UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β-GLUKAN LARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH (Pleurotus ostreatus...

8/19/2019 UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β-GLUKAN LARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH (Pleurotus ostreatus (Jacq…

1/76

UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β-GLUKAN LARUT AIR

JAMUR TIRAM PUTIH ( Pleur otus ostr eatus (Jacq.) P. Kumm) PADA HAMSTERSYRIAN HIPERKOLESTEROLEMIA DAN HIPERGLIKEMIA BERDASARKAN

PENURUNAN KADAR KOLESTEROL TOTAL DAN LDL

SkripsiUntuk melengkapi syarat-syarat guna memperoleh gelar

Sarjana Farmasi

Disusun Oleh:Della Yulantika

1104015053

PROGRAM STUDI FARMASIFAKULTAS FARMASI DAN SAINS

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PROF. DR. HAMKA

JAKARTA2015


2/76

iii

Abstrak

UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β -GLUKANLARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH ( Pleur otus ostr eatus (Jacq.) P. Kumm)

PADA HAMSTER SYRIAN HIPERKOLESTEROLEMIA DANHIPERGLIKEMIA BERDASARKAN PENURUNAN KADAR KOLESTEROL

TOTAL DAN LDL

Della Yulantika1104015053

Jamur tiram putih mengandung s enyawa β -glukan yang dilaporkan memiliki aktivitasantihiperkolesterol. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui aktivitasantihiperkolestrol ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih pada hamsterhiperkolesterolemia dan hiperglikemia. Individu hiperglikemia pada umumnyamengalami gangguan metabolisme lemak dan peningkatan kadar kolesterol. Hewanuji hamster syrian jantan dibagi 6 kelompok perlakuan, masing-masing terdiri dari 4ekor hamster. Kelompok I (kontrol normal), kelompok II (kontrol positif) diberikolestiramin, kelompok III (kontrol negatif), kelompok IV, V, dan VI diberi ekstrakβ-glukan larut air jamur tiram putih dosis 120 mg/kg BB, 240 mg/kg BB, dan 480mg/kg BB secara peroral. Pemeriksaan kadar kolesterol total dan LDL menggunakanalat fotometer klinikal. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak uji dapatmenurunkan kadar kolesterol total dan LDL. Sebagai simpulan adalah dosis ekstrakβ-glukan larut air jamur tiram putih yang terbaik menurunkan kadar kolesterol totalyaitu 240 mg/kg BB dan LDL yaitu 480 mg/kg BB.

Kata Kunci : Jamur Tiram Putih , β-glukan, Hiperkolesterolemia-Hiperglikemia


3/76

iv

KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmanirrahim,

Alhamdulillahirabbil’alamin, segala puji bagi Allah SWT., semesta alam YangMaha Pemurah lagi Maha Penyayang, karena atas karunia dan izin-Nya penulis dapatmenyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi ini. Shalawat serta salam senantiasatercurah kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW.

Skripsi dengan judul “ UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROLEKSTRAK β -GLUKAN LARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH ( Pleurotusostreatus (Jacq.) P. Kumm) PADA HAMSTER SYRIANHIPERKOLESTEROLEMIA DAN HIPERGLIKEMIA BERDASARKANPENURUNAN KADAR KOLESTEROL TOTAL DAN LDL ” disusun untukmemenuhi tugas akhir sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana

Farmasi pada Fakultas Farmasi dan Sains Universitas Muhammadiyah Prof. DR.Hamka Jakarta. Penulis menyadari bahwa terselesaikannya skripsi ini tidak lepas dari bantuan,

bimbingan serta arahan yang sangat berharga dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan kali ini penulis ingin menyampaikan rasa terimakasih dan yangsebesar-besarnya kepada :

1. Bapak Drs. H. Budi Arman, M.Kes., Apt. selaku Dekan FFS UHAMKA.2. Bapak Dr. Hadi Sunaryo, M.Si., Apt. selaku Wakil Dekan I FFS UHAMKA.3. Ibu Dra. Sri Nevi Gantini, M.Si., M.Farm., selaku Wakil Dekan II FFS

UHAMKA4. Ibu Ari Widayanti, S.Si., Apt., M.Farm., selaku Wakil Dekan III FFS UHAMKA5. Ibu Kori Yati, M. Farm., Apt. selaku Ketua Jurusan FFS UHAMKA yang telah

memberikan kemudahan dalam proses penyelesaian skripsi ini.6. Bapak Dr. H. Priyo Wahyudi, M.Si., selaku Pembimbing I yang senantiasa

membantu dalam memberikan bimbingan, waktu, arahan serta berbagaidukungan yang sangat berarti selama pengerjaan penelitian dan penyusunanskripsi ini. Terimakasih atas kesabarannya dalam membantu penulis selama ini

7. Ibu Siska, M.Farm., Apt. selaku Pembimbing II yang telah membantu dalammemberikan bimbingan dan arahan dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

8. Bapak Dr. H. Priyanto, M.Biomed., Apt., selaku Penguji I serta dosenPembimbing Akademik.

9. Bapak Kriyana Efendi, M. Farm., Apt., selaku Penguji II.10. Bapak dan Ibu dosen Farmasi UHAMKA yang tidak bisa disebutkan satu persatu

yang telah memberikan berbagai ilmu yang bermanfaat sehingga mendukungterselesaikannya skripsi ini.

11. Ayahanda Adi Buana dan Ibunda Atikah tercinta, kakak-adik tersayang RindyAntika, Heri Supangat, Innaka Salwa dan keponakan Fathan Rizki Hertama sertaseluruh keluarga besar penulis, terimakasih untuk semangat, do’a dan cinta yangtak pernah putus.


4/76


5/76

vi

DAFTAR ISI

HalamanHALAMAN JUDUL ...................................................................................... I

LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................... IiABSTRAK ...................................................................................................... IiiKATA PENGANTAR ................................................................................... IvDAFTAR ISI .................................................................................................. ViDAFTAR TABEL .......................................................................................... viiiDAFTAR GAMBAR ..................................................................................... ixDAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xBAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1

A. Latar Belakang................................................................................ 1B. Permasalahan Penelitian................................................................. 3C. Tujuan Penelitian............................................................................ 3D. Manfaat Penelitian.......................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................................. 4A. Landasan Teori............................................................................... 4

1. Deskripsi Jamur Tiram Putih.................................................. 42. Aktivitas β-Glukan.................................................................. 53. Ekstraksi β-Glukan.................................................................. 64. Kolesterol................................................................................ 65. Lipoprotein.............................................................................. 76. Diabetes Melitus...................................................................... 97. Fruktosa................................................................................... 108. Kolestiramin............................................................................ 109. Hamster................................................................................... 1110. Prinsip Pengukuran Kadar Kolesterol dan LDL..................... 12

B. Hipotesis......................................................................................... 12BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................... 13

A. Tempat dan Waktu Penelitian......................................................... 131. Tempat Penelitian.................................................................... 132. Waktu Penelitian..................................................................... 13

B. Alat dan Bahan Penelitian.............................................................. 131. Alat yang digunakan............................................................... 132. Bahan Penelitian...................................................................... 13

C. Prosedur Penelitian......................................................................... 141. Determinasi Simplisia Jamur.................................................. 142. Penyiapan dan Pengumpulan Simplisia Jamur........................ 143. Ekstraksi β-glukan Larut Air Jamur Tiram Putih.................... 144. Pemeriksaan Mutu Ekstrak...................................................... 145. Uji Kualitatif β -Glukan........................................................... 156. Rancangan Penelitian.............................................................. 167. Persiapan Hewan Uji............................................................... 17


6/76

vii

8. Perhitungan Dosis................................................................... 179. Pembuatan Larutan Sediaan Uji............................................. 1910. Pembuatan Sediaan Suspensi Na-CMC.................................. 2011. Perlakuan Hewan Uji.............................................................. 20

12. Prosedur Pengambilan Serum Darah ..................................... 2113. Pengukuran Kadar Kolesterol Total danLDL......................../

22

D. Analisis Data.................................................................................. 22BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................... 23

A. Hasil Determinasi Simplisia Jamur................................................ 23B. Hasil Ekstraksi................................................................................ 23C. Hasil Pemeriksaan Mutu Ekstrak β -Glukan Larut Air Jamur

Tiram Putih .................................................................................... 23D. Hasil Uji Kualitatif β-Glukan......................................................... 24E. Penyiapan Hewan Uji .................................................................... 25F. Hasil Uji Aktivitas Ekstrak β -Glukan Larut Air Jamur Tiram

Putih ( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm) TerhadapPenurunan Kadar Kolesterol Total Hamster Hiperkolesterolemiadan Hiperglikemia.......................................................................... 26

G. Hasil Uji Aktivitas Ekstrak β -Glukan Larut Air Jamur TiramPutih ( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm) TerhadapPenurunan Kadar LDL Hamster Hiperkolesterolemia danHiperglikemia................................................................................. 29

BAB V SIMPULAN DAN SARAN 35A. Simpulan ........................................................................................ 35B. Saran .............................................................................................. 35

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 36LAMPIRAN ............................................. ..................................................... 40


7/76

viii

DAFTAR TABEL

HalamanTabel 1. Parameter Biologi Dasar Hamster ................................................. 11

Tabel 2. Hasil Ekstraksi β -Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih ............... 23


8/76

ix

DAFTAR GAMBAR

HalamanGambar 1.

Gambar 2.

Struktur β-glukan pada Dinding Sel Jamur ....................................

Rumus Bangun Fruktosa.................................................................

5

10Gambar 3. Rerata Kadar Kolesterol Total Awal dan Akhir HamsterHiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang Diberi BahanUji................................................................................................... 27

Gambar 4. Persentase Penurunan Kadar Kolesterol HamsterHiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang Diberi BahanUji................................................................................................... 28

Gambar 5. Rerata Kadar LDL Awal dan Akhir Hamster Hiperkolesterolemiadan Hiperglikemia yang Diberi Bahan Uji..................................... 30

Gambar 6. Persentase Penurunan Kadar LDL Hamster Hiperkolesterolemiadan Hiperglikemia yang Diberi Bahan Uji..................................... 31

Gambar 7. Mekanisme Kolestiramin Dalam Menurunkan Kolesterol Totaldan LDL......................................................................................... 32

Gambar 8. Mekanisme β-Glukan Dalam Menurunkan Kolesterol Total danLDL................................................................................................ 33


9/76

x

DAFTAR LAMPIRAN

HalamanLampiran 1. Skema Prosedur Penelitian...................................................... 40

Lampiran 2. Skema Ekstraksi β-Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih....... 41Lampiran 3. Skema Pembagian Kelompok Hewan Uji Hamster Syrian...... 42Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji............................................................ 43Lampiran 5. Skema Pengambilan Serum Darah Hamster............................ 45Lampiran 6. Prosedur Pengukuran Kadar Kolesterol Total......................... 46Lampiran 7. Prosedur Pengukuran Kadar LDL........................................... 47Lampiran 8.Lampiran 9.

