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HPLC-RMN/ LC-RMN

1A RMN uma tcnica de espectroscopia nuclear

Matria2

Comprimento de onda ()CurtoEnergiaLongoEnergia

Espectro de Radiao Eletromagntica3C126O168S3216Grandeza fsica envolvida em RMNH11C136SpinNO POSSUE SPIN

NO APRESENTAM MOMENTO ANGULAR ASSOCIADO

NO EXIBEM PROPRIEDADES MAGNTICAS

AUSNCIA DE SINAIS DETECTVEIS POR RMN

NO SO APLICVEIS ANLISES DE RMN

4Princpio

Ncleos magneticamente ativos so expostos um campo magntico externo;Absorvem energia e saltam para nveis energticos superiores;Ao retornarem, liberam energia, que ser processada por um computador e interpretada na forma de um grfico.

5No Espectro de RMN

Campo baixoCampo altoOnda pulsadaOnda Contnua (RMN CW)RMN7RMN no Domnio de Tempo (RMN-DT)

Utilizam ms permanentes de baixo campo magntico (100 MHz), mais homogneos e estveis.Alta resoluo

Intensidade x Frequncia

Onda pulsadaPrincipal vantagem: alta razo sinal/rudo para um mesmo tempo de medida

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Interface LC-RMN interface for on-flow measuremetsInterface with valve for stopped-flow measurementsInterface with storage loops for stopped flow measurementsSolid phase extration unit for LC-SPE-RMN9

Evaporao do solventeDissoluo do composto em solvente delteradoTubo de RMN(5mm)Equipamento de RMNModo de Operao: Stopped Flow 10Modo de Operao: Continuous - Flow Pr-requisitos

Instrumentao do HPLC;Instrumentao da RMN;Sonda de fluxo contnuo;Vlvula instalada antes da sonda para registrar tanto o espectro no modo stopped-flow quanto continuous flow.Uso de solventes deuterados j na fase de separao por HPLC

11LC-RMNTcnica hifenada;Fornece informaes estruturais da molcula;Tcnica com baixa sensibilidade;Alto custo;Condies de fase reversa

Mtodos de supresso de solvente12Cuidados geraisAmostras devem ser solveis em solventes deuterados

Ex. CDCl3,DMSO-d6,MeOH-d4,MeCN-d3,acetona-d6,benzeno-d6,D2O.

Quantidade ideal de amostra

RMN de H 5-10 mg(amostras muito concentradas alargam as linhas do espectro)

Observaes:

As amostras devem ser filtradas, pois a presena de partculas insolveis pode prejudicar o ajuste de homogeneidade do campo magntico.

Transferir a soluo para um tudo de RMN de 5 mm limpo, seco e isento de trincas.

Aps a anlise, a amostra deve ser imediatamente retirada do tubo de RMN, pois ela poder ficar parcialmente impregnada em sua parede, tornando com o tempo inadequado para anlise de RMN.

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14Condies CromatogrficasColuna C18 250 mm x 4,6 mm

Fase mvel : D2O com 1% cido Triclorofluoractico 80:20 Acetonitrila

Fluxo 1 mL/min

UV 254 nm

HPLC acoplado a RMN stopped-flow

Amostra um extrato metanlico diludo em D2O

15Standard20-hydroxyecdysone2-deoxy-20-hydroxyecdysone

16Resultado Cromatogrfico

17Ecdisterides presentes no extrato de Silene otites

(A) 20-hydroxyecdysone(B) 2-deoxy-20-hydroxyecdysone (C) 2-deoxyecdysone 18Estruturas Qumicas

(A) 20-hydroxyecdysoneB) 2-deoxy-20-hydroxyecdysone (C) 2-deoxyecdysone 19Concluso Estes resultados demonstram claramente que o HPLC-RMN eficientemente utilizvel para a identificao dos ecdisterides presentes neste extrato parcialmente purificado atravs da separao realizada no HPLC deSileneotite.20RefernciasALBERT, KLAUS. Liquid chromatography-nuclear magnetic resonance spectroscopy. Jounal of Chromatography A, v. 856, p. 199-211, 1999.LUZYANIN, K.; ABRANTES, M. Ressonncia Magntica Nuclear - Ferramenta verstil em Qumica Farmacutica e Imagiologia Mdica. Qumica, v. 117, p. 25-20, 2010.PATEL, K. N.; PATEL, J. K.; PATEL, M. P. RAJPUT, G. C.; PATEL, H.Introduction to hyphenated techniques and their application in pharmacy. Pharmaceutical Methods., v. 1, n. 1, p. 2-13, 2010.SARKER, S. D.; NAHAR, L. Hyphenated Techiques. In: SARKER, S. D.; LATIF, Z.; GRAY, A.Natural Products Isolation.2. ed. Totowa, New Jersey: Humana Press Inc., 2006, p.240-244.SNYDER, L. R.; KIRKLAND, J. J.; DOLAN, J. W. Introduction Modern Liquid Chromatography. 3.ed.Hoboken, New Jersey.John Wiley & Sons, Inc., 2010, p.192-193.TOKUNAGA, T; OKAMOTO, M. Recent Progress in LC-NMR.Sumitomo Kagaku, v.2, p. 1-10 2010.WILSON, I. D.; MORGAN, E. D.; LAFONT, R.; WRIGHT, B. Hight-performance liquid chromatography coupled to nuclear magnetic resonance spectroscopy: Application to the ecdysteroids of Silene Oyite. Journal of Chromatography A, v. 799, p. 333-336, 1998.

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