la pared celular

• (provee toxicidad)

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Formas y arreglos celulares

Formas Bacilos Cocos Espirilos Vibrio (forma de coma)

Cuadrados Estrellas

Arreglos Solas Pares Tétadras Octadas Cadenas Paquetes

Chromatium vinosum, Thiospirillum jenense, Thiopedia rosea

Rhodospirillum rubrum, Rhodobacter sphaeroides, Rhodomicrobium vannielii

Chlorobium limicola, Prosthecochloris aestuarii, Pelodictyon clathratiforme

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Morfología de la colonia Forma

Puntiforme Circular y ovalada Filamentosa Irregular Rizoide fusiforme

Elevación Plana Elevada Convexa Pulvinada Umbonada Montañosa crateriforme

Márgen Entero Ondulado Lobulado Erosionado Filamentoso rizado

Left: Escherichia coli cells. Right: E. coli colonies on EMB Agar.

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Tipo de locomoción

Estructuras proteicas: Pili

• Estructuras de anclaje

Flagelos• Uni-,bi-, o multi-

flagelado• Dispersión por el

hábitat• Migran hacia

nutrientes• Los alejan de

ambientes adversos

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Tipos de movimiento

TaxisMovimiento que responde a diversos

estímulos

• Quimiotaxis• Fototaxis• Magnetotaxis

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Pigmentos de la colonia Depende de las especies Depende del medio de cultivo Depende de nutrientes Muy variado

Blancas Cremas Amarillas claras y brillantes Anaranjadas Rosas claras y brillantes etc.

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Fijación y tinción de células

Fijación Fijación con calor

• Fija estructuras externas de la célula.

Fijación con químicos

• Fija estructuras internas de la célula.

Tinción Aumenta

visibilidad Aumenta

características morfológicas

Conserva para estudios futuros

Varios tipos

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Cont.

Tipos de tinciones: Simple

• un solo colorante• determina

tamaño, forma y arreglo

Diferencial• clasifíca bacterias

en grupos (ej. Gram +, -)

Negativa• detecta cápsula o

membrana externa

De esporas• detecta presencia

de estructuras de supervivencia

De flagelos• Aumenta grosor

del flagelo(s)

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Requisitos nutricionales Nutrientes

Macroelementos• Carbono• Oxígeno• Hidrógeno• Nitrógeno• Azufre• Fósforo• Potasio• Calcio• Magnesio• Hierro

Oligoelementos• Manganeso• Cinc• Cobalto• Molibdeno• Níquel• Cobre

Medios de cultivo

Consistencia• Medios sólidos (agar)• Medios semi-sólidos• Medios líquidos

(caldos nutritivos)

Tipos• Medios selectivos

• Favorece crecimiento de una bacteria particular

• Medios diferenciales• Distingue entre

grupos• Se observan

reacciones

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Secuencias moleculares

Phylogenetic tree of Bacteria

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Estirilización y técnicas de asepcia

Estirilización Proceso por el cual

se elimina todo tipo de vida de medios o material.

Técnicas de asepcia Evitar contaminación Posibles patógenos

(riesgo humano) Descartar

apropiadamente

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A. Investigar las carac. de las bacterias

Objetivos:Observar y describir la morfología de las colonias y de las bacterias individuales.A. Morfología de las coloniasTeoría:

Colonia crece de una bacteria Cada colonia tiene carac. Específicas Ver fig.13.1 de la separata para describir

las carac. de las colonias.

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Ocasionalmente colonias de hongos pueden contaminar los platos de bacterias

Procedimiento:

1. Limpiar el área de trabajo con desinfectante

2. Se utilizara el microscopio

3. Utilizar los medios que se le van a proveer, mantenerlos CERRADOS!

4. Examinar las colonias individuales anotar la inf. en la tabla 13.1

5. Utilizando los términos de la fig.13.1 seleccionar cuales describen las colonias.

A. Investigar las carac. de las bacterias

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B. Morfología de las Cél. Individuales

Objetivo:

Examinar las laminillas de bacterias que ilustran las 3 formas básicas de las bacterias en adición se examinaran y describiran las bacterias de la boca.

Teoría: Las bacterias se pueden clasificar en 3

formas básicas: bacilos, coco, espirilos Placa de los dientes

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Procedimiento:

1. Utilizar el microscopio para observar las formas de las bacterias y luego dibujarlas

2. Para conocer las formas de las bacterias encontradas en los dientes, se va ha preparar una laminilla de la placa:a. Laminilla limpia

b. Coloque una gota de agua en la laminilla, dejela secar al aire

c. Utilizando un palillo de dientes raspe sus dientes cerca de las encías, luego se mezcla con la gota de agua

B. Morfología de las Cél. Individuales

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d. Mezclar y tratar de esparcirlo en la laminilla dejar que sequee. cuando este seca la laminilla, aguantarla con el pinche de ropa y pasarlo por encima del mechero sin pegarlo a la flama f. colocar la laminilla en una bandeja y aplicar de 2a3 gotas de cristal violeta g. Dejarlo por un min.h.lavar con agua de las botellitas en la bandeja

Secar con papel especial no raspar.3.Observar la forma de la bacteria en el

microscopio.

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C. Identificar bacterias del Ambiente

Procedimiento1.Escoger el ambiente para realizar muestreo. Puede ser

del aire, agua, superficie etc. No se debe hacer del cuerpo

a. Hacer una hipótesis del crec. De las bact. En ese ambiente

2.Utilizar platos de agar para su muestra

3.Se descartan los hisopos, identificar en el plato el ambiente seleccionado

4. Sellarlos con parafina y luego encubarlos por 24h a25°C

5. Observar los resultados

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D. Control de Crecimiento BacterianoProcedimiento

1. Identificar el plato de agar con el núm. De sección, la bacteria y el agente a utilizarse.

2. Preparar el plato con la bacteria:3. Añadir el desinfectante, antiseptico al plato con

discos empapados del agente, un cuadrante es el control.

4.La siguiente semana observar la sensitividad del antibiótico y los otros agentes. Medir el diámetro de la zona de inhibición.

5. Sellarlos con parafina y luego encubarlos a 37°C 6. Anotar los resultados en una tabla.

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Ejemplo

1. Control

2. Lysol

3. Alcohol

4. Clorox1 2

3 4Observar resultados (zona de inhibición)