Surat Determinasi Jamur Tiram Putih.....................................Surat Keterangan Hamster Syrian...........................................

4849

Lampiran 10. Perhitungan Susut Pengeringan, Kadar Air, Kadar Abu, danRendemen Ekstrak β-Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih.... 50

Lampiran 11. Spektrum β -Glukan dengan Metode KCKT............................ 52

Lampiran 12. Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total dan LDLAwal dan Akhir yang Diberi Bahan Uji.................................. 54

Lampiran 13. Uji Statistik Data Penurunan Kadar Kolesterol Total danLDL.......................................................................................... 55

Lampiran 14. Data Persentase Penurunan Kadar Kolesterol Total dan LDLHamster Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yangDiberi Bahan Uji...................................................................... 58

Lampiran 15. Konversi Dosis Manusia untuk Dosis Hewan BerdasarkanLuas Permukaan Tubuh........................................................... 59

Lampiran 16. Perlakuan Hewan Uji Hamster Syrian..................................... 60Lampiran 17. Ekstraksi β-Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih................... 61

Lampiran 18. Pemberian Induksi Fruktosa Cair dan PakanHiperkolesterol........................................................................ 62Lampiran 19.Lampiran 20.

Pengambilan Darah Hamster Melalui Sinus Orbitalis.............Pemberian Ekstrak Uji pada Hamster......................................

6364

Lampiran 21. Pemisahan Serum Darah.......................................................... 65Lampiran 22. Pengukuran Kadar Kolesterol Total dan LDL........................ 66Lampiran 23. Pemeriksaan Mutu Ekstrak...................................................... 67


10/76

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Kolesterol adalah salah satu jenis sterol yang paling dikenal oleh

masyarakat. Kolesterol merupakan komponen esensial membran struktural semua

sel dan merupakan komponen utama sel otak dan saraf. Kolesterol merupakan

bahan antara pembentukan sejumlah steroid penting seperti asam empedu, asam

folat, hormon-hormon adrenal korteks, esterogen, androgen, dan progesteron.

Kadar kolesterol normal adalah kurang dari 200 mg/dl, sedangkan keadaandengan kadar kolesterol lebih dari normal di dalam darah dikatakan sebagai

hiperkolesterolemia. Kadar kolesterol yang meningkat berpengaruh buruk

terhadap jantung dan pembuluh darah (Almatsier 2003). Hiperkolesterolemia

merupakan faktor resiko utama terjadinya penyakit jantung koroner (PJK) dan

stroke (Hartono 2006).

Berdasarkan data organisasi kesehatan dunia WHO, penyakit PJK

merupakan penyebab kematian nomor satu di dunia. Diperkirakan sedikitnya 17,5

juta atau setara dengan 30% kematian di seluruh dunia disebabkan oleh penyakit

ini (WHO 2012). Faktor risiko yang merupakan predisposisi untuk timbulnya PJK

adalah hiperkolesterolemia, atherosklerosis, hipertensi, diabetes melitus, dan

stress (Suyatna 2007). Tingginya kadar kolesterol darah, penyakit diabetes

melitus, obesitas, dan hipertensi dapat saja terjadi secara bersamaan pada

seseorang (Giri 2008). Pada penderita diabetes, sel-sel lemak mengalami resisten

insulin, sehingga uptake asam lemak bebas yang dimediasi oleh insulin pada sel-

sel otot menjadi tidak seimbang. Kondisi tersebut dapat menginduksi

hiperkolesterolemia (Chen dan Raymond 2008).

Kondisi resistensi insulin pada penderita diabetes melitus mengakibatkan

kelebihan kadar glukosa dalam darah. Hal tersebut juga memengaruhi

metabolisme lemak di dalam tubuh. Akibat berkurangnya hormon insulin maka

akan terjadi peningkatan mobilisasi lemak dari daerah penyimpanan lemak. Hal

tersebut menyebabkan terjadinya peningkatan katabolisme lemak yang disertai


11/76


12/76

3

yang dilakukan Huang et al . (2014) pemberian polisakarida ekstraselular

Pleurotus tuber-regium mampu menjaga komposisi asam lemak agar tetap stabil

serta menurunkan kadar glukosa darah pada tikus dengan komplikasi diabetes-

obesitas (Huang et al . 2014).

Berdasarkan penelitian sebelumnya, maka dilakukan penelitian aktivitas

antihiperkoleste rol ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih ( Pleurotus

ostreatus (Jacq.) P.Kumm) terhadap hamster hiperkolesterolemia dan

hiperglikemia yang diinduksi pakan hiperkolesterol dan fruktosa. Pengujian

dilakukan terhadap aktivitas penurunan kolesterol total dan kolesterol LDL.

B. Permasalahan Penelitian

Berdasarkan uraian di atas, dapat dirumuskan masalah apakah pemberian

ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih ( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P.Kumm)

dapat menurunkan kadar kolesterol total dan LDL darah hamster

hiperkolesterolemia dan hiperglikemia?

C. Tujuan Penelitian

Mengetahui pengaruh pemberian ekstrak β -glukan larut air jamur tiram

putih ( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P.Kumm) dalam menurunkan kadar kolesterol

total dan LDL darah hamster hiperkolesterolemia dan hiperglikemia.D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi dan pengetahuan

kepada masyarakat mengenai manfaat ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih

( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P.Kumm) yang dapat menurunkan kadar LDL dan

kolesterol total, serta diharapkan dapat dijadikan landasan pengetahuan untuk

penelitian lebih lanjut.


13/76

4

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Landasan Teori

1. Deskripsi Jamur Tiram Putih ( Pleur otus ostr eatus (Jacq.) P.Kumm)

a. Taksonomi

Kingdom : Myceteae (fungi)

Divisio : Amastigomycota

Sub Divisio : Basidiomycotae

Kelas : Bisidiomycetes

Ordo : Agaricales

Familia : Pleurotaceae

Genus : Pleurotus

Spesies : Pleurotus ostreatus (Wiardani 2010).

b. Morfologi

Jamur tiram adalah jamur dengan tudung mirip cangkang tiram dengan

bagian tengah agak cekung dan berwarna putih hingga krem. Permukaan tudung

licin, berminyak saat lembap, dan tepiannya bergelombang. Memiliki diameter 3-20 cm (Wiardani 2010).

c. Lingkungan Tumbuh

Jamur tiram dapat tumbuh di sebagian besar wilayah Indonesia pada

ketinggian antara 550-800 meter di atas permukaan laut dengan kadar air sekitar

60% dan pH 6-7. Jika kadar air di lokasi terlalu tinggi maka jamur akan terserang

penyakit (Wiardani 2010).

d. Kandungan Kimia dan KhasiatJamur tiram putih mengandung protein sebanyak 19-35% dari berat kering

jamur, karbohidrat sebanyak 50-60%, serat 1,56%, lemak 0,17%, Selain itu jamur

tiram mengandung vitamin B1, vitamin B2, niasin, biotin serta beberapa garam

mineral dari unsur-unsur Ca, P, Fe, Na, dan Zn dalam komposisi yang seimbang.

Macam asam amino yang terkandung dalam jamur tiram adalah sistein, metionin,

isoleusin, leusin, lisin, fenilalanin, treonin, tirosin, dan valin. Khasiat jamur tiram


14/76

5

untuk kesehatan antara lain berpotensi sebagai agen pencegah dan penyembuhan

penyakit kardiovaskuler terutama kolesterol dan juga dalam aspek kesehatan lain

yakni kanker, infeksi, bakteri dan virus (Winarti 2010). Jamur tiram mengandung

senyawa penting yang disebut pleuran yaitu polisakarida yang tersusun dalam

bentuk β-1,3 glukan dengan cabang β-1,3 glukopyranosida (Widyastuti dan

Koesnandar 2008).

2. Aktivitas β-Glukan

Senyawa β-glukan merupakan polisakarida yang terdapat dalam sumber

makanan seperti gandum, jamur, dan ragi. Semua β-glukan adalah polimer

glukosa yang bergabung melalui ikatan rantai β-1,3-glikosidik dan masing-masing

dibedakan dari cabang serta panjangnya struktur, bentuk cabang β-glukan pada

fungi yaitu β-1,6-glikosidik (Chan et al. 2009). Istilah glukan menunjukan suatu

polisakarida yang tersusun atas unit-unit molekul glukosa, sedangkan istilah beta

(β) adalah sebutan untuk posisi sterik dari gugus hidroksi glukosa yang tersusun

dalam formasi rantai tersebut (Rop et al. 2009).

Gambar 1. Struktur β -glukan pada Dinding Sel Jamur (Chan et.al. 2009)

Senyawa β -glukan dari jamur tiram terdiri atas: β -glukan larut air dan β -

glukan larut alkali. Senyawa β-glukan mempunyai aktivitas sebagai

antihiperkolesterol dengan mekanisme kerjanya mengikat asam empedu dan


15/76

6

menghambat sirkulasi enterohepatik, sehingga menyebabkan peningkatan

produksi asam empedu yang berasal dari kolesterol (Mursito et al 2011).

3. Ekstraksi β-Glukan

Senyawa β-glukan dapat diperoleh dari proses ekstraksi tubuh buah,

miselium atau dari medium cair dalam proses fermentasi bawah permukaan.

Metabolit primer seperti β-glukan, dapat diperoleh dari ekstraksi biomassa,

terutama tubuh buah dengan menggunakan pelarut etanol atau air yang

selanjutnya dimurnikan untuk mendapatkan ekstrak yang relatif murni sebagai

bahan neutraceutical (Widyastuti 2011). Salah satu metode untuk memproduksi

senyawa aktif β-glukan dari jamur adalah dengan cara ekstraksi dilanjutkan

dengan pemurnian β-glukan (Aryantha 2005). Terdapat prosedur yang lebih

efisien untuk mengekstraksi β-glukan, yakni β-glukan diisolasi melalui presipitasi

etanol dan freeze drying dalam nitrogen cair. Uji kemurnian menggunakan kolom

analisis karbohidrat dengan hasil 87,5% (Ng & Yap 2002).

Dalam me modifikasi desain produksi β -glukan dari jamur tiram harus

memerhatikan sifat kelarutan senyawa aktif dalam solven pengekstrak. Ekstrak

senyawa aktif polisakarida β-glukan memiliki sifat larut dalam air dan alkali

Modifikasi yang dilakukan adalah dengan memecah proses ekstraksi menjadi duatahap, yakni ekstraksi dengan solven air dilanjutkan alkali. Pada metode

sebelumnya hanya satu kali tahap ekstraksi, yaitu air saja atau alkali saja secara

terpisah. Variabel-variabel yang berpengaruh terhadap proses ekstraksi

berlandaskan hasil optimasi dengan menggunakan metode penelitian sebelumnya

(Widyastuti 2011).

