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Protocolo e Informe Armonizado para la Evaluación del Desempeño del Método para la enumeración de E. coli Β-Glucuronidasa a 44°C utilizando 5-Bromo-4-Cloro-3-Indol Β-D-Glucurónido

Apéndice Normativo J, NOM-210-SSA1-2014

PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL

MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido

APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014

1.

1



Participaron en la elaboración de este protocolo.

María Esperanza Rodríguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]

Karina Guerrero ColinaLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Q. Analista de Análisis Microbiológicos229 9811390 Ext: [email protected]

Odilia Hernández HernándezLaboratorio Estatal Salud Pública Veracruz.Jefatura de Depto. de Análisis SanitariosMicrobiológicos/Jefatura de Depto. de Análisis Sanitarios229 9811390 Ext: [email protected]

Anastasio Palacios MarmolejoLaboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes449 [email protected]

Participaron en la revisión de este protocolo.

Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de Jalisco(33) [email protected]

Liliana Cano RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Q. Analista55 50805200 EXT. [email protected]

César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos analíticos.5550805200 ext. [email protected]

M. en C. Juan Carlos Piliado VelascoLaboratorio de Análisis de Riesgos del Distrito [email protected].: 58507923

Autorización

Imelda Rocío Guzmán CervantesComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Control AnalíticoTeléfono: 01 55 50 80 52 00 ext. [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext. [email protected]

2.

2

mailto:[email protected]





1. OBJETIVO.1.1. Establecer las directrices para la evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J. Método

para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su interés y competencia, mediante la aplicación de este protocolo armonizado.

2. CAMPO DE APLICACIÓN.2.1. Este protocolo es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de

implementación del Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.

3. MÉTODO DE ENSAYO.3.1. Apéndice Normativo J. Método para la Enumeración de E. coli β-glucuronidasa a 44ºC, utilizando

5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido; Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos.

3



3.2. Diagrama de Flujo.El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al método de prueba original.

4



4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS4.1. Los equipos listados a continuación son los requeridos por el método. En el informe de

evaluación de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos e instrumentos empleados”

Nombre Características Estado deseado

Balanza Granataria Sensibilidad de 0.1 g Calibración vigente y verificada el día de uso.

Marco de pesas

Clase F1 o E210 ó 20 g;y 100 g ó 200 g ó 500 g

Calibrado

IncubadoraTemperatura controlada a 44°C ± 1°C.

Calificada1 44°C ± 1°C, por 24 h mínimo.Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C adecuadamente inmerso.

IncubadoraTemperatura controlada a 35°C ± 2°C

Calificada 35°C ± 2°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.

Baño de aguaTemperatura controlada de 44°C a 47°C.

Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura del baño durante su uso. División mínima de 0.5°C, adecuadamente inmerso.

Cuenta coloniasFuncionando, lámpara con iluminación.

Mantenimiento vigente, lámpara funcionando y lupa limpia sin ralladuras ni roturas.

Homogeneizador peristáltico o licuadora2

Funcionando.Mantenimiento vigente.Licuadora no debe presentar fugas en el momento de la operación, los vasos deben ser esterilizables.

5. MATERIALES5.1. El material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por

calor seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Cuando se use material estéril desechable, éste deberá ser evaluado por lote en su recepción o documentar la esterilidad mediante

1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se demuestre, a través del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cámara durante un periodo determinado mantiene una homogeneidad térmica, asegurando las condiciones de incubación de la prueba.

2 El uso del homogeneizador o de la licuadora depende del tipo de muestra, deberá utilizarse el sistema de homogeneización más adecuado para preparar la muestra y este debe mencionarse en el informe.

5



certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después de tres días.

5.2. El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante registros de supervisión y demostrar la ausencia de residuos de detergente.

5.3. Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus características en el informe.

5.3.1.Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio. Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 90 mm por 15 mm de alto Cucharas, tenedores y cuchillos estériles para el manejo de la muestra Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables Gradillas para tubo de ensaye esterilizables Mecheros Bunsen o Fisher. Perillas o propipetas. Pipetas estériles de vidrio graduadas con diferentes capacidades: 10 y 5 mL con divisiones

de 0.5 mL y 1 mL y con división mínima de 0.1 mL. Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas y/o verificadas. Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL. Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapón de rosca. Puntas para micropipetas estériles y desechables.

6. MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIAL BIOLÓGICO DE REFERENCIALa preparación de los medio de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante.

