DEXAMETASONA, FOSFATO SÓDICO DE

O

CH3

HHO

F

H

H

CH3OH

O

OP

O

ONa

ONaH

CH3

C22H28FNa2O8P PM: 516,4 2392-39-4

Definición - Fosfato Sódico de Dexametasona es Sal disódica de (11β,16α) 9-fluoro-11,17-dihidroxi-21-(fosfonooxi)-16-metilpregna-1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de C22H28FNa2O8P, calculado sobre la sustancia libre de agua y alcohol y debe cumplir con las siguientes especificaciones.

Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o algo amarillo. Inodoro o posee un débil olor a alcohol. Excesivamente higroscópico. Fácilmente soluble en agua; poco soluble en alcohol; muy poco soluble en dioxano; insoluble en cloroformo y éter.

Presenta polimorfismo.

Sustancias de referencia - Dexametaso-na SR-FA. Fosfato de Dexametasona SR-FA. Fosfato Sódico de Dexametasona SR-FA. Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA.

CONSERVACIÓN En envases inactínicos de cierre perfecto.

ENSAYOS

Identificación A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Fase estacionaria - Emplear una placa para

cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromato-grafía) recubierta con gel de sílice para cromatogra-fía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor.

Fase móvil - Butanol, agua y ácido acético gla-cial (60:20:20).

Solución estándar A - Pesar exactamente alre-dedor de 20 mg de Fosfato Sódico de Dexametaso-na SR-FA, transferir a un matraz aforado de 20 ml, disolver y completar a volumen con metanol.

Solución estándar B - Disolver 10 mg de Fosfa-to Sódico de Prednisolona SR-FA en la Solución estándar A y diluir a 10 ml con la misma solución.

Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 10 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona y transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a volumen con metanol y mezclar.

Revelador - Agregar cuidadosamente y enfrian-do, 20 ml ácido sulfúrico a 60 ml de alcohol. Dejar enfriar y diluir a 100 ml con el mismo solvente [NOTA: preparar en el momento de su uso].

Procedimiento - Aplicar por separado sobre la placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de las So-luciones estándar A y B. Dejar secar las aplicacio-nes y desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la longitud de la placa. Secar la placa al aire y examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra debe ser similar en tamaño, intensidad y valor de Rf a la obtenida con la Solución estándar A. Pulverizar sobre la placa con Revelador y calentar a 120 °C durante 10 minutos o hasta que las manchas aparez-can. Dejar enfriar y examinar bajo luz natural y bajo luz ultravioleta a 366 nm: la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra se debe corresponder en tamaño, valor de Rf, color a la luz natural y fluorescencia a la luz ultravioleta que la mancha principal obtenida con la Solución estándar A. El ensayo solo es válido si en el cromatograma obtenido con la Solución estándar B se observan dos manchas, las cuales pueden no estar completamente separadas.

B - El residuo de ignición debe responder a los ensayos para Fosfato <410> y para Sodio <410>.

Determinación de la rotación óptica <170> Rotación específica: Entre + 74° y + 82°, calcu-

lada sobre la sustancia libre de agua y alcohol. Solución muestra: 10 mg por ml, en agua.

Determinación del pH <250> Entre 7,5 y 10,5, determinado sobre una solu-

ción 1 en 100.

Determinación de agua <120> Titulación volumétrica directa. La suma de los

porcentajes del contenido de agua y del contenido de alcohol, determinado según se indica en Deter-minación de alcohol, no debe ser mayor de 16,0 %.

Determinación de alcohol <130> Proceder según se indica para Método II; excep-

to que se debe emplear una columna con fase esta-cionaria constituida por un copolímero de 4-vinil-piridina y estireno-divinilbenceno y las siguientes modificaciones.

Solución del estándar interno - Transferir 1,0 ml de alcohol isopropílico a un matraz aforado

de 100 ml, completar a volumen con agua y mez-clar.