4. Kolesterol

Kolesterol merupakan sterol utama dalam tubuh manusia dan komponenstruktural membran sel dan lipoprotein plasma. Kolesterol juga merupakan

prekursor hormon steroid dan asam empedu (Botham dan Mayes 2009).

Kolesterol dalam diet kebanyakan terkandung dalam kuning telur dan lemak

hewani dan sebagian lagi disintesis di dalam tubuh terutama di hati. Kolesterol

juga dapat membahayakan tubuh apabila terdapat dalam jumlah terlalu banyak di


16/76

7

dalam darah dapat membentuk endapan pada dinding pembuluh darah, sehingga

menyebabkan penyempitan yang dinamakan arterosklerosis (Almatsier 2003).

Kolesterol sangat larut dalam lemak tetapi hanya sedikit larut dalam air, dan

mampu membentuk ester dengan asam lemak (ester kolesterol). Kolesterol yang

diabsorbsi dari usus disebut sebagai kolesterol eksogen, sedangkan sejumlah besar

yang dibentuk di hepatosit dan enterosit disebut kolesterol endogen. Kolesterol

yang diabsorbsi usus kemudian dimasukkan ke dalam kilomikron yang dibentuk

di dalam mukosa usus (Ganong 2008). Kolesterol endogen disintesis dari asetil-

KoA, sedangkan kolesterol eksogen berasal dari makanan. Secara garis besar

biosintesis kolesterol dibagi menjadi tiga tahap: (1) pembentukan HMG-KoA dari

kondensasi molekul asetil KoA, (2) perubahan HMG-KoA menjadi skualen,

melalui reduksi menjadi asam mevalonat oleh enzim HMG-KoA reduktase, (3)

pembentukan kolesterol dari skualen (Muchtadi dkk. 1993).

5. Lipoprotein

Lipoprotein merupakan gabungan molekul lipid dan protein yang disintesis

di dalam hati. Seperempat sampai sepertiga bagian dari lipoprotein adalah protein

dan selebihnya lipid. Lipoprotein memiliki fungsi mengangkut lipid di dalam

plasma ke jaringan-jaringan yang membutuhkannya sebagai sumber energi,sebagai komponen membran sel atau sebagai prekursor metabolit aktif (Almatsier

2003). Lipoprotein mengangkut lipid dari usus sebagai kilomikron dan dari hati

sebagai lipoprotein berdensitas sangat rendah ( very low density lipoprotein,

VLDL ) (Botham dan Mayes 2009). Partikel lipoprotein terdiri dari bagian inti

yang mengandung trigliserida dan ester kolesterol serta dikelilingi oleh fosfolipid,

kolesterol bebas, dan apolipoprotein (Suyatna 2007).

Lipoprotein dibedakan menjadi 5 golongan besar, yaitu:a. Kilomikron

Kilomikron merupakan lipoprotein dengan berat molekul terbesar, dibentuk

di dalam usus halus, mengandung lebih dari 80% trigliserida dan kurang dari 5%

kolesterol ester. Kilomikron membawa trigliserida dari makanan ke jaringan

lemak dan otot rangka, juga membawa kolesterol dari makanan ke hati.

Trigliserida dari kilomikron akan mengalami hidrolisis oleh lipoprotein lipase


17/76

8

(LPL) membentuk asam lemak bebas, yang akan digunakan oleh jaringan. Hasil

hidrolisis tersebut adalah kilomikron remnan. Kilomikron remnan adalah

kilomikron yang telah dihilangkan sebagian besar trigliseridanya (Suyatna 2007).

b. Lipoprotein Densitas Sangat Rendah ( Very Low Density Lipoprotein, VLDL)

VLDL merupakan lipoprotein yang terdiri dari 60% trigliserida dan 10-15%

kolesterol. VLDL disekresi oleh hati untuk mengangkut trigliserida yang

disintesis oleh hati ke jaringan perifer. Setelah meninggalkan hati, trigliserida

yang terdapat dalam VLDL dihidrolisis oleh lipoprotein lipase sehingga

membentuk asam lemak bebas dan VLDL remnan. Asam lemak bebas disimpan

dalam jaringan lemak dan digunakan oleh jaringan seperti jantung dan ototrangka, sedangkan VLDL remnan akan diubah menjadi LDL. Karena asam lemak

bebas dan gliserol dapat disintesis dari karbohidrat maka makanan tinggi

karbohidrat dapat meningkatkan kadar VLDL (Suyatna 2007).

c. Lipoprotein Densitas Sedang ( I ntermediate Densi ty Li poprotein, IDL)

IDL merupakan zat perantara yang terjadi sewaktu VLDL dikatabolisme

menjadi LDL. IDL mengandung trigliserida (30%), serta mengandung kolesterol

(20%) dan relatif lebih banyak mengandung apoprotein B dan E. IDL jumlahnya

sedikit di dalam plasma, akan terjadi peningkatan ketika terjadi proses

penghambatan VLDL menjadi IDL (Suyatna 2007).

d. Lipoprotein Densitas Rendah ( L ow Density L ipoprotein , LDL)

LDL merupakan lipoprotein pengangkut kolesterol terbesar pada manusia,

sebesar 70% (Suyatna 2007). Sisa VLDL atau IDL akan membentuk LDL dan

satu partikel LDL berasal dari satu partikel VLDL. Sebagian dari kolesterol di

IDL akan dibawa ke hati dan beberapa jaringan yang mempunyai reseptor LDL

yaitu Apo B-100 E. Sebagian lagi dari kolesterol LDL akan mengalami oksidasi

dan ditangkap oleh reseptor scavenger-A (SR-A) di makrofag dan akan menjadi

sel busa (Botham dan Mayes 2011).

e. Lipoprotein Densitas Tinggi ( H igh D ensity L ipoprotein, HDL)

HDL disintesis di hati dan disekresikan ke dalam usus (Murray et al. 2006).

HDL yang dilepaskan sebagai partikel kecil yang miskin akan kolesterol dan


18/76

9

mengandung Apo A, C, dan E, disebut dengan HDL nascent yang menerima

kolesterol bebas, HDL nascent berubah menjadi HDL yang berbentuk bulat.

Kolesterol bebas akan terakumulasi pada HDL tersebut dan mengalami

esterifikasi oleh enzim lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT) menjadi

kolesterol ester. HDL akan membawa sebagian kolesterol ester ke hati dan

ditangkap oleh scavenger receptor kelas B tipe 1 (SR-B1). Sebagian lagi akan

dipertukarkan dengan trigliserida dari VLDL dan IDL dengan bantuan cholesteryl

ester tranfer protein (CETP) (Adam 2006).

6. Diabetes Melitus

Diabetes melitus adalah sekumpulan dari gangguan metabolik yang ditandai

oleh hiperglikemia dan abnormalitas metabolisme dari karbohidrat, lemak, dan

protein yang merupakan hasil dari defect sekresi insulin baik mutlak atau relatif,

dan berkurangnya sensitivitas jaringan terhadap insulin atau keduanya (Priyanto

2008). Simptom yang menyertai DM adalah poliuria, polidipsi, penurunan berat

badan walaupun ada polifagia (peningkatan nafsu makan), hiperglikemia, ketosis,

asidosis (Ganong 2008). Dalam mendiagnosis DM harus didasarkan pada

pemeriksaan kadar glukosa darah, memperhatikan asal bahan darah yang diambil

dan cara pemeriksaan yang digunakan. Kadar glukosa darah yang dijadikan patokan sebagai diagnosis DM yaitu, kadar glukosa darah sewaktu yang dikatakan

DM adalah ≥ 200 mg/dl, kadar glukosa darah puasa yang dikatakan DM adalah ≥

126 mg/dl (Gustaviani 2006).

Diabetes melitus (DM) dapat dibedakan menjadi DM tipe I dan DM tipe II.

Diabetes Melitus tipe I merupakan gangguan produksi insulin akibat penyakit

autoimun atau idiopatik, tipe ini sering disebut insulin dependent diabetes mellitus

atau IDDM karena pasien mutlak membutuhkan insulin. Diabetes melitus tipe IImerupakan akibat resistensi insulin atau gangguan sekresi insulin. Pada DM tipe

II ini tidak selalu dibutuhkan insulin, terkadang cukup dengan diet dan

antidiabetik oral. Tipe ini sering disebut noninsulin dependent diabetes mellitus

atau NIDDM. Hiperglikemia timbul akibat berkurangnya insulin sehingga glukosa

darah tidak dapat masuk ke sel-sel otot, jaringan adiposa, dan metabolisme akan

terganggu (Suherman 2007).


19/76

10

7. Fruktosa

Fruktosa adalah gula sederhana yang memberikan rasa manis. Terdapat

pada makanan alami seperti buah-buahan, madu, sayuran, dan biji-bijian. Sumber

utama fruktosa adalah sukrosa, yang merupakan derivat gula tebu dan gula bit.

Fruktosa merupakan suatu monosakarida yang dapat menyebabkan gangguan

metabolisme. Berbagai penelitian menunjukkan bahwa seiring dengan

peningkatan konsumsi makanan ataupun minuman yang mengandung fruktosa,

terjadi peningkatan prevalensi berbagai gejala sindrom metabolik. Obesitas,

dislipidemia, hipertensi, diabetes melitus merupakan sindrom metabolik yang

sering terjadi (Prahastuti 2011).

Gambar 2. Rumus Bangun Fruktosa

Fruktosa terdiri atas 6 atom karbon (heksosa) yang merupakan isomer

glukosa (C 6H12O6) dan mengandung gugus karbonil sebagai keton. Fruktosa

dikonsumsi dalam bentuk sukrosa dan jarang dalam bentuk bebas. Dalam usus,

sukrosa dihidrolisis oleh enzim sukrase menjadi fruktosa dan glukosa. Setelah

diabsorpsi oleh usus, fruktosa diangkut melalui vena porta menuju hati untuk

dimetabolisme menjadi lipid. Nama lain dari fruktosa yaitu D-Fructose,

Fructosum, Fruit Sugar, Fruktoosi, Fruktos, Fruktoz, Fruktoza, Fruktoze,

Laevulose, Laevusolum, dan Levulose. Fruktosa sangat efisien menginduksi de

novo lipogenesis (DNL) dengan menyediakan atom karbon untuk membentuk

trigliserida dan VLDL serta meningkatkan penimbunan lemak dalam hepar yang

menyebabkan resistensi insulin (Prahastuti 2011).

