'Estudio de la dinámica y función de la ¨Proteína .2018-07-13 · La polarización de HP1γ no

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  • Di r ecci n:Di r ecci n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Intendente Giraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293

    Co nta cto :Co nta cto : digital@bl.fcen.uba.ar

    Tesis Doctoral

    Estudio de la dinmica y funcin deEstudio de la dinmica y funcin dela Protena Heterocromtica 1la Protena Heterocromtica 1

    gama durante el proceso degama durante el proceso dediferenciacin celulardiferenciacin celular

    Desbats, Mara Andrea

    2010

    Este documento forma parte de la coleccin de tesis doctorales y de maestra de la BibliotecaCentral Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilizacin debe seracompaada por la cita bibliogrfica con reconocimiento de la fuente.

    This document is part of the doctoral theses collection of the Central Library Dr. Luis FedericoLeloir, available in digital.bl.fcen.uba.ar. It should be used accompanied by the correspondingcitation acknowledging the source.

    Cita tipo APA:

    Desbats, Mara Andrea. (2010). Estudio de la dinmica y funcin de la ProtenaHeterocromtica 1 gama durante el proceso de diferenciacin celular. Facultad de CienciasExactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.

    Cita tipo Chicago:

    Desbats, Mara Andrea. "Estudio de la dinmica y funcin de la Protena Heterocromtica 1gama durante el proceso de diferenciacin celular". Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.Universidad de Buenos Aires. 2010.

    http://digital.bl.fcen.uba.arhttp://digital.bl.fcen.uba.armailto:digital@bl.fcen.uba.ar
  • UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

    Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

    Departamento de Qumica Biolgica

    Estudio de la dinmica y funcin de la Protena Heterocromtica 1 gama durante el proceso de

    diferenciacin celular

    Tesis presentada para optar al ttulo de Doctor de la Universidad de Buenos

    Aires en el rea de Qumica Biolgica

    Lic. Mara Andrea Desbats

    Director de Tesis: Dra. Graciela Piwien Pilipuk

    Consejero de Estudios: Dr. Eduardo Cnepa

    Lugar de Trabajo: Fundacin Instituto Leloir

    Buenos Aires, 2010

  • ndice de Contenidos

    Resumen en Castellano......................................................................................................1

    Resumen en Ingls...............................................................................................................2

    Abreviaturas..........................................................................................................................3

    Introduccin

    I. Diferenciacin celular...........................................................................................................4

    II. Diferenciacin adipoctica...................................................................................................4

    2.1 Modelos de diferenciacin adipoctica.................................................................................5

    2.2 Cascada transcripcional durante la adipognesis..................................................................6

    III. Cromatina ...........................................................................................................................7

    3.1 Modificaciones de histonas y su importancia funcional......................................................9

    3.2 Modificaciones asociadas a la represin de genes.............................................................10

    3.3 Modificaciones asociadas a la activacin de genes............................................................11

    3.4 Modificaciones en clulas pluripotentes............................................................................11

    3.5 Memoria epigentica..........................................................................................................11

    IV. Organizacin de la cromatina durante la diferenciacin celular................................12

    V. HP1 (Heterocromatin Protein 1).......................................................................................13

    5.1 Estructura de HP1...............................................................................................................16

    5.2 HP1 y compaa.................................................................................................................17

    5.3 Funciones de HP1...............................................................................................................17

    5.4 HP1 y RNA........................................................................................................................19

    5.5 HP1...................................................................................................................................20 5.6 Modificaciones postraduccionales de HP1.........................................................................21

  • VI. Compartimentalizacin del ncleo eucariota................................................................22

    6.1 Territorios cromosmicos ..................................................................................................22

    6.2 Fbricas de transcripcin....................................................................................................24

    6.3 RNA polimerasa II ............................................................................................................26

    6.4 Compartimentos de factores de splicing (Splicing Speckles).............................................27

    6.5 Lmina nuclear...............................................................................................................28

    6.6 Poros nucleares...................................................................................................................30

    Problema de investigacin, hiptesis de trabajo y objetivos..............................32

    Materiales y mtodos

    I. Cultivos de lneas celulares...................................................................................................34

    II. Induccin de la diferenciacin.............................................................................................35

    III. Inhibicin de la transcripcin.............................................................................................35

    IV. Inhibicin de la traduccin.................................................................................................35

    V. Inhibicin de quinasas.........................................................................................................35

    VI. Prediccin de sitios de fosforilacin de HP1 con NetPhosK...................................35 VII. Inmunofluorescencia indirecta (IFI).................................................................................36

    VIII. Induccin de estrs celular por calor o Heat Shock.........................................................36

    IX. Incorporacin de BrdU (replicacin).................................................................................37

    X. Incorporacin de BrUTP (transcripcin).............................................................................37

    XI. Extraccin de protenas nucleares......................................................................................37

    XII. Tratamiento de clulas con RNAsas o DNAsas...............................................................37

    XIII. Deteccin de mRNAs totales...........................................................................................37

    XIX. Ensayos de interferencia..................................................................................................38

  • XV. Inmunoprecipitacin de HP1.........................................................................................38 XVI. SDS PAGE......................................................................................................................39

    XVII. Western Blotting.............................................................................................................39

    XVIII. Descripcin de los anticuerpos utilizados....................................................................40

    XIX. Anlisis estadstico..........................................................................................................40

    Resultados

    I. HP1 se localiza polarizadamente en el ncleo durante la diferenciacin de preadipocitos 3T3 L1......................................................................................................................................41

    II. La polarizacin de HP1 es un evento temprano y transitorio............................................43 III. La polarizacin de HP1 es exclusiva de esta isoforma de HP1........................................44 IV. La polarizacin de HP1 se asocia al proceso de diferenciacin adipoctica....................45 V. La polarizacin de HP1 no se correlaciona con la proliferacin de los preadipocitos......48 VI. La polarizacin de HP1 no ocurre en cualquier regin nuclear......................................50

    VII. La zona de polarizacin de HP1 no se asocia a compartimentos nucleares preexistentes.............................................................................................................................51

    VIII. La zona de polarizacin nuclear de HP1 presenta una distribucin diferencial de laminas......................................................................................................................................52

    IX. La zona de polarizacin de HP1 se excluye de heterocromatina pero se asocia a modificaciones de histonas caractersticas de eucromatina.........................