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2008

ISOLADOS CLNICOS DE ENTEROBATERIACEAE, DA COMUNIDADE, PRODUTORES DE -LACTAMASES DE ESPECTRO ALARGADO

MARIA MANUELA AFONSO VENTURA DA ROCHA MARQUES REGUENGO DA LUZ

MARIA MANUELA AFONSO VENTURA DA ROCHA MARQUES REGUENGO DA LUZ

2008

Isolados clnicos de Enterobacteriaceae, da comunidade, produtores de -lactamases de espectro alargado

Dissertao apresentada Universidade do Porto para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Anlises Clnicas, realizada sob a orientao cientfica da Prof. Doutora Helena Maria Neto Ferreira de Sousa, Professora Auxiliar da Faculdade de Farmcia da Universidade do Porto

AGRADECIMENTOS

Aos meus filhos, pelo seu amor, compreenso e tolerncia.

Ao meu marido, pelo desafio, entusiasmo e companheirismo incondicional.

minha me e minha irm por tanto se preocuparem comigo.

A toda a restante famlia, pelo estmulo e apoio que sempre demonstraram.

minha orientadora, Prof. Helena Maria Neto Ferreira de Sousa, pelo seu entusiasmo e disponibilidade constantes.

Ao Prof. Franklim Marques pela sua considerao.

Ao Dr. Miguel Pereira, Dr. Isabel Romo, Dr. Sameiro Sequeira e Dr. Joo Pessanha Moreira, por toda a colaborao prestada.

Ao Dr. Lus Vidal Pinheiro, por acreditar que o indivduo se deve demarcar pela sua formao pessoal e profissional, pelo interesse demonstrado e compreenso da importncia da realizao deste trabalho.

s minhas colegas de Mestrado, Daniela Gonalves e Cristiana Ferreira pela sua colaborao.

Ao Nuno Oliveira e Cristina Sousa, pela sua colaborao.

A todos aqueles que de uma forma ou de outra me acompanharam nesta caminhada, os meus sinceros agradecimentos.

I

Lista de abreviaturas

% Percentagem

Beta

g Micrograma

l Microlitro

oC Graus Centgrados

ADN cido desoxiribonucleco

AML Amoxicilina

AMC Amoxicilina/cido Clavulnico

AN Amicacina

ATB Antibiticos

ATCC American Type Culture Collection

ATM Aztreonamo

C Cloranfenicol

CAZ Ceftazidima

CIP Ciprofloxacina

CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute

CMI Concentrao inibitria mnima

CTX Cefotaxima

CXM Ceufuroxima

DDST Double Disc Synergy Test

FEP Cefepime

EDTA cido etilenodiamino tetra-actico

ESBL -lactamase de espectro alargado

F Nitrofurantona

FOX Cefoxitina

GEN Gentamicina

IMP Imipenemo

Kb Kilobases

MCK MacConkey

MH Mueller-Hinton

Min Minuto

ml Mililitro

NA cido nalidxico

NAG N-Acetilglucosamina

NAMA c. N-Acetilmurmico

NET Netilmicina

II

PBP Penicilin Binding Proteins

pI Ponto isoelctrico

PM Peso molecular

rpm Rotaes por minuto

S Estreptomicina

SXT Trimetoprim

TE Tetraciclina

TSA Teste de susceptibilidade a antibiticos

TSB Caldo tripticase soja (Tryptic Soy Broth)

III

Lista de tabelas

Tabela 1 Principais mecanismos de transferncia de material gentico nas bactrias 10

Tabela 2 Classificao de Ambler 12

Tabela 3 Classificao de -lactamases segundo Bush, Jacoby e Medeiros 13

Tabela 4 Proposta de classificao de -Lactamases de espectro alargado segundo Giske 24

Tabela 5 Teste de "Screening" de Enterobacteriaceae produtores de ESBL 38

Tabela 6 Isolados produtores de ESBL 39

Tabela 7 Testes de susceptibilidade a antibiticos -lactmicos dos isolados produtores de ESBL 42

Tabela 8 Testes de susceptibilidade a antibiticos no -lactmicos dos isolados produtores de ESBL 43

Tabela 9 Teste de adio de cido clavulnico - (1mg/ml) 44

Tabela 10 Focagens isoelctricas das estirpes produtoras de ESBL 45

Tabela 11 Perfis de sensibilidade das bactrias transconjugantes a antibiticos -lactmicos 46