8. Kolestiramin

Kolestiramin merupakan obat hipolipidemik golongan resin penukar ion.

Derivat resin merupakan obat yang relatif aman bila digunakan oleh anak-anak.


20/76

11

Kolestiramin adalah garam klorida dari basic anion exchange resin yang bersifat

hidrofilik. Kolestiramin adalah obat yang memiliki mekanisme aksi serupa dengan

β-glukan dalam menurunkan kadar kolesterol. Bekerja dengan cara mengikat

asam empedu di usus halus dan mengeluarkannya melalui feses (Suyatna 2007).

Penurunan kadar asam empedu ini oleh pemberian kolestiramin akan

menyebabkan meningkatnya produksi asam empedu yang disintesis dari

kolesterol. Karena sirkulasi enterohepatik dihambat oleh kolestiramin maka

kolesterol yang diabsorpsi lewat saluran cerna akan terhambat dan keluar bersama

feses (Suyatna 2007). Dosis kolestiramin awal ialah 4 g satu kali sehari, dapat

ditingkatkan 12-16 g perhari terbagi 2-4 bagian. Pada keadaan

hiperkilomikronemia kolestiramin kurang efektif, sedangkan pada keadaan

hiperlipoproteinemia kolestiramin perlu di kombinasi dengan asam nikotinat atau

ezetimibe untuk mendapatkan efek yang maksimal. Penggunaan kolestiramin

jangka panjang telah terbukti dapat menurunkan hiperkolesterol dan persentase

serangan jantung fatal sekitar 20% (Marks et al. 2000).

9. Hamster

Hamster syrian ( Mesocricetus auratus ) termasuk famili Cricetidae dan

tergolong kelompok hewan pengerat (rodentia), seperti tikus dan kelinci (Sadgara2010). Hamster merupakan hewan yang aktif dimalam hari. Hamster memiliki

perilaku yang tidak terlalu agresif, tetapi jika mereka terkejut atau tiba-tiba

terbangun mereka akan menjadi sangat agresif. Hamster merupakan hewan yang

banyak digunakan untuk mempelajari efek obat dan diet pada metabolisme

lipoprotein dan aterosklerosis. Hal ini dikarenakan hamster memiliki metabolisme

lipoprotein yang hampir mirip dengan manusia (Dillard et al 2010).

Tabel 1. Parameter Biologi Dasar HamsterParameter Hamster

Rentang hidup (tahun) 1-3Berat lahir (g) 1-2

Berat badan dewasa (g) Jantan : 85-100 ; Betina : 95-150Asupan makanan (g/hari) 10-14

Asupan air (ml/hari) 7-10Volume urin (ml/hari) 6


21/76


22/76

13

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Tempat dan Waktu Penelitian

1. Tempat Penelitian

Penelitian dilakukan di laboratorium Agromikrobiologi BPPT PUSPITEK

Serpong, Laboratorium Afiliasi Kimia UI Depok, Laboratorium Kimia Terpadu,

Laboratorium Farmakologi, dan Laboratorium Patologi Klinik, Fakultas Farmasi

dan Sains, Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka, Jakarta Timur.

2. Waktu penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan April - Juli 2015.

B. Alat dan Bahan Penelitian

1. Alat penelitian

Peralatan yang dibutuhkan antara lain adalah spuit, kandang hewan coba

yang dilengkapi tempat pakan dan minum, timbangan hewan, neraca analitik,

microcentrifuge (Eppendrof MiniSpin ®), centrifuge , peralatan gelas, oven, mikro

pipet, micro tube , vorteks, dan fotometer klinikal (VARTA 506).

2. Bahan penelitian Bahan penelitian yang digunakan meliputi:

a. Bahan Uji

Jamur tiram putih diperoleh dari PT. IP FARMS Lembang, Bandung.

b. Bahan Kimia

Bahan kimia yang diperlukan meliputi etanol 80%, isofluran yang diperoleh

dari PT. Dexa Medica, reagen kit kolesterol total, reagen LDL Presipitan (Heparin

dan natrium sitrat) merk Diasys dari PT. Centra Alkes, dan akuades.c. Bahan Pembanding

Obat pembanding yang digunakan adalah kolestiramin 4 g dari PT. Novell

Pharmaceutical.

d. Bahan Induksi Hiperkolesterol

Bahan penginduksi hiperkolesterol adalah campuran kuning telur puyuh

50% dan pakan standar sampai 100%.


23/76


24/76


25/76

16

b. Pembuatan Standar Pembanding Curdlan (β -1,3;1,6-glukan)

Curdlan sebanyak 50 mg dilarutkan dengan sedikit NaOH 0,5 N, kemudian

ditambahkan aquabidest sampai 100 ml dalam labu ukur dan akan didapatkan

larutan standar 500 ppm. Larutan standar 500 ppm diencerkan dengan aquabidest

menjadi konsentrasi 300, 200, 100, dan 50 ppm. Sebanyak 20 µl larutan standar

dari masing-masing konsentrasi disuntikkan ke dalam kolom KCKT

menggunakan aquabidest sebagai fase gerak dan dialirkan dengan kecepatan 1

ml/menit pada suhu 80 C, setelah larutan standar sampai di detektor indeks bias,

larutan standar dibiaskan dan kromatogram ditampilkan di monitor komputer.

c. Pembuatan Larutan Sampel dari Ekstrak β -glukan Larut Air

Ekstrak β-glukan larut air ditimbang sebanyak 0,0103 gram dilarutkan

dengan sedikit NaOH 0,5N, kemudian ditambahkan aquabidest 2 ml, ditambahkan

resin penukar ion, kemudian dikocok sampai homogen. Sebanyak 20 µl

disuntikkan ke dalam kolom KCKT menggunakan aquabidest sebagai fase gerak

dan dialirkan dengan kecepatan 1 ml/menit pada suhu 80˚C, setelah sampel

sampai pada detektor indeks bias (RID), sampel dibiaskan dan kromatogram

ditampilkan di monitor komputer (Andayani 2009).

6. Rancangan PenelitianRancangan penelitian menggunakan rancangan acak lengkap dengan 6

kelompok perlakuan, sehingga penentuan jumlah hamster tiap kelompok (n=4)

dihitung berdasarkan rumus Federer (Hanafiah 1993).

(t-1) (n-1) ≥ 15

(6-1) (n-1) ≥ 15

(5n – 5) ≥ 15

5n ≥ 20n ≥ 4........................................................(5)

Keterangan:

t = jumlah kelompok perlakuan

n= jumlah ulangan tiap kelompok


26/76

17

7. Persiapan Hewan Uji

Hewan uji diaklimatisasi selama 2 minggu. Pada tahap ini hewan diberikan

minum dan pakan standar, lalu dikelompokkan sesuai dengan berat badannya,

agar mempermudah dalam pengelompokan perlakuan. Skema pembagian

kelompok dapat dilihat pada lampiran 3.

8. Perhitungan Dosis

a. Dosis Ekstrak Jamur Tiram Putih

Dosis penelitian sebelumnya terhadap aktivitas penurunan kadar kolesterol

pada hamster dari ekstrak jamur Pleurotus ostreatus menunjukkan hasil yang

kurang konsisten, sehingga dosis yang digunakan adalah dosis ekstrak jamur tiram

putih yang berefek sebagai antihiperglikemia pada tikus dalam penelitian Ghaly et

al. (2001), dengan perhitungan sebagai berikut:

Dosis = Dosis yang diketahui x ℎ

.............................................(6)

Dosis efektif untuk tikus 200 mg/kg BB = 200 mg/kg BB

Dosis untuk hamster menurut FDA = 200 mg/kg BB x6

5

= 240 mg/kg BB

Untuk mengetahui dosis ekstrak yang efektif dalam menurunkan kadar

kolesterol dan LDL darah hamster maka pada percobaan ini digunakan 3 variasi

dosis, yaitu :

Dosis I : ½ x 240 mg/kg BB = 120 mg/kg BB = 18 mg/ 150 g BB

Dosis II : 1 x 240 mg/kg BB = 240 mg/kg BB = 36 mg/ 150 g BB

Dosis III : 2 x 240 mg/kg BB = 480 mg/kg BB = 72 mg/ 150 g BB

b. Dosis Kolestiramin

Dosis kolestiramin untuk manusia (60 kg) adalah 4 g. Dosis dikonversi ke

hamster sehingga menjadi:

Dosis manusia (60 kg) = 4 g

= 4000 mg/ 60 kg BB

= 66,67 mg/ kg BB


.....................................(7)


27/76

18

Dosis untuk hamster menurut FDA = 66,67 mg/kg BB x 375

= 493,33 mg/kg BB

= 74 mg/150 g BB

c. Dosis Fruktosa

Dosis pemberian fruktosa secara oral pada tikus yang biasanya digunakan

adalah 180 mg/100 g BB tikus selama 55 hari (Adriawan et al . 2014).

Dosis tikus (100 g) = 180 mg/100 g BB tikus

= 1.800 mg/kg BB


........(8)

Dosis hamster = 1.800 mg/kg BB x6

5

= 2.160 mg/kg BB

Komposisi fruktosa = Fruktosa 55% volume 500 ml

Fruktosa dalam sediaan = 55100

x 500 ml = 275 g

Konsentrasi fruktosa 55% = 55 g dalam 100 ml

Fruktosa dalam 1 ml =55

100 x 1 ml = 0,55 g = 550 mg

Rata-rata BB hamster pada saat mulai induksi = 68,447 g ~ 68 g

Dosis fruktosa pada 68 g BB hamster = 2.160 mg x68

1000

= 146,88 mg

Bila 550 mg = 1 ml berdasar pada 1 ml kapasitas lambung hamster

Volume dosis 146,88 mg = 1 ml x146,88

550

= 0,267 ml

Untuk mempersingkat waktu induksi, dilakukan peningkatan 3 x volume

fruktosa yaitu 0,9 ml.

d. Dosis Pakan Hiperkolesterol

Pakan tinggi kolesterol dibuat dengan komposisi kuning telur puyuh 50%

dan pakan standar (pelet hamster) sampai 100% (Dewi dan Probosari 2012).

Untuk pembuatan pakan kolesterol, kuning telur mentah yang dicampur dengan


28/76

19

pakan standar diaduk homogen hingga terbentuk adonan, lalu adonan dibentuk

menjadi pelet (Asmariani dan Probosari 2012).

Pakan tinggi kolesterol yaitu pakan yang terdiri dari pakan standar (pelet

hamster) ditambahkan kuning telur puyuh 50%. Kuning telur puyuh dipilih karena

mengandung kolesterol yang tinggi dibanding telur lain yaitu 2139,17 mg dalam

100 g (Dwiloka 2003).

