Lab. 3 Bacteriolog­a BIOL 3052 Instructora Suheidy Valent­n

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  • Lab. 3 BacteriologaBIOL 3052Instructora Suheidy Valentn

  • BacteriasClulas procariotasSon muy pequeas, miden desde 0.2 a 10 m.Reproduccin asexualFisin binariaConjucacinBacterial Cell Components

  • rbol filogentico de los DominiosThe Phylogenetic Tree of Life based on Comparative ssrRNA Sequencing.The rooted Tree lands the prokaryotes in two Domains, Archaea and Bacteria. At a taxonomic level, organisms at the tips of the Archaeal branches represent Orders; the tips of the bacterial branches are Phyla. The most important, best known, and diverse groups branching off of the Bacterial limb are the Cyanobacteria, Proteobacteria and Gram positives.

  • Cmo se clasifican?Forma y arreglo de las clulasMorfologa de la coloniaTipo de locomocinPigmentos de la coloniaTincionesRequisitos nutricionalesSecuencias moleculares de DNA y RNA

  • Forma de las clulasPared celularEsta hecha de PeptidoglucanoEs porosaProvee proteccinD forma Puede tener una segunda membrana sobre la pared celular(provee toxicidad)

  • Formas y arreglos celularesFormasBacilosCocosEspirilosVibrio (forma de coma)CuadradosEstrellasArreglosSolasParesTtadrasOctadasCadenasPaquetes

    Chromatium vinosum, Thiospirillum jenense, Thiopedia rosea Rhodospirillum rubrum, Rhodobacter sphaeroides, Rhodomicrobium vannielii Chlorobium limicola, Prosthecochloris aestuarii, Pelodictyon clathratiforme

  • Morfologa de la coloniaFormaPuntiformeCircular y ovaladaFilamentosaIrregularRizoidefusiformeElevacinPlanaElevadaConvexaPulvinadaUmbonadaMontaosacrateriformeMrgenEnteroOnduladoLobuladoErosionadoFilamentosorizadoLeft: Escherichia coli cells. Right: E. coli colonies on EMB Agar.

  • Tipo de locomocinEstructuras proteicas:Pili Estructuras de anclajeFlagelosUni-,bi-, o multi-flageladoDispersin por el hbitatMigran hacia nutrientesLos alejan de ambientes adversos

  • Tipos de movimientoTaxisMovimiento que responde a diversos estmulos

    QuimiotaxisFototaxisMagnetotaxis

  • Pigmentos de la coloniaDepende de las especiesDepende del medio de cultivoDepende de nutrientesMuy variadoBlancasCremasAmarillas claras y brillantesAnaranjadasRosas claras y brillantesetc.

  • Fijacin y tincin de clulasFijacinFijacin con calorFija estructuras externas de la clula.Fijacin con qumicosFija estructuras internas de la clula.

    TincinAumenta visibilidadAumenta caractersticas morfolgicasConserva para estudios futurosVarios tipos

  • Cont.Tipos de tinciones:Simpleun solo colorantedetermina tamao, forma y arreglo Diferencialclasifca bacterias en grupos (ej. Gram +, -)Negativadetecta cpsula o membrana externaDe esporasdetecta presencia de estructuras de supervivenciaDe flagelosAumenta grosor del flagelo(s)

  • Requisitos nutricionalesNutrientesMacroelementosCarbonoOxgenoHidrgenoNitrgenoAzufreFsforoPotasioCalcioMagnesioHierroOligoelementosManganesoCincCobaltoMolibdenoNquelCobreMedios de cultivo

    ConsistenciaMedios slidos (agar)Medios semi-slidosMedios lquidos (caldos nutritivos)

    TiposMedios selectivosFavorece crecimiento de una bacteria particularMedios diferencialesDistingue entre gruposSe observan reacciones

  • Secuencias molecularesPhylogenetic tree of Bacteria

  • Estirilizacin y tcnicas de asepciaEstirilizacinProceso por el cual se elimina todo tipo de vida de medios o material.

    Tcnicas de asepciaEvitar contaminacinPosibles patgenos (riesgo humano)Descartar apropiadamente

  • A. Investigar las carac. de las bacteriasObjetivos:Observar y describir la morfologa de las colonias y de las bacterias individuales.A. Morfologa de las coloniasTeora:Colonia crece de una bacteriaCada colonia tiene carac. EspecficasVer fig.13.1 de la separata para describir las carac. de las colonias.

  • Ocasionalmente colonias de hongos pueden contaminar los platos de bacteriasProcedimiento:Limpiar el rea de trabajo con desinfectanteSe utilizara el microscopioUtilizar los medios que se le van a proveer, mantenerlos CERRADOS!Examinar las colonias individuales anotar la inf. en la tabla 13.1Utilizando los trminos de la fig.13.1 seleccionar cuales describen las colonias.

    A. Investigar las carac. de las bacterias

  • B. Morfologa de las Cl. IndividualesObjetivo: Examinar las laminillas de bacterias que ilustran las 3 formas bsicas de las bacterias en adicin se examinaran y describiran las bacterias de la boca.Teora:Las bacterias se pueden clasificar en 3 formas bsicas: bacilos, coco, espirilosPlaca de los dientes

  • Procedimiento:Utilizar el microscopio para observar las formas de las bacterias y luego dibujarlasPara conocer las formas de las bacterias encontradas en los dientes, se va ha preparar una laminilla de la placa:Laminilla limpiaColoque una gota de agua en la laminilla, dejela secar al aire Utilizando un palillo de dientes raspe sus dientes cerca de las encas, luego se mezcla con la gota de agua

    B. Morfologa de las Cl. Individuales

  • d. Mezclar y tratar de esparcirlo en la laminilla dejar que sequee.cuando este seca la laminilla, aguantarla con el pinche de ropa y pasarlo por encima del mechero sin pegarlo a la flama f.colocar la laminilla en una bandeja y aplicar de 2a3 gotas de cristal violeta g. Dejarlo por un min.h.lavar con agua de las botellitas en la bandejaSecar con papel especial no raspar.3.Observar la forma de la bacteria en el microscopio.

  • C. Identificar bacterias del AmbienteProcedimiento1.Escoger el ambiente para realizar muestreo. Puede ser del aire, agua, superficie etc. No se debe hacer del cuerpoHacer una hiptesis del crec. De las bact. En ese ambiente2.Utilizar platos de agar para su muestra3.Se descartan los hisopos, identificar en el plato el ambiente seleccionado4. Sellarlos con parafina y luego encubarlos por 24h a25C5. Observar los resultados

  • D. Control de Crecimiento Bacteriano

    Procedimiento

    1. Identificar el plato de agar con el nm. De seccin, la bacteria y el agente a utilizarse.2. Preparar el plato con la bacteria:3. Aadir el desinfectante, antiseptico al plato con discos empapados del agente, un cuadrante es el control.4.La siguiente semana observar la sensitividad del antibitico y los otros agentes. Medir el dimetro de la zona de inhibicin.5. Sellarlos con parafina y luego encubarlos a 37C 6. Anotar los resultados en una tabla.

  • Ejemplo1. Control2. Lysol3. Alcohol4. Clorox1 2 34Observar resultados (zona de inhibicin)