Solución estándar - Preparar una solución 1 en 50 de alcohol en agua. Determinar la densidad relativa a 25 °C (ver 160. Determinación de la densidad relativa) y obtener el porcentaje de C2H5OH por referencia a la Tabla alcoholimétrica en Tablas.

Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de So-lución estándar y 5,0 ml de Solución del estándar interno a un matraz aforado de 10 ml. Completar a volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el cromatógrafo de gases.

Preparación muestra - Pesar exactamente alre-dedor de 500 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-sona, transferir a un matraz aforado de 10 ml, agre-gar 5,0 ml de Solución estándar interno y mezclar hasta disolver. Completar a volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el croma-tógrafo de gases.

Cálculos - Calcular el porcentaje de alcohol en la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensayo por la fórmula siguiente:

4(S/P)(RM/RE)

en la cual S es el porcentaje de alcohol en la Solu-ción estándar, P es el peso en g de Fosfato Sódico de Dexametasona empleado en la Preparación muestra y RM y RE son las respuestas del pico de alcohol, relativas al estándar interno, en la Prepara-ción muestra y la Preparación estándar, respecti-vamente. El contenido de C2H5OH no debe ser mayor de 8,0 %.

Fosfato inorgánico Solución estándar de fosfato - Disolver

143,3 mg de fosfato monobásico de potasio seco en agua y diluir a 1 litro. Esta solución contiene el equivalente a 0,10 mg de fosfato en cada ml.

Reactivo para fosfato A - Disolver 5 g de mo-libdato de amonio en ácido sulfúrico 1 N para obte-ner 100 ml.

Reactivo para fosfato B - Disolver 350 mg de sulfato p-metilaminofenol en 50 ml de agua, agre-gar 20 g de bisulfito de sodio, mezclar hasta disol-ver y diluir con agua a 100 ml.

Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 25 ml y disolver en una mezcla de 10 ml de agua y 5 ml de ácido sulfúrico 2 N, calentando si fuera necesario. Agre-gar 1 ml de Reactivo para fosfato A y 1 ml de Reac-tivo para fosfato B, completar a volumen con agua, mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos.

Solución estándar - En forma similar y en suce-sión inmediata, preparar una Solución estándar empleando 5,0 ml de Solución estándar de fosfato en lugar de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexameta-sona.

Procedimiento - Determinar concomitantemen-te las absorbancias de ambas soluciones, en celdas de 1 cm a 730 nm, con un espectrofotómetro, em-pleando agua como blanco. La absorbancia de la Solución muestra no debe ser mayor que la de la Solución estándar. No debe contener más de 1,0 % de fosfato.

Dexametasona libre Sistema cromatográfico - Emplear un equipo

para cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm × 4,5 mm con fase estacionaria constituida por grupos fenilo químicamente unidos a partículas porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minuto.

Solución de trietilamina - Preparar una solución que contenga 7,5 ml de trietilamina en 1 litro de agua. Ajustar a pH 5,4 con ácido fosfórico.

Fase móvil - Solución de trietilamina y metanol (74:26). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Croma-tografía).

Solución estándar - Disolver una cantidad exac-tamente pesada de Fosfato de Dexametaso-na SR-FA en Fase móvil para obtener una solución de aproximadamente 0,5 mg por ml. Preparar una segunda solución disolviendo una cantidad exacta-mente pesada de Dexametasona SR-FA en una mezcla de metanol y agua (1:1) para obtener una solución de aproximadamente 50 µg por ml. Trans-ferir 10,0 ml de la primera solución y 1,0 ml de la segunda solución a un matraz aforado de 100 ml. Completar a volumen con Fase móvil y mezclar.

Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 100 ml y disolver con Fase móvil. Completar a volumen con Fase móvil y mezclar. Diluir 5,0 ml de esta solución con Fase móvil a 50,0 ml.

Solución de aptitud del sistema - Preparar una solución en Fase móvil de aproximadamente 0,05 y 0,02 mg por ml de Fosfato de Dexametasona SR-FA y de Dexametasona SR-FA, respectivamen-te.

Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la eficiencia de la columna de-terminada para el pico principal no debe ser menor de 900 platos teóricos; el factor de asimetría para el

pico principal no debe ser mayor de 1,6; la resolu-ción R entre los picos de fosfato de dexametasona y dexametasona no debe ser menor de 1,8; la desvia-ción estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %.

Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) de la Solución estándar y la Solución mues-tra, registrar los cromatogramas y medir las res-puestas de los picos de dexametasona. Calcular la cantidad de dexametasona (C22H29FO5) en la por-ción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensa-yo. No debe contener más de 1,0 %.

Pureza cromatográfica Sistema cromatográfico, Solución reguladora,

de acetato, Solución A, Solución B y Fase móvil proceder según se indica en Valoración, excepto que el cromatógrafo se debe programar del siguien-te modo:

Tiempo (minutos)

Solución A (%)

Solución B (%)

Etapa

0-3,5 90 10 Isocrática

3,5-23,5 90→60 10→40 Gradiente lineal

23,5-34,5 60→5 40→95 Gradiente lineal

34,5-59,5 5 95 Isocrática

59,5-60 5→90 95→10 Gradiente lineal

Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 25 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 25 ml, disolver en Solución A, completar a volumen con el mismo solvente y mezclar.

Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - Cromatografiar la Solución muestra y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedi-miento: la resolución R entre el pico principal y el de la impureza más cercana no debe ser menor de 1,8; la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 4,0 %.

Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo aproximadamente 15 µl de la Solución muestra, registrar el cromatograma y medir las respuestas de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la porción de Fosfato Sódi-co de Dexametasona en ensayo, en relación a la suma de las respuestas de todos los picos. No debe contener más de 1,0 % de cualquier impureza indi-vidual y no más de 2,0 % de impurezas totales.

Impurezas orgánicas volátiles <520> Método II.

VALORACIÓN Sistema cromatográfico - Emplear un equipo

para cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida por octilsilano químicamente unido a partículas porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Mante-ner la temperatura de la columna a aproximadamen-te 40 °C. El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto. El cromatógrafo se debe pro-gramar del siguiente modo:

Tiempo (minutos)

Solución A (%)

Solución B (%)

Etapa

0-3,5 90 10 Isocrática

3,5-24 90→60 10→40 Gradiente lineal

24-35 60→5 40→95 Gradiente lineal

35-60 5 95 Isocrática

60-60,1 5→90 95→10 Gradiente lineal

60,1-65 90 10 Isocrática

Solución reguladora de acetato - Disolver 7 g de acetato de amonio en 1 litro de agua, ajustar a pH 4,00 ± 0,05 y mezclar.

Solución A - Metanol, agua y Solución regula-dora de acetato (7:7:6). Filtrar y desgasificar.

Solución B - Metanol y Solución reguladora de acetato (7:3). Filtrar y desgasificar.

Fase móvil - Emplear mezclas de Solución A y Solución B según se indica en Sistema cromatográ-fico. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía).

Preparación estándar - Disolver una cantidad exactamente pesada de Fosfato de Dexametaso-na SR-FA en Solución A para obtener una solución de aproximadamente 0,92 mg por ml.

Preparación muestra - Disolver una cantidad exactamente pesada de Fosfato Sódico de Dexame-tasona en Solución A y mezclar para obtener una solución de aproximadamente 1,0 mg por ml.

Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) - Cromatografiar la Preparación muestra y registrar las respuestas de los picos según se indica en Pro-cedimiento: la resolución R entre el pico de fosfato de dexametasona y el de la impureza más cercana no debe ser menor de 1,0. Cromatografiar la Pre-paración estándar y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la desvia-ción estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %.

Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente

15 µl) de la Preparación estándar y la Preparación muestra, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad de C22H28FNa2O8P en la porción de Fosfa-to Sódico de Dexametasona en ensayo.