Perhitungan 1 kg pakan kolesterol:

Kuning telur puyuh = 50% x 1000 g = 500 g

Pakan standar = 50% x 1000 g = 500 g

9. Pembuatan Larutan Sediaan Uji

a. Pembuatan Larutan Sediaan Ekstrak UjiEkstrak uji disiapkan dengan membuat larutan induk pada masing masing

dosis yang digunakan pada penelitian. Ekstrak uji dibuat setiap hari untuk

menjamin larutan ekstrak dalam keadaan baik. Pembuatan larutan ekstrak β -

glukan jamur tiram putih dapat dilihat pada lampiran 4.

1) Untuk membuat larutan induk dengan dosis terendah yaitu dosis 1 (120

mg/kgBB = 18 mg/150 g BB) ekstrak ditimbang 200 mg dan dilarutkan

dengan suspensi Na CMC hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 20mg/ml larutan. Banyaknya larutan ekstrak yang diberikan dari larutan

induk pada hamster per 150 g BB:

Volume (ml) = ℎ ( )

150 x

( ) …………..(9 )

2) Untuk membuat larutan induk dosis 2 (240 mg/kgBB = 36 mg/150 g BB)

ekstrak ditimbang 400 mg dan dilarutkan dengan suspensi Na CMC hingga

10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 40 mg/ml larutan. Banyaknya

larutan ekstrak yang diberikan dari larutan induk pada hamster per 150 g

BB:


150 x

( ) ………..(10 )

3) Untuk membuat larutan induk dosis tertinggi yaitu dosis 3 (480 mg/kgBB

= 72 mg/150 g BB) ekstrak ditimbang 800 mg dan dilarutkan dengan

suspensi Na CMC hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 80 mg/ml


29/76

20

larutan. Banyaknya larutan ekstrak yang diberikan dari larutan induk pada

hamster per 150 g BB:


150

x ( )

…………(11 )

b. Pembuatan Larutan Obat Pembanding

Dosis kolestiramin yang digunakan pada manusia (60 kg) adalah 4 g

(Sukandar dkk 2008). Dosis terlebih dahulu dikonversikan ke hamster, dari hasil

perhitungan didapat dosis kolestiramin 493,33 mg/kgBB atau 74 mg/150 g BB

hamster. Untuk membuat larutan induk dosis kolestiramin ditimbang sebanyak

1000 mg dan dilarutkan dengan suspensi Na CMC hingga 10 ml, sehingga

diperoleh konsentrasi 100 mg/ml. Pembuatan larutan obat pembanding dapatdilihat pada lampiran 4.


150 x

( ) ..……..…(12 )

10. Pembuatan Sediaan Suspensi Na-CMC

Pembuatan larutan Na-CMC 0,5% ditimbang 500 mg kemudian ditaburkan

di atas air panas 100 ml, setelah 15 menit diaduk kuat-kuat dalam lumpang sampai

terbentuk massa suspensi yang homogen, hingga didapatkan konsentrasi suspensi

Na CMC 0,5%.

11. Perlakuan Hewan Uji

Percobaan terdiri atas tahap adaptasi/aklimatisasi dan tahap perlakuan.

Adaptasi dilakukan selama 14 hari, hamster diberi makanan standar secukupnya

dan air minum ad libitum . Pakan standar diberikan secukupnya agar diketahui

konsumsi makanan harian sebagai acuan pemberian pakan pada masa perlakuan.

Penelitian dilakukan dalam beberapa tahap, yaitu :

a. Aklimatisasi hamster selama 14 hari, pengukuran kadar kolesterol total dan

LDL darah, sebelumnya hamster dipuasakan selama 12 jam. Pengambilan

darah dilakukan pada bagian mata.

b. Dilakukan orientasi pakan hiperkolesterol yaitu satu hamster diberi pakan

hiperkolesterol sebagai orientasi. Setelah itu pada hari ke-1 dihitung setelah


30/76

21

aklimatisasi semua hamster diberi pakan induksi hiperkolesterol dan

fruktosa, kecuali kelompok kontrol normal selama 28 hari.

c. Pada hari ke-29, dilakukan pengukuran kadar kolesterol total dan LDL.

d. Kemudian dilakukan pembagian kelompok hewan uji. Dibagi menjadi 6

kelompok dengan masing-masing kelompok terdiri dari 4 hewan uji.

Perlakuan dilakukan pada hari ke-29 selama 14 hari.

Kelompok I : Diberi pakan standar (kelompok kontrol normal).

Kelompok II : Diberi pakan hiperkolesterol, fruktosa dan

kolestiramin (kelompok kontrol positif).

Kelompok III : Diberi pakan hiperkolesterol dan fruktosa (kelompok

kontrol negatif).

Kelompok IV : Diberi pakan hiperkolesterol, fruktosa dan ekstrak β -

glukan larut air jamur tiram putih dosis I (120 mg/ kg

BB hamster).

Kelompok V : Diberi pakan hiperkolesterol, fruktosa dan ekstrak β -

glukan larut air jamur tiram putih dosis II (240 mg/kg

BB hamster).

Kelompok VI : Diberi pakan hiperkolesterol, fruktosa dan ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih dosis III

(480 mg/kg BB hamster).

e. Pada hari ke-44 dilakukan pengukuran kadar kolesterol total dan LDL.

f. Selesai perlakuan, semua hamster diistirahatkan ke dalam kandangnya

masing-masing dan diberi makan dan minuman ad libitum .

g. Semua data kadar kolesterol total dan LDL sebelum dan sesudah perlakuan

yang diperoleh, ditabulasi, dibuat rata-rata, dan dianalisis.12. Prosedur Pengambilan Serum Darah

Pengambilan darah diambil sebanyak 3 kali yaitu pada hari ke-0 setelah

aklimatisasi, ke-29 dan ke-44. Darah hamster diambil melalui sinus orbitalis

dengan cara sebagai berikut: hamster dibius dengan isofluran hingga tidak

sadarkan diri, pada bagian sudut mata hamster ditusuk dengan pipa kapiler,

kemudian pipa kapiler diputar hingga darah mengalir melalui pipa kapiler


31/76

22

tersebut. Darah ditampung pada mikrotube. Darah diambil kira-kira 1,0 ml

kemudian disentrifugasi pada kecepatan 4000 rpm selama 15 menit agar diperoleh

serum. Skema pengambilan serum darah terdapat pada lampiran 5.

13. Cara Pengukuran Kadar Kolesterol Total dan LDL

a. Kolesterol total

Serum darah sebanyak 10 µl, lalu dicampur reagen enzim (kit) sebanyak

1000 µl, kemudian dihomogenkan dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu

37 C atau 20 menit pada suhu 20-25 C. Kemudian kadar dibaca dengan fotometer

klinikal (VARTA 506). Skema prosedur pengukuran kadar kolesterol total dapat

dilihat pada lampiran 6.

b. LDL

Serum diambil 100 µl kemudian dicampur dengan 1000 µl pereaksi

pengendap yang terdiri dari campuran larutan heparin dan natrium sitrat.

Campuran divorteks kemudian disentrifugasi pada kecepatan 4000 rpm selama 15

menit. Setelah itu didiamkan selama 1 jam supaya LDL mengendap, kemudian

supernatan diambil sebanyak 100 µl dimasukkan ke dalam tabung kemudian

dicampur dengan 1000 µl reagen enzim kit. Kemudian dibaca dengan fotometer

klinikal (VARTA 506).Kadar LDL = kadar kolesterol total - kolesterol di dalam supernatan........(13)

Skema prosedur pengukuran kadar LDL dapat dilihat pada lampiran 7 (Rifai2000).

D. Analisis Data

Data kadar kolesterol total dan LDL awal dan akhir kemudian dihitung nilai

persentase penurunannya, dan dianalisis dengan menggunakan program pengolah

statistik. Pada analisis data ini dilakukan terlebih dahulu uji homogenitas dannormalitas. Uji homogenitas dilakukan untuk menguji apakah beberapa kelompok

memiliki variansi yang sama. Sedangkan uji normalitas digunakan untuk

mengetahui apakah distribusi sebuah data mengikuti atau mendekati distribusi

normal (Santoso 2010). Selanjutnya dilakukan uji ANOVA satu arah dengan taraf

signifikansi 95%. Jika terdapat perbedaan yang bermakna maka dilanjutkan

dengan uji LSD (Pujiastuti dan Andayani 2001).


32/76

23

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Determinasi Simplisia Jamur

Hasil determinasi jamur dari Pusat Penelitian Biologi, LIPI Cibinong

menunjukkan bahwa simplisia tersebut adalah jamur tiram putih ( Pleurotus

ostreatus (Jacq.) P. Kumm), termasuk dalam suku Pleurotaceae . Hasil

determinasi dapat dilihat pada lampiran 8.

B. Hasil Ekstraksi

Simplisa kering jamur tiram putih ( Pleurotus ostreatus ) sebanyak 1,1 kg

dihaluskan menghasilkan 1 kg serbuk jamur tiram putih kering. Serbuk jamur

tiram putih kering diekstraksi dengan akuades sebanyak 3 kali volume serbuk

jamur (14,25 liter), yang dipanaskan pada 100 C selama 3 jam, kemudian

disaring. Sebanyak 7,5 liter filtrat yang diperoleh, dipresipitasi dengan etanol 80%

sebanyak 3 kali volume filtrat (22,5 liter) dan disimpan pada suhu 4 C selama 24

jam. Dilanjutkan sentrifugasi pada 4000 rpm selama 15 menit. Hasil ek straksi β -

glukan larut air serbuk jamur tiram putih diperoleh 298 g ekstrak basah, kemudian

dikeringkan dalam oven suhu 150 C selama 24 jam hingga diperoleh ekstrak

kering sebanyak 85,56 g (Tabel 2).

Tabel 2. Hasil Ekstraksi β-Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih

No Jenis Hasil1. Jamur tiram putih kering 1100 g2. Serbuk jamur tiram putih kering 1000 g3. Filtrat 7,5 L4. Ekstrak basah 298 g5. Ekstrak kering 85,56 g

C. Hasil Pemeriksaan Mutu Ekstrak β-Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih

1. Organoleptis

Ekstrak kering jamur tiram putih memiliki karakteristik bau khas, rasa agak

pahit, dan bentuk serbuk warna coklat.


33/76

24

2. Kadar Air

Hasil pengujian kadar air ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih

dengan menggunakan moisture balance yaitu sebesar 5,053% (Lampiran 9). Nilai

tersebut menunjukkan persentase besarnya kandungan air yang masing

terkandung dalam ekstrak.

