Interacción de los receptores dopaminérgicos D y opioides ... · PDF fileEstudio...

Click here to load reader

  • date post

    22-Aug-2019
  • Category

    Documents

  • view

    221
  • download

    0

Embed Size (px)

Transcript of Interacción de los receptores dopaminérgicos D y opioides ... · PDF fileEstudio...

  • Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología

    Tesis Doctoral

    Interacción de los receptores dopaminérgicos D4 y opioides tipo μ en el estriado: implicación en la

    fase inicial del consumo de morfina

    Belén Gago Calderón

    Directora: Dra. Alicia Rivera Ramírez

    Málaga, 2007

  • Doña Alicia Rivera Ramírez, Doctora en Ciencias Biológicas y Profesora Contratada Doctor del Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Málaga CERTIFICA Que Doña Belén Gago Calderón, Licenciada en Biología por la Universidad de Málaga, ha realizado bajo mi dirección el trabajo recogido en la presente Memoria titulada “Interacción de los receptores dopaminérgicos D4 y opioides tipo µ en el estriado de rata: implicación en la fase inicial del consumo de morfina“ para la obtención del Título de Doctor en Biología. Revisado el trabajo, considero que la presente memoria reúne todo los requisitos necesarios para ser sometida a juicio de la Comisión correspondiente. Y para que así conste y surta los efectos oportunos, firmo la presente en Málaga a siete de mayo de dos mil siete.

    Fdo. Alicia Rivera Ramírez

  • Don José Becerra Ratia, Director del Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Málaga INFORMA Que Doña Belén Gago Calderón ha realizado en los laboratorios de este departamento el trabajo experimental que ha permitido la elaboración de la presente Memoria de Tesis Doctoral. Y para que así conste y surta los efectos oportunos, firmo la presente en Málaga a de de dos mil siete.

    Fdo. José Becerra Ratia

  • Desde esta página quisiera expresar mi agradecimiento a todas las personas que han hecho posible que este trabajo haya llegado a su fin, por todo su apoyo, ayuda desinteresada y consejos: A Alicia Rivera, por ser además de mi directora de tesis, mi amiga y un apoyo en todo

    momento. No encuentro palabras para agradecerte toda tu ayuda y paciencia. A Adelaida de la Calle, por abrirme las puertas de su laboratorio y confiar en mí cuando todavía

    era una estudiante de biología. A Kjell Fuxe, del Instituto Karolinska de Estocolmo, por acogerme tan amablemente en su

    laboratorio y darme la oportunidad de aprender tanto de él. A Zaida Díaz, por su desinteresada e inestimable ayuda para resolver dudas o problemas de

    cualquier índole. Gracias por escucharme. A Fernando Rodríguez de Fonseca, por introducirme en el complejo mundo del estudio del

    comportamiento. A Manuela Vega y Salvador Salas, del Servicio de Análisis de Imagen de la Universidad de

    Málaga, por ayudarme y aconsejarme en todo momento y por amenizar las horas de trabajo delante del microscopio y el ordenador.

    A Sergio Cañete y Sofía Escalera, del Servicio de Radioisótopos de la Universidad de Málaga,

    por su desinteresada ayuda, por resolver mis dudas y pequeños problemas a la hora de llevar a cabo los experimentos y por todas las risas y charlas compartidas.

    A José Becerra, director del Departamento de Biología Celular, Genética y Fisiología, por

    brindarme toda su ayuda para realizar este trabajo.

    De entre las demás personas que me han rodeado durante estos años, quiero destacar mi especial agradecimiento a varias de ellas:

    mis niñas, Sandra, Paula, Susi, Julia, Mj, Ana, Mariajo; “el Clan Carrata” formado por Mónica, Patricia, Javi, Elena, Prude, y las 2 pequeñas incorporaciones, Noah y Aleksander; “el Grupillo”, César, Llillo, Maria José, Ana, Antonio, Rafa; “las niñas del equipo”, Anita, Pivot, Berta, Lourdes, Raquel, Silvia, Marian, Rosita y Eli; Antoñipi, Begoña y el pequeñajo Moisés; mis valencianos, Natalia, Alicia, Diego y Mayka; Carlitos y Sole; Ana; Ruth Martín; María del Mar; Nacho y “mi sobrinilla” Laura; Patricia, Guillermo y la pequeña Lucia; Ruth y Paco; Luis; José Esteban; Silvia y Luis; Arquero y Eva, David; Inés; Raquel; Mariló; Antonio Peñafiel; Pepi; José Manuel; Ángel; Antonia; Jesús Santamaría; Ana; José Ángel Narváez; Carmen Pedraza; Eva Lindqvist, Stefan Brené, Lars Olson; y de la pequeña colonia española en Estocolmo, Rebeca, Maribel, Sonia y Edgar El presente trabajo ha sido financiado por la Junta de Andalucía (CTS-161) y los Misterios de Ciencia y Tecnología (BFI 2002-00587) y de Educación y Ciencias (BFU 2005-06615)

  • A mi familia A Carlos

    Una droga es una sustancia que, cuando se inyecta en una rata, produce un artículo científico.