6.1. MEDIOS DE CULTIVO6.1.1. Medio Triptona bilis X-glucurónido (TBX) 6.1.2. Agua peptonada amortiguada

6.2. CEPAS (MATERIAL BIOLÓGICO)6.2.1.E. coli NCTC 13216 ó ATCC 25922 ó ATCC 8739

7. MUESTRAS7.1. Cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método con al menos una

matriz por cada grupo de alimentos indicado en la siguiente tabla.7.2. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la muestra

considerando lo siguiente:

6



Grupo de alimentos Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa mayormente recibida en el laboratorio.

Prioridad para el laboratorio. 3

Productos Cárnicos

CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentadosCuradoPate

Reportar en el informe Reportar en el informe Reportar en el

informe

Pescado y Productos de la pesca

CrudosCongelados


informe

Frutas y Vegetales Crudos Reportar en el

informe Reportar en el informe Reportar en el informe

Leche y lácteos

CrudosCongeladosfermentadosQueso artesanal


informe

Agua

Agua potableAgua embotelladaAgua de pozoHielo


informe

Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio


informe

7.3. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerando; la frecuencia de recepción y los programas prioritarios.

7.4. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra y almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Se debe además contar con la trazabilidad de la muestra por ejemplo marca, número de lote, fecha de caducidad, para productos como frutas, vegetales, agua de la llave, se deben contener información de los datos de muestreo o lugar de la compra, fecha de la compra, etc.

7.5. Verificación de la muestra:7.5.1. Las muestras seleccionadas deberán ser analizadas para la búsqueda de E. coli β-

glucuronidasa a 44 °C utilizando el método en cuestión.7.5.2. Deberá realizarse por triplicado, encontrando resultados negativos en las tres repeticiones.

8. DESARROLLO EXPERIMENTAL

8.1. Ajuste del inóculo

3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario.

7



8.1.1. Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución adecuada de los microorganismos para preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se indican más adelante.

8.1.2. El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, este debe describirse en el informe.

8.1.3. Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-P-062).

8.1.4. Inocular aproximadamente 120,000 UFC en 250 mL de la muestra (para muestras líquidas) o 250 mL de la primera dilución, para obtener una cuenta aproximada de 480 UFC en la primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera.

Tabla 1 Preparación de muestras

Parámetro Analistas Muestra Diluciones decimales

Número de réplicas Microorganismo Tamaño de Inóculo

Repetibilidad Un analista 25 g o 250 mL

Muestras sólidas.

3 dilucionesMuestras Líquidas4

Directa y 2 diluciones

10 Escherichia coli 120,000 UFC aproximadamente

Reproducibilidad

Al menos 2 analistas, o 2 tiempos diferentes

25 g o 250 mL

10 por analista Escherichia coli 120,000 UFC

aproximadamente

8.2. Repetibilidad8.2.1. Medir 10 alícuotas de 25 g de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada

amortiguada, para muestras líquidas medir 250 mL.8.2.2. Inocular cada alícuota con aproximadamente 120,000 UFC.8.2.3. Verificar los inóculos utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para el cálculo 6

cajas, para obtener entre 15 y 150 UFC.8.2.4. Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice

Normativo J. NOM-210-SSA1-2014.8.2.5. Registrar los resultados en el formato del informe.

8.3. Reproducibilidad8.3.1. Un segundo analista o el mismo en un tiempo diferente, deberá ejecutar lo descrito en

repetibilidad.8.3.2. Registrar los resultados en el formato del informe.

9. Resultados9.1. Registrar resultados en el informe de desempeño.

10. Análisis estadístico

4 Dependiendo de la matriz y la carga microbiana esperada algunas muestras liquidas deben ser diluidas, en este caso realizar la siembra de las tres primeras diluciones.

8



10.1. Repetibilidad 10.1.1. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará

automáticamente el cálculo. 10.1.2. El valor de r se calcula como:

DSR= sx

r=2.8√DSR2nDónde:s=desviación estándarr= repetibilidadDSR=Desviación estándar relativan = número de réplicasx = Promedio

10.2. Reproducibilidad10.2.1. Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 repeticiones de

la prueba de repetibilidad de un analista, más los resultados de un segundo analista, o el mismo analista en un segundo tiempo.

10.2.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.

10.2.3. El valor de R se calcula como:

R=2.8√DSR12+DSR22nDónde:R= Reproducibilidad (por analista)DSR1=Desviación estándar relativa del analista 1DSR2=Desviación estándar relativa del analista 2n= Total de réplicas considerando los dos analistas

10.3. Recuperación10.3.1. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará

automáticamente el cálculo. 10.3.2. El valor de % de recuperación se calcula como: % Recuperación= Media de la cuenta de logaritmo de las cuentas x100

Logaritmo de las UFC inoculadas10.4. Sesgo

10.4.1. El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor obtenido experimentalmente.

10.4.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.

