上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

实验中医

ＤＯＩ１０１６３０６ ｊ１００８￣８６１ｘ２０１８０１０１２

基于 ＮＦ￣κＢ 通路评价益气小复方对三阴性乳腺癌顺铂耐药的逆转作用张玉柱ꎬ陈红风上海中医药大学附属龙华医院中医乳腺病科(上海　 ２０００３２)

【摘　 要】 　 目的探讨益气小复方(Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ)逆转三阴性乳腺癌顺铂(ｐｌａｔｉｎｕｍꎬＤＤＰ)耐药细胞株 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 耐药的能力及其潜在的机制ꎮ 方法采用 ＭＭＴ 检测协同效应浓度下的益气小复方对 ＤＤＰ 诱导三阴性乳腺癌 ＤＤＰ 耐药细胞株 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 生长抑制的影响ꎬ随后采用流式细胞仪检测益气小复方联合 ＤＤＰ 对ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 诱导凋亡的增敏作用ꎻ应用电感耦合质谱仪检测比较益气小复方联合 ＤＤＰ 组与单用 ＤＤＰ 组ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 胞内铂离子浓度累积的差异ꎬ并采用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测益气小复方对耐药相关蛋白以及对 ＮＦ￣κＢ 通路的调控作用ꎮ 同时ꎬ建立乳腺癌移植瘤模型ꎬ分为对照组ＤＤＰ 组益气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组以做进一步验证ꎮ 结果益气小复方联合 ＤＤＰ 可使 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 耐药指数显著降低(Ｐlt００１)ꎬ且 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 在不同浓度 ＤＤＰ 作用下联合作用组均比单用 ＤＤＰ 组凋亡比例显著增加(Ｐlt００５或 Ｐlt００１)ꎻ益气小复方联合 ＤＤＰ 可显著增加 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株胞内铂浓度(Ｐlt００１)ꎻ联合组中 Ｐ 糖蛋白(Ｐ￣ ｇｐ)乳腺癌耐药蛋白(ＢＣＲＰ)和多药耐药相关蛋白 ２(ＭＲＰ２)的表达量分别是 ＤＤＰ 组的 ４１３６４７(均 Ｐlt０００１)ꎻ益气小复方联合 ＤＤＰ 组中 ＩＫＫα 蛋白表达和 ＮＦ￣κＢ 蛋白核内积累水平均较其他组显著降低(均 Ｐlt００１)ꎮ 体内实验结果提示ꎬ益气小复方联合 ＤＤＰ 组较其他组瘤体体积增加较慢(Ｐlt００５)剥瘤前通过荧光活体成像荧光值低(Ｐlt００５)以及最终瘤体的质量小(Ｐlt００５)ꎮ 结论益气小复方可能通过抑制了 ＮＦ￣κＢ 通路的活性ꎬ进而下调相关转运蛋白超家族成员 Ｐ￣ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达从而逆转 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞对 ＤＤＰ 的耐药作用ꎮ【关键词】 　 益气小复方ꎻ三阴性乳腺癌ꎻ顺铂ꎻＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 细胞株ꎻ耐药ꎻ增敏

Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｏｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｂａｓｅｄｏｎ ＮＦ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙＺＨＡＮＧ ＹｕｚｈｕꎬＣＨＥＮ ＨｏｎｇｆｅｎｇＢｒｅａｓｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＬｏｎｇｈｕａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｇｈａｉ２０００３２ꎬＣｈｉｎａ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｏｎ ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ(ＤＤＰ)￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌｌｉｎｅ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ａｔ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＤＤＰ ｏｎ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｌａｔｉｎｕｍ ｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＤＤＰ ａｎｄ ＤＤＰ ａｌｏｎｅ ｂｙ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ Ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｏｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ Ｍｅａｎｗｈｉｌｅꎬｔｈｅ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｍｏｄｅｌ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄꎬａｎｄ ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬＤＤＰ ｇｒｏｕｐꎬＹｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＹｉｑｉＦｏｒｍｕｌａ ｗｉｔｈ ＤＤＰ ｇｒｏｕｐ(ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ)ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｖｅｒｉｆｙ ＲｅｓｕｌｔｓＹｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＤＤＰ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ(Ｐlt００１) Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ＤＤＰ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓꎬｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＤＤＰ ｇｒｏｕｐ(Ｐlt００５ ｏｒ Ｐlt００１) Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＤＤＰ ｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｐｌａｔｉｎｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｃｅｌｌｓ(Ｐlt００１) Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐ￣ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ (Ｐ￣ｇｐ)ꎬ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ (ＢＣＲＰ) ａｎｄ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ２ (ＭＲＰ２) ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ４１ꎬ ３６ ａｎｄ４７ ｏｆ ｔｈｅ ＤＤＰ ｇｒｏｕｐꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ (Ｐ lt ０００１) Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＫＫα ａｎｄ ＮＦ￣ κＢ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ(Ｐlt００１) Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｉｎ ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｌｏｗｌｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｇｒｏｕｐｓ(Ｐlt００５)ꎬａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｌｉｖｉｎｇ ｉｍａｇｉｎｇｗａｓ ｌｏｗ ｂｅｆｏｒｅ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ(Ｐlt００５)ꎬａｎｄ ｔｈｅ ｍａｓｓ ｏｆ ｆｉｎａｌ ｔｕｍｏｒ ｗａｓ ｓｍａｌｌ(Ｐlt００５) Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ ｍａｙ ｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＮＦ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙꎬａｎｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｄｏｗｎ￣ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐ￣ ｇｐꎬＢＣＲＰ ａｎｄ ＭＲＰ２ ａｎｄ ｔｈｕｓ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｈｅ ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ＤＤＰＫＥＹＷＯＲＤＳ　 Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａꎻｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒꎻｃｉｓｐｌａｔｉｎꎻＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅꎻｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ

[基金项目]　 国家自然科学基金资助项目(８１３７３６４７)[作者简介]　 张玉柱ꎬ男ꎬ在读博士生ꎬ主要从事中医药防治乳腺疾病的临床与基础研究[通信作者]　 陈红风ꎬ主任医师教授ꎬ博士生导师ꎻＥ￣ｍａｉｌｃｈｈｆｌｕｋ １２６ｃｏｍ

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Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

　 　 乳腺癌已逐步成为女性癌症发病率最高的疾

病之一ꎬ据流行病学数据统计ꎬ在北美欧洲和中国

乳腺癌的发病率均逐年攀升ꎮ 三阴性乳腺癌

(ＴＮＢＣ)是雌激素受体(ＥＲ)孕激素受体(ＰＲ)以

及人类表皮因子受体(Ｈｅｒ￣ ２)均是阴性为特点的一

种癌症[１]ꎮ 该类患者恶性程度高发病年轻化ꎬ在治疗方法目前尚缺少内分泌和靶向治疗ꎬ而化疗仍

是 ＴＮＢＣ 重要治疗方式ꎮ ２０１７ 年圣加伦乳腺癌国

际会议达成共识[２]ꎬ铂类药物是 ＴＮＢＣ 新辅助化疗

的首选治疗方案之一ꎬ但化疗耐药一直是乳腺癌患

者和乳腺外科医生需要共同面对的问题ꎮ 在临床

实践中ꎬ中医药辅助化疗同步进行治疗ꎬ往往可以

增强疗效和降低发生耐药的风险ꎮ 本课题组一直

致力于益气小复方(Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ)的基础研究ꎬ前期

研究发现其联合化疗药物具有较好抑制肿瘤细胞

生长 的 效 果[３]ꎬ 为 探 究 益 气 小 复 方 对 顺 铂

(ｐｌａｔｉｎｕｍꎬＤＤＰ)耐药的逆转作用ꎬ特选择三阴性乳

腺癌 ＤＤＰ 耐药细胞株ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰꎬ并从 ＮＦ￣κＢ 通路进行了评价ꎮ

１　 材料与方法

１１　 实验材料

１１１ 　 动物和细胞株 　 ＢＡＬＢ Ｃ 裸鼠ꎬ雌性ꎬ４ 周

龄ꎬ购自上海斯莱克动物中心ꎬ动物许可证号ＳＣＸＫ(沪) ２０１２￣０００２ꎮ 饲养于上海中医药大学实验动物

中心清洁级实验室ꎬ饲养环境为(２２plusmn２)ꎬ１２ ｈ 昼

夜交替ꎮ 人源三阴性乳腺癌细胞株 ( ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１)ꎬ购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资

源中心ꎮ１１２　 药物与试剂　 ＤＤＰꎬ购于齐鲁制药有限公司

(生产批号Ｈ３７０２１３５８)ꎬ用 ＰＢＳ 稀释成 ２０ ｇ Ｌ 的

工作液ꎬ￣２０ 低温保存ꎮ 胎牛血清(ＦＢＳ)胰酶ＤＭＥＭ 高糖培养基ꎬ均为 Ｇｉｂｃｏ 公司生产ꎻ噻唑蓝

ＭＴＴꎬ购自华美生物工程公司ꎻ二甲亚砜(ＤＭＳＯ)ꎬ江苏鸿声化工厂产品ꎮ 所有抗体均购于 Ａｂｃａｍ公司ꎮ１１３　 主要仪器　 全功能酶标仪(Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１)ꎬ美国 ＢｉｏＴｅｋ 公司ꎻ倒置显微镜(ＤＰ７０)ꎬ日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公司ꎻ电泳仪(Ｍｉｎｉ￣ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｅｔｒａ ｃｅｌｌ)ꎬ美国 ＧＥ 公

司ꎻ小动物荧光成像系统(ＭＡ２００)ꎬ日本 ＮＩＫＯＮ 公

司ꎻＣＯ２恒温培养箱(Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３１３１)ꎬ美国赛诺菲公司ꎻ外科手术器械包(ＳＳＷ￣３)ꎬ上海手

术器械厂ꎮ

１２　 益气小复方水煎剂制备工艺和测定　 取黄芪党参饮片ꎬ比例为 ２ ∶ １ꎬ加水回流提取 ３ 次ꎬ提取时

间分别为 １５１１ ｈꎬ每次加水量分别为 ８６６ 倍后

过滤ꎻ然后合并 ３ 次提取液ꎬ８０ 减压浓缩至相对

密度 １２２~１２３ꎻ８０ 减压干燥ꎬ研细ꎮ 精密称取提

取物细粉ꎬ每份 １０~１２ ｇꎬ加水 ２０ ｍｌ 使溶解ꎻ用水

饱和正丁醇振摇提取 ４ 次ꎬ每次 ４０ ｍｌꎻ合并正丁醇

层ꎬ用氨试液洗涤 ２ 次ꎬ每次 ４０ ｍｌꎻ正丁醇液蒸干ꎬ残渣加甲醇溶解ꎬ转移至 １０ ｍｌ 容量瓶中ꎬ加甲醇至

刻度摇匀既得ꎻ分别精密吸取对照品溶液 １０ μｌ供试品溶液 ２０ μｌꎬ注入液相色谱仪进行测定ꎬ用外标

两点法对数方程计算即得ꎮ１３　 细胞培养

１３１　 三阴性乳腺癌细胞株培养　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰꎬ采用低浓度到高浓度不同浓度的 ＤＤＰ 诱导刺

