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Reagente para a determinao de fibrinognio plasmtico

Fibringeno

SIGNIFICADO CLNICOO fibrinognio uma glicoprotena presente no plasma e nos grnulos plaquetrios . o fator de coagulao que encontra-se na maior concentrao plasmtica (200-500 mg/dl). Quan-do se produz um traumatismo ou dano vascular, a trombina formada rasga o fibrinognio convertendo-o em monmeros de fibrina que polimerizam espontaneamente e aps so estabilizados dando lugar a uma rede insolvel de fibrina.Nveis baixos de fibrinognio podem-se encontrar em desordens hereditrios tais como hipofibrinogenemia, afibrinogenemia, disfibrinogenemia e tambm em outras formas como doenas hepticas, coagulao intravascular disseminada, sndromes fibrinolticos, etc. Nveis elevados podem-se encontrar na diabetes, doenas inflamatrias, etc.Na atualidade foi reconhecido que os altos nveis de fibri-nognio aumentam o risco ao padecimento de doenas cardiovasculares.

FUNDAMENTOS DO MTODOO ensaio se baseia no mtodo de Clauss sendo considerado como mtodo de referncia pelo NCCLS (National Commit-tee for Clinical Laboratory Standards).Quando um excesso de trombina adicionado a plasma diludo, o tempo de coagulao inversamente proporcio-nal concentrao de fibrinognio plasmtico. O tempo de coagulao obtido comparado posteriormente com uma preparao de fibrinognio padronizada.

REAGENTES FORNECIDOSA. Reagente A: frascos contendo trombina liofilizada. Uma vez reconstituda equivale aproximadamente a 100 Unidades NIH de trombina/ml.B. Reagente B: soluo de imidazol 0,05 M, pH 7,3.Calibrador: frasco contendo plasma liofilizado. Vide o valor de fibrinognio apontado no rtulo.

REAGENTES NO FORNECIDOSgua bidestilada ou deionizada.

INSTRUES PARA USOReagente A e Calibrador: retirar o lacre metlico e abrir lentamente a tampa de borracha para evitar perdas do ma-terial liofilizado. Adicionar o volume de gua bidestilada ou deionizada indicado no rtulo. Tampar, deixar em repouso 30 minutos e logo aps misturar suavemente (sem agitar) at obter dissoluo completa antes de usar. Datar. Recomenda-se manter o Reagente A em seu frasco original aps sua reconstituio e durante o uso.

Reagente B: pronto para uso. Evitar sua contaminao. Manter em seu frasco original bem tampado.

PRECAUESOs Reagentes so para uso diagnstico "in vitro".Este produto foi preparado partindo de plasmas humanos os que foram ensaiados utilizando os mtodos com licena da FDA. No foi encontrada reatividade para HBsAg, HCV e HIV. Mas como nenhum mtodo pode dar certeza da ausn-cia absoluta de agentes infecciosos os plasmas referncia, controle e amostras de pacientes devem ser manipuladas como se tratando de material potencialmente infectante.Utilizar os reagentes observando as precaues habituais de trabalho no laboratrio de anlises clnicas.Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas conforme regulao local vigente.

ESTABILIDADE E INSTRUES DEARMAZENAMENTOReagentes Fornecidos: so estveis sob refrigerao (2-10oC) at a data do vencimento indicada na embalagem.Reagente A reconstituda: estvel 5 dias sob refrigerao (2-10oC) ou 30 dias congelada (-20oC). Para descongelar o material dever ser feita rapidamente a 37oC e no voltar a congelar. Antes mesmo de ser utilizados levar o reagente a temperatura ambiente. Evitar os esquentamentos prolongados.Calibrador reconstitudo: estvel por 8 horas sob refrige-rao (2-10oC).

