practica 7 Poder reductor, formaci³n de osazonas y s­ntesis de pentaacetato de...

practica 7 Poder reductor, formaci³n de osazonas y s­ntesis de pentaacetato de ±²-D-Glucosa
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Practica VIIPoder reductor, formacin de osazonas y sntesis de pentaacetato de alfa-beta-D-Glucosa.

Integrantes del equipo 3.QBPIntroduccin.Los carbohidratos o glcidos son las biomolculas ms abundantes en la naturaleza. Cada ao, el proceso de fotosntesis de plantas y algas, convierte ms de 100 000 millones de toneladas mtricas de CO2 y H2O en celulosa y otros productos vegetales. Los glcidos pueden ser monosacridos, oligosacridos (disacridos, trisacridos, etc.) y polisacridos.

Antecedentes.Los disacridos y los polisacridos se pueden hidrolizar para producir monosacridos que reaccionan de acuerdo con los grupos hidroxilo y carbonilo que poseen. Por ejemplo, tienen la capacidad de reducir algunos compuestos en medio alcalino, por lo que se han denominado azcares reductores, contienen un carbono anomrico libre, es decir, que no forma parte del enlace glucosdico, y dan resultados positivos con los reactivos de Benedict o Fehling. Los carbohidratos no reductores son aquellos que no contienen un carbono anomrico libre y, por lo tanto, no dan pruebas positivas con dichos reactivos.

Objetivos.Generales.Evidenciar el poder reductor de algunos carbohidratos.Destacar la importancia de la formacin de ozasonas para la identificacin de azucares.Particulares.Observar la base de los mecanismos de reaccin.

Parte experimental.Poder reductor.Colocar 6 tubos de ensayo en una gradilla; a cada tubo agregar 2 mL de solucin de Fehling recientemente preparada (1 mL de solucin A y 1 mL de solucin B) y 5 mL de solucin al 10% de cada uno de los azcares a ensayar. Agitar cada tubo y colocarlos en un bao mara con agua hirviendo durante dos minutos. Observar y anotar los resultados.

Formacin de osazonas (glucosa y fructosa).Colocar en un tubo de ensayo 5 mL de solucin al 2% del azcar a ensayar, agregar 3 mL del reactivo de fenilhidrazina recientemente preparada y 0.2 mL de solucin saturada de bisulfito de sodio; mezclar, calentar en un bao mara y anotar el tiempo en que se forman las osazonas. Continuar el calentamiento por 15 minutos ms y enfriar lentamente; filtrar y lavar el precipitado con agua fra, tomar con un agitador una pequea muestra y colocarla sobre un portaobjetos; observar al microscopio y dibujar los cristales de las osazonas.

Formacin de osazonas de disacridos (sacarosa y lactosa). Preparar las osazonas de los disacridos, siguiendo la tcnica empleada para monosacridos; anotar el tiempo en que se colocan los tubos en el bao mara y tomar muestras de las mezclas de reaccin a los 15, 20 y 30 minutos. Enfriar las muestras as como la mezcla de reaccin, filtrar y observar al micros

Formacin de osazonas de polisacridos. Colocar en un tubo de ensayo 5 mL de solucin de almidn al 2% y proceder como en la tcnica para monosacridos. copio las osazonas formadas.

Formacin de osazonas de disacridos y polisacridos hidrolizados (sacarosa y almidn). Formacin de osazonas de los productos de hidrlisis. Colocar 5 mL de los hidrolizados en tubos de ensayo y proceder como en la tcnica para monosacridos.

Pentaacetato de -D-glucosa. En un mortero mezclar 2.0 g (0.01 moles) de glucosa anhidra y 1g (0.01 moles) de acetato de sodio anhidro; pasar la mezcla a un matraz bola de 50 mL, agregar anhdrido; Continuar la agitacin hasta que el slido formado quede finamente dividido y dejar reposar durante 30 minutos agitando ocasionalmente. Filtrar el slido y recristalizar de agua caliente, utilizando carbn activado para decolorar.

Resultados.Poder reductor.CarbohidratoResultado

SacarosaAzul Fuerte (Negativo)

LactosaNaranja Ladrillo (Positivo)

GlucosaNaranja Ladrillo (Positivo)

FructosaNaranja Ladrillo (Positivo)

AlmidnAzul Cielo (Negativo)

Formacin de osazonas.CarbohidratoResultadoTiempo

Glucosa (Monosacarido)Positivo (P.P.* Amarillo)15:00 min

Fructosa (Monosacarido)Positivo (P.P.* Amarillo)10:50 min

Sacarosa (Disacarido)Negativo--

Lactosa (Disacarido)Negativo--

Almidn (Polisacarido)Negativo--

Sacarosa H* (Disacarido)Positivo (P.P.* Amarillo)20:00 min

Almidn H* (Polisacarido)Negativo--

H*: Hidrolizado, P.P.*: Precipitado, Maltosa: Sin reactivo.

Pentaacetato de -D-glucosa.Punto de fusin: 146 C

Discusin. Poder reductor.Si se calienta una suspensin de hidrxido de cobre en solucin alcalina, se forma xido cprico de color negro:Sin embargo, en presencia de sustancias reductoras, se precipita xido cuproso de coloracin parda-orn:Los hidratos de carbono que poseen un aldehido libre o potencialmente libre o un grupo cetnico tienen propiedades reductoras en solucin alcalina., Adems, los monosacridos actan como agentes reductores en soluciones dbilmente cidas. La formacin de un precipitado rojo y la decoloracin de la solucin indican prueba positiva para azcar reductor.

Formacin de osazonas.

Los compuestos que contienen el grupo COCHOH forman osazonas cristalinas con fenilhidrazina. Los cristales de osazona tienen forma y puntos de fusin caractersticos lo cual ayuda a la identificacin de los azcares reductores. Otros datos que pueden ayudar son el tiempo de formacin de los cristales y precipitacin de la osazona en fro o en caliente.La fenilhidrazina reacciona con el grupo carbonilo de los azcares dando la fenilhidrazona que a su vez reacciona con dos molculas ms de fenilhidrazina para formar la osazona. Tanto la glucosa, como la fructosa y la manosa forman la misma osazona, puesto que la configuracin de los tomos de carbono 3, 4, 5 y 6 es la misma para los tres azcares. Ejemplo de la glucosa, fructosa y sacarosa hidrolizada (Imgenes a la derecha; se observa el esquema y la foto tomada).

Conclusiones.Los distintos resultados de las pruebas nos ayudan a identificar los diferentes carbohidratos dentro de un compuesto y/o sustanciaBibliografa.I. Len. F., (2000). Bioqumica experimental. Revert, Espaa: Pg(s) 175-181