POTENSI FITOESTROGEN KEDELAI (Glycine max SEBAGAI...

i

POTENSI FITOESTROGEN KEDELAI (Glycine max)

SEBAGAI KANDIDAT KONTRASEPSI WANITA

TERHADAP EKSPRESI RESEPTOR ESTROGEN

β DAN HISTOLOGI UTERUS PADA TIKUS

PUTIH BETINA (Rattus norvegicus)

SKRIPSI

Oleh :

ARNES WIDYA ANGGITA

135130101111010

PENDIDIKAN DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2017

ii






SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan

Oleh :

ARNES WIDYA ANGGITA

135130101111010

PENDIDIKAN DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2017

iii

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI






Oleh :

ARNES WIDYA ANGGITA

135130101111010

Setelah dipertahankan di depan Majelis Penguji

pada tanggal 18 September 2017

dan dinyatakan memenuhi syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan

Pembimbing I Pembimbing II

Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES

NIP. 19600903 198802 2 001 drh. Viski Fitri Hendrawan, M. Vet

NIP. 19880518 201504 1 003

Prof. Dr. Aulanni’am,drh., DES

NIP. 19600903 198802 2 001

Mengetahui,

Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

iv

LEMBAR PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama : Arnes Widya Anggita

NIM : 135130101111010

Program Studi : Pendidikan Dokter Hewan

Penulis Skripsi berjudul :

Potensi Fitoestrogen Kedelai (Glycine max) sebagai Kandidat

Kontrasepsi Wanita terhadap Ekspresi Reseptor Estrogen β dan

Histologi Uterus pada Tikus Putih Betina (Rattus norvegicus).

Dengan ini menyatakan bahwa :

1. Isi dari skripsi yang saya buat adalah benar-benar karya saya sendiri dan tidak

menjiplak karya orang lain, selain nama- nama yang termaktub di isi dan tertulis

di daftar pustaka dalam skripsi ini.

2. Apabila dikemudian hari ternyata skripsi yang saya tulis terbukti hasil jiplakan,

maka saya akan bersedia menanggung segala resiko yang akan saya terima.

Demikian pernyataan ini dibuat dengan segala kesadaran.

Malang, 18 September 2017

Yang menyatakan,

( Arnes Widya Anggita)

NIM. 135130101111010

v

Potensi Fitoestrogen Kedelai ( Glycine max ) sebagai Kandidat Kontrasepsi

Wanita terhadap Ekspresi Reseptor Estrogen β dan

Histologi Uterus Pada Tikus Putih Betina

(Rattus norvegicus)

ABSTRAK

Kontrasepsi adalah upaya untuk mencegah terjadinya kehamilan dengan

menggunakan alat atau obat-obatan. Alat kontrasepsi yang tersedia masih banyak

dilaporkan memiliki efek samping. Berdasarkan hal tersebut, penelitian ini

menggunakan fitoestrogen dalam ekstrak kedelai (Glycine max). Fitoestogen

merupakan senyawa yang memiliki sifat sama dengan hormon estrogen atau dapat

berinteraksi dengan reseptor estrogen. Fitoestrogen akan menyebabkan estrogen

endogen mengalami hambatan ikatan dengan reseptor estrogen. Penelitian ini

bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian fitoestrogen kedelai (Glycine

max) terhadap ekspresi reseptor estrogen β dan gambaran histologi uterus.

Penelitian ini dilakukan dengan dosis kronis 40 hari dengan diberikan ekstrak

ethanol kedelai peroral. Hewan coba tikus dibagi menjadi empat kelompok yaitu

kelompok kontrol (K), kelompok perlakuan dosis 25 mg/ekor (P1), perlakuan

dosis 50 mg/ekor (P2), dan perlakuan dosis 75 mg/ekor (P3). Hasil penelitian

menunjukkan bahwa pemberian fitoestrogen kedelai menunjukkan peningkatan

ekspresi ER β pada pemberian dosis 75 mg/ekor secara signifikan (p

vi

The Potency of Phytoestrogen (Glycine max) as Women Contraceptive

Candidate towards Expression of Estrogen Receptor β

and Uterine Histology in Female Rats

(Rattus Norvegicus)

ABSTRACT

Contraception is a method used to prevent pregnancy in many ways.

Available contraceptives are considerably reported to have side effects. Based

upon these, this study used extracts of phytoestrogens in soy

(Glycine max). Phytoestrogens is a compound that has similar nature to estrogen

or can interact with the estrogen receptor. Phytoestrogens can lead endogenous

estrogens to have obstruction to bonding with estrogen receptors. This study

investigated the effect of soy phytoestrogens (Glycine max) on the expression of

estrogen receptor β and uterine histology. This research was conducted with

chronic doses within 40 days with ethanol extract of soybean given orally. Rats

were divided into four groups: control group (K), the treatment group with 25

mg/head dose (P1), the treatment group with 50 mg/head dose (P2), and the

treatment group with 75 mg/head dose (P3). The results showed that

administration of soy phytoestrogens significantly (p

vii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis haturkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa karena atas

limpahan rahmat dan pertolongan-Nya lah sehingga penulis mampu

menyelesaikan skripsi yang berjudul “Potensi Fitoestrogen Kedelai (Glycine max)

sebagai Kandidat Kontrasepsi Wanita Terhadap Ekspresi Reseptor Estrogen β dan

Histologi Uterus Pada Tikus Putih Betina (Rattus norvegicus)” dengan lancar.

Skripsi ini disusun guna melakukan tugas akhir sebagai salah satu syarat

memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan.

Dalam penyusunan skripsi ini tidak lepas akan adanya bantuan serta

dukungan moril dari beberapa pihak. Pada kesempatan ini penulis berterima kasih

kepada yang terhormat :

1. Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES selaku Dekan Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya serta dosen pembimbing I yang telah memberikan

bimbingan, saran, fasilitas, kesabaran serta waktu yang telah diberikan selama

ini.

2. drh. Viski Fitri Hendrawan M. Vet selaku dosen pembimbing II atas

bimbingan, saran, kesabaran, fasilitas serta waktu yang telah diberikan selama

ini.

3. drh. Yudit Oktanella, M.Si dan drh. Galuh Chandra Agustina, M.Si selaku

dosen penguji yang telah memberikan saran dan masukan yang sangat

membangun sehingga menjadikan laporan ini lebih baik lagi.

4. Seluruh jajaran Dekanat, Dosen dan Staf Program Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya atas dorongan semangat dan fasilitas yang diberikan.

5. Ayah Sunaryo dan Ibu Arum Hariyati serta keluarga besar atas doa, cinta,

ilmu,kesabaran dan pengorbanan baik moril dan materi yang telah di berikan

selama ini.

6. Dian Agustiar, Tsani Indah Kusuma dan Ida Sukma Kuswardhani selaku teman

seperjuangan skripsi

viii

7. Ade Nura Aulia dan Andrea Puput atas dukungan dan motivasi yang telah di

berikan selama ini.

8. Segenap keluarga kelas CAVITAS 2013 atas dukungan serta semangat yang

tiada henti.

9.Teman-teman seperjuangan mahasiswa Fakultas Kedokteran Hewan Universitas

Brawijaya angkatan 2013 yang telah memberikan semangat dan saran yang

membangun.

10.Serta kepada semua pihak yang telah membantu dalam pelaksanaan dan

penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.

Penulis berharap skripsi ini dapat diterima sehingga dapat memberikan

pengalaman serta wawasan baru terhadap penulis. Penulis menyadari bahwa

skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu kritik dan saran yang

membangun dari semua pihak diharapkan demi penyempurnaan selanjutnya.

Akhir kata, penulis berharap semoga Allah SWT membalas segala kebaikan yang

telah diberikan kepada penulis. Amin.

Malang, September 2017

Penulis

ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ ii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii

HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................... iv

ABSTRAK ........................................................................................................... v

ABSTRACT ...................................................................................................... vi

KATA PENGANTAR ...................................................................................... vii

DAFTAR ISI ........................................................................................................ ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG ................................................... xiv

BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................. 1

1.1. Latar Belakang ................................................................................. 1 1.2. Rumusan Masalah ............................................................................ 4 1.3. Batasan Masalah ............................................................................... 4 1.4. Tujuan Penelitian.............................................................................. 5 1.5. Manfaat Penelitian............................................................................ 5

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ......................................................................... 6

2.1. Kontrasepsi ........................................................................................ 6

2.2. Kedelai ................................................................................................ 9

2.3. Estrogen ............................................................................................. 11

2.4. Fitoestrogen ....................................................................................... 13

2.5 Reseptor Estrogen α dan β ................................................................ 15

2.6 Mekanisme Kerja Fitoestrogen terhadap Reseptor Estrogen ............ 17

2.7 Hewan Coba Tikus (Rattus norvegicus)............................................ 19

2.8 Uterus ................................................................................................ 21

2.9 Mekanisme Kerja Estrogen pada Uterus ........................................... 23

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESA PENELITIAN ............... 24

3.1. Kerangka Konsep Penelitian ............................................................. 24

3.2. Hipotesa Penelitian ............................................................................ 26

BAB 4 METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 27

4.1 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 27

4.2 Sampel Penelitian .............................................................................. 27

4.3 Rancangan Penelitian ........................................................................ 28

4.4 Variabel Penelitian ............................................................................ 28

4.5 Materi Penelitian ............................................................................... 29

4.5.1 Alat ............................................................................................. 29

4.5.2 Bahan .......................................................................................... 29

4.6 Tahapan Penelitian ............................................................................ 29

4.6.1 Persiapan Hewan Coba ............................................................... 29

4.6.2 Pembuatan Ekstrak Etanol Kedelai ............................................. 30

4.6.3 Pemberian Perlakuan pada Tikus ................................................ 30

4.6.4 Pembedahan Hewan Coba .......................................................... 31

4.6.5 Pembuatan Preparat Histologi ..................................................... 31

4.6.6 Metode imunohistokimia ............................................................ 32

x

4.6.7 Analisis Data ............................................................................... 34

BAB 5 HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 35 5.1 Pengaruh Pemberian Fitoestrogen Kedelai (Glycine max)

terhadap Ekspresi Reseptor Estrogen β pada Uterus Tikus Putih

Betina (Rattus norvegicus) ................................................................ 35

5.2 Pengaruh Pemberian Fitoestrogen Kedelai (Glycine max)

Terhadap Histologi Uterus Tikus Putih Betina

(Rattus norvegicus) ........................................................................... 39

BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 43

6.1 Kesimpulan........................................................................................ 43

6.2 Saran .................................................................................................. 43

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 44

LAMPIRAN ........................................................................................................ 50

xi

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Kandungan gizi 100 g biji kedelai ................................................................ 11

2.2 Kandungan fitoestrogen pada beberapa tanaman .......................................... 14

4.1 Rancangan Penelitian .................................................................................... 28

5.1 Perbandingan pengaruh Fitoestrogen Kedelai (Glycine max)

terhadap Ekspresi ER β ................................................................................ 35

xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Kedelai ....................................................................................................... 10