AMOSTRAPlasmaa) Coleta: obter sangue cuidadosamente, evitando estases ou espuma e coloc-la num tubo com anticoagulante em proporo 9 + 1 (exemplo: 4,5 ml de sangue + 0,5 ml de anticoagulante). Misturar suavemente. Centrifugar e separar o plasma antes dos 30 minutos. A extrao de sangue deve ser realizada com seringa descartvel.b) Aditivos: para obter o plasma pode ser utilizado Anti-coagulante TP de Wiener lab. ou citrato de sdio 3,8% ou 3,2%. No utilizar EDTA ou heparina.c) Substncias interferentes conhecidas:- As amostras ictricas, lipmicas ou hemolisadas podem

apresentar resultados errados.- Nveis elevados de produtos de degradao de fibrinognio ou

fibrina podem alongar os tempos de coagulao especialmen-te quando os nveis de fibrinognio so menores a 150 mg/dl.

- Nveis teraputicos de heparina no interferem com o ensaio mas nveis elevados podem levar a resultados

C

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falsamente diminudos.Referncia bibliogrfica Young efeitos de drogas neste mtodo.d) Estabilidade e instrues de armazenamento: deve-se conservar a amostra at chegar a hora do anlise em tubos plsticos para minimizar o efeito de ativao pelo contato que pode ser produzido com os tubos de vidro.Mantenha o plasma sob refrigerao (2-10oC) at realizar a prova. Este perodo no pode ser maior que 4 horas. Caso no possa processar a amostra dentro deste tempo guarda-la no freezer a -20oC. O ltimo processo deve ser realizado muito rpido igual que o descongelamento (submergindo em banho maria a 37oC antes da determinao.

MATERIAL NECESSRIO1- Fornecido- Folha de papel duplo logartmico.

2- No fornecido- Tubos de hemlise.- Tubos plsticos para preparar as solues.- Pipetas e micropipetas para medir os volumes indicados.- Banho maria a 37oC.- Cronmetro.- Fonte de luz para a observao do cogulo.

PROCEDIMENTO

I- CURVA DE CALIBRAO1- Preparar diluies do Calibrador 1:5, 1:10, 1:15, 1:20, 1:30, utilizando 0,1 ml do Calibrador reconstitudo e 0,4; 0,9; 1,4; 1,9; e 2,9 ml de Reagente B. O Calibrador diludo 1:10 representa o 100% do valor indicado na embalagem.2- Pr-aquecer 0,2 ml de cada diluio a 37oC durante 2 minutos.3- Disparar o cronmetro aps acrescentar 0,1 ml de Reactivo A reconstitudo (no pr-aquecer o Reagente A) s diluies pre-incubadas e registrar os tempos de formao do cogulo.4- Calcular o tempo mdio de coagulao para cada diluio, fazendo o teste em duplicata.5- Construir a curva de calibrao de fibrinognio repre-sentando os tempos de coagulao em funo da concen-trao de fibrinognio colocado sobre o papel log-log. Unir atravs de uma reta a maioria dos pontos representados. A reta deve conter pelo menos 3 pontos conseqentes.

Diluio Reagente Calibrador Concentrac. Fator B fibrinognio(*) diluio

1:5 0,8 0,2 --- mg/dl x 2 = 1:10 0,9 0,1 --- mg/dl x 1 = 1:15 1,4 0,1 --- mg/dl x 0,67 = 1:20 1,9 0,1 --- mg/dl x 0,5 = 1:30 2,9 0,1 --- mg/dl x 0,33 =(*) concentrao de fibrinognio indicada em rtulo do Calibrador.

O valor de fibrinognio de cada diluio da curva se de-termina multiplicando a concentrao de fibrinognio no Calibrador pelo fator de diluio. Exemplo: se no Calibrador se indica o nvel de fibrinognio de 260 mg/dl, as diluies 1:5, 1:10, 1:15, 1:20 e 1:30 tem 520, 260 173, 130 e 87 mg/dl respetivamente.