3. Kadar Abu

Hasil pengujian kadar abu ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih yaitu

sebesar 5,6733% (Lampiran 9). Nilai tersebut menunjukkan persentase besarnya

kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai

terbentuknya ekstrak. Mineral internal yang terkandung dalam jamur tiram putih

terdiri dari unsur Ca, P, Fe, Na, dan Zn (Winarti 2010). Mineral eksternal adalah

mineral dari luar jamur tiram putih yang diperoleh selama proses ekstraksi.

4. Susut Pengeringan

Hasil pengujian susut pengeringan ekstrak β -glukan larut air jamur tiram

putih yaitu sebesar 5,37% (Lampiran 9). Nilai tersebut menunjukkan persentase

besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan seperti senyawa-senyawa

yang menguap.

5. RendemenHasil rendemen ekstrak kering β -glukan larut air jamur tiram putih yaitu

sebesar 8,556% (Lampiran 9) . Nilai tersebut menunjukkan jumlah β -glukan yang

tersari dari simplisia.

D. Hasil Uji Kualitatif β -Glukan

Identifikasi β-glukan larut air pada ekstrak jamur tiram putih secara

kualitatif dilakukan dengan teknik Kromatografi Cair (KCKT). Hasil identifikasi

β-glukan standar curdlan menunjukkan bahwa β -glukan muncul pada waktu

retensi 3,504 menit dengan luas area 691646, sedangkan hasil uji kualitatif β -

glukan jamur tiram larut air muncul pada waktu retensi 3,612 menit dengan luas

area 197345. Identifikasi β-glukan dilakukan untuk memastikan bahwa ekstrak uji

adalah β-glukan dan siap diujikan ke hewan uji. Hasil uji kromatogram β -glukan

dapat dilihat pada lampiran 10.


34/76

25

E. Penyiapan Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah hamster syrian jantan

Mesocricetus auratus usia 3 bulan dan bobot badan ±50 g. Hamster dipilih

sebagai hewan uji dengan beberapa pertimbangan, bahwa hamster merupakan

hewan mamalia dengan organ tubuh yang menyerupai manusia serta profil

lipoprotein hamster lebih menyerupai manusia dibandingkan tikus (Dilliard et al.

2010). Jenis kelamin hamster digunakan adalah jantan untuk menghindari

pengaruh hormonal yang biasa terjadi pada hamster betina yang dapat

memengaruhi hasil uji. Penelitian ini menggunakan 30 ekor hamster, terbagi

dalam 6 kelompok secara acak, sehingga penyebaran berat badannya merata untuk

setiap kelompok. Tiap kelompok terdiri dari 5 ekor berdasarkan rumus Federer (n

≥ 4), namun dilebihkan 1 ekor tiap kelompoknya, untuk mengantisipasi kematian

hewan uji selama perlakuan.

Penelitian menggunakan 3 kelompok kontrol yaitu kelompok kontrol

normal, kontrol positif, dan kontrol negatif. Kelompok normal berguna untuk

mengetahui kadar kolesterol total dan LDL hamster normal tanpa pemberian

pakan hiperkolesterol dan fruktosa selama penelitian. Kontrol negatif

dimaksudkan untuk mendapatkan gambaran kadar kolesterol total dan LDL hewanuji hiperkolesterolemia dan hiperglikemia yang tidak mendapatkan perlakuan

obat. Kontrol positif dimaksudkan untuk mengetahui kadar kolesterol total dan

LDL hewan uji hiperkolesterolemia dan hiperglikemia akibat pemberian

kolestiramin sebagai obat pembanding. Pemilihan kolestiramin sebagai obat

pembanding karena mempunyai keterkaitan dengan mekanisme kerja β-glukan

dalam menurunkan kadar kolesterol. Tiga kelompok dikategorikan sebagai

kelompok uji dengan diberikan ekstrak β -glukan larut air yang memiliki variasidosis yang berbeda yaitu dosis I 120 mg/kg BB, dosis II 240 mg/kg BB, dan dosis

III 480 mg/kg BB.

Sebelum menjalani tahap penelitian, hamster diaklimatisasikan selama 2

minggu agar mampu menyesuaikan keadaannya dari mulai lingkungan kandang,

makanan, dan minuman. Setelah tahap aklimatisasi, dilakukan pengukuran kadar

kolesterol total dan LDL sebagai kadar awal dihitung pada hari ke-0 .sebelum


35/76

26

tahap induksi. Sebelum memasuki tahap induksi, dilakukan orientasi pakan

hiperkolesterol pada seekor hamster, untuk mengetahui seberapa banyak pakan

hiperkolesterol yang akan diberikan pada hamster. Hasilnya hamster tersebut

menghabiskan 10 g pakan hiperkolesterol. Setiap 10 g pakan hiperkolesterol

mengandung kuning telur puyuh 50% dan pakan standar hingga 100% diberikan

sekali dalam sehari pada siang hari untuk menciptakan keadaaan

hiperkolesterolemik dan hiperglikemik pada hamster syrian jantan. Induksi pakan

hiperkolesterol dilakukan secara ad libitum sebanyak 10 g dan induksi fruktosa

cair sebanyak 0,9 ml secara per oral selama 28 hari untuk menciptakan hamster

hiperkolesterolemia dan hiperglikemia.

Pengambilan darah dilakukan melalui sinus orbital pada mata hamster.

Hamster dibius dengan isofluran hingga tidak sadarkan diri, kemudian bagian

sudut mata ditusuk dengan pipa kapiler sampai darah mengalir. Darah kemudian

ditampung dalam mikrotube ± 1 ml dan didiamkan selama 15 menit, selanjutnya

disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama 15 menit, sehingga terjadi

pemisahan antara serum dengan sel darah. Serum yang diperoleh dipisahkan ke

dalam mikrotube kemudian ditambah dengan reagen dan dilihat kadar kolesterol

total dan LDL dengan menggunakan alat fotometer klinikal .

F. Hasil Uji Aktivitas Ekstrak β -Glukan Larut Air Jamur Tiram Putih(Pl eur otus ostr eatus (Jacq.) P. Kumm) Terhadap Penurunan KadarKolesterol Total Hamster Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia

Data yang diperoleh terdiri dari kadar kolesterol total awal dan akhir. Kadar

kolesterol total awal diukur sesaat setelah induksi pemberian pakan

hiperkolesterol dan fruktosa selama 28 hari. Rerata kadar kolesterol total awal

hewan uji hiperkolesterolemia dan hiperglikemia adalah 395,41±26,36 mg/dl.

Sedangkan rerata kadar glukosa darah awal hewan uji hiperkolesterolemia dan

hiperglikemia adalah 181,55±8,71 mg/dl. Kadar kolesterol total akhir diukur

setelah perlakuan atau pemberian bahan uji selama 14 hari. Pengukuran kadar

kolesterol total dilakukan menggunakan fotometer klinikal dengan metode

enzimatis. E ster kolesterol diuraikan oleh kolesterol esterase menjadi kolesterol dan

asam lemak, kemudian oleh kolesterol oksidase, kolesterol diubah menjadi 4-

kolestenona dan hidrogenperoksida, selanjutnya oleh peroksidase terbentuk


36/76

27

quinonimine . Intensitas warna quinonimine menggambarkan kadar kolesterol dalam

sampel (N.S. Bio-Tec 2011). Hasil pengukuran kadar kolesterol total dapat dilihat

pada lampiran 11.

Gambar 3. Rerata Kadar (mg/dl) Kolesterol Total Awal ( ) dan Akhir ( )Hamster Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang DiberiBahan Uji

Data rerata kadar kolesterol total hewan uji pada kelompok normal, positif,

negatif, dosis I, dosis II, dan dosis III ditampilkan pada Gambar 3. Terlihat bahwa

pemberian bahan uji dapat menurunkan kadar kolesterol total hamster

hiperkolesterolemia dan hiperglikemia. Hal ini dapat dibuktikan pada dosis I dapat

menurunkan kadar kolesterol total dari 318,53 mg/dl menjadi 199,44 mg/dl. Dosis

II menurunkan kadar kolesterol total dari 351,17 mg/dl menjadi 154,53 mg/dl, dan

dosis III menurunkan kadar kolesterol total dari 381,10 mg/dl menjadi 141,77

mg/dl. Pemberian bahan uji ek strak β -glukan larut air jamur tiram putih dosis I, II,

dan III terbukti berhasil menurunkan kadar kolesterol total hamster

hiperkolesterolemia dan hiperglikemia. Data kadar kolesterol total yang diperoleh

kemudian dihitung nilai persentase penurunannya.

65,19

376,2 369,5

318,53

351,17381,1

65,94

185,81

322,81

199,44

154,54141,77

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

NORMAL POSITIF NEGATIF DOSIS I DOSIS II DOSIS III

K a d a r

K o l e s

t e r o

l T o t a l

( m g /

d l )

Perlakuan


37/76

28

Dari perhitungan nilai rata-rata persentase penurunan kelompok normal

menunjukkan hasil yang minus. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok normal

mengalami kenaikan kadar kolesterol total. Dengan demikian kelompok normal

tidak dimasukkan dalam pengolahan data, karena dapat memengaruhi hasil uji

statistik terhadap data penurunan kadar kelompok lainnya. Rerata persentase

penurunan kadar kolesterol yaitu, kelompok normal sebesar – 27,91%, kelompok

positif 50,44%, kelompok negatif 12,34%, kelompok dosis I 36,67%, kelompok

dosis II 55,89%, dan kelompok dosis III 62,83% (Gambar 4).

Gambar 4. Persentase Penurunan Kadar Kolesterol Total (%) HamsterHiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang Diberi Bahan Uji

Berdasarkan Gambar 4, terlihat bahwa dosis III menunjukkan rerata persen

penurunan kolesterol total terbesar yaitu 62,83%. Data persen penurunankolesterol total selanjutnya diuji normalitas dan homogenitasnya, didapat hasil uji

normalitas (p= 0,200) dan uji distribusi homogenitas (p= 0,102). Hal ini

menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dan homogen (p > 0,05).

Selanjutnya diuji menggunakan ANOVA satu arah. Dari hasil ANOVA terhadap

persentase kadar kolesterol total diperoleh nilai sig. 0,000 < 0,05. Hal tersebut

menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antar perlakuan, dan adanya

50,44

36,67

55,89

62,83

0

10

20

30

40

50

60

70

80

POSITIF DOSIS I DOSIS II DOSIS III

P e r s e n t a s e

P e n u r u n a n

K a d a r

K o l e s

t e r o

l T o t a l

( % )

Perlakuan


38/76

29

pengaruh pemberian sediaan uji terhadap penurunan kadar kolesterol total darah

hamster hiperkolesterolemia dan hiperglikemia. Hasil uji statistik dapat dilihat

pada lampiran 12.