2.2 Mekanisme estrogen reseptor mengaktivasi ekspresi gen .......................... 16

2.3 Perbandingan Struktur Kimia Genistein dan Estradiol .............................. 18

2.4 Tikus putih (Rattus norvegicus) galur Wistar ............................................. 20

2.5 Lapisan dinding uterus ................................................................................ 22

5.1 Gambaran hasil pewarnaan immunohistokimia pada uterus tikus betina ... 35

5.2 Histologi uterus tikus dengan pewarnaan Hematoxylin Eosin

(HE) perbesaran 400 X ............................................................................... 39

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1. Surat Laik Etik Penelitian ................................................................ 50

Lampiran 2. Uji Fitokimia Ekstrak Kedelai ......................................................... 51

Lampiran 3. Surat Keterangan Ekstrak Biji Kedelai ............................................ 52

Lampiran 4. Rancangan penelitian ...................................................................... 53

Lampiran 5. Perhitungan Dosis ............................................................................ 54

Lampiran 6. Pembuatan Ekstrak Etanol Kedelai ................................................. 56

Lampiran 7. Metode Immunohistokimia.............................................................. 57

Lampiran 8. Cara Pengambilan Organ ................................................................. 58

Lampiran 9. Pewarnaan Histotologi Uterus ......................................................... 59

Lampiran 10. Analisa Statistik One Way ANOVA Ekspresi ER β ..................... 60

Lampiran 11.Hasil Immunoratio Ekspresi ER β ................................................... 62

Lampiran 12. Foto Kegiatan .................................................................................. 63

xiv

DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG

g : gram

mg : miligram

µg : mikrogram

mg : miligram

mL : mililiter

µL : mikroliter

ASEAN : Association of Southeast Asian Nations

BKKBN : Badan Kependudukan dan Keluarga Berencana Nasional

ERE : Estrogen Receptor Element

LH : Luteinizing Hormone

FSH : Follicle Stimulating Hormone

ATP : Adenosina trifosfat

cAMP : Cyclic adenosine monophosphate

ERα : estrogen reseptor alpha

Erβ : estrogen reseptor betha

DNA : deoxyribonucleic acid

RNA : ribonucleic acid

H2O2 : hidrogen peroksida

GnRH : Gonadotropin Relasing Hormone

PBS : Phosphate Baffer Saline

PFA : Paraformaldehida

SA-HRP : Strep Avidin Horseradishperoxidase

1

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

Jumlah penduduk dapat menjadi potensi maupun beban bagi suatu negara,

akan menjadi potensi apabila jumlah penduduk seimbang dengan sumber daya

yang tersedia serta mempunyai kualitas hidup yang baik. Penduduk yang banyak

akan menjadi beban apabila melampaui kapasitas wilayah negara tersebut.

Pertumbuhan penduduk yang tinggi menyebabkan ledakan penduduk, hal ini

sangat mempengaruhi kualitas hidup dan tingkat kesejahteraan penduduk dalam

suatu wilayah tertentu. Kepadatan penduduk sangat berpengaruh terhadap kualitas

hidup masyarakat, karena dapat menimbulkan berbagai masalah kependudukan

misalnya kemiskinan, perumahan, lapangan pekerjaan dan lain-lain (Christiani

dkk, 2014). Menurut World Population Data Sheet 2013, Indonesia merupakan

negara ke-5 di dunia dengan estimasi jumlah penduduk terbanyak, yaitu 249 juta.

Indonesia di antara negara ASEAN memiliki luas wilayah terbesar, tetapi menjadi

negara dengan penduduk terbanyak. Pusat data dan informasi Kementerian

Kesehatan RI, mengestimasi jumlah penduduk Indonesia tahun 2013 sejumlah

248,4 juta orang (Kemenkes, 2014).

Pemerintah Indonesia berupaya menekan laju pertumbuhan penduduk,

dengan program BKKBN ( Badan Kependudukan dan Keluarga Berencana).

BKKBN bertugas melaksanakan pengendalian penduduk dan menyelenggarakan

keluarga berencana. Salah satu sasaran strategis BKKBN tahun 2015-2019 adalah

meningkatnya pemakaian kontrasepsi. Penggunaan kontrasepsi merupakan upaya

untuk pengendalian fertilitas atau menekan pertumbuhan penduduk yang paling

2

efektif. BKKBN dalam pelaksanaannya diupayakan agar semua metode

kontrasepsi yang disediakan dan ditawarkan kepada masyarakat memberikan

manfaat optimal dengan meminimalkan efek samping maupun keluhan yang

ditimbulkan. Alat kontrasepsi yang telah tersedia masih banyak dilaporkan terjadi

kegagalan atau mengalami efek samping (BKKBN, 2015). Dalam dunia

kedokteran hewan usaha untuk mencegah terjadinya kebuntingan sudah banyak

dilakukan khususnya pada hewan anjing dan kucing untuk menekan populasi yang

berlebih. Metode yang sering dilakukan yaitu dengan tindakan operasi, dimana

akan menghilangkan siklus estrus secara irreversibel. Pencegahan kebuntingan

yang bersifat reversibel dapat dilakukan dengan pemanfaatan hormon reproduksi,

tetapi penggunaan hormon sebagai metode kontrasepsi pada hewan masi jarang

dilakukan.

Indonesia adalah negara kepulauan yang memiliki cakupan luas, dimana di

dalamnya hidup flora, fauna dan mikroba yang sangat beranekaragam. Data

IBSAP tahun 2003 memperkirakan terdapat 38.000 jenis tumbuhan (55%

endemik) di Indonesia. Lebih dari 6000 jenis tumbuhan dimanfaatkan untuk

keperluan bahan makanan, pakaian, perlindungan dan obat-obatan (Walujo,

2011). Kedelai adalah salah satu komoditi pangan utama setelah padi dan jagung.

Kedelai merupakan bahan pangan sumber protein nabati utama bagi masyarakat.

Kedelai mengandung protein 35% bahkan pada varitas unggul kadar proteinnya

dapat mencapai 40-43% (Hardi, 2010).

Kacang kedelai dikenal sebagai sumber fitoestrogen yang banyak

dijumpai. Kandungan fitoestrogen dalam biji kedelai memiliki nilai yang tinggi

3

yaitu 103.920, jika dibandingkan dengan tanaman lain seperti biji wijen 8.008,1;

kacang kecambah 495,1 dan kacang hijau 105,8. Hasil penelitian Fraser tahun

2006 menyatakan bahwa senyawa fitoestrogen (genistein) yang terkandung dalam

kedelai dapat berdampak negatif terhadap kesuburan karena berpotensi

menggagalkan pembuahan. Senyawa fitoestogen merupakan senyawa yang

memiliki sifat dan khasiat yang sama dengan hormon estrogen atau dapat

berinteraksi dengan reseptor estrogen (Miharja dkk, 2015). Aktivasi fitoestrogen

(isoflavon) dengan reseptor estrogen akan menyebabkan endogenous estrogen

mengalami penghambatan ikatan dengan reseptor estrogen. Penghambatan ikatan

tersebut menyebabkan kadar estrogen dalam darah meningkat. Estrogen dalam

darah yang meningkat dapat menyebabkan proses feed back negative mechanism

terhadap hypothalamus yang mempengaruhi penurunan sekresi FSH dan LH

(Ganong, 1998).

Pada perkembangan uterus secara normal, estrogen akan menyebabkan

proliferasi uterus, terutama proliferasi endometrium. Efek biologis dari estrogen

dimediasi melalui dua jenis reseptor yang dikenal dengan estrogen reseptor alpha

(ERα) dan estrogen reseptor betha (ERβ). ER β memiliki afinitas 20-30 kali lebih

tinggi terhadap fitoestrogen daripada ER α dan sebanding dengan afinitas

estradiol, namun memiliki aktifitas lebih rendah dari estradiol. Tingginya afinitas

ER β dapat menekan tindakan dari ER α. Sifat fitoestrogen sebagai ER antagonis,

maka ikatan dengan protein co-regulator yang diaktifkan adalah co-repressor,

sehingga proses transkripsi terhambat (Khairiah, 2014). Fitoestrogen dalam

kedelai akan menyebabkan proliferasi uterus menurun dan terjadi perubahan

4

struktur epitel pada endometrium. Adanya perubahan struktur epitel ini dapat

menyebabkan implantasi tidak melekat erat.

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek pemberian fitoestrogen

dalam kedelai (Glycine max) sebagai kandidat kontrasepsi wanita, dengan melihat

ekspresi reseptor estrogen β uterus dan perubahan histologi uterus.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka rumusan masalah

dari penelitian ini adalah:

1) Apakah fitoestrogen dalam kedelai (Glycine max) dapat mempengaruhi

ekspresi reseptor estrogen β uterus pada hewan coba tikus (Rattus

norvegicus)?

2) Apakah fitoestrogen dalam kedelai (Glycine max) dapat mempengaruhi

histologi uterus pada hewan coba tikus (Rattus norvegicus)?

1.3 Batasan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka penelitian ini

dibatasi pada :

1) Hewan model yang digunakan adalah tikus (Rattus norvegicus) betina strain

Wistar yang sudah pernah partus. Penggunaan hewan coba dalam penelitian

sudah memperoleh persetujuan dari Komisi Etik Penelitian UB dengan

Nomor 715-KEP-UB.

2) Hewan model yang digunakan pada semua fase estrus.

3) Biji keledai yang digunakan adalah jenis Devon 1 yang didapatkan dari

BALITKABI.

5

4) Ekstrak diberikan secara peroral melalui sonde selama 40 hari.

5) Variabel yang diamati dalam penelitian ini adalah ekspresi reseptor estrogen β

uterus dan gambaran histologi uterus.

1.4 Tujuan Penelitian

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka tujuan dari

penelitian ini adalah:

1) Untuk mengetahui potensi pemberian fitoestrogen dalam kedelai (Glycine

max) terhadap ekspresi reseptor estrogen β uterus pada hewan coba tikus

(Rattus norvegicus).

2) Untuk mengetahui potensi pemberian fitoestrogen dalam kedelai (Glycine

max) terhadap histologi uterus pada hewan coba tikus (Rattus norvegicus).

1.5 Manfaat Penelitian

1.5.1 Manfaat Akademis

Dapat dijadikan sebagai dasar teori untuk menambah ilmu pengetahuan

dalam bidang kesehatan, khususnya tentang manfaat fitoestrogen dalam

kedelai sebagai kandidat kontrasepsi.

1.5.2 Manfaat Praktis

1) Dapat dijadikan informasi untuk meningkatkan pengetahuan mengenai

potensi kedelai terhadap ekspresi reseptor estrogen β dan gambaran

histologi uterus.

2) Dapat dijadikan sebagai bahan rujukan pengembangan penelitian tentang

kontrasepsi wanita yang aman.

1

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kontrasepsi

Kontrasepsi adalah upaya untuk mencegah terjadinya kehamilan. Upaya

itu dapat bersifat sementara, dapat pula bersifat permanen. Penggunaan

kontrasepsi merupakan salah satu variabel yang mempengaruhi fertilitas dengan

menggunakan alat atau obat-obatan. Kontrasepsi adalah menghindari atau

mencegah terjadinya kehamilan sebagai akibat pertemuan antara sel telur yang

matang dengan sel sperma (Qolbi, 2009). Kontrasepsi adalah alat yang digunakan

untuk menunda, menjarangkan kehamilan, serta menghentikan kesuburan.