El sesgo se calcula como:

9



Sesgo= [Ve-Vo]Donde Ve= valor esperado

Vo= valor obtenido

10.5. Fuentes de incertidumbre10.5.1. Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.10.5.2. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará

automáticamente el cálculo.10.5.3. La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre

estándar combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificación técnica como un valor de 2 (que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del 95%.

U = 2 sR

Donde: U= Incertidumbre expandida. YiA= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log10 (ufc/ml) del analista A YiB= Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log 10 (ufc/ml) del analista B n= 10

11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN

Parámetro Criterio de aceptación

Repetibilidad 10 Réplicas un analista,Nivel de fortificación: valor medioResultado r < 3

Reproducibilidad 10 Réplicas por cada analista,Nivel de fortificación: valor medioResultado R < 3

10



Parámetro Criterio de aceptación

Recuperación 10 Réplicas un analista,Nivel de fortificación valor medioResultado entre 90 y 110% log

Sesgo 10 réplicas un analista,Nivel de fortificación: valor medioLa diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es <0.3 log

Incertidumbre Especificar el mensurandoListar las fuentes de incertidumbrec) Realizar los cálculos de la incertidumbre expandida.

Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062. 2012.

11

INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE

NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014

INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO

PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C

utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido

APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014

1



Participaron en la elaboración de este informe

Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]



César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]


Evelia Nungaray JiménezLaboratorio Estatal de Salud Pública de JaliscoCoordinadora de Microbiología SanitariaTel. 01 333 833 06 [email protected]

Participaron en la revisión de este informe.

Fabiola Curiel AyalaLaboratorio Estatal de Salud Pública de QuerétaroGerente Técnica Vigilancia Sanitaria(442) 2 20 72 42

Geovani Ramírez HernándezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura50805200 ext. 2026

2



[email protected] [email protected]

Maria Esperanza Rodriguez ParraLaboratorio Estatal Salud Pública TamaulipasResponsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos834 312 [email protected]



César Omar Gálvez GonzálezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos.5550805200 ext. [email protected]


Autorización

Armida Zúñiga EstradaComisión Federal Para la Protección Contra Riesgos Sanitarios.Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

Josefina Gutiérrez RamírezComisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura.Directora Ejecutiva de Innovación.01 55 50 80 52 00 ext [email protected]

1. OBJETIVO

Establecer los lineamientos para la elaboración del informe en la evaluación del desempeño del Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44ºC utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J NOM-210-SSA1-2014 en la(s) matrices de alimentos de su competencia.

2. CAMPO DE APLICACIÓN

3




Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y evaluación del desempeño del Apéndice Normativo J, Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido.

3. EQUIPOS E INSTRUMENTOS Equipo Descripción:

Identificación, Marca, Modelo

Estado deseado5

Evidencia del estado.6

Balanza Granataria d Verificado y Calibrado

Haga clic aquí para escribir texto.

Marco de pesas Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado Haga clic aquí para escribir texto.

Incubadora44°C ± 1°C


Calificada Haga clic aquí para escribir texto.

Incubadora35°C ± 2°C


Calificada Haga clic aquí para escribir texto.

Baño de agua44°C a 47°C


Con termómetro calibrado y/o

verificado a 47°C


Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas

y verificadas


Calibrada y Verificada


Cuenta colonias Haga clic aquí para escribir texto.

Mantenimiento vigente

No aplica

Homogeneizador peristáltico, licuadora


Mantenimiento Vigente

No aplica

Instrumento de medición de temperatura


Calibrado y Verificado


Reporto SupervisoFirma Firma

Nombre Haga clic aquí para escribir Nombre Haga clic aquí para escribir texto.

5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/Terceros-Autorizados.aspx6Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las evidencias al presente informe.

4



texto.Fecha Haga clic aquí para escribir una

fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir una

fecha.

4. MATERIALES Material Marca Lote Certificado de

calidad7

Caja petri de vidrio o desechable, diámetro 90 mm x 15mm alto




Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora




Cucharas, tenedores y cuchillos para el manejo de la muestra.




Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables




Pipetas estériles de vidrio graduadas de diferentes capacidades: 10 mL y 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL con divisiones de 0.1mL




Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL




Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir

texto.Nombre Haga clic aquí para escribir texto.