激所得[１]ꎮ 细胞均培养于含 １０的胎牛血清１的

青霉素以及链霉素的 ＤＭＥＭ 完全培养基中ꎬ置于

３７ ５ ＣＯ２的培养箱中培养ꎮ１３２　 耐药细胞株培养 　 参照本课题组前期试验

建立 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株[４]ꎮ 耐药细胞

用不带有 ＤＤＰ 培养基复苏ꎬ隔天换液用 ＤＤＰ 培养

液(１５ ｍｇ Ｌ)继续培养ꎮ 取对数期细胞进行试验ꎮ１４　 细胞耐药指数测定　 通过 ＭＴＴ 实验测定耐药

细胞株的耐药能力ꎮ 以 ５ ０００ 个 孔的细胞浓度将

细胞接种到 ９６ 孔板中ꎬ孵育 ２４ ｈ 且全部细胞贴壁

后予 ＤＤＰ 处理 ４８ ｈ 后加入 ＭＴＴ ５ ｇ Ｌ 孵育 ４ ｈꎻ随后加 ＤＭＳＯ 震荡 １０ ｍｉｎꎬ然后予以 ４９０ ｎｍ 实验波

长６３０ ｎｍ 为参照波长检测存活细胞的 ＯＤ 值ꎬ并以

此计算各组细胞半抑制浓度(ＩＣ５０)ꎮ１５　 细胞内铂浓度检测　 通过 ＩＣＰ￣ＭＳ 法检测细胞

内铂浓度ꎮ 取对数期 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ 和 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞ꎬＤＤＰ 浓度为 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 细胞 ＩＣ５ ０

值 １ ｍｇ Ｌꎮ 干预 ４８ ｈꎬ将处理后的细胞吸除掉上清

后ꎬＰＢＳ 清洗 ３ 次ꎻ用细胞刮刮下细胞收集ꎬ随后将

细胞悬掖置于含浓硝酸的细胞裂解液中 ６０ 水浴

２０ ｍｉｎꎮ 随后将处理后的细胞样品一部分使用电感

耦合等离子体质谱检测细胞内铂离子含量ꎬ另一部

分用于检测细胞样品的蛋白浓度ꎮ 重复 ３ 次ꎬ最终

将处理后的细胞样品采用电感耦合等离子体质谱

检测胞内铂离子浓度ꎮ 得到的铂浓度数值除以该

组样 品 相 应 的 蛋 白 浓 度ꎬ 即 表 示 为 ｎｇ Ｐｔ ｍｇｐｒｏｔｅｉｎꎮ１６　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株凋亡水平检测　 采

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上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 双染色及流式细胞术检测ꎮＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细胞株

干预 ４８ ｈ 后ꎬ根据 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 凋亡检测试

剂盒说明书推荐步骤收集细胞并孵育荧光探针ꎻ然后于流式细胞仪中检测细胞的凋亡程度ꎮ１７　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞相关蛋白表达检测　采用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测相关蛋白表达情况ꎮ 取对数

生长期的 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞ꎬ按 １times１０６ 个细

胞 孔接种于 ６ 孔板ꎬ贴壁 ２４ ｈ 后ꎬ加入含有药物的

培养基ꎬ药物干预 ４８ ｈ 后裂解细胞提取总蛋白ꎬ－８０ 保存ꎮ 每孔蛋白上样量 ６０ μｇꎬ经过 ８和

１０的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳分离后ꎬ转至 ＰＶＤＦ 膜上ꎬ用５的脱脂牛奶摇床封闭 ２ ｈꎬ一抗以 １ ∶ １ ０００ 比例

稀释ꎬ４ 孵育过夜ꎮ 后 ＴＢＳＴ 清洗 ３ 次后ꎬ加 ＨＲＰ标记二抗(１ ∶ ５ ０００) ２ ｈꎮ ＴＢＳＴ 洗膜 ３ 次ꎬＥＣＬ 化

学发光法显色ꎮ 所有实验均重复 ３ 次ꎬ通过 Ｉｍａｇｅ Ｊ软件定量分析蛋白相对表达量ꎮ１８ 　 皮下移植瘤体内实验 　 收集 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ￣ ｌｕｃ 细胞(１times１０７ ０２ ｍｌ ＰＢＳ)接种小鼠左侧第

二乳腺脂肪垫下ꎮ 当瘤块体积约达到 ６００ ｍｍ３时ꎬ将瘤块剥离ꎬ瘤块中坏死部分切除后ꎬ剩余部分剪

碎ꎬ瘤体碎块直径在 ０５ ~ １５ ｍｍ 之间ꎬ后将碎块逐

个种植到裸鼠左侧第二脂肪垫下ꎮ 接种 ２ 周后ꎬ将接种成功的裸鼠随机分为空白对照组ＤＤＰ 组益气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组ꎬ每组 ６ 只ꎮ根据药物剂量换算公式ꎬＤＤＰ 注射剂量为 ３ ｍｇ ｋｇꎬ１ 次 ３ ｄꎻ益气小复方的灌胃剂量为 ４ ｇ ｋｇꎬ１ 次 ｄꎮ

每 ３ ｄ 测量裸鼠的体质量和肿瘤体积ꎮ 体积算法(肿块长直径times短径２) ２ꎮ 所有的动物实验操作均

通过上海中医药大学动物实验中心伦理委员会

批准ꎮ１９　 统计学方法　 本研究数据采用 ＳＰＳＳ １９０ 软件

进行统计分析ꎮ 数据均使用 Ｓｔｕｄｅｎｔrsquo ｔ 检验ꎮ 实验

数据表示为 ｘ－plusmn ｓꎮ 所有数据均来自 ３ 个独立平行实

验组ꎮ

２　 结果

２１　 益气小复方水煎剂相关成分测定　 益气小复方

水煎剂通过高效液相色谱法比对成分测定结果为黄芪甲苷 １ ０５０ μｇ ｇ毛蕊异黄酮葡萄糖苷 ５００ μｇ ｇ芒柄花素 ７０３４ μｇ ｇ党参炔苷６５７５ μｇ ｇꎮ２２　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞耐药指数的影响　为了验证ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 是否具有 ＤＤＰ 耐药以

及多药耐药的特性ꎬ故采用 ＭＴＴ 法检测 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞在加入益气小复方后应用临床中常

见的化疗药物 ＤＤＰ 的细胞抑制率和 ＩＣ５０ꎮ 实验结

果显示药物处理 ４８ ｈ 后ꎬ耐药细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 相对于敏感细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ꎬＩＣ５０显

著增加ꎻ予以益气小复方干预后均发现ꎬＩＣ５０显著降

低(Ｐlt００１)ꎻ通过 Ｃｏｍｐｕｓｙｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ 测算益气小复

方与 ＤＤＰ 的联用指数(ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎬＣＩ)ꎬ结果

显示联合指数均小于 １ꎬ表明两者之间具有协同效

应ꎮ 见图 １ꎮ

Ａ细胞存活率ꎻＢＩＣ５０浓度ꎻＣ联用指数ꎮ ｎ＝ ３ꎬｘ－plusmn ｓꎻ与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 １　 ＤＤＰ 与益气小复方或联合使用对细胞株活性影响比较

２３　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株体外凋亡率的影

响　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细

胞株ꎬ在 ５ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 浓度下细胞凋亡率分别为

(１４６９plusmn４２０)(３６１０plusmn３８０)ꎬ组间比较差异有

统计学意义 ( Ｐ lt ００５)ꎻ １０ ｍｇ Ｌ 浓度下分别为

(２３８８plusmn４４４)(４７７０plusmn５３３)(Ｐlt００１)ꎬ２０ ｍｇ Ｌ浓度下分别为 (３６ １０ plusmn ５ ７８)(６５ ３０ plusmn ７ ２２)(Ｐlt００１)ꎮ 表明益气小复方联合 ＤＤＰ 组的凋亡率

明显高于 ＤＤＰ 组ꎮ 见图 ２ꎮ

1048944１５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

ＡＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 凋亡情况ꎻＢ凋亡率比较ꎮ 与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 ２　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组不同浓度 ＤＤＰ 的干预下细胞凋亡情况比较

２４　 对 ２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株胞内铂浓度的影响　ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 在 １ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 的干预下胞内

铂浓度为(１７４５５plusmn２７３２)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎻ在益气小复

方的干预下ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 的胞内铂浓度为

(２４５９３plusmn１２４７)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎬ与未干预组比较差异

有统计学意义(Ｐlt００１)ꎮ 见图 ３ꎮ

图 ３　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组细胞内铂浓度比较

２５　 对相关蛋白表达的影响

２５１　 对转运蛋白超家族成员蛋白表达的影响 　益气小复方作用于 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ后ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 耐 药 细 胞 株 Ｐ 糖 蛋 白

(Ｐ￣ｇｐ)乳腺癌耐药蛋白(ＢＣＲＰ)和多药耐药相关

蛋白 ２ (ＭＲＰ２) 的表达量分别是 ＤＤＰ 组的 ４１３６和 ４７(均 Ｐlt０００１)ꎮ 见图 ４ꎮ

图 ４　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组相关跨膜蛋白表达比较

２５２　 对 ＮＦ￣κＢ 通路的影响　 对照组ＤＤＰ 组益

气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组作用于

ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ 后ꎬＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 结果表明ꎬ益气小复方单独或者联合使用ꎬ可降低核

因子 ｋａｐｐａ￣ Ｂ 激酶抑制剂 α ( Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ￣Ｂ ｋｉｎａｓｅ αꎬ ＩＫＫα)和核转录因子 ｋａｐｐａＢ(ＮＦ￣κＢ)表达水平ꎬ而单独使用 ＤＤＰ 对 ＮＦ￣κＢ 没