Kontrasepsi berasal dari kata kontra berarti mencegah atau melawan, sedangkan

konsepsi berarti pembuahan, sehingga pengertian kontrasepsi adalah mencegah

bertemunya sperma dengan ovum, sehingga tidak terjadi pembuahan yang

mengakibatkan kematian. Kontrasepsi yang baik harus memiliki syarat-syarat

antara lain: aman, dapat diandalkan, sederhana, murah, dapat diterima orang lain

dan dapat dipakai dalam jangka panjang (Sanri, 2016)

Terdapat beberapa metode untuk mencegah terjadinya kebuntingan pada

hewan, diantaranya yaitu :

a. Immunokontrasepsi

Prinsip dari immunokontrasepsi dengan protein zona pellucida ialah

mencegah terjadinya fertilisasi dengan adanya antibodi yang akan mengacaukan

identifikasi antigen determinan sehingga mencegah penetrasi spermatozoa ke

dalam oocyt sehingga tidak terjadi fertilisasi (Ringleb et al., 2004). Antibodi yang

dihasilkan oleh protein imunokontrasepsi dalam tubuh akseptor diharapkan

2

berperan mencegah pengenalan antara spermatozoa dengan oosit, sehingga

pembuahan dapat dicegah. Bahan imunokontrasepsi yang potensial adalah zona

pelusida-3 (ZP3), karena ZP3 merupakan protein reseptor pengenalan oosit oleh

spermatozoa (McCartney dan Mate, 1999).

b. Operasi

Pencegahan kebuntingan dapat pula dilakukan dengan metode operasi,

yakni dengan dilakukan ovariohisterectomy. Ovariohisterectomy merupakan

istilah kedokteran yang terdiri dari ovariectomy dan histerectomy. Ovariectomy

adalah tindakan mengamputasi, mengeluarkan dan menghilangkan ovarium dari

rongga abdomen. Sedangkan histerectomy adalah tindakan mengamputasi,

mengeluarkan dan menghilangkan uterus dari rongga abdomen (Denni,2012).

Ovariohysterectomy memiliki banyak nama lain, diantaranya yaitu: spay, femal

neutering, sterilization, fixing, desexing, ovary and uterine ablation, dan

pengangkatan uterus. Operasi ini dilakukan untuk mensterilkan hewan betina

dengan maksud menghilangkan fase estrus atau untuk terapi penyakit yang

terdapat pada uterus, seperti resiko tumor ovarium, serivks, dan uterus. Selain

itu, operasi juga dilakukan untuk memperkecil terjadinya pyometra pada betina

yang tidak steril (Sardjana, 2011).

c. Penggunaan preparat hormonal

- Prostaglandin F2α dan bromocriptine

Prinsip penggunaan kombinasi antara prostaglandin F2α dan

bromokriptin ialah menginduksi terjadinya abortus pada anjing (Palmer dan

Post, 2002). Bromokriptin merupakan alkaloida ergot semi sintesis dari

3

kelompok ergotoksin dan memiliki daya stimulasi langsung terhadap reseptor

dopamine di otak. Peningkatan sekresi dopamine ini identik dengan hormone

Prolactin Inhibiting Factor yang menyebabkan berkurangnya sekresi prolaktin

(Tjay dan Rahardja, 2002). Berkurangnya sekresi prolaktin ini juga akan

menurunkan kadar progesterone dalam darah sehingga dapat menyebabkan

abortus. Hasil dari penelitian menunjukan bahwa kombinasi antara

prostaglandin F2α dan bromocriptine selama 5 hari mampu menyebabkan

terjadinya luteolysis sehingga mencegah kebuntingan (Palmer dan Post,

2002).

- Preparat estrogen

Pemberian preparat estrogen akan menyebabkan kadar estrogen dalam

darah meningkat. Estrogen yang tinggi dapat melabilkan membran lisosom

sehingga diproduksi enzim fosfolipase A yang aktif untuk mengawali

pembentukan prostaglandin dari fosfolipida di mikrosom. Prostaglandin akan

membebaskan ion Ca 2+ di dalam sel otot polos uterus yang kemudian

berikatan dengan aktin dan miosin, untuk memulai proses kontraksi otot.

Kondisi ini yang kemungkinan menjadi penyebab terjadinya kematian embrio

yang baru terimplantasi. Pada rodentia, domba dan kelinci, estrogen yang

terlalu dominan membuat uterus tidak mampu menampung implantasi

blastokista. Kegagalan implantasi sering terjadi akibat kegagalan transpor sel

telur. Pemberian estrogen sebanyak 0,4 µg dapat mempercepat transpor sel

telur dari tuba fallopii ke uterus mencit (Akbar, 2010).

4

- Antagonist progesterone anglepristone (alizone)

Progesteron merupakan hormone kebuntingan yang dapat menyebabkan

penebalan endometrium dan perkembangan kelenjar uterin sebelum

terjadinya implantasi dari ovarium yang dibuahi. Selama kebuntingan,

progesterone menahan timbulnya ovulasi melalui inhibisi umpan balik FSH

dan LH dari adenohipofisis (Frandson, 1992). Zat-zat anti progesterone akan

melawan kegiatan progesterone dengan jalan memblok secara kompetitif

reseptornya di organ tujuan. Kebuntingan akan dihentikan akibat efek

progesterone terhadap endometrium dihambat (Tjay dan Rahardja, 2002).

2.2 Kedelai

Tanaman kedelai merupakan salah satu sumber potensi pangan yang

sering dikonsumsi masyarakat Indonesia. Kedelai merupakan sumber protein yang

paling murah karena berbagai varietas kedelai yang ada di Indonesia mempunyai

kadar protein 30,53 - 44 %. Klasifikasi tanaman kedelai yaitu sebagai berikut

(Oktavia, 2012):

Kingdom : Plantae (Tumbuhan)

Divisio : Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Sub Divisio : Angiospermae (Biji tertutup)

Classis : Dicotyledoneae (Berkeping biji dua / dikotil)

Ordo : Rosales

Famili : Leguminosae (Kacang-kacangan)

Genus : Glycine

Spesies : Glycine max

5

Gambar 2.1 Kedelai (Irwan, 2006)

Biji kedelai tersusun atas tiga komponen utama, yaitu kulit biji, daging

(kotiledon), dan hipokotil dengan perbandingan 8:90:2. Komposisi kimia kedelai

adalah 40,5% protein, 20,5% lemak, karbohidrat 22,2%, serat kasar 4,3%, abu

4,5%, dan air 6,6%. Kedelai merupakan sumber gizi yang sangat penting.

Komposisi gizi kedelai bervariasi tergantung varietas yang dikembangkan dan

juga warna kulit maupun kotiledonnya (Oktavia, 2012).

Kedelai adalah tanaman semusim yang diusahakan pada musim kemarau,

karena tidak memerlukan air dalam jumlah besar. Kedelai merupakan sumber

protein, dan lemak, serta sebagai sumber vitamin A, E, K dan beberapa jenis

vitamin B dan mineral K, Fe, Zn dan P. Kadar protein kacang-kacangan berkisar

antara 20-25%, sedangkan pada kedelai mencapai 40%. Kedelai mengandung

delapan asam amino penting yang rata-rata tinggi, kecuali metionin dan

fenilalanin. Kandungan protein kedelai cukup tinggi sehingga kedelai termasuk ke

dalam lima bahan makanan yang mengandung protein tinggi. Berikut kandungan

gizi biji kedelai:

6

Tabel 2.1 Kandungan gizi 100 g biji kedelai

(Sukradan dan Yuningsih, 2013)

Salah satu komponen penting atau senyawa bioaktif yang terdapat dalam

kedelai dan bertindak sebagai antioksidan adalah isoflavon. Isoflavon termasuk

dalam golongan flavonoid yang merupakan senyawa polifenolik (Zubik and

Meydani, 2003). Pada tanaman kedelai, kandungan isoflavon yang lebih tinggi

terdapat pada biji kedelai, khususnya pada bagian hipokotil (germ) yang akan

tumbuh menjadi tanaman. Kedelai mengandung 2-4 mg isoflavon dalam satu

gram kedelai (Risfianty, 2016).

2.3 Estrogen

Estrogen adalah senyawa steroid yang berfungsi terutama sebagai hormon

seks wanita Salah satu fungsi hormon estrogen adalah menimbulkan proliferasi sel

dan pertumbuhan jaringan organ-organ kelamin serta jaringan yang berkaitan

dengan reproduksi (Guyton, 2000). Hormon estrogen terdiri dari tiga jenis, yaitu

estradiol, estron dan estriol. Estradiol memiliki kemampuan untuk aktivitas

7

biologi yang tinggi bila dibandingkan dengan jenis yang lain. Perbandingan

khasiat biologi dari ketiga hormon tersebut adalah estradiol: estron: estriol=

10:5:1 (Badziad, 2003).

Sintesis hormon estrogen terjadi di dalam sel-sel theka dan sel-sel

granulosa ovarium, dimana kolesterol merupakan zat bakal dari hormon ini, yang

pembentukannya melalui beberapa serangkaian reaksi enzimatik. FSH diketahui

berperan dalam sel theka untuk meningkatkan aktivitas enzim pembelah rantai sisi

kolesterol melalui pengaktifan ATP menjadi cAMP, dan dengan melalui beberapa

proses reaksi enzimatik terbentuklah androstenedion, kemudian androstenedion

akan berfusi ke dalam sel granulose, selanjutnya melakukan aromatisasi

membentuk estron dan estradiol 17β (Badziad, 2003). Estriol adalah estrogen

yang paling lemah yang dihasilkan dari oksidasi estradiol maupun estron (Guyton,

2000).

Efek biologis dari estrogen dimediasi melalui dua jenis reseptor yang

dikenal dengan estrogen reseptor alpha (ERα) dan estrogen reseptor betha (ERβ).

ERα dan ERβ banyak terdapat pada jaringan reproduksi wanita (ovarium,

endometrium, dan payudara), kulit, pembuluh darah tulang dan otak. Susunan

syaraf pusat adalah target lain dari estrogen yang akan memodulasi sekresi LH

dan FSH melalui sistem hipotalamus-hipofisis. Berdasarkan kadarnya dalam

plasma, estrogen dapat berperan sebagai kontrol umpan balik negatif dengan

menurunkan sekresi LH dan FSH, atau sebagai kontrol umpan balik positif

dengan menstimulasi sekresi LH dan FSH (Putra, 2009).

8

Reseptor α dan β diaktifkan oleh faktor transkripsi. Mekanisme tindakan

ER melibatkan estrogen yang mengikat reseptor dalam inti, setelah itu reseptor

dimerisasi dan mengikat elemen respon spesifik yang dikenal sebagai elemen

respon estrogen (ERE) yang terletak di promotor gen target ( Bjornstrom and

Sjoberg, 2005).