    High Times Encyclopaedia of Recreational Drugs, Egderton Y. Davis

  • ABREVIATURAS 6-OHDA 6-hidroxidopamina AC adenilato ciclasa Acb núcleo accumbens ADHD attention-deficit/hyperactivity disorder; trastorno por déficit de atención e hiperactividad AP-1 activator protein-1; proteína activadora-1 AMP adenosine 5’-monophosphate; adenosina 5’-monofosfato AMPc cyclic AMP; AMP cíclico ARN ácido ribonucleico ARNm ARN mensajero ATF activating transcription factor; factor activador de la transcripción ATP adenosina 5’-trifosfato Bmax número de sitios de unión CaMK Ca2+-Calmodulin-dependent protein kinase; proteína quinasa dependiente de Ca2+-

    Calmodulina

    CBP CREB-binding protein; proteína de unión a CREB CCK colecistokinine; colecistoquinina cdk cyclin-dependent kinase; quinasa dependiente de ciclina CPu caudado putamen CRE cAMP response element; elemento de respuesta a AMPc CREB cAMP response element binding protein; proteína de unión al elemento de respuesta a

    AMPc

    CREM cAMP response element modulator; modulador del elemento de respuesta a AMPc DAB 3-3’ diaminobencidina DAG 1,2 diacilglicerol DARPP-32 dopamine- and cAMP-regulated phosphoprotein of 32kDa; fosfoproteína de 32 kDa

    regulada por dopamina y AMPc

    DL dorso-lateral DM dorso-medial

    DOR δ opioid receptor, receptor opioide δ

    ERK extracellular signal-regulated kinase; quinasa regulada por señales extracelulares Fra Fos-related antigen GABA gamma-aminobutyric acid; ácido gamma-aminobutírico GFAP glial fibrillary acidic protein; proteína ácida fibrilar de la glía GP Globo pálido GRK G protein-couple receptor kinase; quinasa de receptores acoplados a proteínas G HPC hipocampo IP3 Inositol 1,4,5-trifosfato IR inmunoreactivo JNK c-Jun N-terminal kinase; proteína c-Jun N-terminal KD Constante de disociación Ki Constante de afinidad

    KOR κ opioid receptor; receptor opioide κ

    LC locus coeruleus

  • LGP lateral globus pallidus; globo pálido lateral LHb lateral habenular nucleus; habénula lateral MAPK mitogen activated protein kinase; proteína quinasa activada por mitógenos MIF melanocyte inhibiting factor; factor inhibidor de melonocitos MGP medial globus pallidus; globo pálido medial

    MOR μ opioid receptor; receptor opioide μ

    NPFF neuropeptide FF; neuropéptido FF ORL1 orphan opioid-like receptor PAG periaqueductal gray; área gris periacueductal PDYN prodynorphin; prodinorfina PENK proenkepahlin; proencefalina PIP2 fosfatidilinositol-4,5-bifosfato PKA protein kinase A; proteína quinasa A PKC protein kinase C; proteína quinasa C PLC phospholipase C; fosfolipasa C POMC proopiomelanocortin ; proopiomelacortina PP-1 protein phosphatase 1; proteína fosfatasa-1 RSK MAPK-activated ribosomal S6 kinase; quinasa S6 ribosomal activada por MAPK SAPK stress-activated protein kinase; proteínas quinasas activadas por estrés Ser serina SN sustancia negra SNC sustancia negra compracta SNR sustancia negra reticular STh núcleo subtalámico Tdt terminal deoxynucleotidyl transferase TH tirosina hidroxilasa Thr threonine; treonina Tu tubérculo olfatorio VL ventro-lateral VM ventro-medial VP ventral palidum; pálido ventral VTA ventral tegmental area; área tegmental ventral

  • INTRODUCCIÓN 1 1. Morfina: Fármaco para el Tratamiento Paliativo del Dolor y Droga de Abuso 2 2. Estriado: Organización Estructural y Proyecciones Aferentes y Eferentes 3 3. Sistema Opioide Endógeno 6

    3.1. Opioides endógenos 6 3.2. Receptores opioides 7

    4. Sistema Dopaminérgico 10

    4.1. Receptores dopaminérgicos 11 5. Mecanismos Celulares y Moleculares de la Adicción a Opiáceos 15

    5.1. Consumo agudo 15 5.2. Consumo crónico y consolidación de la adicción 24 5.3. Abstinencia 27

    6. Hipótesis de Trabajo y Objetivos 29 MATERIAL Y MÉTODOS 30 1. Animales de Experimentación 31 2. Tratamientos Farmacológicos y Grupos de Experimentación 31

    2.1. Estudio del patrón de expresión de c-Fos, Fos B-ΔFos B y p-CREB después del tratamiento agudo con morfina y/o un agonista de los receptores dopaminérgicos D4 31

    2.1.1. Estudio temporal 32 2.1.2. Especif