有明显影响ꎮ 见图 ５ꎮ

图 ５　 各组的 ＮＦ￣κＢ 通路蛋白表达比较

２６　 体内实验对裸鼠及其瘤体的影响 　 给药过程

中 ＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组给药第 ４ 天裸

鼠体质量较其他两组明显减轻(Ｐ 均lt００１)ꎬ在给药

第 １６ 天发现单用 ＤＤＰ 组裸鼠体质量降低更明显

(Ｐ 均lt００５)ꎮ 瘤体的体积变化在给药第 ７ 天 ＤＤＰ联合益气小复方组瘤体体积较其他 ３ 组生长缓慢

(Ｐ 均lt００１)ꎻ给药第 １２ 天ꎬ发现 ＤＤＰ 联合益气小

复方组较 ＤＤＰ 组生长缓慢(Ｐ 均lt００５)ꎮ 给药第 ３０天后ꎬ对照组益气小复方组ꎬＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益

气小复方组瘤体质量分别为(７５７plusmn１５６)ｍｇ(７４６plusmn９２)ｍｇ(２６４plusmn５３) ｍｇ 和(１８３plusmn８０) ｍｇꎬ各组间比较

Ｐ 均lt００５ꎮ 各组在处死剥瘤前移植瘤活体成像的

结果ꎬ可见对照组和益气小复方组荧光值较大ꎬＤＤＰ组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组相比ꎬＤＤＰ 联合益气

小复方组更小(Ｐlt００５)ꎮ 见图 ６图 ７ꎮ

1048944２５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

Ａ裸鼠体质量ꎻＢ瘤体体积ꎻＣ瘤体质量

图 ６　 各组裸鼠及其瘤体的生长情况比较

图 ７　 各组剥瘤前裸鼠皮下移植瘤荧光值

３　 讨论

化疗是乳腺癌最主要的全身治疗方式之一[５]ꎬ但化疗耐药往往导致治疗失败ꎬ造成预后不良[６]ꎮ膜蛋白的高表达是乳腺癌产生耐药的主要机制[７]ꎬ目前对诱导跨膜蛋白高表达的耐药机制尚未清

晰[８]ꎬ部分学者运用化学合成的方法寻找下游蛋白

或者激酶的抑制剂ꎬ从而增强杀伤肿瘤细胞的能

力[９]ꎬ这些方法往往被动且效率低下ꎮ 所以开发中

医药的宝藏ꎬ寻求低毒高效可以逆转 ＤＤＰ 耐药的

逆转剂是我们课题组的主要方向ꎮ 益气小复方是

源于乳腺癌患者术后常用方剂化裁而来[１０]ꎬ长期使

用取得非常好的疗效ꎮ 本研究选择符合 ２０１５ 年版

laquo中国药典raquo标准的黄芪和党参饮片ꎬ黄芪与党参的

配比为 ２ ∶ １ꎬ以黄芪中黄芪甲苷毛蕊异黄酮葡萄

糖苷芒柄花素ꎬ党参中党参炔苷为指标性成分ꎬ优化黄芪党参药对提取物的提取浓缩和干燥工艺ꎻ同时以 ４ 种指标成分含量测定为主ꎬ建立提取物质

量产生耐药的标准ꎬ有助于黄芪党参提取物质量的

一致性和稳定性ꎮ 结果发现ꎬ益气小复方能够降低

ＤＤＰ 耐药细胞株跨膜蛋白的表达ꎬ一定程度上阻止

了 ＤＤＰ 的外排功能ꎬ增加了胞内 ＤＤＰ 的含量ꎬ而产

生增敏的效果ꎮ 同样ꎬ在体内实验也进一步证明了

益气小复方逆转 ＤＤＰ 耐药的假设ꎬ联合用药的作用

效果明显优于 ＤＤＰ 单药使用ꎮ

国内外大量研究表明[１１￣１５]ꎬＮＦ￣ κＢ 信号通路参

与跨膜蛋白的表达ꎬ其激活是引起耐药的重要途

径ꎮ Ｂｅｎｔｉｒｅｓ 团队通过双荧光素的方法证明了 ＮＦ￣κＢ 的 ｍＲＮＡ 序列中含有 Ｐ￣ ｇｐ 启动子区域[１６]ꎮ 更

多的实验证明耐药促进 ＩＫＫβ 的激活往往是产生

ＮＦ￣κＢ 核扭转的经典通路ꎬ而本实验却恰恰证明益

气小复方通过抑制旁路途径 ＩＫＫα 的表达从而抑制

ＮＦ￣κＢ 在细胞核内的积累水平ꎬ即抑制 ＮＦ￣κＢ 核扭

转作用ꎬ从而逆转了耐药ꎮ综上所述ꎬ益气小复方通过抑制 ＩＫＫα 的活性ꎬ

阻滞了 ＩＫＫα ＮＦ￣κＢ 信号通路ꎬ从而下调了转运蛋

白成员 Ｐ￣ ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达ꎬ最终增加了

ＤＤＰ 在耐药细胞株的含量ꎮ 这可能是益气小复方

逆转乳腺癌 ＤＤＰ 耐药的作用机制之一ꎮ 本研究从

跨膜蛋白为切入点ꎬ从 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 信号通路的角

度出发ꎬ揭示 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 与 ＤＤＰ 耐药的关系ꎬ是对益气小复方 ＤＤＰ 耐药增敏作用的全新探索ꎬ具有

一定的临床和基础价值ꎮ

参考文献[１] ＢＲＡＳＯＭＡＲＩＳＴＡＮＹ ＦꎬＦＩＬＯＳＴＯ ＳꎬＣＡＴＣＨＰＯＬＥ Ｓꎬｅｔ ａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ

１７８ ＰＩＭ１ꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ￣ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒｉｐｌｅ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓꎬ２０１６ꎬ７６(１４ Ｓｕｐｐｌ)ｓ１７８

[２] ＣＵＲＩＧＬＩＡＮＯ ＧꎬＢＵＲＳＴＥＩＮ Ｈ ＪꎬＰ ＷＩＮＥＲ Ｅꎬｅｔ ａｌ Ｄｅ￣ｅｓｃａｌａｔｉｎｇａｎｄ ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ￣ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅ ＳｔＧａｌｌｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒｉｍａｒｙＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７[Ｊ] Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ２８(８)１７００￣１７１２

[３] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ Ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅＡｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ￣Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ [ Ｊ ] Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ａｌｔｅｒｎａｔ Ｍｅｄꎬ２０１４ꎬ２０１４(２)６２８７１２

[４] 盛佳钰ꎬ时百玲ꎬ陈红风 三阴性乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 顺铂耐药

细胞株的建立及鉴定[Ｊ] 肿瘤防治研究ꎬ２０１６ꎬ４３(３)１７５￣１８０[５] ＡＧＩＲＯ Ａꎬ ＭＡ Ｑꎬ ＡＣＨＥＳＯＮ Ａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ￣

Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｈｏ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｃｏｌｏｎｙ￣Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｊ Ｃｌｉｎ

1048944３５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

10509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901

本刊声明

近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

laquo上海中医药大学学报raquo编辑部

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Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

　 　 乳腺癌已逐步成为女性癌症发病率最高的疾

病之一ꎬ据流行病学数据统计ꎬ在北美欧洲和中国

乳腺癌的发病率均逐年攀升ꎮ 三阴性乳腺癌

(ＴＮＢＣ)是雌激素受体(ＥＲ)孕激素受体(ＰＲ)以

及人类表皮因子受体(Ｈｅｒ￣ ２)均是阴性为特点的一

种癌症[１]ꎮ 该类患者恶性程度高发病年轻化ꎬ在治疗方法目前尚缺少内分泌和靶向治疗ꎬ而化疗仍

是 ＴＮＢＣ 重要治疗方式ꎮ ２０１７ 年圣加伦乳腺癌国

际会议达成共识[２]ꎬ铂类药物是 ＴＮＢＣ 新辅助化疗

的首选治疗方案之一ꎬ但化疗耐药一直是乳腺癌患

者和乳腺外科医生需要共同面对的问题ꎮ 在临床

实践中ꎬ中医药辅助化疗同步进行治疗ꎬ往往可以

增强疗效和降低发生耐药的风险ꎮ 本课题组一直

致力于益气小复方(Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ)的基础研究ꎬ前期

研究发现其联合化疗药物具有较好抑制肿瘤细胞

生长 的 效 果[３]ꎬ 为 探 究 益 气 小 复 方 对 顺 铂

(ｐｌａｔｉｎｕｍꎬＤＤＰ)耐药的逆转作用ꎬ特选择三阴性乳

腺癌 ＤＤＰ 耐药细胞株ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰꎬ并从 ＮＦ￣κＢ 通路进行了评价ꎮ

１　 材料与方法

１１　 实验材料

１１１ 　 动物和细胞株 　 ＢＡＬＢ Ｃ 裸鼠ꎬ雌性ꎬ４ 周

龄ꎬ购自上海斯莱克动物中心ꎬ动物许可证号ＳＣＸＫ(沪) ２０１２￣０００２ꎮ 饲养于上海中医药大学实验动物

中心清洁级实验室ꎬ饲养环境为(２２plusmn２)ꎬ１２ ｈ 昼

夜交替ꎮ 人源三阴性乳腺癌细胞株 ( ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１)ꎬ购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资

源中心ꎮ１１２　 药物与试剂　 ＤＤＰꎬ购于齐鲁制药有限公司

(生产批号Ｈ３７０２１３５８)ꎬ用 ＰＢＳ 稀释成 ２０ ｇ Ｌ 的

工作液ꎬ￣２０ 低温保存ꎮ 胎牛血清(ＦＢＳ)胰酶ＤＭＥＭ 高糖培养基ꎬ均为 Ｇｉｂｃｏ 公司生产ꎻ噻唑蓝

ＭＴＴꎬ购自华美生物工程公司ꎻ二甲亚砜(ＤＭＳＯ)ꎬ江苏鸿声化工厂产品ꎮ 所有抗体均购于 Ａｂｃａｍ公司ꎮ１１３　 主要仪器　 全功能酶标仪(Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１)ꎬ美国 ＢｉｏＴｅｋ 公司ꎻ倒置显微镜(ＤＰ７０)ꎬ日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公司ꎻ电泳仪(Ｍｉｎｉ￣ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｅｔｒａ ｃｅｌｌ)ꎬ美国 ＧＥ 公

司ꎻ小动物荧光成像系统(ＭＡ２００)ꎬ日本 ＮＩＫＯＮ 公

司ꎻＣＯ２恒温培养箱(Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３１３１)ꎬ美国赛诺菲公司ꎻ外科手术器械包(ＳＳＷ￣３)ꎬ上海手