2.4 Fitoestrogen

Fito artinya tanaman, estrogen artinya hormon pada wanita. Jadi

Fitoestrogen adalah senyawa kimia dari bahan tanaman yang dapat bekerja seperti

estrogen. Fitoestrogen merupakan fitokimia yang memiliki fungsi mirip dengan

hormon estrogen dan merupakan suatu bahan alternatif yang potensial sebagai

pengganti bahan modulator reseptor estrogen selektif sintetik yang banyak

digunakan sebagai terapi sulih hormon ( Prakash and Gupta, 2011). Fitoestrogen

dikelompokkan menjadi 3 kelas yaitu isoflavonoid, coumestans dan lignans.

Subkelompok Isoflavonoid yaitu diadzein, genistein dan glycetein. Subkelompok

coumestans adalah coumestral. Subkelompok lignans yaitu enterolactone dan

enteradione ( Rishi, 2002).

Pada kelompok fitoestrogen tersebut isoflavon merupakan senyawa yang

banyak dimanfaatkan, dikarenakan kandungan fitoestrogen yang cukup tinggi.

Pada tanaman golongan Leguminoceae, khususnya pada tanaman kedelai

mengandung senyawa isoflavon yang cukup tinggi (Hernawati, 2013). Isoflavon

utama pada kedelai terdiri dari genistein dan daidzein. Genistein yaitu senyawa

kimia yang mirip dengan estrogen (fitoestrogen) yang terdapat pada tumbuhan

yang berfungsi sebagai prekursor pada metabolisme tubuh. Fitoestrogen ini secara

9

alami akan mengalami interaksi dengan reseptor estrogen dalam tubuh. Interaksi

isoflavon dengan reseptor estrogen mengarah pada aktivasi yang disebut Estrogen

Receptor Element (ERE) yang bertempat disisi bagian dalam dari membran inti.

Aktivasi isoflavon tergantung dari konsentrasi estrogen endogen. Dilingkungan

dengan tinggi kadar estrogen menyebabkan isoflavon bereaksi sebagai estrogen

antagonis (inhibitor aktivitas estrogen), pada keadaan sebaliknya, dimana kadar

estrogen yang rendah, isoflavon dapat bekerja sebagai estrogen agonis

(menyerupai estrogen)( Dinastiti, 2016). Berikut kandungan fitoestrogen pada

beberapa tanaman (Thompson,2006):

Tabel 2.2 Kandungan fitoestrogen pada beberapa tanaman.

Tanaman Kandungan Fitoestrogen (µg/100g)

Biji kedelai 103.920

Biji wijen 8.008,1

Bawang putih 603,6

Kacang kecambah 495,1

Biji bungan matahari 216

Minyak zaitun 180,7

Almond 131,1

Kenari 139,5

Kacang mete 121,9

Kacang hijau 105,8

Fitoestrogen merupakan suatu substrat dari tumbuhan yang memiliki

khasiat mirip estrogen, meskipun rumus bangun kimianya berbeda dengan

estrogen tetapi memiliki inti yang sama persis dengan estrogen. Khasiat

estrogenik terjadi karena fitoestrogen juga memiliki 2 gugus hidroksil (OH) yang

berjarak 11.0-11,5 A0 pada intinya, sama persis dengan inti estrogen sendiri. Para

peneliti sepakat jarak 11 A0 dan gugus -OH inilah yang menjadi struktur pokok

10

suatu substrat agar mempunyai efek estrogenik, yakni memiliki afinitas tertentu

untuk dapat menduduki reseptor estrogen (Sitasiwi, 2009).

Afinitas fitoestrogen terhadap reseptor estrogen sangat rendah bila

dibanding estrogen endogen atau dapat dikatakan bahwa diperlukan jumlah yang

sangat besar bagi fitoestrogen untuk memperoleh efek yang memadai seperti

estrogen (Putra, 2009). Paparan fitoestrogen dalam bentuk isoflavon terbukti

mempengaruhi struktur organ reproduksi. Penelitian Awoniyi et al. (1998)

menunjukkan bahwa paparan genistein dosis 50 mg/hari pada tikus sejak hari ke-

17 kebuntingan sampai berakhirnya masa laktasi (21 hari postpartum) dapat

menurunkan berat ovarium dan uterus serta kadar estradiol dalam serum. Hal

tersebut dapat terjadi karena dalam organ reproduksi memiliki reseptor estrogen.

2.5 Reseptor Estrogen α dan β

Reseptor estrogen merupakan salah satu anggota reseptor inti yang

memperantarai aksi hormon estrogen didalam tubuh yang terikat dengan DNA

dan ligan pengikat. Reseptor estrogen berfungsi untuk mengubah transkripsi gen

jika berikatan dengan jaringan spesifik yang bersifat koaktivator atau koreseptor.

Reseptor estrogen terdiri dari dua subtipe yaitu, Reseptor Estrogen α (ER α) dan

Reseptor Estrogen β (ER β). ER α berhubungan dengan efek estrogen terhadap

proliferasi dan sebaliknya ER β menekan aktifitas pertumbuhan. ER β yang

memiliki sifat antiproliferasi dapat menghambat tindakan ER α sebagai aktivator

yang memediasi proliferasi sel dengan membentuk heterodimer. Pengikatan

estrogen yang sama pada ER α dan ER β dapat menimbulkan efek yang

berlawanan dalam transkripsinya. Estradiol dapat menstimuli transkripsi gen

11

dengan ER α dan ERE, tetapi pada sistem yang sama estradiol menginhibisi

transkripsi gen bila berikatan dengan ER β (Sulistyowati, 2015).

Reseptor estrogen banyak terdapat pada organ reproduksi wanita

(ovarium, endometrium dan payudara), kulit, pembuluh darah, tulang dan otak.

Pada organ reproduksi laki-laki reseptor ini banyak terdapat pada prostat.

(Dinastiti, 2016). Reseptor tersebut memungkinkan terjadi efek langsung pada

pembuluh darah baik pada sel otot polos maupun pada endotel. ER β lebih banyak

terdapat pada mukosa intestinal, parenchyma paru, sumsung tulang, tulang, otak,

sel endothelial dan kelenjar prostat. Sedangkan ER α lebih banyak pada

endometrium, payudara, jaringan hipotalamus dan stroma ovarium (Gruber et al,

2002). Fitoestrogen merupakan kompetitor aktif untuk reseptor estrogen, terutama

reseptor β (Sitasiwi, 2009). ER β memiliki afinitas 20-30 kali lebih tinggi terhadap

fitoestrogen daripada ER α dan sebanding dengan afinitas estradiol, namun

memiliki aktifitas lebih rendah dari estradiol. Tingginya afinitas ER β dapat

menekan tindakan dari ER α (Khairiah, 2014).

Gambar 2.2 Mekanisme estrogen reseptor mengaktivasi ekspresi gen (Mendelsohn and

Karas, 1999).

Estrogen masuk ke sel target melalui difusi pasif dan mengikat reseptor

intraseluler dengan afinitas yang kuat. Ikatan estrogen- reseptor estrogen komplek

12

membentuk dimer dan mengikat ke target gennya (Estrogen Respone Elements,

ERE). Hubungan komplek dengan beberapa protein mampu mengaktifkan

General Transcriptional Apparatus (GTA), yaitu multi protein komplek yang

mengandung RNA polimerase berfungsi untuk mentranskripsi DNA menjadi

RNA. Ikatan estrogen-reseptor-protein merupakan Coactivator (CoAct) dan faktor

integrator transkripsi. Ikatan estrogen- reseptor-protein juga mempunyai aktivitas

histone Acetyltransferase (HAT) yang berfungsi untuk menambah gugus asetil

pada histon, selain itu reseptor estrogen juga dapat bersifat corepresor yaitu

menekan transkripsi gen (Mendelsohn and Karas, 1999).

Ekspresi ER dikontrol oleh hormon. Jumlah ER di uterus berhubungan

dengan kadar estrogen dalam darah. Pada siklus estrus tikus ekspresi ER β di

uterus tertinggi pada saat fase diestrus (estrogen rendah), menurun saat proestrus

awal (estrogen mulai meningkat) dan sebaliknya untuk ER α. Pada endometrium

ekspresi ER α paling tinggi pada pertengahan fase proliferasi sampai sebelum

ovulasi, ekspresi ER β meningkat selama fase sekresi. Pada tikus hilangnya sikus

estrus karena penuaan berada dalam kondisi persisten diestrus dan dapat

menurunkan jumlah dan afinitas reseptor. Pada regulasi reseptor dapat terjadi

penurunan kepekaan yang dikenal dengan desensitisasi atau dapat pula terjadi

penurunan jumlah yang dikenal down regulasi. Keadaan tersebut dapat terjadi

karena adanya rangsangan yang terus menerus oleh agonis (Anita, 2004).

2.6 Mekanisme Kerja Fitoestrogen terhadap Reseptor Estrogen

Mekanisme kerja fitoestrogen terhadap reseptor estrogen (ER) adalah

dengan meniru aktivitas hormon estrogen. Estrogen adalah hormon yang

13

berfungsi sebagai molekul sinyal. Prosesnya dimulai dari masuknya molekul

estrogen yang terbawa melalui darah kedalam bermacam- macam jaringan target

estrogen. Proses terjadinya dengan menempel pada reseptor estrogen sehingga

menghambat pengikatan estrogen alami pada reseptor tersebut. Struktur dan

fungsi genistein dan daidzein menyerupai estradiol. Kemiripan estradiol terletak

pada jarak antara 2 gugus hidroksilnya sehingga genistein dapat mengikat reseptor

estrogen. Umumnya estradiol akan berikatan dengan reseptor estrogen kemudian

menyebabkan terjadinya ekspresi gen dan sintesa protein yang spesifik (Pavese et

al, 2010).

Gambar 2.3 Perbandingan Struktur Kimia Genistein dan Estradiol (Pavese et al, 2010).

Afinitas fitoestrogen (genistein) rendah terhadap reseptor alpha 5%

sedangkan terhadap reseptor betha 36% jika dibandingkan dengan estradiol 100%,

walaupun demikian kadar sirkulasi yang berulang dari fitoestrogen mampu

menghasilkan aktivitas biologik yang potensial (Tsourounis, 2004).

Fitoestrogen dapat melewati membran sel serta berinteraksi dengan

reseptor dan enzim, karena fitoestrogen mempunyai berat molekul yang kecil.

Mekanisme genomik yaitu aktivasi langsung melalui reseptor estrogen.

Mekanisme genomik dari fitoestrogen ini melalui dua cara yakni, pertama

fitoestrogen langsung berikatan dengan reseptor estrogen berupa transkripsi gen,

14

sehingga dapat menimbulkan efek seperti estrogen (efek estrogenik). Kedua,

fitoestrogen tidak langsung berikatan dengan reseptor estrogen (indirect genomic)

dengan mempengaruhi kadar estrogen endogen dalam sirkulasi (mekanisme

kompetitif inhibitor). Aksi genomik melibatkan reseptor estrogen yang terletak di

nukleus (nuclear receptor) atau inti sel. Estrogen dibawa ke jaringan dalam

bentuk terikat dengan protein dan segera berdifusi ke dalam sel sebagai estrogen

bebas. Estrogen terikat dengan reseptor estrogen di nukleus dan selanjutnya

reseptor estrogen mengalami dimerisasi dan terikat dengan ERE yang terletak

pada promotor gen target dan selanjutnya menginduksi transkripsi gen-gen yang

sehubungan dengan proliferasi sel (Dinastiti, 2016).