Hasil uji LSD terhadap persen penurunan kolesterol total terbukti bahwa

dosis I, II, dan III menunjukkan adanya perbedaan bermakna dengan kontrol

positif (p


39/76

30

Gambar 5. Rerata Kadar (mg/dl) LDL Awal ( ) dan Akhir ( )Hamster Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang DiberiBahan Uji

Data rerata kadar LDL hewan uji pada kelompok normal, positif, negatif,

dosis I, dosis II, dan dosis III ditampilkan pada Gambar 5. Terlihat bahwa

pemberian bahan uji dapat menurunkan kadar LDL. Hal ini dapat dibuktikan pada

dosis I dapat menurunkan kadar LDL dari 157,3 mg/dl menjadi 96,94 mg/dl, dosis

II menurunkan kadar LDL dari 158,42 mg/dl menjadi 93,38 mg/dl, dan dosis III

menurunkan kadar LDL dari 183,47 mg/dl menjadi 91,79 mg/dl. Pemberian bahan

uji ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih dosis I, II, dan III terbukti berhasil

menurunkan kadar LDL hamster hiperkolesterolemia dan hiperglikemia. Data

kadar LDL yang diperoleh kemudian dihitung nilai persentase penurunannya.Dari perhitungan nilai rerata persentase penurunan kelompok normal

menunjukkan hasil yang minus. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok normal

mengalami kenaikan LDL. Dengan demikian kelompok normal tidak dimasukkan

dalam pengolahan data, karena dapat memengaruhi hasil uji statistik terhadap data

penurunan kadar kelompok lainnya. Rerata persentase kadar LDL yaitu, kelompok

normal sebesar – 24,37%, kelompok positif 49,11%, kelompok negatif -0,81%,

51,04

223,37

168,46157,3 158,42

183,47

53,56

114,08

169,14

96,94 93,38 91,79

0

50

100

150

200

250

300

NORMAL POSITIF NEGATIF DOSIS I DOSIS II DOSIS III

K a d a r

L D L ( m g /

d l )

Perlakuan


40/76

31

kelompok dosis I 37,057%, kelompok dosis II 40,85%, kelompok dosis III

49,47% (Gambar 6).

Gambar 6. Persentase Penurunan Kadar LDL (%) HamsterHiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang Diberi Bahan Uji

Berdasarkan Gambar 6, terlihat bahwa dosis III menunjukkan rerata persen

penurunan LDL terbesar yaitu 49,47%. Data persen penurunan kadar LDL yang

diperoleh kemudian diuji normalitas dan homogenitasnya, didapat hasil uji

normalitas (p= 0,119) dan uji homogenitas (p= 0,308), sehingga menunjukkan

bahwa data terdistribusi normal dan homogen (p>0,05). Hasil ANOVA satu arah

terhadap persentase penurunan kadar LDL diperoleh nilai sig. 0,114 > 0,05. Hal

tersebut menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang bermakna antar perlakuan,

dan menjelaskan bahwa pemberian ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih

dosis I, dosis II, dosis III, dan kontrol positif memberikan efek penurunan kadar

LDL yang sebanding. Dari analisis persentase penurunan LDL dapat diperoleh

gambaran bahwa untuk mendapatkan efek yang lebih besar dibanding dengan

kontrol positif (kolestiramin) dapat dihasilkan dari pemberian ekstrak β -glukan

larut air jamur tiram putih dosis III (480 mg/kgBB). Hasil uji statistik dapat dilihat

pada lampiran 14.

49,11

37,05

40,85

49,47

0

10

20

30

40

50

60

POSITIF DOSIS I DOSIS II DOSIS III

P e r s e n

t a s e

P e n u r u n a n

K a d a r

L D L ( % )

Perlakuan


41/76

32

Gambar 7. Mekanisme Kolestiramin Dalam Menurunkan Kolesterol Totaldan LDL (Lullmann et al . 2000)

Kolesterol merupakan sterol utama dalam tubuh manusia dan komponen

struktural membran sel dan lipoprotein plasma. Kolesterol berasal dari dua

sumber, sumber eksogen dan endogen. Kolesterol eksogen merupakan kolesterol

yang berasal dari makanan dan diabsorbsi di usus. Sedangkan kolesterol endogen

merupakan kolesterol yang dibentuk di hati (Suyatna 2007). LDL merupakan

lipoprotein yang memiliki fungsi mengangkut kolesterol ke jaringan-jaringan

yang membutuhkannya sebagai sumber energi, sebagai komponen membran sel

atau sebagai prekursor metabolit aktif (Almatsier 2003). LDL pengangkut

kolesterol terbesar pada manusia, yaitu 70% (Suyatna 2007).

Kolestiramin sebagai kontrol positif menurunkan kolesterol melalui

mekanisme pengikatan asam empedu di intestinal dan mengekskresikannya

melalui feses. Hal ini meningkatkan pengiriman asam empedu dari hati sebagai

tempat sintesisnya ke intestinal (Malloy dan Kane 2012). Satu gram kolestiramin

dapat mengikat 100 mg asam empedu. Penggunaan kolestiramin jangka panjang

telah terbukti dapat menurunkan hiperkolesterol dan persentase serangan jantung

fatal sekitar 20% (Marks et al. 2000). Sementara ekstrak β -glukan larut air jamur

tiram putih menurunkan kolesterol dan LDL karena dimediasi oleh kemampuan β -


42/76


43/76

34

darah juga mengalami peningkatan kadar kolesterol total dan LDL (Chen dan

Raymond 2008).

Berdasarkan penelitian ini dapat diketahui bahwa ekstrak β-glukan larut air

jamur tiram putih pada dosis 120 mg/kgBB, 240 mg/kgBB, dan 480 mg/kgBB

terbukti memiliki aktivitas antihiperkolesterolemia dengan persentase penurunan

kadar kolesterol total masing-masing sebesar 36,67%, 55,89%, dan 62,83%.

Persentase penurunan kadar LDL masing-masing 37,057%, 40,85%, dan 49,47%.

Dosis II (240 mg/kgBB) merupakan dosis terbaik sebanding dengan kelompok

positif (kolestiramin) dalam menurunkan kadar kolesterol total dengan persentase

penurunan kadar kolesterol total sebesar 62,83%. Dosis III (480 mg/kgBB)

merupakan dosis terbaik sebanding dengan kelompok positif (kolestiramin) dalam

menurunkan kadar LDL dengan persentase penurunan kadar LDL sebesar

49,47%.


44/76

35

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa,

pemberian ekstrak β-glukan larut air jamur tiram putih pada dosis I (120

mg/kgBB), II (240 mg/kgBB), dan III (480 mg/kg BB) terbukti mempunyai

aktivitas menurunkan kolesterol total dan LDL darah hewan uji. Dosis 240

mg/kgBB merupakan dosis terbaik sebanding dengan kelompok positif

(kolestiramin) dalam menurunkan kadar kolesterol total dengan persentase

penurunan kadar kolesterol total sebesar 62,83%. Dosis 480 mg/kgBB merupakandosis terbaik sebanding dengan kelompok positif (kolestiramin) dalam

menurunkan kadar LDL dengan persentase penurunan kadar LDL sebesar

49,47%.

B. Saran

Perlu dilanjutkan penelitian uji toksisitas akut ekstrak β -glukan larut air jamur

tiram putih.


45/76


46/76

37

Departemen Kesehatan RI. 2000. Buku Panduan Teknologi Ekstrak . DirektoratJenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta. Hlm.17, 22, 39.

Dewi CK, Probosari E. 2012. Pengaruh Pemberian Buah Pepaya ( Carica papaya

L.) Terhadap Kadar Kolesterol Total pada Tikus Sprague Dawley denganHiperkolesterolemia. Journal of Nutrition College 1 (1): 93-98.

Dillard A, Matthan NR, Lichtenstein AH. 2010. Use of Hamster as a Model toStudy Diet-Induced Atherosclerosis. Nutrition & Metabolism 7(89): 1-12.

Dwiloka B. 2003. Efek Kolesterolemik Berbagai Telur. Media Gizi dan Keluarga.27(2): 58-65.

Ganong WF. 2008. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 22. Buku KedokteranEGC. Jakarta. Hlm. 317-320.

Ghaly IS, Ahmed ES, Booles HF, Farag IM, Nada SA. 2001. Evaluation ofAntihyperglycemic Action of Oyster Mushroom ( Pleurotus ostreatus ) andIts Effect on DNA Damage, Chromosome Aberrations and SpermAbnormalities in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. Journal GlobalVeterinaria 7 (6): 532-544.

Giri NL. 2008. Potensi Antioksidasi Daun Salam: Kajian in vivo pada TikusHiperkolesterolemia dan Hiperglikemia. Skripsi. Fakultas MIPA InstitutPertanian Bogor. Bogor. Hlm. 11.

Gustaviani R. 2006. Diagnosis dan Klasifikasi Diabetes. Dalam: Sudoyono WA,Setiyohadi B, Alwi I, Simadibrata M, Setiati S. Buku Ajar Ilmu Penyakit

Dalam . Jilid II . Pusat Penerbitan Departemen Ilmu Penyakit Dalam FKUI.Jakarta. Hlm.1857.

Hanafiah KA. 1993. Rancangan Percobaan Teori dan Aplikasi . Edisi 2 . Citra Niaga Rajawali. Jakarta. Hlm. 6-7.

Hartono A. 2006. Terapi Gizi dan Diet Rumah Sakit . Edisi II . EGC. Jakarta. Hlm.147-148.

Hendritomo HI. 2010. Jamur Konsumsi Berkhasiat Obat . Lily Publisher.Yogyakarta. Hlm. 42.

Hidayati F. 2013. Uji Aktivitas Antihiperkolesterol Ekstrak Air β -glukan JamurTiram Putih ( Pleurotus ostreatus (Jacq.) P.Kumm) pada HamsterHiperkolesterolemia. Skripsi . Fakultas MIPA UHAMKA. Jakarta. Hlm.26.


47/76


48/76

39

Rifai N, Warnick GR, Donniniezak HM. 2000. Handbook of Lipoprotein Testing .American Association for Clinical Chemistry. USA.

Rop O, Mleck J, Jurikov T. 2009. Beta-glucan in Higher Fungi and Their HealthEffect. Nutrition Reviews. 67(11):626-627.

Sadgara Y. 2010. Merawat Hamster Si Imut yang Menggemaskan . PT. AgroMedia. Jakarta. Hlm. 5.

Santoso S. 2010. Statistik Parametrik . Elek Media Komputindo. Jakarta. Hlm.104.

Suherman SK. 2007. Insulin dan Antidiabetik Oral. Dalam: Gunawan SG,Setiabudy R, Nafrialdi, Elysabeth. Farmakologi dan Terapi. Edisi V .

Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran UniversitasIndonesia. Jakarta. Hlm. 481-495.