7 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de esterilidad realizada al material.

5



Fecha Haga clic aquí para escribir una fecha.


5. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

Reactivo o medio de cultivo

Marca Lote y caducidad

Resultados de desempeño y

fecha de evaluación

Fecha de vida útil del medio

preparado.

Medio Triptona bilis X-glucurónido (TBX)




Haga clic aquí para escribir una fecha.

Agua peptonada amortiguada




Haga clic aquí para escribir una fecha.





6. CEPAS

Cepas utilizadas ATCC Certificado u hoja de identidad y aseguramiento de calidad

Escherichia coli Haga clic aquí para escribir texto.






7. MUESTRAS7.1. Criterio de selección de la muestra

6



Criterio de selección de la muestra

Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa, mayormente recibida en el laboratorio

Prioridad para el laboratorio

Productos Cárnicos

CrudoProcesados térmicamenteCongeladosFermentradosCuradoPate

Reportar en el informe

Ejemplo Cárnico crudoCárnico congelado

EjemploCarne molida congelada

2

Pescado y Productos de la pesca

CrudosCongelados

Reportar en el informeEjemplo Pescado refrigeradoCrudosCongelado

Reportar en el informe

EjemploTilapia

3

Frutas y Vegetales

CrudosMínimamente procesados

Reportar en el informe Ejemplo fruta crudaNo recibe

Reportar en el informeEjemploNo recibe

4

Leche y lácteos FrescoCrudosQueso artesanal

Reportar en el informeEjemploQueso Fresco

Reportar en el informeEjemploQueso fresco

1

Otros Productos Para ser llenado por cada laboratorio

Ejemplo No aplica

Reportar en el informeEjemploNo aplica

5

Muestra SeleccionadaHaga clic aquí para escribir texto.

Cantidad de MuestraHaga clic aquí para escribir texto.

Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservación): Haga clic aquí para escribir texto.



Fecha Haga clic aquí para escribir una Fecha Haga clic aquí para escribir una

7



fecha. fecha.

8. DESARROLLO EXPERIMENTAL.8.1. Preparación del Inóculo. (Ver punto 8.1 del protocolo)

8.1.1. Descripción de la preparación del inóculo:

Escriba en esta sección el protocolo empleado. por ejemplo:

Se inoculó una asada de Escherichia coli en 10 mL de Caldo Infusión Cerebro Corazón, se incubó a 35o C +/- 2o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85% hasta llegar a la dilución 10-10.Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-10 y se adicionó AST, se incubó a 35o C + 2o C por 22 a 24 h. Se realizó el conteo en cada dilución y se realizó el registro de los resultados de la concentración del microorganismo en cada dilución.

Se seleccionó la dilución con cuentas aproximadamente de 12 X 104

UFC.

Las diluciones se mantuvieron en refrigeración y no son utilizadas por más 26h.

8.1.2. Preparación del Inóculo. RegistroFecha de preparación: Haga clic aquí para escribir una fecha. Fecha de lectura: Haga clic aquí para escribir una fecha.

Diluciones 10.7 10.8 10.9 Dilución seleccionada

Cuenta de colonias

>250 >250 78 102 7 10 10.5

UFC >250 90 <25 UFC 9X104

Reporto SupervisoFirma Firma

Nombre Haga clic aquí para escribir texto.




8



8.2.Resultados de Verificación de la muestra:

Ausencia del Analito

Tamaño de la unidad de análisis:

25 g Fecha del Análisis: Haga clic aquí para escribir una fecha.

Réplica Resultado Valor esperado Cumple (sí / no / no aplica)

1 Haga clic aquí para escribir texto.

☐Muestras no contaminadas:< 10 UFC/g o <1 UFC/mL☐Muestras naturalmente contaminadas:☐No aplica

☐si☐no☐no aplica





Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso

Firma Firma





8.3. Resultados Se prepararon las muestras como se menciona el punto 8.3 del protocolo para las pruebas de repetibilidad y reproducibilidad, siguiendo el método, se colocan los resultados encontrados por cada analista.

9



8.3.1. Analista 1Réplica

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

UFC Haga clic aquí para escribir texto.










Ver Registros:Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso

Firma Firma





8.3.1.1. Verificación del Inóculo.Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC, volumen total inoculado: 250mL


Cuenta de colonias

3600

3600 360 360 30 36 10.5

UFC >250 36 <25 UFC 90X104

Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para

escribir texto.Nombre Haga clic aquí para escribir

texto.Fecha Haga clic aquí para

escribir una fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir

una fecha.