II- AMOSTRAS DE PACIENTES E CONTROLES1- Preparar diluies 1:10 dos plasmas de pacientes ou plasmas controle em Reagente B.2- Pr-aquecer 0,2 ml de cada diluio a 37oC durante 2 minutos.3- Adicionar rapidamente 0,1 ml de Reagente A e registrar o tempo de formao do cogulo.4- Repetir a determinao e fazer a mdia o resultado para cada amostra.

CLCULO DOS RESULTADOSConhecendo o tempo de coagulao do paciente ou do controle, colocar o valor curva padro e interpolar o valor do fibrinognio em cada caso.

INTERPRETAO DOS RESULTADOSSe o tempo de coagulao para a amostra demasiado curto (por exemplo: menor a 7 segundos) diluir o plasma 1:20 com Reagente B e voltar a ensaiar. Multiplicar o resultado por 2.Se o tempo de coagulao para a amostra demasiado lon-go (exemplo: maior a 35 segundos) diluir o plasma 1:5 com Reagente B e voltar a ensaiar. Multiplicar o resultado por 0,5.

MTODO DE CONTROLE DE QUALIDADEPlasma Control normal/patolgico.

VALORES DE REFERNCIAO intervalo de valores observados em pacientes normais oscila entre 200 - 400 mg/dl.

Em geral recomenda-se que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia baseado em sua populao.

CONVERSO DE UNIDADES AO SISTEMA SIFibrinognio (mg/dl) x 0,01 = Fibrinognio (g/l)

LIMITAES DO PROCEDIMENTO- Deve-se realizar uma curva de calibrao nova com

cada mudana de lote de reagente ou qualquer troca de aparelho.

- Falhas na reconstituio dos reagentes podem ser causa de resultados errados.

- Coleta de amostra: as amostras e seus diluies deveram-se colocar em tubos de plstico ou de vidro siliconado. importante respeitar a relao de anticoagulante e sangue como tambm a concentrao de citrato utilizada.

- Deve-se controlar que o ensaio seja realizado a 37oC e que os tubos de trabalho estejam absolutamente limpos.

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DESEMPENHOa) Reprodutibilidade: processando 20 duplicatas das mesmas amostra num mesmo dia se obtiveram os seguintes resultados:

Nvel D.P. C.V. 288 mg/dl 6,13 mg/dl 2,1 % 180 mg/dl 4,05 mg/dl 2,2 %

b) Linearidade: a reao linear entre 100 e 600 mg/dl.

PARMETROS PARA ANALISADORES AUTOMTICOSO kit Fibringeno Wiener lab. pode ser utilizado de forma manual e com mtodos de deteco mecnicos e foto-ticos. Para aparelhos semi-automticos recomenda-se seguir as instrues do manual de uso.

APRESENTAOKit para 100 determinaes contendo:- Reagente A: 10 x 1 ml- Reagente B: 2 x 60 ml- Calibrador: 1 x 1 ml(Cd. 1705006)

REFERNCIA- Clauss, A. - Acta Haematol. 17:237, 1957.- Koepke, J.A. - Am. J. Clin. Pathol. 63:984, 1975.- Collet, J.P. - Blood 82/8:2462, 1993.- Ernest, E. - Ann. Intern. Med. 118/12:956, 1993.- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",

AACC Press, 4th ed., 2001.

2000 Rosario - Argentina

Wiener lab.

SMBOLOSOs seguintes smbolos so utilizados nos kits de reagentes para diagnstico da Wiener lab.

CEste produto preenche os requisitos da Diretiva Europia 98/79 CE para dispositivos mdicos de diagnstico "in vitro"

P Representante autorizado na Comunidade EuropiaV Uso mdico-diagnstico "in vitro"

X Contedo suficiente para testes

H Data de validade

l Limite de temperatura (conservar a)

No congelar

F Risco biolgico

Volume aps da reconstituio

Contedo

g Nmero de lote

M Elaborado por:

NocivoXn

Corrosivo / Castico

IrritanteXi

i Consultar as instrues de uso

Calibrador

Controleb

b Controle Positivo

c Controle Negativo

h Nmero de catlogo

Calibr.

Cont.