术器械厂ꎮ

１２　 益气小复方水煎剂制备工艺和测定　 取黄芪党参饮片ꎬ比例为 ２ ∶ １ꎬ加水回流提取 ３ 次ꎬ提取时

间分别为 １５１１ ｈꎬ每次加水量分别为 ８６６ 倍后

过滤ꎻ然后合并 ３ 次提取液ꎬ８０ 减压浓缩至相对

密度 １２２~１２３ꎻ８０ 减压干燥ꎬ研细ꎮ 精密称取提

取物细粉ꎬ每份 １０~１２ ｇꎬ加水 ２０ ｍｌ 使溶解ꎻ用水

饱和正丁醇振摇提取 ４ 次ꎬ每次 ４０ ｍｌꎻ合并正丁醇

层ꎬ用氨试液洗涤 ２ 次ꎬ每次 ４０ ｍｌꎻ正丁醇液蒸干ꎬ残渣加甲醇溶解ꎬ转移至 １０ ｍｌ 容量瓶中ꎬ加甲醇至

刻度摇匀既得ꎻ分别精密吸取对照品溶液 １０ μｌ供试品溶液 ２０ μｌꎬ注入液相色谱仪进行测定ꎬ用外标

两点法对数方程计算即得ꎮ１３　 细胞培养

１３１　 三阴性乳腺癌细胞株培养　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰꎬ采用低浓度到高浓度不同浓度的 ＤＤＰ 诱导刺

激所得[１]ꎮ 细胞均培养于含 １０的胎牛血清１的

青霉素以及链霉素的 ＤＭＥＭ 完全培养基中ꎬ置于

３７ ５ ＣＯ２的培养箱中培养ꎮ１３２　 耐药细胞株培养 　 参照本课题组前期试验

建立 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株[４]ꎮ 耐药细胞

用不带有 ＤＤＰ 培养基复苏ꎬ隔天换液用 ＤＤＰ 培养

液(１５ ｍｇ Ｌ)继续培养ꎮ 取对数期细胞进行试验ꎮ１４　 细胞耐药指数测定　 通过 ＭＴＴ 实验测定耐药

细胞株的耐药能力ꎮ 以 ５ ０００ 个 孔的细胞浓度将

细胞接种到 ９６ 孔板中ꎬ孵育 ２４ ｈ 且全部细胞贴壁

后予 ＤＤＰ 处理 ４８ ｈ 后加入 ＭＴＴ ５ ｇ Ｌ 孵育 ４ ｈꎻ随后加 ＤＭＳＯ 震荡 １０ ｍｉｎꎬ然后予以 ４９０ ｎｍ 实验波

长６３０ ｎｍ 为参照波长检测存活细胞的 ＯＤ 值ꎬ并以

此计算各组细胞半抑制浓度(ＩＣ５０)ꎮ１５　 细胞内铂浓度检测　 通过 ＩＣＰ￣ＭＳ 法检测细胞

内铂浓度ꎮ 取对数期 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ 和 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞ꎬＤＤＰ 浓度为 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 细胞 ＩＣ５ ０

值 １ ｍｇ Ｌꎮ 干预 ４８ ｈꎬ将处理后的细胞吸除掉上清

后ꎬＰＢＳ 清洗 ３ 次ꎻ用细胞刮刮下细胞收集ꎬ随后将

细胞悬掖置于含浓硝酸的细胞裂解液中 ６０ 水浴

２０ ｍｉｎꎮ 随后将处理后的细胞样品一部分使用电感

耦合等离子体质谱检测细胞内铂离子含量ꎬ另一部

分用于检测细胞样品的蛋白浓度ꎮ 重复 ３ 次ꎬ最终

将处理后的细胞样品采用电感耦合等离子体质谱

检测胞内铂离子浓度ꎮ 得到的铂浓度数值除以该

组样 品 相 应 的 蛋 白 浓 度ꎬ 即 表 示 为 ｎｇ Ｐｔ ｍｇｐｒｏｔｅｉｎꎮ１６　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株凋亡水平检测　 采

1048944０５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 双染色及流式细胞术检测ꎮＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细胞株

干预 ４８ ｈ 后ꎬ根据 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 凋亡检测试

剂盒说明书推荐步骤收集细胞并孵育荧光探针ꎻ然后于流式细胞仪中检测细胞的凋亡程度ꎮ１７　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞相关蛋白表达检测　采用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测相关蛋白表达情况ꎮ 取对数

生长期的 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞ꎬ按 １times１０６ 个细

胞 孔接种于 ６ 孔板ꎬ贴壁 ２４ ｈ 后ꎬ加入含有药物的

培养基ꎬ药物干预 ４８ ｈ 后裂解细胞提取总蛋白ꎬ－８０ 保存ꎮ 每孔蛋白上样量 ６０ μｇꎬ经过 ８和

１０的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳分离后ꎬ转至 ＰＶＤＦ 膜上ꎬ用５的脱脂牛奶摇床封闭 ２ ｈꎬ一抗以 １ ∶ １ ０００ 比例

稀释ꎬ４ 孵育过夜ꎮ 后 ＴＢＳＴ 清洗 ３ 次后ꎬ加 ＨＲＰ标记二抗(１ ∶ ５ ０００) ２ ｈꎮ ＴＢＳＴ 洗膜 ３ 次ꎬＥＣＬ 化

学发光法显色ꎮ 所有实验均重复 ３ 次ꎬ通过 Ｉｍａｇｅ Ｊ软件定量分析蛋白相对表达量ꎮ１８ 　 皮下移植瘤体内实验 　 收集 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ￣ ｌｕｃ 细胞(１times１０７ ０２ ｍｌ ＰＢＳ)接种小鼠左侧第

二乳腺脂肪垫下ꎮ 当瘤块体积约达到 ６００ ｍｍ３时ꎬ将瘤块剥离ꎬ瘤块中坏死部分切除后ꎬ剩余部分剪

碎ꎬ瘤体碎块直径在 ０５ ~ １５ ｍｍ 之间ꎬ后将碎块逐

个种植到裸鼠左侧第二脂肪垫下ꎮ 接种 ２ 周后ꎬ将接种成功的裸鼠随机分为空白对照组ＤＤＰ 组益气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组ꎬ每组 ６ 只ꎮ根据药物剂量换算公式ꎬＤＤＰ 注射剂量为 ３ ｍｇ ｋｇꎬ１ 次 ３ ｄꎻ益气小复方的灌胃剂量为 ４ ｇ ｋｇꎬ１ 次 ｄꎮ

每 ３ ｄ 测量裸鼠的体质量和肿瘤体积ꎮ 体积算法(肿块长直径times短径２) ２ꎮ 所有的动物实验操作均

通过上海中医药大学动物实验中心伦理委员会

批准ꎮ１９　 统计学方法　 本研究数据采用 ＳＰＳＳ １９０ 软件

进行统计分析ꎮ 数据均使用 Ｓｔｕｄｅｎｔrsquo ｔ 检验ꎮ 实验

数据表示为 ｘ－plusmn ｓꎮ 所有数据均来自 ３ 个独立平行实

验组ꎮ

２　 结果

２１　 益气小复方水煎剂相关成分测定　 益气小复方

水煎剂通过高效液相色谱法比对成分测定结果为黄芪甲苷 １ ０５０ μｇ ｇ毛蕊异黄酮葡萄糖苷 ５００ μｇ ｇ芒柄花素 ７０３４ μｇ ｇ党参炔苷６５７５ μｇ ｇꎮ２２　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞耐药指数的影响　为了验证ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 是否具有 ＤＤＰ 耐药以

及多药耐药的特性ꎬ故采用 ＭＴＴ 法检测 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞在加入益气小复方后应用临床中常

见的化疗药物 ＤＤＰ 的细胞抑制率和 ＩＣ５０ꎮ 实验结

果显示药物处理 ４８ ｈ 后ꎬ耐药细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 相对于敏感细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ꎬＩＣ５０显

著增加ꎻ予以益气小复方干预后均发现ꎬＩＣ５０显著降

低(Ｐlt００１)ꎻ通过 Ｃｏｍｐｕｓｙｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ 测算益气小复

方与 ＤＤＰ 的联用指数(ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎬＣＩ)ꎬ结果

显示联合指数均小于 １ꎬ表明两者之间具有协同效

应ꎮ 见图 １ꎮ

Ａ细胞存活率ꎻＢＩＣ５０浓度ꎻＣ联用指数ꎮ ｎ＝ ３ꎬｘ－plusmn ｓꎻ与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 １　 ＤＤＰ 与益气小复方或联合使用对细胞株活性影响比较

２３　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株体外凋亡率的影

响　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细

胞株ꎬ在 ５ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 浓度下细胞凋亡率分别为

(１４６９plusmn４２０)(３６１０plusmn３８０)ꎬ组间比较差异有

统计学意义 ( Ｐ lt ００５)ꎻ １０ ｍｇ Ｌ 浓度下分别为

(２３８８plusmn４４４)(４７７０plusmn５３３)(Ｐlt００１)ꎬ２０ ｍｇ Ｌ浓度下分别为 (３６ １０ plusmn ５ ７８)(６５ ３０ plusmn ７ ２２)(Ｐlt００１)ꎮ 表明益气小复方联合 ＤＤＰ 组的凋亡率

明显高于 ＤＤＰ 组ꎮ 见图 ２ꎮ

1048944１５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

ＡＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 凋亡情况ꎻＢ凋亡率比较ꎮ 与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 ２　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组不同浓度 ＤＤＰ 的干预下细胞凋亡情况比较

２４　 对 ２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株胞内铂浓度的影响　ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 在 １ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 的干预下胞内

铂浓度为(１７４５５plusmn２７３２)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎻ在益气小复

方的干预下ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 的胞内铂浓度为

(２４５９３plusmn１２４７)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎬ与未干预组比较差异

有统计学意义(Ｐlt００１)ꎮ 见图 ３ꎮ

图 ３　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组细胞内铂浓度比较

２５　 对相关蛋白表达的影响

２５１　 对转运蛋白超家族成员蛋白表达的影响 　益气小复方作用于 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ后ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 耐 药 细 胞 株 Ｐ 糖 蛋 白

(Ｐ￣ｇｐ)乳腺癌耐药蛋白(ＢＣＲＰ)和多药耐药相关

蛋白 ２ (ＭＲＰ２) 的表达量分别是 ＤＤＰ 组的 ４１３６和 ４７(均 Ｐlt０００１)ꎮ 见图 ４ꎮ

图 ４　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组相关跨膜蛋白表达比较

２５２　 对 ＮＦ￣κＢ 通路的影响　 对照组ＤＤＰ 组益

气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组作用于

ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ 后ꎬＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 结果表明ꎬ益气小复方单独或者联合使用ꎬ可降低核