2.7 Hewan Coba Tikus (Rattus norvegicus)

Tikus (Rattus norvegicus) merupakan hewan laboratorium yang banyak

digunakan untuk media penelitian medis dan biologis. Tikus memiliki tubuh yang

lebih besar dari mencit, sehingga memudahkan pembedahan dan pengambilan

sampel. Secara garis besar fungsi dan bentuk organ serta proses biokimia antara

tikus dan manusia memiliki banyak kesamaan, selain itu juga mudah dipelihara

(Suckow et al, 2006).

Tikus yang digunakan dalam penelitian ini memiliki klasifikasi sebagai

berikut (Krinke, 2000) :

Kingdom : Animalia

Phylum : Chordata

Sub Phylum : Vertebrata

Class : Mammalia

15

Ordo : Rodentia

Family : Muridae

Genus : Rattus

Species : Rattus norvegicus

Gambar 2.4 Tikus putih (Rattus norvegicus) galur Wistar

(Dahlia dan Delly, 2014)

Tikus putih (Rattus norvegicus) termasuk ke dalam hewan mamalia yang

memiliki ekor panjang. Ciri-ciri galur ini yaitu bertubuh panjang dengan kepala

sempit. Telinga tikus tebal dan pendek dengan rambut halus (Sirois, 2005).

Tubuh tikus normal 85% tertutup rambut, ekor betina pada umumnya lebih

panjang dibandingkan ekor jantan (Suckow, 2006). Rattus norvegicus memiliki

waktu hidup 2,5 sampai 3 tahun, memiliki temperatur tubuh 37,5ºC, denyut

jantung 330-480 kali permenit, frekuensi respirasi 66-114 kali permenit dan

memasuki masa dewasa pada usia 50-60 hari (Kusumawati, 2004).

Tikus putih (Rattus norvegicus) betina adalah mamalia yang tergolong

ovulator spontan. Tikus termasuk hewan yang bersifat poliestrus, memiliki siklus

reproduksi yang sangat pendek. Siklus estrus lamanya berkisar antara 4-5 hari.

Siklus estrus adalah interval waktu mulai dari permulaan periode estrus yang

pertama sampai periode estrus berikutnya. Siklus estrus pada tikus terbagi

16

menjadi beberapa fase yaitu proestrus yang berlangsung 12 jam, estrus yang

berlangsung 12 jam, metestrus I yang berlangsung 15 jam, metestrus II yang

berlangsung 6 jam dan diestrus yang berlangsung 57-60 jam (Anita, 2004).

Ovulasi sendiri berlangsung 8-11 jam sesudah dimulainya tahap estrus. Folikel

yang sudah kehilangan telur akibat ovulasi akan berubah menjadi korpus luteum

(KL), yang akan menghasilkan progesteron atas rangsangan LH. Progesteron

bertanggung jawab dalam menyiapkan endometrium uterus agar reseptif terhadap

implantasi embrio. Lama kebuntingan pada tikus adalah sekitar 21-23 hari (Akbar,

2010).

2.8 Uterus

Uterus merupakan salah satu organ reproduksi betina yang berfungsi

sebagai penerima dan tempat perkembangan ovum yang telah dibuahi. Uterus

pada tikus berupa tabung ganda, disebut tipe dupleks. Dinding uterus secara

histologis terdiri dari tiga lapisan utama, yaitu lapisan endometrium, miometrium

dan perimetrium. Endometrium tikus terdiri dari epitel kolumnar bersilia dan

lapisan basal lamina propria. Lamina propria disusun oleh jaringan ikat longgar,

serabut kolagen, fibroblas dan limposit ditemukan diantara jaringan. Kelenjer

uterus ditemukan pada lamina propria. Miometrium terdiri dari otot polos yang

tersusun sirkular di bagian dalam dan longitudinal di bagian luar. Perimetrium

disusun oleh jaringan pengikat dan sejumlah pembuluh darah (Herlita dkk, 2015).

17

Gambar 2.5 Lapisan dinding uterus (Manurung, 2014).

Pada penelitian Haibin et al (2005) menggunakan mencit yang sudah tidak

memiliki ovarium (ovariectomy) kemudian diberi fitoestrogen menunjukkan

aktivitas proliferasi sel-sel endometrium. Penelitian tersebut membuktikan

kemampuan fitoestrogen untuk berikatan dengan reseptor estrogen pada jaringan.

Perubahan struktur histologi uterus disebabkan karena pada lapisan penyusun

dinding uterus memiliki reseptor estrogen, sehingga perubahan struktur lapisan

tersebut berjalan seiring dengan perubahan kandungan hormon reproduksi dalam

plasma (Cooke et al, 1995). Penelitian Herlita tahun 2015 menyebutkan bahwa

histologi uterus tikus yang diberikan agen antifertilitas terlihat lumen yang relatif

sempit, daerah endometium yang relatif tipis, sel-sel penyusunnya tersusun

longgar, serta lapisan epitel yang lebih tipis dari pada uterus tikus normal.

Pada perkembangan uterus secara keseluruhan, estrogen memainkan

peranan penting terhadap proliferasi uterus, terutama proliferasi endometrium.

Salah satu efek estrogen terhadap uterus adalah menyebabkan proliferasi

endometrium yang nyata dan perkembangan kelenjar endometrium yang kelak

akan digunakan untuk membantu nutrisi zigot yang berimplantasi (Agustini,

2007). Dalam keadaan normal, endometrium mengalami penebalan. Perubahan

18

ketebalan endometrium dapat terjadi akibat pemakaian obat kontrasepsi. Saat akan

terjadi implantasi, endometrium harus dalam keadaan siap dan matang yang

ditandai suatu keadaan proliferasi dan diferensiatif seperti sekresi kelenjar, edema,

proliferasi vaskuler dan desidualisasi stroma (Utami, 2016)

2.9 Mekanisme Kerja Estrogen pada Uterus

Aksi estrogen sama seperti hormon steroid yang lain, yakni masuk ke

dalam sel melalui proses difusi kemudian berikatan dengan reseptor estrogen yang

terdapat di dalam sitoplasma dan nukleus. Ikatan antara estrogen dan reseptor

akan menyebabkan terjadinya perubahan konformasi yang menghasilkan bentuk

kompleks estrogen reseptor. Kompleks tersebut akan berikatan dengan protein

koaktivator, yang memfasilitasi ekspresi gen dan mempunyai afinitas yang tinggi

terhadap DNA binding site untuk mengaktivasi transkripsi gen. Transkripasi gen

oleh RNA polymerase menghasilkan mRNA. mRNA kemudian ditranslasikan di

robosomal sitoplasma untuk menghasilkan protein yang berkaitan dengan fungsi

pertubuhan endometrium (Dinastiti, 2016). Proliferasi diinisiasi saat pubertas

sebagai respon terhadap siklus estrogen. RE α stroma akan mensekresikan growth

factor yang berfungsi untuk pertumbuhan sel epitel endometrium (Cooke et al,

1995).

1

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESA PENELITIAN

3.1 Kerangka Konsep Penelitian

FSH dan LH

Uterus

Ovarium

Estrogen

Hipofisa anterior

Tikus Betina

Hipothalamus

GnRH

Fitoestrogen

kedelai

Feed back

negative

mecanism

ER α ER β

Proliferasi

Histologi

Keterangan :

: Variabel bebas

: Variabel

tergantung

: Induksi terapi

: Efek terapi

2

GnRH (Gonadotropin Relasing Hormone) merupakan hormon yang

diproduksi oleh hipotalamus di otak. GnRH akan merangsang pelepasan FSH dan

LH di hipofisa atau pituitari anterior. FSH (Follicle Stimulating Hormone)

menyebabkan sel-sel granulosa yang terdapat didalam folikel akan cepat menjadi

banyak. Kemudian akan terbentuk ruangan dalam folikel. Folikel ini disebut

folikel de Graaf. Pada sel-sel granulosa di dalam folikel de Graaf akan dihasilkan

estrogen. LH (Luteinizing Hormone) menyebabkan folikel de Graaff pecah pada

proses ovulasi dan akan menjadi corpus luteum (CL). Corpus luteum

mensekresikan progesteron.

Fitoestrogen dalam kedelai memiliki peran yang hampir sama dengan

estrogen yaitu dapat berikatan dengan reseptor estrogen. Fitoestrogen akan terikat

dengan reseptor estrogen di nukleus dan selanjutnya reseptor estrogen mengalami

dimerisasi dan terikat menjadi Estrogen Receptor Elements (ERE) yang terletak

pada promotor gen target. Aktivasi fitoestrogen (isoflavon) dengan reseptor

estrogen akan menyebabkan endogenous estrogen mengalami penghambatan

ikatan dengan reseptor estrogen. Penghambatan ikatan tersebut menyebabkan

kadar estrogen dalam darah meningkat. Estrogen dalam darah yang meningkat

dapat menyebabkan proses feed back negative mechanism terhadap hypothalamus

yang mempengaruhi penurunan sekresi FSH dan LH.

Pada perkembangan uterus secara normal, estrogen akan menyebabkan

proliferasi uterus, terutama proliferasi endometrium. Efek biologis dari estrogen

dimediasi melalui dua jenis reseptor yang dikenal dengan estrogen reseptor alpha

(ERα) dan estrogen reseptor betha (ERβ). ER α memediasi efek proliferasi dan

3

sebaliknya ER β memiliki sifat antiproliferasi. ER β memiliki afinitas 20-30 kali

lebih tinggi terhadap fitoestrogen daripada ER α dan sebanding dengan afinitas


ER β dapat menekan tindakan dari ER α. Melalui mekanisme tersebut fitoestrogen

dapat bersaing dengan estradiol menempati reseptor estrogen. Sifat fitoestrogen

sebagai ER antagonis, maka ikatan dengan protein co-regulator yang diaktifkan

adalah co-repressor, sehingga proses transkripsi terhambat. Fitoestrogen dalam

kedelai akan menyebabkan proliferasi uterus menurun dan terjadi perubahan

struktur pada endometrium. Adanya perubahan struktur epitel ini dapat

menyebabkan implantasi tidak melekat erat. Perubahan struktur histologi uterus

disebabkan karena pada lapisan penyusun dinding uterus memiliki reseptor

estrogen.

3.2 Hipotesa Penelitian

Dari rumusan permasalahan, maka hipotesa dari penelitian ini adalah

sebagai berikut:

1. Fitoestrogen dari ekstrak keledai (Glycine max) meningkatkan ekspresi

reseptor estrogen β pada uterus tikus (Rattus norvegicus).

2. Fitoestrogen dari ekstrak keledai (Glycine max) menyebabkan perubahan

histologi pada uterus tikus (Rattus norvegicus).

1

BAB 4 METODE PENELITIAN

4.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi Hewan Universitas

Islam Negeri Maliki Malang, Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya dan Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya. Waktu penelitian dilaksanakan pada bulan Maret 2017

sampai dengan bulan Mei 2017.

