Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima...

7
1) Τι μεταβάλλει περισσότερο την γονιδιακή έκφραση ενός ευκαρυωτικού κυττάρου a) Μια επιβλαβής μετάλλαξη σε έναν μεταγραφικό παράγοντα Χ που συμμετέχει ενεργά στην μεταγραφή του κύττάρου b) Μια επιβλαβή μετάλλαξη στον υποκινητή του γονιδίου Ψ που ελέγχει την σύνθεση μιας δομικής πρωτείνης (π.χ Ακτίνη) που ρυθμίζεται μεταγραφικά απο τον μεταγραφικό παράγοντα Χ Δικαιολογίστε την απαντησή σας 2) Οι σωματικές μεταλλάξεις στα εσώνια ενός ογκοκατασταλτικού γονιδίου έχουν βιολογική σημασία; 3) Υπάρχουν μεταλλάξεις στην κωδική περιοχή ενός γονιδίου που να μην οδηγούν σε αμινοξική αλλαγή στην κςδικοποιούσα πρωτείνη; 4) Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της χρήσης τυχαίων εξανουκλεοτιδίων στην αντίστροφη μεταγραφή για την σύνθεση cDNA μορίων έναντι της χρήσης oligodT εκκινητή 5) Σε έναν φορέα κλωνοποίησης, πραγματοποιείται πέψη με περιοριστικές ενδονουκλεάσες α,β που βρίσκονται μέσα στο γονίδιο ανθεκτικότητας για ampicillin. Ο ίδιος φορέας φέρει επίσης ενα δεύτερο γονίδιο ανθεκτικότητας στο αντιβιοτικό Kanamycin. Με τι αντιβιοτικό η αντιβιοτικά θα επιλέγατε τους θετικούς κλώνους κατά την κλωνοποίηση. 6) Απο τον πυρήνα ενός παγκρεατικού κυττἀρου απομονώνουμε το mRNA από την μεταγραφή του γονιδίου της Ινσουλίνης και το τοποθετούμε σε εκχύλισμα βακτηριακού κυττάρου για μετάφραση. Θα παραχθεί ινσουλίνη

Transcript of Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima...

Page 1: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

1) Τι μεταβάλλει περισσότερο την γονιδιακή έκφραση ενός ευκαρυωτικούκυττάρου

a) Μια επιβλαβής μετάλλαξη σε έναν μεταγραφικό παράγοντα Χ που συμμετέχει ενεργά στην μεταγραφή του κύττάρου

b) Μια επιβλαβή μετάλλαξη στον υποκινητή του γονιδίουΨ που ελέγχει ( . ) την σύνθεση μιας δομικής πρωτείνης π χ Ακτίνη που ρυθμίζεται

μεταγραφικά απο τον μεταγραφικό παράγοντα Χ

Δικαιολογίστε την απαντησή σας

2) Οι σωματικές μεταλλάξεις στα εσώνια ενός ογκοκατασταλτικού ; γονιδίου έχουν βιολογική σημασία

3) Υπάρχουν μεταλλάξεις στην κωδική περιοχή ενός γονιδίου που να μην ;οδηγούν σε αμινοξική αλλαγή στην κςδικοποιούσα πρωτείνη

4) Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της χρήσης τυχαίων εξανουκλεοτιδίων στην αντίστροφη μεταγραφή για την σύνθεση cDNA

μορίων έναντι της χρήσης oligodT εκκινητή

5) , Σε έναν φορέα κλωνοποίησης πραγματοποιείται πέψη με περιοριστικές , ενδονουκλεάσες α β που βρίσκονται μέσα στο γονίδιο ανθεκτικότητας

ampicillin. για Ο ίδιος φορέας φέρει επίσης ενα δεύτερο γονίδιο ανθεκτικότητας στο αντιβιοτικό Kanamycin. Με τι αντιβιοτικό η

αντιβιοτικά θα επιλέγατε τους θετικούς κλώνους κατά την .κλωνοποίηση

6) Απο τον πυρήνα ενός παγκρεατικού κυττἀρου απομονώνουμε το mRNA από την μεταγραφή του γονιδίου της Ινσουλίνης και το τοποθετούμε σε