因子 ｋａｐｐａ￣ Ｂ 激酶抑制剂 α ( Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ￣Ｂ ｋｉｎａｓｅ αꎬ ＩＫＫα)和核转录因子 ｋａｐｐａＢ(ＮＦ￣κＢ)表达水平ꎬ而单独使用 ＤＤＰ 对 ＮＦ￣κＢ 没

有明显影响ꎮ 见图 ５ꎮ

图 ５　 各组的 ＮＦ￣κＢ 通路蛋白表达比较

２６　 体内实验对裸鼠及其瘤体的影响 　 给药过程

中 ＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组给药第 ４ 天裸

鼠体质量较其他两组明显减轻(Ｐ 均lt００１)ꎬ在给药

第 １６ 天发现单用 ＤＤＰ 组裸鼠体质量降低更明显

(Ｐ 均lt００５)ꎮ 瘤体的体积变化在给药第 ７ 天 ＤＤＰ联合益气小复方组瘤体体积较其他 ３ 组生长缓慢

(Ｐ 均lt００１)ꎻ给药第 １２ 天ꎬ发现 ＤＤＰ 联合益气小

复方组较 ＤＤＰ 组生长缓慢(Ｐ 均lt００５)ꎮ 给药第 ３０天后ꎬ对照组益气小复方组ꎬＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益

气小复方组瘤体质量分别为(７５７plusmn１５６)ｍｇ(７４６plusmn９２)ｍｇ(２６４plusmn５３) ｍｇ 和(１８３plusmn８０) ｍｇꎬ各组间比较

Ｐ 均lt００５ꎮ 各组在处死剥瘤前移植瘤活体成像的

结果ꎬ可见对照组和益气小复方组荧光值较大ꎬＤＤＰ组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组相比ꎬＤＤＰ 联合益气

小复方组更小(Ｐlt００５)ꎮ 见图 ６图 ７ꎮ

1048944２５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

Ａ裸鼠体质量ꎻＢ瘤体体积ꎻＣ瘤体质量

图 ６　 各组裸鼠及其瘤体的生长情况比较

图 ７　 各组剥瘤前裸鼠皮下移植瘤荧光值

３　 讨论

化疗是乳腺癌最主要的全身治疗方式之一[５]ꎬ但化疗耐药往往导致治疗失败ꎬ造成预后不良[６]ꎮ膜蛋白的高表达是乳腺癌产生耐药的主要机制[７]ꎬ目前对诱导跨膜蛋白高表达的耐药机制尚未清

晰[８]ꎬ部分学者运用化学合成的方法寻找下游蛋白

或者激酶的抑制剂ꎬ从而增强杀伤肿瘤细胞的能

力[９]ꎬ这些方法往往被动且效率低下ꎮ 所以开发中

医药的宝藏ꎬ寻求低毒高效可以逆转 ＤＤＰ 耐药的

逆转剂是我们课题组的主要方向ꎮ 益气小复方是

源于乳腺癌患者术后常用方剂化裁而来[１０]ꎬ长期使

用取得非常好的疗效ꎮ 本研究选择符合 ２０１５ 年版

laquo中国药典raquo标准的黄芪和党参饮片ꎬ黄芪与党参的

配比为 ２ ∶ １ꎬ以黄芪中黄芪甲苷毛蕊异黄酮葡萄

糖苷芒柄花素ꎬ党参中党参炔苷为指标性成分ꎬ优化黄芪党参药对提取物的提取浓缩和干燥工艺ꎻ同时以 ４ 种指标成分含量测定为主ꎬ建立提取物质

量产生耐药的标准ꎬ有助于黄芪党参提取物质量的

一致性和稳定性ꎮ 结果发现ꎬ益气小复方能够降低

ＤＤＰ 耐药细胞株跨膜蛋白的表达ꎬ一定程度上阻止

了 ＤＤＰ 的外排功能ꎬ增加了胞内 ＤＤＰ 的含量ꎬ而产

生增敏的效果ꎮ 同样ꎬ在体内实验也进一步证明了

益气小复方逆转 ＤＤＰ 耐药的假设ꎬ联合用药的作用

效果明显优于 ＤＤＰ 单药使用ꎮ

国内外大量研究表明[１１￣１５]ꎬＮＦ￣ κＢ 信号通路参

与跨膜蛋白的表达ꎬ其激活是引起耐药的重要途

径ꎮ Ｂｅｎｔｉｒｅｓ 团队通过双荧光素的方法证明了 ＮＦ￣κＢ 的 ｍＲＮＡ 序列中含有 Ｐ￣ ｇｐ 启动子区域[１６]ꎮ 更

多的实验证明耐药促进 ＩＫＫβ 的激活往往是产生

ＮＦ￣κＢ 核扭转的经典通路ꎬ而本实验却恰恰证明益

气小复方通过抑制旁路途径 ＩＫＫα 的表达从而抑制

ＮＦ￣κＢ 在细胞核内的积累水平ꎬ即抑制 ＮＦ￣κＢ 核扭

转作用ꎬ从而逆转了耐药ꎮ综上所述ꎬ益气小复方通过抑制 ＩＫＫα 的活性ꎬ

阻滞了 ＩＫＫα ＮＦ￣κＢ 信号通路ꎬ从而下调了转运蛋

白成员 Ｐ￣ ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达ꎬ最终增加了

ＤＤＰ 在耐药细胞株的含量ꎮ 这可能是益气小复方

逆转乳腺癌 ＤＤＰ 耐药的作用机制之一ꎮ 本研究从

跨膜蛋白为切入点ꎬ从 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 信号通路的角

度出发ꎬ揭示 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 与 ＤＤＰ 耐药的关系ꎬ是对益气小复方 ＤＤＰ 耐药增敏作用的全新探索ꎬ具有

一定的临床和基础价值ꎮ

参考文献[１] ＢＲＡＳＯＭＡＲＩＳＴＡＮＹ ＦꎬＦＩＬＯＳＴＯ ＳꎬＣＡＴＣＨＰＯＬＥ Ｓꎬｅｔ ａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ

１７８ ＰＩＭ１ꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ￣ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒｉｐｌｅ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓꎬ２０１６ꎬ７６(１４ Ｓｕｐｐｌ)ｓ１７８

[２] ＣＵＲＩＧＬＩＡＮＯ ＧꎬＢＵＲＳＴＥＩＮ Ｈ ＪꎬＰ ＷＩＮＥＲ Ｅꎬｅｔ ａｌ Ｄｅ￣ｅｓｃａｌａｔｉｎｇａｎｄ ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ￣ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅ ＳｔＧａｌｌｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒｉｍａｒｙＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７[Ｊ] Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ２８(８)１７００￣１７１２

[３] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ Ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅＡｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ￣Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ [ Ｊ ] Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ａｌｔｅｒｎａｔ Ｍｅｄꎬ２０１４ꎬ２０１４(２)６２８７１２

[４] 盛佳钰ꎬ时百玲ꎬ陈红风 三阴性乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 顺铂耐药

细胞株的建立及鉴定[Ｊ] 肿瘤防治研究ꎬ２０１６ꎬ４３(３)１７５￣１８０[５] ＡＧＩＲＯ Ａꎬ ＭＡ Ｑꎬ ＡＣＨＥＳＯＮ Ａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ￣

Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｈｏ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｃｏｌｏｎｙ￣Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｊ Ｃｌｉｎ

1048944３５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

10509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901

本刊声明

近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

laquo上海中医药大学学报raquo编辑部

1048944４５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 双染色及流式细胞术检测ꎮＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细胞株

干预 ４８ ｈ 后ꎬ根据 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ￣ ＦＩＴＣ ＰＩ 凋亡检测试

剂盒说明书推荐步骤收集细胞并孵育荧光探针ꎻ然后于流式细胞仪中检测细胞的凋亡程度ꎮ１７　 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞相关蛋白表达检测　采用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测相关蛋白表达情况ꎮ 取对数

生长期的 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞ꎬ按 １times１０６ 个细

胞 孔接种于 ６ 孔板ꎬ贴壁 ２４ ｈ 后ꎬ加入含有药物的

培养基ꎬ药物干预 ４８ ｈ 后裂解细胞提取总蛋白ꎬ－８０ 保存ꎮ 每孔蛋白上样量 ６０ μｇꎬ经过 ８和

１０的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳分离后ꎬ转至 ＰＶＤＦ 膜上ꎬ用５的脱脂牛奶摇床封闭 ２ ｈꎬ一抗以 １ ∶ １ ０００ 比例

稀释ꎬ４ 孵育过夜ꎮ 后 ＴＢＳＴ 清洗 ３ 次后ꎬ加 ＨＲＰ标记二抗(１ ∶ ５ ０００) ２ ｈꎮ ＴＢＳＴ 洗膜 ３ 次ꎬＥＣＬ 化

学发光法显色ꎮ 所有实验均重复 ３ 次ꎬ通过 Ｉｍａｇｅ Ｊ软件定量分析蛋白相对表达量ꎮ１８ 　 皮下移植瘤体内实验 　 收集 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ￣ ｌｕｃ 细胞(１times１０７ ０２ ｍｌ ＰＢＳ)接种小鼠左侧第

二乳腺脂肪垫下ꎮ 当瘤块体积约达到 ６００ ｍｍ３时ꎬ将瘤块剥离ꎬ瘤块中坏死部分切除后ꎬ剩余部分剪

碎ꎬ瘤体碎块直径在 ０５ ~ １５ ｍｍ 之间ꎬ后将碎块逐

个种植到裸鼠左侧第二脂肪垫下ꎮ 接种 ２ 周后ꎬ将接种成功的裸鼠随机分为空白对照组ＤＤＰ 组益气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组ꎬ每组 ６ 只ꎮ根据药物剂量换算公式ꎬＤＤＰ 注射剂量为 ３ ｍｇ ｋｇꎬ１ 次 ３ ｄꎻ益气小复方的灌胃剂量为 ４ ｇ ｋｇꎬ１ 次 ｄꎮ

每 ３ ｄ 测量裸鼠的体质量和肿瘤体积ꎮ 体积算法(肿块长直径times短径２) ２ꎮ 所有的动物实验操作均

通过上海中医药大学动物实验中心伦理委员会

批准ꎮ１９　 统计学方法　 本研究数据采用 ＳＰＳＳ １９０ 软件

进行统计分析ꎮ 数据均使用 Ｓｔｕｄｅｎｔrsquo ｔ 检验ꎮ 实验

数据表示为 ｘ－plusmn ｓꎮ 所有数据均来自 ３ 个独立平行实

验组ꎮ

２　 结果

２１　 益气小复方水煎剂相关成分测定　 益气小复方

水煎剂通过高效液相色谱法比对成分测定结果为黄芪甲苷 １ ０５０ μｇ ｇ毛蕊异黄酮葡萄糖苷 ５００ μｇ ｇ芒柄花素 ７０３４ μｇ ｇ党参炔苷６５７５ μｇ ｇꎮ２２　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞耐药指数的影响　为了验证ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 是否具有 ＤＤＰ 耐药以