4.2 Sampel Penelitian

Hewan model menggunakan tikus (Rattus novergicus) galur Wistar,

berjenis kelamin betina yang sudah pernah melahirkan dengan berat badan rata-

rata 200 gram. Menurut Kusriningrum (2008), estimasi besaran sampel dihitung

berdasarkan rumus dibawah ini.

t (n-1) ≥ 15

t (n-1) ≥ 15

4 (n-1) ≥ 15

4 n- 4 ≥ 15

4 n ≥ 19

n ≥ 19/4

n = 4, 75

n = 5

Dari perhitungan diatas, maka untuk 4 macam kelompok perlakuan

diperlukan jumlah ulangan paling sedikit 5 kali dalam setiap kelompok perlakuan,

sehingga jumlah hewan coba yang dibutuhkan adalah 20 ekor.

Keterangan :

t = jumlah perlakuan

n = jumlah minimal ulangan

yang diperlukan

2

4.3 Rancangan Penelitian

Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorik dengan

menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Hewan coba dibagi menjadi

empat kelompok perlakuan (Lampiran 4). Semua tikus selain kelompok kontrol

negatif diberikan ekstrak kedelai selama 40 hari, K adalah kelompok kontrol tanpa

diberi ekstrak kedelai, P1 adalah kelompok tikus diberi ektrak kedelai dosis 25

mg/200g BB, P2 adalah kelompok tikus diberi ektrak kedelai dosis 50 mg/200g

BB dan P3 adalah kelompok tikus diberi ektrak kedelai dosis 75 mg/200g BB

(Lampiran 5). Pengukuran ekspresi reseptor estrogen dan pembuatan histologi

uterus dilakukan post test only.

Tabel 4.1 Rancangan Penelitian

Variabel yang diamati Ulangan

Ekspresi Reseptor Estrogen β dan Histologi Uterus 1 2 3 4 5

Kelompok K (kontrol negatif)

Kelompok P1 (ekstrak kedelai dosis 25 mg/200g BB)



4.4 Variabel Penelitian

Variabel yang diamati dalam penelitian ini adalah sebagai berikut

Variabel bebas : Ekstrak kedelai

Variabel tergantung : Ekspresi Reseptor Estrogen β dan Histologi uterus.

Variabel kendali : Tikus Rattus norvegicus, jenis kelamin, berat badan,

strain, status gestasi, pakan, lingkungan dan air minum.

3

4.5 Materi Penelitian

4.5.1 Alat

Alat yang digunakan adalah kandang tikus, labu ukur 10 mL, objek

glass, cover glass, cawan petri, mikro pipet, pipet tetes, spuit, disecting set,

sarung tangan, masker, botol kecil, sonde, pot sampel, eppendorf, refrigrator,

inkubator, toples, shaker digital, penyaring kain, erlenmeyer, evaporator,

mikrotom, tabung reaksi, rak tabung reaksi, kertas tissue, automatic tissue

processor Tissue Tek Xpress x50 dan mikroskop.

4.5.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah hewan coba tikus

(Rattus norvegicus) betina strain Wistar yang sudah pernah melahirkan dengan

berat 200 gram, kedelai, ethanol 70%, 80%, 90%, 95%, 96% dan ethanol

absolut, pakan tikus, air minum, alkohol 70%, 80%, 96%, 100%, air, NaCl

Fisiologis, Paraformaldehida (PFA) 10%, Phosphate Baffer Saline (PBS),

paraffin, entelan, xylol, H2O2, antibodi primer dan sekunder reseptor estrogen

β, SA-HRP, DAB dan pewarna hematoxylen eosin.

4.6 Tahapan Penelitian

4.6.1 Persiapan Hewan Coba

Hewan model dibagi dalam empat kelompok perlakuan secara acak.

Hewan model diadaptasikan dalam kandang kelompok selama tujuh hari

sebelum perlakuan. Tikus yang digunakan adalah jenis tikus putih (Rattus

norvegicus) strain Wistar betina dengan berat rata-rata 200g yang sudah pernah

4

melahirkan. Jumlah keseluruhan yang digunakan 20 ekor dan dibagi menjadi 4

kelompok perlakuan masing-masing 5 ekor tikus.

Tikus dikandangkan dalam kandang berukuran 50 x 40 x 20 cm, jumlah

kandang disesuaikan dengan jumlah tikus yang digunakan. Kandang terbuat

dari bak plastik dengan tutup dari rangka kawat. Kandang tikus berlokasi pada

tempat yang bebas dari suara ribut dan terjaga dari asap serta polutan lainnya.

Suhu optimum ruangan untuk tikus adalah 22-24oC dan kelembaban udara 50-

60% dengan ventilasi yang cukup.

4.6.2 Pembuatan Ekstrak Etanol Kedelai

Sampel berupa biji kedelai (Glycine max) digiling hingga halus. Serbuk

biji kedelai ditimbang sebanyak 2 kg. Kemudian diberi pelarut ethanol 96%

sebanyak 2 L. Serbuk yang telah dibasahi tersebut dimasukkan ke dalam

toples, diratakan dan ditambahkan pelarut etanol 96% sebanyak 5L. Toples

ditutup dengan rapat selama 24 jam dan dishaker di atas shaker digital rpm 50.

Ekstrak cair disaring dengan penyaring kain dan ditampung dalam erlenmeyer.

Ampas dimasukkan lagi kedalam toples dan ditambahkan 5 L pelarut,

dibiarkan selama 24 jam di atas shaker digital rpm 50. Hasil ekstrak cair

pertama dan kedua dijadikan satu dan diuapkan dengan menggunakan rotary

evaporator. Proses evaporasi dilakukan selama 2 jam. Ekstrak yang dihasilkan,

kemudian diuapkan kembali di atas water bath selama 2 jam.

4.6.3 Pemberian Perlakuan pada Tikus

Tikus betina dikelompokkan menjadi 4 kelompok yaitu K (kelompok

kontrol tanpa diberi ekstrak kedelai), P1 (Kelompok tikus diberi ektrak kedelai

5

dosis 25 mg/200g BB), P2 (Kelompok tikus diberi ektrak kedelai dosis 50

mg/200g BB) dan P3 (Kelompok tikus diberi ektrak kedelai dosis 75 mg/200g

BB). Pemberian ekstrak kedelai dilakukan dengan cara disonde yaitu 2 mL/

ekor/ hari selama 40 hari. Setelah 40 hari tikus dibedah untuk dilakukan

pengamatan terhadap ekspresi ER β dan histologi uterus.

4.6.4 Pembedahan Hewan Coba

Pengambilan organ uterus tikus (Rattus norvegicus) dilakukan dengan

melakukan pembedahan. Sebelum dilakukan pembedahan tikus di euthanasia

dengan cara dislokasi leher. Alat bedah disiapkan untuk pengambilan organ

uterus. Setelah tikus mati, tikus diletakan pada nampan bedah dan diposisikan

pada ventrodorsal. Selanjutnya dibuka pada bagian abdomen dan diambil organ

uterus kemudian dibagi menjadi dua bagian. Satu bagian uterus dicuci dengan

cairan NaCl fisiologis lalu direndam dalam Phosphat Buffer Saline (PBS). Satu

bagian lainnya dimasukkan kedalam formalin 10%.

4.6.5 Pembuatan Preparat Histologi

Organ difiksasi dengan larutan formalin 10% minimal selama 7 jam

sebelum dilakukan proses pengerjaan. Jaringan dipotong kurang lebih

ketebalan 2-3 mm. Jaringan yang telah dipotong dimasukkan ke dalam kaset

dan diberi kode. Jaringan kemudian diproses dengan alat automatic tissue

processor Tissue Tek Xpress x50 selama 90 menit. Setelah itu, kaset diangkat

dari automatic tissue processor. Tahap selanjutnya adalah proses infiltrasi yang

dilakukan dalam parafin cair dan di-embedding ke dalam blok. Jaringan pada

blok parafin dipotong dengan mikrotom setebal 3-5 mikron. Irisan diletakkan

6

pada object glass dan dilakukan inkubasi dalam oven selama 30 menit dengan

suhu 70-80oC. Selanjutnya dilakukan proses deparafinasi dengan menggunakan

2 tabung larutan xylol masing-masing selama 20 menit, dilanjutkan dengan

proses rehidrasi menggunakan alkohol absolut 95%, 90%, 80% dan 70% secara

berurutan masing-masing selama 3 menit. Jaringan kemudian dicuci dengan

aquades selama 15 menit. Jaringan kemudian diwarnai dengan Harris

Hematoksilin selama 10-15 menit lalu dicuci dengan aquades selama 15 menit.

Jaringan dicelupkan pada alkohol 1% sebanyak 2-5 celup dan diwarnai dengan

eosin selama 10-15 menit dan dicuci dengan aquades 15 menit. Preparat

dikeringkan dan dilakukan mounting menggunakan entellan kemudian ditutup

dengan cover glass.

4.6.6 Metode Imunohistokimia

Imunohistokimia adalah suatu metode untuk mendeteksi keberadaan

molekul atau berbagai macam komponen yang terdapat di dalam sel atau

jaringan dengan menggunakan prinsip reaksi antara antigen dengan antibodi.

Metode imunohistokimia berdasarkan pada penggunaan suatu antibodi yang

spesifik yang dilabel dengan ikatan kimia pada suatu zat yang dapat dilihat,

tanpa label itu mempengaruhi kemampuan antibodi untuk membentuk suatu

kompleks dengan antigen yang bersangkutan (Sahertian, 2010). Langkah

pertama yang dilakukan yaitu dengan inkubasi slide di inkubator dengan suhu

370 C selama 24 jam. Proses selanjutnya yaitu deparafinisasi dengan

menggunakan xylol I, 2, 3 masing-masing selama 10 menit. Deparafinisasi

bertujuan untuk menghilangkan atau melarutkan parafin yang terdapat pada

7

jaringan. Kemudian rehidrasi dengan direndam kedalam alkohol bertingkat

100%, 90%, 80% masing-masing selama 10 menit dan dicuci dengan aquades

selama 10 menit.

Slide dimasukkan ke dalam freezer suhu 40 C selama 24 jam. Slide

dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 5 menit dan diusap

sekeliling jaringan dengan tissue. Kemudian diinkubasi dengan H2O2 selama

40 menit. H2O2 adalah kromogen enzim yaitu suatu gugus fungsi senyawa

kimiawi yang dapat membentuk senyawa berwarna bila bereaksi dengan

senyawa tertentu. Slide dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 5

menit dan diusap sekeliling jaringan dengan tissue. Lalu diinkubasi antibodi

primer selama 24 jam, antibodi yang digunakan adalah antibodi reseptor

estrogen β. Slide dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 5 menit

dan diusap sekeliling jaringan dengan tissue. Selanjutnya diinkubasi antibodi

sekunder selama 2 jam. Slide dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-

masing 5 menit dan diusap sekeliling jaringan dengan tissue. Diinkubasi

dengan SA-HRP (Strep Avidin Horseradishperoxidase) selama 40 menit.

SA-HRP berfungsi untuk memperkuat ikatan antigen dengan antibodi.