. εκχύλισμα βακτηριακού κυττάρου για μετάφραση Θα παραχθεί ινσουλίνη

7) Διαφορές στην γονιδιακή ρύθμιση μεταξύ ευκαρυωτικών και προκαρυςτικών

8) Ποιά τα διαφορετικά είδη RNA που παράγονται σε ένα ευκαρυωτικό .κύτταρο

9) Πως ελέγχουμε την ποιότητα ολικού RNA που απομονώσαμε απο ευκαρυωτικά κύτταρα με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης

Page 2: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

10) Γιατί επιλέγουμε οι εκκινητές που σχεδιάζουμε για real time PCR η RT-PCR να υβριδοποιούνται σε διαφορετικά εξώνια

11) Ηπέψη ενός γραμμικού κομματιού DNA :δίνει τα ακόλουθα μεγέθη

XbaI 2 24,0 24,5XhoI 2 15,0 33,5XbaI+XhoI 3 9,0 15,0 24,5

Να δώσετε την δομή του γραμμικού DNA με βάσει τις θέσεις αναγνώρισης XbaI των περιοριστικὠν ενδονουκλεάσων και XhoI

12) , Στον παρακάτω γονιδιακό χάρτη με ποιό συνδιασμό γονιδίων θακλωνοποιούσατε:

13 Το γονίδιο Β13 Το γονίδιο D

13) Ποιό το πλεονέκτημα της ύπαρξης πολλαπλών θέσεων κλωνοποίησης (Multiple Cloning Sites, MCS) μέσα στο LacZ γονίδιο ενος πλασμιδιακού φορέα

;κλωνοποίησης

Page 3: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

14) PCR;Ποια είναι τα συστατικά μιας τυπικής αντίδρασης

15) Σε ένα πρόγραμμα αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης ο χρόνος extension (72ο) 1 10είναι λεπτό και . δευτερόλεπτα Τι συμπέρασμα μπορείτε να βγάλετε για το

;μέγεθος του παραγόμενου προϊόντος

16) PCR 800Σε μια αντίδραση περιμένουμε ένα προϊον . βάσεων Στο τέλος της αντίδρασης και αφού αναλύσουμε

το προϊόν σε πύκτωμα αγαρόζης διαπιστώνουμε την 3 700,900,600. ύπαρξη προϊόντων σε Τι θα αλλάζατε στην

PCR . αντίδραση για να έχετε το επιθυμητό αποτέλεσμα

17) Γιατί οι πλασμιδιακοί φορείς που χρησιμοποιούνται στην κλωνοποίηση περιέχουν κάποιο γονίδιο

. ανθεκτικότητας σε αντιβιοτικό Βακτηριακές αποικίες που προκύπτουν από πείραμα κλωνοποίησης σε κάποιο στερεό

θρεπτικό υλικό που περιέχει αντιβιοτικό είναι σίγουρο ότι DNAπεριέχουν το ανασυνδιασμένο πλασμίδιο με το

;ένθεσης

Page 4: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

18) DNA and Στο ηλεκτρικό πεδίο πως κινείται το δίκλωνοRNA.

19) Έστω ότι θέλουμε να κλωνοποιήσουμε ένα γονίδιο με EcoRI BamH1τη χρήση περιοριστικών ενδονουκλεασών και . 1200σε καποιο πλασμιδιακό φορέα Το γονίδιο έχει μήκος

βάσεις και στα άκρα του υπάρχουν θέσεις αναγνώρισης EcoRI BamH1. για την και Μια ακόμη θέση αναγνώρισης για EcoR . την Ι υπάρχει στην μέση του γονιδίου Είναι σωστό να

προχωρήσουμε στην κλωνοποίηση του συγκεκριμένου BamH1 EcoRI.γονιδίου με την χρήση της και της

.Δικαιολογήστε

20) RT-PCR Έστω ότι θέλουμε να μελετήσουμε με την την . έκφραση του μεταγράφου της μυωσίνης Το συγκεκριμένο

6 Kb. μεράγραφο έχει μήκος Με δεδομένο ότι για το βήμα της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης ο ένας από τους 5’ δυο εκκινητές υβριδοποιείται στο άκρο του μεταγράφου