及多药耐药的特性ꎬ故采用 ＭＴＴ 法检测 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞在加入益气小复方后应用临床中常

见的化疗药物 ＤＤＰ 的细胞抑制率和 ＩＣ５０ꎮ 实验结

果显示药物处理 ４８ ｈ 后ꎬ耐药细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 相对于敏感细胞株 ＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ꎬＩＣ５０显

著增加ꎻ予以益气小复方干预后均发现ꎬＩＣ５０显著降

低(Ｐlt００１)ꎻ通过 Ｃｏｍｐｕｓｙｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ 测算益气小复

方与 ＤＤＰ 的联用指数(ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎬＣＩ)ꎬ结果

显示联合指数均小于 １ꎬ表明两者之间具有协同效

应ꎮ 见图 １ꎮ

Ａ细胞存活率ꎻＢＩＣ５０浓度ꎻＣ联用指数ꎮ ｎ＝ ３ꎬｘ－plusmn ｓꎻ与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 １　 ＤＤＰ 与益气小复方或联合使用对细胞株活性影响比较

２３　 对 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株体外凋亡率的影

响　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组干预耐药细

胞株ꎬ在 ５ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 浓度下细胞凋亡率分别为

(１４６９plusmn４２０)(３６１０plusmn３８０)ꎬ组间比较差异有

统计学意义 ( Ｐ lt ００５)ꎻ １０ ｍｇ Ｌ 浓度下分别为

(２３８８plusmn４４４)(４７７０plusmn５３３)(Ｐlt００１)ꎬ２０ ｍｇ Ｌ浓度下分别为 (３６ １０ plusmn ５ ７８)(６５ ３０ plusmn ７ ２２)(Ｐlt００１)ꎮ 表明益气小复方联合 ＤＤＰ 组的凋亡率

明显高于 ＤＤＰ 组ꎮ 见图 ２ꎮ

1048944１５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

ＡＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 凋亡情况ꎻＢ凋亡率比较ꎮ 与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 ２　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组不同浓度 ＤＤＰ 的干预下细胞凋亡情况比较

２４　 对 ２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株胞内铂浓度的影响　ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 在 １ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 的干预下胞内

铂浓度为(１７４５５plusmn２７３２)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎻ在益气小复

方的干预下ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 的胞内铂浓度为

(２４５９３plusmn１２４７)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎬ与未干预组比较差异

有统计学意义(Ｐlt００１)ꎮ 见图 ３ꎮ

图 ３　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组细胞内铂浓度比较

２５　 对相关蛋白表达的影响

２５１　 对转运蛋白超家族成员蛋白表达的影响 　益气小复方作用于 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ后ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 耐 药 细 胞 株 Ｐ 糖 蛋 白

(Ｐ￣ｇｐ)乳腺癌耐药蛋白(ＢＣＲＰ)和多药耐药相关

蛋白 ２ (ＭＲＰ２) 的表达量分别是 ＤＤＰ 组的 ４１３６和 ４７(均 Ｐlt０００１)ꎮ 见图 ４ꎮ

图 ４　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组相关跨膜蛋白表达比较

２５２　 对 ＮＦ￣κＢ 通路的影响　 对照组ＤＤＰ 组益

气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组作用于

ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ 后ꎬＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 结果表明ꎬ益气小复方单独或者联合使用ꎬ可降低核

因子 ｋａｐｐａ￣ Ｂ 激酶抑制剂 α ( Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ￣Ｂ ｋｉｎａｓｅ αꎬ ＩＫＫα)和核转录因子 ｋａｐｐａＢ(ＮＦ￣κＢ)表达水平ꎬ而单独使用 ＤＤＰ 对 ＮＦ￣κＢ 没

有明显影响ꎮ 见图 ５ꎮ

图 ５　 各组的 ＮＦ￣κＢ 通路蛋白表达比较

２６　 体内实验对裸鼠及其瘤体的影响 　 给药过程

中 ＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组给药第 ４ 天裸

鼠体质量较其他两组明显减轻(Ｐ 均lt００１)ꎬ在给药

第 １６ 天发现单用 ＤＤＰ 组裸鼠体质量降低更明显

(Ｐ 均lt００５)ꎮ 瘤体的体积变化在给药第 ７ 天 ＤＤＰ联合益气小复方组瘤体体积较其他 ３ 组生长缓慢

(Ｐ 均lt００１)ꎻ给药第 １２ 天ꎬ发现 ＤＤＰ 联合益气小

复方组较 ＤＤＰ 组生长缓慢(Ｐ 均lt００５)ꎮ 给药第 ３０天后ꎬ对照组益气小复方组ꎬＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益

气小复方组瘤体质量分别为(７５７plusmn１５６)ｍｇ(７４６plusmn９２)ｍｇ(２６４plusmn５３) ｍｇ 和(１８３plusmn８０) ｍｇꎬ各组间比较

Ｐ 均lt００５ꎮ 各组在处死剥瘤前移植瘤活体成像的

结果ꎬ可见对照组和益气小复方组荧光值较大ꎬＤＤＰ组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组相比ꎬＤＤＰ 联合益气

小复方组更小(Ｐlt００５)ꎮ 见图 ６图 ７ꎮ

1048944２５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

Ａ裸鼠体质量ꎻＢ瘤体体积ꎻＣ瘤体质量

图 ６　 各组裸鼠及其瘤体的生长情况比较

图 ７　 各组剥瘤前裸鼠皮下移植瘤荧光值

３　 讨论

化疗是乳腺癌最主要的全身治疗方式之一[５]ꎬ但化疗耐药往往导致治疗失败ꎬ造成预后不良[６]ꎮ膜蛋白的高表达是乳腺癌产生耐药的主要机制[７]ꎬ目前对诱导跨膜蛋白高表达的耐药机制尚未清

晰[８]ꎬ部分学者运用化学合成的方法寻找下游蛋白

或者激酶的抑制剂ꎬ从而增强杀伤肿瘤细胞的能

力[９]ꎬ这些方法往往被动且效率低下ꎮ 所以开发中

医药的宝藏ꎬ寻求低毒高效可以逆转 ＤＤＰ 耐药的

逆转剂是我们课题组的主要方向ꎮ 益气小复方是

源于乳腺癌患者术后常用方剂化裁而来[１０]ꎬ长期使

用取得非常好的疗效ꎮ 本研究选择符合 ２０１５ 年版

laquo中国药典raquo标准的黄芪和党参饮片ꎬ黄芪与党参的

配比为 ２ ∶ １ꎬ以黄芪中黄芪甲苷毛蕊异黄酮葡萄

糖苷芒柄花素ꎬ党参中党参炔苷为指标性成分ꎬ优化黄芪党参药对提取物的提取浓缩和干燥工艺ꎻ同时以 ４ 种指标成分含量测定为主ꎬ建立提取物质

量产生耐药的标准ꎬ有助于黄芪党参提取物质量的

一致性和稳定性ꎮ 结果发现ꎬ益气小复方能够降低

ＤＤＰ 耐药细胞株跨膜蛋白的表达ꎬ一定程度上阻止

了 ＤＤＰ 的外排功能ꎬ增加了胞内 ＤＤＰ 的含量ꎬ而产

生增敏的效果ꎮ 同样ꎬ在体内实验也进一步证明了

益气小复方逆转 ＤＤＰ 耐药的假设ꎬ联合用药的作用

效果明显优于 ＤＤＰ 单药使用ꎮ

国内外大量研究表明[１１￣１５]ꎬＮＦ￣ κＢ 信号通路参

与跨膜蛋白的表达ꎬ其激活是引起耐药的重要途

径ꎮ Ｂｅｎｔｉｒｅｓ 团队通过双荧光素的方法证明了 ＮＦ￣κＢ 的 ｍＲＮＡ 序列中含有 Ｐ￣ ｇｐ 启动子区域[１６]ꎮ 更

多的实验证明耐药促进 ＩＫＫβ 的激活往往是产生

ＮＦ￣κＢ 核扭转的经典通路ꎬ而本实验却恰恰证明益

气小复方通过抑制旁路途径 ＩＫＫα 的表达从而抑制

ＮＦ￣κＢ 在细胞核内的积累水平ꎬ即抑制 ＮＦ￣κＢ 核扭

转作用ꎬ从而逆转了耐药ꎮ综上所述ꎬ益气小复方通过抑制 ＩＫＫα 的活性ꎬ

阻滞了 ＩＫＫα ＮＦ￣κＢ 信号通路ꎬ从而下调了转运蛋

白成员 Ｐ￣ ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达ꎬ最终增加了

ＤＤＰ 在耐药细胞株的含量ꎮ 这可能是益气小复方

逆转乳腺癌 ＤＤＰ 耐药的作用机制之一ꎮ 本研究从

跨膜蛋白为切入点ꎬ从 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 信号通路的角

度出发ꎬ揭示 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 与 ＤＤＰ 耐药的关系ꎬ是对益气小复方 ＤＤＰ 耐药增敏作用的全新探索ꎬ具有

一定的临床和基础价值ꎮ

参考文献[１] ＢＲＡＳＯＭＡＲＩＳＴＡＮＹ ＦꎬＦＩＬＯＳＴＯ ＳꎬＣＡＴＣＨＰＯＬＥ Ｓꎬｅｔ ａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ

１７８ ＰＩＭ１ꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ￣ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒｉｐｌｅ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓꎬ２０１６ꎬ７６(１４ Ｓｕｐｐｌ)ｓ１７８

[２] ＣＵＲＩＧＬＩＡＮＯ ＧꎬＢＵＲＳＴＥＩＮ Ｈ ＪꎬＰ ＷＩＮＥＲ Ｅꎬｅｔ ａｌ Ｄｅ￣ｅｓｃａｌａｔｉｎｇａｎｄ ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ￣ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅ ＳｔＧａｌｌｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒｉｍａｒｙＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７[Ｊ] Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ２８(８)１７００￣１７１２

[３] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ Ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅＡｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ￣Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ [ Ｊ ] Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ａｌｔｅｒｎａｔ Ｍｅｄꎬ２０１４ꎬ２０１４(２)６２８７１２