10



8.3.2. Analista 2Réplica

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

UFC Haga clic aquí para escribir texto.










Ver Registros: Haga clic aquí para escribir texto.Reporto Superviso

Firma FirmaNombre Haga clic aquí para escribir




8.3.2.1. Verificación del Inóculo.Volumen inoculado _1ml_ de la dilución 105 Aproximadamente __90000___UFC, volumen total inoculado: 250mL


Cuenta de colonias

3600

3600 360 360 30 36 10.5

UFC >250 36 <25 UFC 90X104

Reporto SupervisoFirma FirmaNombre Haga clic aquí para

escribir texto.Nombre Haga clic aquí para escribir

texto.Fecha Haga clic aquí para

escribir una fecha.Fecha Haga clic aquí para escribir

una fecha.

Colocar los resultados en la hoja de cálculo del ANEXO.

9. RESULTADOS

11



Parámetro Resultados obtenidos

Criterio de aceptación Dictamen

Repetibilidad Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.

r < 3☐Cumple☐No cumple

Reproducibilidad


R < 3 ☐Cumple☐No cumple

Recuperación Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.

Entre 90 y 110 log ☐Cumple☐No cumple

Sesgo Analista 1Haga clic aquí para escribir texto.Analista 2Haga clic aquí para escribir texto.

Diferencia absoluta entre lo recuperado e inoculado < 0.3 log

❏ Cumple❏ No cumple

Incertidumbre expandida




10. Discusión de los resultados

12



Por ejemplo: Los resultados del análisis estadístico realizado, demuestran que al aplicar el método se obtienen resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el análisis de los productos descritos en este informe.

11. CONCLUSIÓN

● Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método para la

enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-

Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser

aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el

análisis del grupo de alimentos (matriz específica).

● Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se

concluye que el Método para la enumeración de E. coli,β-glucuronidasa a 44º C

utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido, Apéndice Normativo J. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el

método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de

XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del grupo de alimentos cárnicos o para la

matriz específica.

12. BIBLIOGRAFÍA

12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. APÉNDICE NORMATIVO J. Método para la enumeración de E. coli, β-glucuronidasa a 44º C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido,

12.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-P-062 2012.

13. ANEXOSAnexe copia de las evidencias referidas en el informe.Hoja de cálculos

13

INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO PARA LA ENUMERACIÓN DE E. coli β-glucuronidasa a 44 °C utilizando 5-Bromo-4-cloro-3-Indol β-D-Glucurónido. APÉNDICE NORMATIVO J, NOM-210-SSA1-2014 anexo 1

1

Volumen inoculado 1ml de la dilución 10ˆ-4 aproximamente 90000 UFC Volumen inoculado

250 mL

Analista 1Réplica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

UFC/g ó UFC/mL 8000 8100 8000 7900 8000 8300 6800 8400 8200 8100

Log 3.90 3.91 3.90 3.90 3.90 3.92 3.83 3.92 3.91 3.91Promedio 3.90

Desviacion Estandar 0.03 r1= 0.0058 Criterio 3.00 CumpleDSR 0.01

Analista 2Réplica 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10UFC/g 8100 8000 7900 8000 8300 6800 8400 8200 8000 8100

Log 3.91 3.90 3.90 3.90 3.92 3.83 3.92 3.91 3.90 3.91Promedio 3.90

Desviacion Estandar 0.03 r2= 0.0058 Criterio 3.00 CumpleDSR 0.01

R 0.0058 Criterio 3.00 Cumple

UFC/g o mL Log

Cuenta de Analista 1 4000 3.602059991Cuenta de Analista 2 8000 3.903089987 108.31%

VALOR ESPERADO Cumple

99.96% 90 -110 Cumple

0.3VALOR ESPERADO Cumple

0.0 < 0.3 Cumple

((logA1-LogB1)2)/2 ((logA2-LogB2)2)/2 ((logA3-LogB3)2)/2 ((logA4-LogB4)2)/2 ((logA5-LogB5)2)/2 ((logA6-LogB6)2)/2 ((logA7-LogB7)2)/2 ((logA8-LogB8)2)/2 ((logA9-LogB9)2/2) ((logA10-LogB10)2)/2

0.000015 0.000015 0.000015 0.000015 0.000128 0.003747 0.004211 0.000055 0.000058 0.000000suma 0.008257sR 0.02032U 0.04

Incertidumbre

% DE RECUPERACION 1% DE RECUPERACION 2

HOJA DE CALCULOS, INFORME ARMONIZADO E. coli

SESGO 1SESGO 2

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