Slide dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 5 menit dan diusap

sekeliling jaringan dengan tissue. Slide dicuci dengan aquades mengalir

sebanyak 2 kali. Kemudian diinkubasi dengan DAB selama 40 menit dan

dicuci dengan PBS sebanyak 3 kali masing-masing 5 menit dan diusap

sekeliling jaringan dengan tissue. Slide dicounterstaining dengan pewarna

hematoksilin mayer selama 3 menit lalu dicuci dengan air sampai pewarna

8

hilang dan dikeringkan. Setelah kering slide ditetesi dengan entellan dan

ditutup dengan coverglass. Antibodi primer bertugas mengenali antigen yang

diidentifikasi pada jaringan (first layer), sedangkan antibodi sekunder akan

berikatan dengan antibodi primer (second layer). Antibodi kedua merupakan

anti-antibodi primer. Dalam pewarnaan imunohistokimia, reaksi positif

ditunjukkan dengan munculnya warna coklat pada bagian sel yang mempunyai

spesifisitas dengan antibodi primer yang digunakan (Sahertian, 2010).

4.6.7 Analisis Data

Pada penelitian ini dilakukan analisis data menggunakan analisis

kuantitatif statistik dan kualitatif deskriptif. Analisis kuantitatif dilakukan

untuk melihat ekspresi reseptor estrogen β dengan menggunakan Immunoratio

dan SPSS kemudian dilakukan uji analysis of variance (ANOVA) yang

dilanjutkan dengan uji Tukey dengan α= 5% untuk mengetahui perbedaan

ragam antar kelompok tikus. Sedangkan untuk analisa data dari pengamatan

histologi uterus digunakan analisis kualitatif deskriptif menggunakan

mikroskop dengan perbesaran 400 x. Pengamatan histologi uterus meliputi

epitel endometrium. Hasilnya dibandingkan dengan histologi uterus normal.

1

BAB 5 HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Pengaruh Pemberian Fitoestrogen Kedelai (Glycine max) terhadap

Ekspresi Reseptor Estrogen β pada Uterus Tikus Putih Betina (Rattus

norvegicus)

Hasil pengecatan ER β dengan metode immunohistokimia dan dihitung

dengan menggunakan software immunoratio pada 5 lapang pandang dengan

pembesaran mikroskop perbesaran 1000x. Sampel dapat dilihat sebagai berikut :

(K) (P1)

(P2) (P3)

Gambar 5.1 Gambaran hasil pewarnaan imunohistokimia pada uterus tikus betina

Keterangan : Hasil pemeriksaan ekspresi ER β uterus tikus metode immunohistokimia

dengan skala 3 µm. Pada bagian stroma endometrium sel yang

mengekspresikan ER β ditandai dengan warna coklat ( ). Tampak ada

perbedaan ekspresi ER β pada kelompok K (tanpa perlakuan), P1, P2 dan

P3.

Hasil pengukuran ekspresi reseptor estrogen β organ uterus pada hewan

coba tikus dianalisis statistik menggunakan Statistical Product of Service Solution

2

(SPSS) 22 dengan uji ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Tukey. Hasil uji Anova

One Way pada data ekspresi ER β diperoleh ada perbedaan yang bermakna rerata

ekspresi ER β pada keempat kelompok tikus , hal ini ditunjukkan dengan nilai

p

3

menunujukkan tidak ada perbedaan yang bermakna. Hasil tersebut dapat diartikan

bahwa perlakuan pemberian fitoestrogen kedelai (Glycine max) dengan kedua

dosis yang berbeda tersebut mempunyai kemampuan yang sama dalam

meningkatkan ekspresi ER β pada tikus betina (Rattus novergicus).

Berdasarkan pada Tabel 5.1 menunjukkan ada perbedaan yang bermakna

rata-rata ekspresi ER β antara kekompok perlakuan 2 dosis 50mg/ekor (36.22 ±

1.41b) dengan kelompok perlakuan 3 dosis 75mg/ekor (55.26 ± 3.24

c). Pada

kelompok perlakuan 3 menunjukkan peningkatan terhadap kontrol lebih besar

yaitu 77 % jika dibandingkan kelompok perlakuan 1 dan 2, hal ini berarti semakin

besar pemberian fitoestrogen kedelai (Glycine max) maka ekspresi ER β akan

semakin besar pula.

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian fitoestrogen kedelai

(Glycine max) dapat meningkatkan ekspresi ER β uterus. Hasil ini sesuai dengan

pendapat Biben (2012) yang menyebutkan bahwa fitoestrogen adalah kelompok

tanaman yang berkhasiat menyerupai hormon estrogen atau dapat berinteraksi

dengan reseptor estrogen. Fitoestrogen merupakan kompetitor aktif untuk reseptor

estrogen, terutama reseptor β (Sitasiwi, 2009). ER β memiliki afinitas 20-30 kali

lebih tinggi terhadap fitoestrogen daripada ER α dan sebanding dengan afinitas


ER β dapat menekan tindakan dari ER α (Khairiah, 2014).

ER α dan ER β mempunyai pola ikatan dengan peptide koaktivator dan

korepresor secara berbeda sehingga efek yang ditimbulkan juga berbeda (Rice and

Whitehead, 2006). ER α memediasi efek proliferasi, sedangkan ER β bersifat

4

antiproliferasi. ER β dapat menurunkan transkripsi gen yang diregulasi oleh ER α,

sehingga bersifat antagonis ER α. Dalam proses transkripsi sintesis protein,

kompleks estrogen-reseptor estrogen tidak hanya berikatan pada ERE namun juga

berikatan dengan co-regulator. Co- regulator terdiri dari co-activator yang

berfungsi untuk menginduksi terjadinya proses transkripsi gen dari ikatan

komplek estrogen-reseptor estrogen, sehingga dapat diproduksinya suatu

messanger RNA (mRNA) yang mengakibatkan terjadinya sintesis protein sesuai

dengan karakteritsik hormon sedangkan co-represor akan bekerja sebaliknya

yakni menghambat proses transkripsi gen. Ikatan dengan ER β dapat menginhibisi

transkripsi gen, sehingga proliferasi pada organ akan terhambat (Gruber et al,

2002). Fitoestrogen dalam kedelai akan menyebabkan proliferasi pada lamina

propia endometrium menurun. Pada lamina propria terdapat stroma dan glandula

endometrium. Stroma akan mensekresikan growth factor yang akan menyebabkan

pertumbuhan epitel. Glandula endometrium berfungsi menghasilkan nutrisi untuk

perkembangan zigot. Proliferasi lamina propia yang terganggu akan menyebabkan

pertumbuhan endometrium terhambat dan tidak siap untuk implantasi.

Fitoestrogen memiliki mekanisme kerja serupa dengan estradiol. Estradiol

yang disekresikan ke dalam darah akan berikatan dengan globulin dan albumin

atau dalam bentuk yang bebas dan akan berikatan dengan reseptor estrogen.

Fitoestrogen dapat meniru kerja estrogen tetapi disisi lain juga dapat memblok

kerja estrogen. Fitoestrogen mempunyai aktivitas biologi dan struktur molekul

menyerupai estradiol sehingga dapat berikatan langsung dengan reseptor estrogen

dan berkompetisi dengan estrogen endogen, oleh karenanya fitoestrogen dapat

5

memberikan efek estrogenik dan antiestrogenik. Efek yang dihasilkan oleh

fitoestrogen tergantung pada dosis, dapat bertindak sebagai estrogenik pada dosis

rendah dan sebagai antiestrogenik pada dosis tinggi ( Wiyasa, 2008; Kariyil,

2010; Sampey et al, 2011).

5.2 Pengaruh Pemberian Fitoestrogen Kedelai (Glycine max) terhadap

Histologi Uterus Tikus Putih Betina (Rattus norvegicus)

Hasil penelitian dari pemberian fitoestrogen dalam ekstrak kedelai

terhadap gambaran histologi uterus tikus sebagai kandidat kontrasepsi dengan

pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) disajikan pada Gambar 5.2. Gambaran

histologi uterus tikus (Rattus norvegicus) dilihat dengan perbesaran 400x.

Gambar 5.2 Histologi uterus tikus dengan pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE)

perbesaran 400 X skala 30 µm.

C D

A B

6

Keterangan:

(A) Uterus tikus kontrol menunjukkan bentuk epitel endometrium normal yaitu epitel silindris ( ).

(B) Uterus tikus perlakuan dosis 25 mg/ekor ekstrak kedelai menunjukkan epitel endometrium tidak normal yaitu pada epitel bagian bawah endometrium menjadi

lebih rendah ( ) sedangkan pada epitel bagian atas tetap memiliki bentuk epitel

silindris.

(C) Uterus tikus perlakuan dosis 50 mg/ekor ekstrak kedelai menunjukkan epitel endometrium tidak normal yaitu adanya perubahan bentuk epitel menjadi lebih

rendah ( ).

(D) Uterus tikus perlakuan dosis 75 mg/ekor ekstrak kedelai menunjukkan epitel endometrium tidak normal yaitu adanya perubahan bentuk epitel menjadi lebih

rendah ( ).

Hasil histologi kelompok perlakuan menunjukkan epitel endometrium tidak

normal yaitu mengalami perubahan bentuk epitel menjadi lebih rendah. Adanya

perubahan epitel ini bisa menyebabkan implantasi zigot tidak melekat erat. Hal ini

sesuai dengan pendapat Patisaul dan Jefferson (2010), fertilitas tikus betina dapat

terganggu setelah paparan isoflavon (fitoestrogen), kegagalan implantasi

dikarenakan uterus tidak mampu mempertahankan blastosit. Darios et al., (2012)

menyatakan, kebuntingan dapat terjadi apabila struktur epitel endometrium dan

otot-otot penyusun endometrium tidak mengalami perubahan.

Pada persiapan hewan bunting, dinding uterus akan menebal secara

perlahan, terjadi vaskularisasi endometrium, kelenjar endometrium lebih banyak

dan kelenjar akan tumbuh panjang berkelok-kelok (Partodihardjo, 1987). Menurut

Greaves (2007) pada saat bunting sel-sel epitel akan mengalami proliferasi dan

differensiasi, endometrium menebal karena adanya proliferasi stroma, terjadi

akumulasi cairan uterus dan terjadi penebalan miometrium. Pemberian

fitoestrogen kedelai (Glycine max) dengan dosis kronis akan bersifat

antiestrogenik yang akan menyebabkan proses proliferasi lamina propia tidak

terjadi. Pada lamina propria terdapat stroma dan glandula endometrium. Stroma

7

akan mensekresikan growth factor yang akan menyebabkan pertumbuhan epitel

dan glandula endometrium berfungsi menghasilkan nutrisi untuk perkembangan

zigot. Proliferasi lamina propia yang terganggu maka akan menyebabkan

pertumbuhan endometrium terhambat dan tidak siap untuk implantasi.

Implantasi adalah proses menempelnya embrio (tahap blastosis) pada

endometrium (dinding rahim) sehingga terjadi hubungan antara selaput ekstrak

embrionik dengan selaput lendir rahim. Berdasarkan proses perlekatan trophoblast

dengan sel epitel endometrium, tikus termasuk tipe implantasi invasif. Implantasi

invasif adalah implantasi dengan blastosis segera melakukan perlekatan dengan

dinding endometrium (Yunanda, 2015). Epitel endometrium harus dalam keadaan

normal yaitu berbentuk epitel selapis silindris agar trophoblast dapat menempel

pada epitel endometrium dengan baik.