[４] 盛佳钰ꎬ时百玲ꎬ陈红风 三阴性乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 顺铂耐药

细胞株的建立及鉴定[Ｊ] 肿瘤防治研究ꎬ２０１６ꎬ４３(３)１７５￣１８０[５] ＡＧＩＲＯ Ａꎬ ＭＡ Ｑꎬ ＡＣＨＥＳＯＮ Ａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ￣

Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｈｏ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｃｏｌｏｎｙ￣Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｊ Ｃｌｉｎ

1048944３５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

10509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901

本刊声明

近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

laquo上海中医药大学学报raquo编辑部

1048944４５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

ＡＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 凋亡情况ꎻＢ凋亡率比较ꎮ 与 ＤＤＰ 组比较ꎬlowastＰlt００５ꎬlowastlowastＰlt００１

图 ２　 ＤＤＰ 组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组不同浓度 ＤＤＰ 的干预下细胞凋亡情况比较

２４　 对 ２３１ ＤＤＰ 耐药细胞株胞内铂浓度的影响　ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 在 １ ｍｇ Ｌ ＤＤＰ 的干预下胞内

铂浓度为(１７４５５plusmn２７３２)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎻ在益气小复

方的干预下ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 的胞内铂浓度为

(２４５９３plusmn１２４７)ｎｇ Ｐｔ ｍｇ ｐｒｏꎬ与未干预组比较差异

有统计学意义(Ｐlt００１)ꎮ 见图 ３ꎮ

图 ３　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组细胞内铂浓度比较

２５　 对相关蛋白表达的影响

２５１　 对转运蛋白超家族成员蛋白表达的影响 　益气小复方作用于 ＭＤＡ￣ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ后ꎬＭＤＡ￣ ＭＢ￣ ２３１ ＤＤＰ 耐 药 细 胞 株 Ｐ 糖 蛋 白

(Ｐ￣ｇｐ)乳腺癌耐药蛋白(ＢＣＲＰ)和多药耐药相关

蛋白 ２ (ＭＲＰ２) 的表达量分别是 ＤＤＰ 组的 ４１３６和 ４７(均 Ｐlt０００１)ꎮ 见图 ４ꎮ

图 ４　 ＤＤＰ 与益气小复方联合 ＤＤＰ 组相关跨膜蛋白表达比较

２５２　 对 ＮＦ￣κＢ 通路的影响　 对照组ＤＤＰ 组益

气小复方组和益气小复方联合 ＤＤＰ 组作用于

ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ ＤＤＰ 细胞株 ４８ ｈ 后ꎬＷｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 结果表明ꎬ益气小复方单独或者联合使用ꎬ可降低核

因子 ｋａｐｐａ￣ Ｂ 激酶抑制剂 α ( Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ￣Ｂ ｋｉｎａｓｅ αꎬ ＩＫＫα)和核转录因子 ｋａｐｐａＢ(ＮＦ￣κＢ)表达水平ꎬ而单独使用 ＤＤＰ 对 ＮＦ￣κＢ 没

有明显影响ꎮ 见图 ５ꎮ

图 ５　 各组的 ＮＦ￣κＢ 通路蛋白表达比较

２６　 体内实验对裸鼠及其瘤体的影响 　 给药过程

中 ＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组给药第 ４ 天裸

鼠体质量较其他两组明显减轻(Ｐ 均lt００１)ꎬ在给药

第 １６ 天发现单用 ＤＤＰ 组裸鼠体质量降低更明显

(Ｐ 均lt００５)ꎮ 瘤体的体积变化在给药第 ７ 天 ＤＤＰ联合益气小复方组瘤体体积较其他 ３ 组生长缓慢

(Ｐ 均lt００１)ꎻ给药第 １２ 天ꎬ发现 ＤＤＰ 联合益气小

复方组较 ＤＤＰ 组生长缓慢(Ｐ 均lt００５)ꎮ 给药第 ３０天后ꎬ对照组益气小复方组ꎬＤＤＰ 组和 ＤＤＰ 联合益

气小复方组瘤体质量分别为(７５７plusmn１５６)ｍｇ(７４６plusmn９２)ｍｇ(２６４plusmn５３) ｍｇ 和(１８３plusmn８０) ｍｇꎬ各组间比较

Ｐ 均lt００５ꎮ 各组在处死剥瘤前移植瘤活体成像的

结果ꎬ可见对照组和益气小复方组荧光值较大ꎬＤＤＰ组和 ＤＤＰ 联合益气小复方组相比ꎬＤＤＰ 联合益气

小复方组更小(Ｐlt００５)ꎮ 见图 ６图 ７ꎮ

1048944２５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

Ａ裸鼠体质量ꎻＢ瘤体体积ꎻＣ瘤体质量

图 ６　 各组裸鼠及其瘤体的生长情况比较

图 ７　 各组剥瘤前裸鼠皮下移植瘤荧光值

３　 讨论

化疗是乳腺癌最主要的全身治疗方式之一[５]ꎬ但化疗耐药往往导致治疗失败ꎬ造成预后不良[６]ꎮ膜蛋白的高表达是乳腺癌产生耐药的主要机制[７]ꎬ目前对诱导跨膜蛋白高表达的耐药机制尚未清

晰[８]ꎬ部分学者运用化学合成的方法寻找下游蛋白

或者激酶的抑制剂ꎬ从而增强杀伤肿瘤细胞的能

力[９]ꎬ这些方法往往被动且效率低下ꎮ 所以开发中

医药的宝藏ꎬ寻求低毒高效可以逆转 ＤＤＰ 耐药的

逆转剂是我们课题组的主要方向ꎮ 益气小复方是

源于乳腺癌患者术后常用方剂化裁而来[１０]ꎬ长期使

用取得非常好的疗效ꎮ 本研究选择符合 ２０１５ 年版

laquo中国药典raquo标准的黄芪和党参饮片ꎬ黄芪与党参的

配比为 ２ ∶ １ꎬ以黄芪中黄芪甲苷毛蕊异黄酮葡萄

糖苷芒柄花素ꎬ党参中党参炔苷为指标性成分ꎬ优化黄芪党参药对提取物的提取浓缩和干燥工艺ꎻ同时以 ４ 种指标成分含量测定为主ꎬ建立提取物质

量产生耐药的标准ꎬ有助于黄芪党参提取物质量的

一致性和稳定性ꎮ 结果发现ꎬ益气小复方能够降低

ＤＤＰ 耐药细胞株跨膜蛋白的表达ꎬ一定程度上阻止

了 ＤＤＰ 的外排功能ꎬ增加了胞内 ＤＤＰ 的含量ꎬ而产

生增敏的效果ꎮ 同样ꎬ在体内实验也进一步证明了

益气小复方逆转 ＤＤＰ 耐药的假设ꎬ联合用药的作用

效果明显优于 ＤＤＰ 单药使用ꎮ

国内外大量研究表明[１１￣１５]ꎬＮＦ￣ κＢ 信号通路参

与跨膜蛋白的表达ꎬ其激活是引起耐药的重要途

径ꎮ Ｂｅｎｔｉｒｅｓ 团队通过双荧光素的方法证明了 ＮＦ￣κＢ 的 ｍＲＮＡ 序列中含有 Ｐ￣ ｇｐ 启动子区域[１６]ꎮ 更

多的实验证明耐药促进 ＩＫＫβ 的激活往往是产生

ＮＦ￣κＢ 核扭转的经典通路ꎬ而本实验却恰恰证明益

气小复方通过抑制旁路途径 ＩＫＫα 的表达从而抑制

ＮＦ￣κＢ 在细胞核内的积累水平ꎬ即抑制 ＮＦ￣κＢ 核扭

转作用ꎬ从而逆转了耐药ꎮ综上所述ꎬ益气小复方通过抑制 ＩＫＫα 的活性ꎬ

阻滞了 ＩＫＫα ＮＦ￣κＢ 信号通路ꎬ从而下调了转运蛋

白成员 Ｐ￣ ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达ꎬ最终增加了

ＤＤＰ 在耐药细胞株的含量ꎮ 这可能是益气小复方

逆转乳腺癌 ＤＤＰ 耐药的作用机制之一ꎮ 本研究从

跨膜蛋白为切入点ꎬ从 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 信号通路的角

度出发ꎬ揭示 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 与 ＤＤＰ 耐药的关系ꎬ是对益气小复方 ＤＤＰ 耐药增敏作用的全新探索ꎬ具有

一定的临床和基础价值ꎮ

参考文献[１] ＢＲＡＳＯＭＡＲＩＳＴＡＮＹ ＦꎬＦＩＬＯＳＴＯ ＳꎬＣＡＴＣＨＰＯＬＥ Ｓꎬｅｔ ａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ

１７８ ＰＩＭ１ꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ￣ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒｉｐｌｅ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓꎬ２０１６ꎬ７６(１４ Ｓｕｐｐｌ)ｓ１７８

[２] ＣＵＲＩＧＬＩＡＮＯ ＧꎬＢＵＲＳＴＥＩＮ Ｈ ＪꎬＰ ＷＩＮＥＲ Ｅꎬｅｔ ａｌ Ｄｅ￣ｅｓｃａｌａｔｉｎｇａｎｄ ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ￣ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅ ＳｔＧａｌｌｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒｉｍａｒｙＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７[Ｊ] Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ２８(８)１７００￣１７１２

[３] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ Ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅＡｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ￣Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ [ Ｊ ] Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ａｌｔｅｒｎａｔ Ｍｅｄꎬ２０１４ꎬ２０１４(２)６２８７１２

[４] 盛佳钰ꎬ时百玲ꎬ陈红风 三阴性乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 顺铂耐药

细胞株的建立及鉴定[Ｊ] 肿瘤防治研究ꎬ２０１６ꎬ４３(３)１７５￣１８０[５] ＡＧＩＲＯ Ａꎬ ＭＡ Ｑꎬ ＡＣＨＥＳＯＮ Ａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ￣

Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｈｏ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｃｏｌｏｎｙ￣Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｊ Ｃｌｉｎ

1048944３５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

10509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901

本刊声明

近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

laquo上海中医药大学学报raquo编辑部

1048944４５1048944

上海中医药大学学报　 第 ３２ 卷　 第 １ 期　 ２０１８ 年 １ 月

Ａ裸鼠体质量ꎻＢ瘤体体积ꎻＣ瘤体质量

图 ６　 各组裸鼠及其瘤体的生长情况比较

图 ７　 各组剥瘤前裸鼠皮下移植瘤荧光值

３　 讨论

化疗是乳腺癌最主要的全身治疗方式之一[５]ꎬ但化疗耐药往往导致治疗失败ꎬ造成预后不良[６]ꎮ膜蛋白的高表达是乳腺癌产生耐药的主要机制[７]ꎬ目前对诱导跨膜蛋白高表达的耐药机制尚未清