Tabela 12 Perfis de sensibilidade das bactrias transconjugantes a antibiticos no -lactmicos 47

Tabela 13 Focagens isoelctricas das transconjugantes e respectivas bactrias dadoras 48

IV

Lista de grficos

Grfico 1 Repartio de estirpes produtoras de ESBL 39

Grfico 2 Eficcia dos antibiticos no -lactmicos testados nas estirpes produtoras de ESBL 51

V

Lista de figuras

Figura 1 Estrutura molecular do anel -lactmico e antibiticos -lactmicos 6

Figura 2 Origens das amostras biolgicas a partir das quais se isolaram as estirpes produtoras de ESBL 30

VI

Lista de fotos

Foto 1 Amostra 77. Teste de adio de cido clavulnico cefepima 40

Foto 2 Amostras 27 e 156 - Teste de adio de cido clavulnico 50

DISSERTAO PARA MESTRADO DE ANLISES CLNICAS 1

NDICE

Lista de abreviaturas I

Lista de tabelas III

Lista de grficos IV

Lista de figuras V

Lista de fotos VI

1-RESUMO/ABSTRACT ................................................................................................................... 3

1.1 - Resumo .............................................................................................................................. 3

1.2 - Abstract ............................................................................................................................. 4

2-INTRODUO ............................................................................................................................. 5

2.1-Antibiticos -lactmicos .................................................................................................... 5

2.1.1-Definio e classificao dos antibiticos -lactmicos .............................................. 6

2.1.2-Mecanismo de aco dos antibiticos -lactmicos ................................................... 6

2.1.3-Vantagens da utilizao dos antibiticos -lactmicos ............................................... 7

2.2 Resistncia aos antibiticos -lactmicos em Enterobacteriaceae .................................. 7

2.3-Patrimnio gentico bacteriano e sua transferncia .......................................................... 9

2.4 - -Lactamases ................................................................................................................... 11

2.4.1-Histria das -lactamases .......................................................................................... 11

2.4.2-Definio de -lactamases e sua classificao ........................................................... 12

2.4.3-Definio de -lactamases de espectro alargado (ESBL) ........................................... 14

2.4.4- Tipos de ESBL (TEM, SHV,OXA e CTX-M) ................................................................... 16

2.4.5- Comportamento das ESBL e importncia da sua deteco laboratorial .................. 19

2.4.6-Testes de deteco de ESBL ....................................................................................... 20

2.4.7 Factores de risco e medidas de preveno e controlo ............................................ 21

2.4.8-Uma nova definio de -lactamases de espectro alargado ..................................... 23

DISSERTAO PARA MESTRADO DE ANLISES CLNICAS 2

2.4.9 - Impacto da transferncia gentica em Enterobacteriaceae produtoras de ESBL ... 25

2.4.10-Expanso clonal de Enterobacteriaceae produtoras de ESBL .................................. 25

2.4.11- Perfis de multi-resistncia em isolados produtores de ESBL .................................. 26

2.5-Contributo dos laboratrios de microbiologia do ambulatrio ........................................ 27

3 - OBJECTIVO .............................................................................................................................. 29

7 - MATERIAL E MTODOS .......................................................................................................... 30

8 RESULTADOS .......................................................................................................................... 38

9 - DISCUSSO ............................................................................................................................. 49

10- CONCLUSO .......................................................................................................................... 53

11 BIBLIOGRAFIA ...................................................................................................................... 54

DISSERTAO PARA MESTRADO DE ANLISES CLNICAS 3

1-RESUMO/ABSTRACT

1.1 - Resumo

A disseminao de Enterobacteriaceae produtoras de -lactamases de espectro alargado

(ESBL) para a comunidade uma realidade descrita a nvel mundial principalmente na

Europa, mas existem poucos registos desta realidade em Portugal.

O nosso estudo teve por objectivo a deteco de Enterobacteriaceae produtoras de

ESBL em isolados clnicos da comunidade da zona urbana do grande Porto, obtidos de

diferentes laboratrios privados.

Os nossos resultados demonstraram que Enterobacteriaceae produtoras de ESBL esto

presentes na comunidade condicionando as opes teraputicas para o tratamento das

infeces da comunidade.

Esta