Sukandar EY, Retnosari A, Joseph S. 2008. ISO Farmakoterapi . ISFI. Jakarta.Hlm. 113.

Suyatna FD. 2007. Hipolipidemik. Dalam: Gunawan SG, Setiabudy R, Nafrialdi,Elysabeth. Farmakologi dan Terapi. Edisi V . Departemen Farmakologidan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta. Hlm.373-378.

Wiardani I. 2010. Budidaya Jamur Konsumsi . Lily Publisher. Yogyakarta. Hlm 5-7.

Widyastuti N, Koesnandar. 2008. Shiitake & Jamur Tiram: Penghambat Tumor & Penurun Kolesterol. Agromedia Pustaka. Jakarta. Hlm. 31.

Widyastuti N, Baruji T, Giarni R, Isnawan H, Wahyudi P, Donowati. 2011.Analisa Kandungan Beta-Glukan Larut Air dan Larut Alkali dari TubuhBuah Jamur Tiram (Pleurotus ostreatus) dan Shiitake (Lentinus edodes).

Jurnal Sains dan Teknologi Indonesia . 13: 182-191.

Winarti S. 2010. Makanan Fungsional . Graha Ilmu. Surabaya. Hlm. 184-186.

World Health Organization. 2012. World Health Statistics. Diakses tanggal 20Februari 2014, 18.33 WIB.http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs317/en/

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs317/en/http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs317/en/http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs317/en/


49/76

40

Lampiran 1. Skema Prosedur Penelitian

Rancangan penelitian

Determinasi simplisia

Penyiapan bahan

Ekstraksi β -glukan larutair

Uji antihiperkolesterol

Analisa data

Pengumpulan dan penyediaansimplisiaPenyiapan reagen

Pemeriksaan organoleptisUji kadar air dan kadar abuPerhitungan RendemenIdentifikasi β -glukan

Aklimatisasi hewan cobaPembagian kelompok hewan ujiPenetapan dosisPemberian pakan hiperkolesterolPemberian induksi fruktosa cairPenyiapan bahan ujiPerlakuan terhadap tiap kelompokhewan ujiPengambilan darahPenentuan kadar kolesterol total danLDL

Simplisia jamur tiram putih


50/76

41

Lampiran 2. Skema Ekstraksi β-glukan Larut Air Jamur Tiram Putih

Jamur tiram putih kering

Serbuk jamur tiram putih

Ditambahkan akuades 3x volume,dipanaskan pada suhu 100 0C selama

3 jam, saring

Ampas Filtrat

Ditambahkan etanol 80 % 3xvolume, diamkan suhu 4 OC, 24 jam

Supernatan Residu filtrat

Sentrifus(4000 rpm, 15 menit)

EndapanSupernatan

Oven

Ekstrak kering


51/76

42

Lampiran 3. Skema Pembagian Kelompok Hewan Uji Hamster Syrian

Kelompok I (kontrol normal)Tidak mendapat perlakuan zat uji, hanyamendapat makanan standar, dan minum.

Kelompok II (kontrol positif)Kelompok yang diberi induksi fruktosa,

pakan hiperkolesterol dan diberi obat pembanding antihiperkolesterol

kolestiramin

Kelompok III (kontrol negatif)Kelompok yang diberi induksi fruktosa,

pakan hiperkolesterol

Kelompok IV (Dosis I)Kelompok yang diberi induksi fruktosa,

pakan hiperkolesterol dan ekstrak β -glukandosis I (120 mg/kg BB)

Kelompok V (Dosis II)Kelompok yang diberi induksi fruktosa,

pakan hiperkolesterol dan ekstrak β -glukandosis II (240 mg/kg BB)

Kelompok VI (Dosis III)Kelompok yang diberi induksi fruktosa,

pakan hiperkolesterol dan ekstrak β -glukandosis III (480 mg/kg BB)

24 ekorhamster

s irian

@ 4ekor


52/76

43

Lampiran 4. Pembuatan Larutan Uji

1. Larutan ekstrak β -glukan larut air jamur tiram putih

Pembuatan larutan uji yang dibuat adalah ekstrak dilakukan setiap hari untuk

menjamin larutan ekstrak dalam keadaan baik.

Dosis 1 = 120 mg/kgBB

Untuk membuat larutan induk dengan dosis terendah yaitu dosis 1 (120

mg/kgBB = 18 mg/150 g BB) ekstrak ditimbang 200 mg dan dilarutkan

dengan suspensi Na CMC hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi

20 mg/ml larutan. Banyaknya larutan ekstrak yang diberikan dari larutan


Volume (ml) = ℎ ( )150

x 1820 /


Untuk membuat larutan induk dosis 2 (240 mg/kgBB = 36 mg/150 g BB)

ekstrak ditimbang 400 mg dan dilarutkan dengan suspensi Na CMC

hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 40 mg/ml larutan.

Banyaknya larutan ekstrak yang diberikan dari larutan induk pada

hamster per 150 g BB:


150 x

36

40 /


Untuk membuat larutan induk dosis tertinggi yaitu dosis 3 (480 mg/kgBB

= 72 mg/150 g BB) ekstrak ditimbang 800 mg dan dilarutkan dengan

suspensi Na CMC hingga 10 ml, sehingga diperoleh konsentrasi 80

mg/ml larutan. Banyaknya larutan ekstrak yang diberikan dari larutan



150 x

72

80 /


53/76

44

2. Larutan obat pembanding kolesteramin

Konsentrasi larutan induk yang dibuat = 100 mg/ml

Volume suspensi yang dibuat per hari = 10 ml

Berat kolesteramin yang ditimbang = 10 ml x 100 mg/ml

= 1000 mg

Serbuk kolesteramin yang ditimbang 1000 mg dilarutkan dalam suspensi Na-

CMC hingga 10 ml. Dari 10 ml larutan diberikan volume untuk masing-

masing hamster :

Volume larutan (ml) =Berat hamster gram

150 gram BB x

74 mg

100mg/ml

=Berat hamster gram

150 gram BB x 0,74 ml


54/76

45

Lampiran 5. Skema Pengambilan Serum Darah Hamster

Hewan Uji

Dipuasakan ± 12 jam

Dibius dengan isofluran

Darah diambil melalui sinus orbitalis

Dimasukkan ke dalam mikrotube

Sentrifugasi pada 4000 rpm selama 15 menit

Serum darah


55/76

46

Lampiran 6. Prosedur Pengukuran Kadar Kolesterol Total

10 µl serum

1000 µl reagen enzim (kit)

Vortex

ditambah

Diamkan selama 10 menit, suhu kamar 20-25 C

Baca kadar denganFotometer Klinikal

Varta 506


56/76

47

Lampiran 7. Prosedur Pengukuran Kadar LDL

100 µl serum

1000 µl reagen LDL presipitan

Vortex

ditambah

Baca kadar denganFotometer Klinikal

Varta 506

Sentrifuse , 4000 rpm 15 menit

Supernatan 100 µl

1000 µl reagen enzim (kit)+

Diamkan ± 1 jam


57/76

48

Lampiran 8. Surat Determinasi Jamur Tiram Putih


58/76

49

Lampiran 9. Surat Keterangan Hamster Syrian


59/76

50

Lampiran 10. Perhitungan Susut Pengeringan, Kadar Air, Kadar Abu, danRendemen dari Ekstrak β-Glukan Larut Air Jamur TiramPutih

A. Susut PengeringanPerhitungan Susut PengeringanBerat botol timbang kosong (a) = 20,1027 gBerat botol timbang + 2 g ekstrak (b) = 22,1022 gBerat botol timbang + ekstrak akhir/konstan (c) = 21,9949 g

Susut Pengeringan =−

− x 100%

= (22,1022 − 21,9949)(22,1022 − 20,1027)

x 100%

=0,1073

1,9995 x 100%

= 5,37%

B. Kadar Air

No Berat sampel (gram) % DC Kadar air %

1 1,804 94,96 5,04

2 1,802 95,12 4,88

3 1,814 94,76 5,24

C. Kadar Abu

No. Berat krusibelkosong (gram)

Berat krusibel +ekstrak kering

(gram) W1

Berat krusibel +ekstrak keringkonstan (gram)

W2

Kadarabu %

1 33,0482 32,9367 34,876 33,0452 5,6773

3 33,0468Perhitungan :

% kadar abu = ℎ

X 100%

=( 2− 0)

( 1− 0)) X 100%

=(33,0468 − 32,9367)

(34,876 − 32,9367) X 100%

=0,1101

1,9393 X 100%

= 5,6773%


60/76

51

D. Rendemen

Serbuk simplisia kering = 1000 gram

Ekstrak kering = 85,56 gram% Rendemen =

X 100%

=85,56

1000 X 100%

= 8,556 %


61/76

52

Lampiran 11. Spektrum β -glukan dengan Metode KCKT

A. Spektrum β -glukan Standar


62/76

53

B. Spektrum β -glukan Larut Air Jamur Tiram Putih


63/76

54

Lampiran 12. Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total (KT), LDL, Glukosa Awal dan Kadar Kolesterol Total, LDL AkhirHamster Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia yang Diberi Bahan Uji

KELOMPOKKT LDL GLUKOSA KT LDL

AWAL RERATA SD AWAL RERATA SD AWAL RERATA SD AKHIR RERATA SD AKHIR RERATA SD

NORMAL

1 67,11

65,19 2,07

49,94

51,04 1,25

114,53

110,91 9,78

61,72

65,94 3,45

51,32

53,56 3,87264,88 52,71 97,21 64,84 53,01

3 66,36 51,29 111,73 67,43 50,73

4 62,41 50,23 120,17 69,77 59,19

POSITIF

1 390,87

376,20 21,62

211,08

223,37 10,42

194,37

188,35 5,26

180,93

185,81 3,89

102,31

114,08 12,752359,43 235,21 188,33 189,6 121,91

3 398,52 227,79 189,17 184,52 127,914 355,98 219,43 181,55 188,21 104,22

NEGATIF

1 360,36

369,50 6,92

153,43

168,46 23,71

190,96

181,20 8,97

362,36

322,81 20,89

163,51

169,14 35,142376,17 200,48 185,65 321,95 206,76

3 368,21 147,89 177,67 344,14 137,164 373,26 172,04 170,52 - -

DOSIS 1

1 311,93

318,53 9,21

138,16

157,30 14,72

170,21

177,73 5,69

192,18

199,44 6,53

92,74

96,94 10,392309,82 173,09 18

UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β-GLUKAN LARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH (Pleurotus ostreatus...

Documents

Transcript of UJI AKTIVITAS ANTIHIPERKOLESTEROL EKSTRAK β-GLUKAN LARUT AIR JAMUR TIRAM PUTIH (Pleurotus ostreatus...