晰[８]ꎬ部分学者运用化学合成的方法寻找下游蛋白

或者激酶的抑制剂ꎬ从而增强杀伤肿瘤细胞的能

力[９]ꎬ这些方法往往被动且效率低下ꎮ 所以开发中

医药的宝藏ꎬ寻求低毒高效可以逆转 ＤＤＰ 耐药的

逆转剂是我们课题组的主要方向ꎮ 益气小复方是

源于乳腺癌患者术后常用方剂化裁而来[１０]ꎬ长期使

用取得非常好的疗效ꎮ 本研究选择符合 ２０１５ 年版

laquo中国药典raquo标准的黄芪和党参饮片ꎬ黄芪与党参的

配比为 ２ ∶ １ꎬ以黄芪中黄芪甲苷毛蕊异黄酮葡萄

糖苷芒柄花素ꎬ党参中党参炔苷为指标性成分ꎬ优化黄芪党参药对提取物的提取浓缩和干燥工艺ꎻ同时以 ４ 种指标成分含量测定为主ꎬ建立提取物质

量产生耐药的标准ꎬ有助于黄芪党参提取物质量的

一致性和稳定性ꎮ 结果发现ꎬ益气小复方能够降低

ＤＤＰ 耐药细胞株跨膜蛋白的表达ꎬ一定程度上阻止

了 ＤＤＰ 的外排功能ꎬ增加了胞内 ＤＤＰ 的含量ꎬ而产

生增敏的效果ꎮ 同样ꎬ在体内实验也进一步证明了

益气小复方逆转 ＤＤＰ 耐药的假设ꎬ联合用药的作用

效果明显优于 ＤＤＰ 单药使用ꎮ

国内外大量研究表明[１１￣１５]ꎬＮＦ￣ κＢ 信号通路参

与跨膜蛋白的表达ꎬ其激活是引起耐药的重要途

径ꎮ Ｂｅｎｔｉｒｅｓ 团队通过双荧光素的方法证明了 ＮＦ￣κＢ 的 ｍＲＮＡ 序列中含有 Ｐ￣ ｇｐ 启动子区域[１６]ꎮ 更

多的实验证明耐药促进 ＩＫＫβ 的激活往往是产生

ＮＦ￣κＢ 核扭转的经典通路ꎬ而本实验却恰恰证明益

气小复方通过抑制旁路途径 ＩＫＫα 的表达从而抑制

ＮＦ￣κＢ 在细胞核内的积累水平ꎬ即抑制 ＮＦ￣κＢ 核扭

转作用ꎬ从而逆转了耐药ꎮ综上所述ꎬ益气小复方通过抑制 ＩＫＫα 的活性ꎬ

阻滞了 ＩＫＫα ＮＦ￣κＢ 信号通路ꎬ从而下调了转运蛋

白成员 Ｐ￣ ｇｐＢＣＲＰ 和 ＭＲＰ２ 的表达ꎬ最终增加了

ＤＤＰ 在耐药细胞株的含量ꎮ 这可能是益气小复方

逆转乳腺癌 ＤＤＰ 耐药的作用机制之一ꎮ 本研究从

跨膜蛋白为切入点ꎬ从 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 信号通路的角

度出发ꎬ揭示 ＩＫＫα ＮＦ￣ κＢ 与 ＤＤＰ 耐药的关系ꎬ是对益气小复方 ＤＤＰ 耐药增敏作用的全新探索ꎬ具有

一定的临床和基础价值ꎮ

参考文献[１] ＢＲＡＳＯＭＡＲＩＳＴＡＮＹ ＦꎬＦＩＬＯＳＴＯ ＳꎬＣＡＴＣＨＰＯＬＥ Ｓꎬｅｔ ａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ

１７８ ＰＩＭ１ꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ￣ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｒｉｐｌｅ￣ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓꎬ２０１６ꎬ７６(１４ Ｓｕｐｐｌ)ｓ１７８

[２] ＣＵＲＩＧＬＩＡＮＯ ＧꎬＢＵＲＳＴＥＩＮ Ｈ ＪꎬＰ ＷＩＮＥＲ Ｅꎬｅｔ ａｌ Ｄｅ￣ｅｓｃａｌａｔｉｎｇａｎｄ ｅｓｃａｌａｔｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｒｌｙ￣ ｓｔａｇｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅ ＳｔＧａｌｌｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒｉｍａｒｙＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７[Ｊ] Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ２８(８)１７００￣１７１２

[３] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｙｉｑｉ Ｆｏｒｍｕｌａ Ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅＡｎｔｉｔｕｍｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｒｉｐｌｅ￣Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ [ Ｊ ] Ｅｖｉｄ Ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ａｌｔｅｒｎａｔ Ｍｅｄꎬ２０１４ꎬ２０１４(２)６２８７１２

[４] 盛佳钰ꎬ时百玲ꎬ陈红风 三阴性乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 顺铂耐药

细胞株的建立及鉴定[Ｊ] 肿瘤防治研究ꎬ２０１６ꎬ４３(３)１７５￣１８０[５] ＡＧＩＲＯ Ａꎬ ＭＡ Ｑꎬ ＡＣＨＥＳＯＮ Ａ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ Ｒｉｓｋ ｏｆ Ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ￣

Ｒｅｌａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｈｏ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｃｏｌｏｎｙ￣Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｗｉｔｈ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ[Ｊ] Ｊ Ｃｌｉｎ

1048944３５1048944

Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

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本刊声明

近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

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Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ３２ Ｎｏ１ Ｊａｎ２０１８

Ｏｎｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３４(３２)３８７２￣３８７９[６] ＣＨＥＮ ＹꎬＴＥＺＣＡＮ ＯꎬＬＩ Ｄꎬｅｔ ａｌ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｕｓｉｎｇ ｆｏｌａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｄ ｐＨ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｇｅｌｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｅｎｔｒａｐｐｅｄ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ[Ｊ] Ｎａｎｏｓｃａｌｅꎬ２０１７ꎬ ９(２９)１０４０４￣１０４１９

[７] ＫＷＯＮ Ｈ ＩꎬＫＩＭ ＳꎬＯＨ Ｍ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ Ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ＯｍｐＡ￣ ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎ[Ｊ] Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒꎬ２０１７ꎬ７２(１１)３０１２￣３０１５

[８] ＬＩＡＯ Ｍ ＪꎬＹＥ Ｍ ＮꎬＺＨＯＵ Ｒ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ [ Ｊ] Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１６ꎬ３１９７￣１０３

[９] ＷＡＩＳＳＢＬＵＴＨ Ｓꎬ ＤＡＮＩＥＬ Ｓ Ｊ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ￣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｐｌａｙｉｎｇ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ] Ｈｅａｒ Ｒｅｓｅａｒꎬ２０１３ꎬ２９９(３)３７￣４５

[１０] 张玉柱ꎬ陈红风 顾氏外科第四代传人治疗乳腺癌术后经验浅

析[Ｊ] 中华中医药杂志ꎬ ２０１５ꎬ(１１)３９６８￣３９７０[１１] ＹＵ Ｘ ＨꎬＪＩＡＮＧ Ｈ ＬꎬＣＨＥＮ Ｗ Ｊꎬｅｔ ａｌ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ

￣１２ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＴＰ￣ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ａ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ￣１８Ｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ￣κＢ ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ＴＨＰ￣ １ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ￣ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｏａｍ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｃｉｒｃ Ｊꎬ

２０１２ꎬ７６(７)１７８０￣１７９１[１２] ＣＨＥＮ Ｚꎬ ＳＨＩ Ｔꎬ ＺＨＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｄｒｕｇ ｅｆｆｌｕｘ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＰ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ ( ＡＢＣ ) ｆａｍｉｌｙ ｉｎｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔ ｄｅｃａｄｅ [ Ｊ] ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔｅｒｓꎬ２０１６ꎬ３７０(１)１５３￣１６４

[１３] ＫＥ Ｓ ＺꎬＮＩ Ｘ ＹꎬＺＨＡＮＧ Ｙ Ｈꎬｅｔ ａｌ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＡＢＣＧ２ ａｎｄ ＭＲＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＡＴＭ ＮＦ￣κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ [ Ｊ] Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌꎬ２０１３ꎬ４２(４)１２８９￣１２９６

[１４] ＺＨＡＯ ＹꎬＨＵＡＮ Ｍ ＬꎬＬＩＵ Ｍꎬｅｔ ａｌ Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｃｏ￣ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｔｏ ｏｖｅｒｃｏｍｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ [ Ｊ] ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６３５２６７

[１５] ＷＡＮＧ ＸꎬＣＡＭＰＯＳ Ｃ ＲꎬＰＥＡＲＴ Ｊ Ｃꎬｅｔ ａｌ Ｎｒｆ２ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＡＴＰＢｉｎｄｉｎｇ Ｃａｓｓｅｔｔｅ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ￣Ｂｒａｉｎ ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ￣ Ｓｐｉｎａｌ Ｃｏｒｄ Ｂａｒｒｉｅｒｓ [ Ｊ] Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉꎬ２０１４ꎬ３４(２５)８５８５￣８５９３

[１６ ] ＢＥＮＴＩＲＥＳ￣ Ａ Ｍꎬ ＢＡＲＢＵ Ｖꎬ ＦＩＬＬＥＴ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ ＮＦ￣ ｋａｐｐａＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｕｃｅｓ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ＭＤＲ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ[Ｊ] Ｏｎｃｏｇｅｎｅꎬ２００３ꎬ２２(１)９０￣９７

(编辑白玉金)

10509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901105090110509011050901

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近期发现有人冒用laquo上海中医药大学学报raquo名义ꎬ通过网络等途径向作者征稿收取费用ꎮ 为此ꎬ本刊声

明如下１本刊从未委托任何代理机构和个人开展征文组稿收费等活动ꎮ２本刊投稿网址为 ｈｔｔｐ ｗｗｗｓｈｚｙｙｚｚｃｏｍꎬ编辑部联系地址为上海市浦东新区蔡伦路 １２００ 号 １１４ 信

箱ꎬ除此之外无其他联系地址和投稿电子信箱ꎮ 请作者在投稿时认清联系方式ꎮ３本刊编辑部电话为 ０２１￣５１３２２５４１ꎬ０２１￣５１３２２５４０ꎮ 作者在投稿时如有疑问ꎬ可直接与本刊联系ꎮ

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