Perubahan histologi uterus disebabkan karena pada lapisan penyusun

dinding uterus memiliki reseptor estrogen (Hillisch et al, 2004). Reseptor estrogen

juga bisa terstimulasi oleh bahan lain selain estrogen, yakni oleh fitoestrogen.

Salah satu tanaman yang termasuk dalam fitoestrogen adalah kedelai (Glycine

max) (Ascenzi, 2006). Fitoestrogen mempunyai afinitas yang lebih tinggi terhadap

ER β. Afinitas ini akan lebih ditingkatkan bila konsentasi fitoestrogennya dalam

jumlah yang tinggi (Kuiper et al, 1998).

Pada perkembangan uterus secara normal, estrogen berfungsi untuk

proliferasi uterus, terutama pertumbuhan sel epitel dan glandula endometrium

(Suhargo, 2005). Stroma akan mensekresikan growth factor yang berfungsi untuk

pertumbuhan sel epitel endometrium (Cooke et al, 1995).Efek biologis dari

8

estrogen dimediasi melalui reseptor estrogen α dan β. Reseptor estrogen α dan β

diaktifkan oleh faktor transkripsi. ER dapat bersifat agonis dan antagonis. ER α

yang berikatan dengan TAF-1 menyebabkan efek agonis dan mengaktifkan co-

activator sehingga transkripsi gen terjadi. Sedangkan ER β yang berikatan dengan

TAF-1 akan menyebabkan efek antagonis sehingga mengaktifkan co-repressor

sehingga transkripsi gen tidak terjadi (Riggs and Hartmann, 2003). Proses

transkripsi yang tidak aktif menyebabkan tidak terjadi sintesa protein yang

diperlukan untuk mitosis sel-sel epitel. Mitosis sel epitel yang tidak terjadi

menyebabkan proliferasi sel epitel tidak terjadi dan epitel endometrium menipis

(Kusmana, 2007). Hal tersebut akan menyebabkan implantasi yang terjadi tidak

melekat erat pada dinding endometrium.

1

BAB 6 KESIMPULAN DAN SARAN

6.1 Kesimpulan

1. Pemberian fitoestrogen kedelai (Glycine max) dengan dosis 75

mg/ekor merupakan dosis efektif untuk meningkatkan ekspresi

reseptor estrogen β tikus betina (Rattus norvegicus). Hal ini

dibuktikan dengan peningkatan signifikan ekspresi reseptor estrogen β

pada kelompok terapi sebanyak 77%.

2. Pemberian fitoestrogen kedelai (Glycine max) dapat menyebabkan

endometrium pada tikus mengalami perubahan bentuk epitel menjadi

lebih rendah. Adanya perubahan struktur epitel ini bisa menyebabkan

implantasi zigot tidak melekat erat.

6.2 saran

Pada penelitian berikutnya sebaiknya dilakukan swab vagina untuk

mendapatkan fase estrus yang sama, agar hasil yang didapatkan lebih

akurat.

1

DAFTAR PUSTAKA

Agustini, K. S. Wiryowidagdo, dan D. Kusmana. 2007. Pengaruh Pemberian

Ekstrak Biji Klabet (Trigonella Foenum-Graecum L.) terhadap

Perkembangan Uterus Tikus Putih Betina Galur Wistar Prepubertal. Pusat

Pengkajian dan Penerapan Teknologi Farmasi Dan Medika. Universitas

Indonesia.

Akbar, B. 2010. Tumbuhan dengan Kandungan Senyawa Aktif yang Berpotensi

sebagai Bahan Antifertilitas. Adabia Press. Jakarta.

Amin, M.H.F. Mahendra dan Aulanni’am. 2009. Pengaruh Paparan

Lipopolisakarida pada Rongga Mulut dan Assisted Drainage Therapy

(Adt) terhadap Kadar S-Ige dan Profil Radikal Bebas Pada Tikus Asma.

Seminar Nasional Biologi XX dan Kongres PBI XIV. UIN Maliki Malang

24-25 Juli 2009.

Anita, K. W. Kusworini dan A. Hidajat. 2004. Efek Estrogenik Ekstrak Tokbi

(Pueraria lobata, L) pada Sel Endometrium dan Vagina Tikus (Rattus

novergicus) Pasca Ooferektomi. Fakultas Kedokteran. Universitas

Brawijaya Malang.

Ascenzi, P. A. Bocedi, dan M. Marino. 2006. Structure Function Relationship of

Estrogen Receptor Alpha and Beta: Impact on Human Health. National

Institutes of health. 27(4):299-402

Awoniyi, C.A. D. Robert, D.N. Veeramachaeni, B.S. Hurst, K.E. Tucker and

W.D. Schalff. 1998. Reproductive Sequelae in Female Rats after in Utero

and Neonatal Exposure to the Phytoestrogen Genistein. Fertil. Steril. 70

(3).

Badziad, A. 2003. Endokrinologi Ginekologi. Edisi ke-2. Jakarta, 113-122.

Bjornstrom, L and M. Sjoberg. 2005. Mechanisms of Estrogen Receptor

Signaling: Convergence of Genomic and Nongenomic Actions on Target

Genes. Mol Endocrinol. 19(4): 833-842.

BKKBN. 2015. Laporan Kinerja Instansi Pemerintah 2015. Badan

Kependudukan dan Keluarga Berencana Nasional.

Christiani, C., P. Tedjo, dan B. Martono. 2014. Analisis Dampak Kepadatan

Penduduk Terhadap Kualitas Hidup Masyarakat Provinsi Jawa Tengah.

Serat Acitya Jurnal Ilmiah. Untag Semarang.

2

Cooke, P.L. D.L. Buchanan, D.B. Lubchan and G.R. Cunha. 1995. Mechanism of

estrogen action : lessons from the estrogen receptor knockout Mouse. Biol.

Reprod. 59 : 470 – 475.

Dahlia dan Delly. 2014. Pemberian Ekstrak Teh Putih (Cammelia sinensis) Oral

Mencegah Dislipidemia Pada Tikus (Rattus Norvegicus) Jantan Galur

Wistar yang Diberi Diet Tinggi Lemak [Tesis]. Universitas Udayana.

Denpasar.

Darios, E.S. B. Seitz, and S.W Watts. 2012. Smooth Muslce Pharmacology in the

Isolated Virgin and Pregnant Rat Uterus and Cervix. J of Pharmacol and

Therapeu, 341, 587-596.

Denni, 2012. Definition of Castration and Effect of Age Castration on Animal

Performance, Muscle Characteristics and Meat Quality Traits in 26-

month-old Charolais Streers. Livestock Science. Elsevier.

Dinastiti, B.V. 2016. Pengaruh Pemberian Susu Kedelai Terhadap Ekspresi

Reseptor Estrogen β Uterus Dan Ketebalan Endometrium Pada Masa

Reproduksi Tikus Betina (Rattus norvegicus) [Tesis]. Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya Malang.

Ganong, W. F. 1998. Fisiologi Kedokteran. Edisi ke-16. EGC. Widjajakusuma

Jakarta

Glover A. and S.J. Assinder. 2006. Acute exposure of adult male rats to dietary

phytoestrogen reduces fecundity and alters epididymal steroid hormone

receptor expression. Jour Endoc. 189: 565-573.

Greaves and Peter. 2007. Histopathology of Preclinical Toxicity Studies 3rd ed.

Leicester. UK.

Gruber, C.J. W. Tsuhugguel, C. Schneeberger, and J.C. Huber. 2002. Production

and Actions of Estrogen. N Engl J Med. 346: pp 340-352.

Guyton, A. C. 2000. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 9. Jakarta. EGC. 1283-

1300.

Haibin, W. T. Sussane, X. Huirong, H. Gregory, K.D. Sanjoy and K.D. Sudhansu,

2005. Variation in Commercial Rodent Diets Induces Disparate Molecular

and Physiological Changes in The Mouse Uterus. PNAS. 28 (102) : 9960

– 9965.

Hardi, M. 2010. Efektivitas Pemberian Pupuk N Terhadap Kandungan Protein

Biji Kedelai (Glycine max L. Merril). Fakultas Pertanian. Universitas

Sumatera Utara Medan.

3

Herlita, R. Probosari, dan J. Ariyanto. 2015. Perubahan Histologis Uterus Tikus

Putih (Rattus Norvegicus) Galur Wistar: Aktifitas Antifertilitas Ekstrak

Kulit Biji Mete (Anacardium Occidentale L.). Biologi PMIPA. FKIP UNS.

Hernawati. 2009. Perbaikan Kinerja Reproduksi Akibat Pemberian Isoflavon Dari

Tanaman Kedelai. Pendidikan Biologi Fakultas MIPA. Universitas

Pendidikan Indonesia.

Hillisch, A. O. Peters, D. Kosemund, G. Muller, A. Walter, B. Schneider, G.

Reddersen, W. Elger, K.H. Fritzemeier. 2004. Dissecting Physiological

Roles of Estrogen Receptor Alpha and Beta with Potent Selective Ligands

from Structure Based Design. National Institutes of health. 18(7):1599-609

Irwan, A.W. 2006. Budidaya Tanaman Kedelai (Glycine max (L.) Merill). Jurusan

Budidaya Pertanian Fakultas Pertanian. Universitas Padjadjaran Bandung.

Kementerian Kesehatan RI. 2014. Situasi dan Analisis Keluarga Berencana.

InfoDANTIN Pusat Data dan Informasi Kementerian Kesehatan RI.

Khairiah, R. 2014. Pengaruh Pemberian Genistein terhadap Ekspresi Reseptor

Estrogen α dan β pada Kultur Sel Endometriosis [Tesis]. Fakultas

Kedokteran Universitas Brawijaya. Malang

Krinke, G. J. 2000. The Handbook of Experimental Animals The Laboratory Rat.

Academy Press. New York.

Kuiper, G.G. J.G Lemmen, B. Carlssom, J.C Corton, S.H Safe, P.T Saag, B. Burg,

and J.A Gustafsson. 1998. Interaction of Estrogenic Chemicals and

Phytoestrogens with Estrogen Receptor Beta. National Institutes of health.

139(10):4252-63

Kusmana, D. R. Lestari, Setiorini, A. Dewi, P. Ratri dan Soraya RRR. 2007. Efek

estrogenik ekstrak etanol 70% kunyit (Curcuma domestica Val.) terhadap

mencit (Mus musculus L.) betina yang diovariektomi. Makara Sains

11(2):90-97.

Kusriningrum, R.S. 2008. Buku Ajar Perancangan Percobaan. Fakultas

kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Dani Abadi. Surabaya

Kusumawati, D. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba. Gadjah Mada University

Press. Yogyakarta

Manurung, E.S. 2014. Ekspresi Imunohistokimia Aromatase P450 Pada

Endometrium Ektopik Penderita Endometriosis Dibandingkan

4

Endometrium Normal [Tesis]. Fakultas Kedokteran. Universitas Sumatera

Utara.

McCartney, C.A, and K.E. Mate, 1999 Cloning and characterisation of a zona

pellucida 3 cDNA from a marsupial. the brushtail possum

Men

POTENSI FITOESTROGEN KEDELAI (Glycine max SEBAGAI...

Documents

Transcript of POTENSI FITOESTROGEN KEDELAI (Glycine max SEBAGAI...