θα επιλέγατε να πραγματοποιήσεται την αντίδραση της αντίστροφης μεταγραφάσης με την χρήση ολιγοντιτη

6 .πραιμέρς ή με τη χρήση νουκλεοτιδίων

21) RNA ,Γιατί η απομόνωση του από ένα ιστό ή κύτταρα θεωρείται δυσκολότερη τεχνικά από την αντίστοιχη

DNA.απομόνωση

22) DNA Πως ελέγχουμε την ποιότητα γενομικού με την ;χρήση περιοριστικών ενδονουκλεασών

23) PCR , Σε μια στην κλινική διαγνωστική πολλές φορές χρησιμοποιούμε ένα θετικό κοντρολ και αρνητικό

. κοντρολμαζι με το υπο εξέταση δείγματα Τι δείγματα ;είναι αυτά και ποιο το νοημά της χρήσης τους

Page 5: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

24) PCR Ένας ερευνητής πραγματοποιεί μια αντίδραση με . δυο δείγματα Α και Β Χρησιμοποιείται το ιδιο ζευγάρι

. DNA, εκκινητών το δείγμα Α περιέχει γενομικό ενώ το cDNA. δείγμα Β περιέχει Ο ερευνητής ανέλυσε τα δείγματα

( ) τα τρέχει σε ένα πύκτωμα αγαρόζης και διαπίστωσαι ότι 1200 , στο δείγμα Α υπήρχε ως προϊόν μια ζώνη βάσεων ενώ 700 . στο Β μια ζώνη βάσεων Τι συμπεράσματα μπορούν να

.προκύψουν για την δομή του υπο μελέτη γονίδιου

25) PCR Ένας ερευνητής πραγματοποίησε αντίδραση σε cDNA , ένα δείγμα με ένα ζευγάρι εκκινητών το οποίο είναι

e ιδικό για ένα κομμάτι της κωδικοποιούσας περιοχής του . PCR ευκαρυωτικού γονιδίου Α Η ανάλυση του προϊόντος

, σε πύκτωμα αγαρόζης έδειξε την παρουσία δυο 1200 700.κομματιών και

Ένας ερευνητής κόβει τις ζώνες από το πύκτωμα αγαρόζης 12 DNA του ερευνητή της και κάνει απομόνωση στα

προϊόντα με σκοπό να ελέγξει το σενάριο εναλλακτικής . ωρίμανσης Ποια μεθοδολογία του προτείνουμε να

ακολουθήσει

26) Σε μια καλλιέργεια ευκαρυωτικών κυττάρων θέλουμε x να ελέγξουμε αν το φάρμακο καταστέλλει την μεταγραφή

. - του γονιδίου Α προτείνεται ένα πείραμα μεθοδολογία με την οποία θα μπορούσαμε να ελέγξουμε την επίδραση του

x .φαρμάκου στη έκφραση του γονιδίου

27) Η αλληλουχία αμινοξέων μεταξύ μιας πρωτείνης από ζυμομύκητες και μιας ανθρώπινης που επιτελούν την ίδια

60%. λειτουργία βρέθηκαν να έχουν ομοιότητα κατά Όμως τα αντίστοιχα DNA 45% . είναι μόνο κατά όμοια Πώς

γίνεται να υπάρχει αυτή η διαφορά σε ποσοστό ; ομοιότητας

Page 6: Technological Educational Institute of Athensusers.teiath.gr/amavridou/9277/1336/Mathima 10&11.docx · Web viewΣε μια PCR στην κλινική διαγνωστική, πολλές

28) Ας υποθέσουμε οτι θέλετε να σημάνετε ραδιενεργά το DNA αλλά όχι το RNA σε βακτηριακά κύτταρα που

. πολλαπλασιάζονται και αναπτύσσονται Τι ραδιενεργό ;μόριο θα προσθέτατε στο υλικό καλλιέργειας

29) Ποιά η χρησιμότητα χρήσης αλκαλικής φωσφατάσης πριν την αντίδραση λιγάσης κατά την πορεία

. κλωνοποίησης Εξηγείστε

30) Ποιό το πλεονέκτημα της real time RT-PCR έναντι της κλασσικής RT-PCR