Cópia de capas internas tese - core.ac.uk .animais e para o Homem, os ß-lactâmicos são um dos

download Cópia de capas internas tese - core.ac.uk .animais e para o Homem, os ß-lactâmicos são um dos

of 77

  • date post

    26-Nov-2018
  • Category

    Documents

  • view

    212
  • download

    0

Embed Size (px)

Transcript of Cópia de capas internas tese - core.ac.uk .animais e para o Homem, os ß-lactâmicos são um dos

  • Universidade de Aveiro 2007

    Departamento de Biologia

    Susana Cludia de Matos Lima Ferreira

    Deteco de -lactamases de Espectro Expandido em E.coli e K.pneumoniae

  • Universidade de Aveiro 2007

    Departamento de Biologia

    Susana Cludia de Matos Lima Ferreira

    Deteco de -lactamases de Espectro Expandido em E.coli e K.pneumoniae

    Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Microbiologia, realizada sob a orientao cientfica do Prof. Doutor Antnio Carlos Matias Correia, professor associado com agregao do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro

  • Ests determinado? Agarra-te a esse momento. O que puderes fazer ou sonhas que podes fazer, Comea a faze-lo. A coragem traz em si o gnio, O poder da magia. Empenha-te somente E a mente incendeia-se, Comea, e o trabalho Ser completado. Goethe

  • o jri

    presidente Prof. Doutor Antnio Carlos Matias Correia professor associado com agregao da Universidade de Aveiro

    vogais Prof. Doutora Snia Alexandra Leite Velho Mendo Barroso

    professora auxiliar da Universidade de Aveiro

    Dr. Maria Helena da Silva Santos Ramos, especialista em Patologia Clnica e Directora do Servio de Microbiologia do Hospital Geral de Santo Antnio do Porto

    Doutora Isabel da Silva Henriques investigadora do CESAM da Universidade de Aveiro

  • agradecimentos

    A todos aqueles que deram o seu contributo para a concretizao deste trabalho, os meus sinceros agradecimentos.

  • palavras-chave

    -lactmico, -lactamase, -lactamases de espectro expandido, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, infeco nosocomial, sensibilidade, especificidade, teste de sinergismo de duplo-disco, E-test, teste VITEK2 ESBL

    resumo

    A produo de -lactamases de espectro expandido (ESBLs) o mecanismo de resistncia aos antimicrobianos -lactmicos mais frequente entre a famlia Enterobacteriaceae. A sua deteco deve ser executada, por todos os laboratrios de Microbiologia, para que resultados de falsas sensibilidades s oximinocefalosporinas no sejam fornecidos indevidamente. Para alm disso, o estudo da epidemiologia dos microrganismos produtores destas enzimas contribui para a preveno e combate sua disseminao. Assim, torna-sefundamental que o diagnstico in vitro seja efectuado com recurso a metodologias de alta especificidade e sensibilidade, adequadas realidade hospitalar em que cada laboratrio se insere. O objectivo deste trabalho foi fazer a caracterizao fentipica de isolados de E. coli e K. pneumoniaeprodutoras de ESBLs, avaliar a sua incidncia nas infeces nosocomiais e da comunidade e fazer a comparao entre trs mtodos de deteco e confirmao da produo de ESBLs, estudando a sua sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo. Os resultados obtidos sugerem a eleio do teste VITEK2 ESBL a adoptar como metodologia de rotina no laboratrio de Microbiologia do Hospital Geral de Santo Antnio, EPE, ao detectar 96,9% de isolados produtores de ESBLs eapresentar 100% de sensibilidade na deteco de estirpes de E. coli ESBL positivas. Adicionalmente, os resultados demonstram que este mtodo no implica custos acrescidos nem mobilizao extraordinria de recursos materiais e humanos, para o servio de Microbiologia deste hospital.

  • keywords

    -lactam, -lactamase, extended-spectrum -lactamases, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, nosocomyal infection, sensibility, specificity, double-disc sinergysm test, E-test, VITEK2 ESBL test

    abstract

    Production of extended-spectrum -lactamases (ESBL) is the mechanism of antimicrobial -lactam resistance more frequent within Enterobacteriaceaefamily members. Its detection should be made, in all diagnosis laboratories, to avoid reports of false susceptibility results to oximinocefalosporins. The epidemiological study of this type of microrganisms gives important information for the adoption of prevention and control measures to reduce dissemination of this mechanism of resistance among bacteria. So, its emergent that in vitrodiagnosis should be done with laboratorial methods, adjusted to the hospital reality and presenting high levels of sensibility and specificity. The aim of this study was to do the phonotypical characterization of E. coli and K. pneumoniae isolates harboring ESBLs, study their incidence in nosocomial and community infections and compare three methods of detection and phenotype confirmation of ESBLs production, evaluating their sensibility and specificity levels. Results suggest that the VITEK 2 ESBL test its a reliable methodology in the routine of Hospital Geral de Santo Antnio, EPE, Microbiology laboratory, detecting 96,9% of ESBL producers and presenting 100% of sensibility in the detection of E. coli ESBL producers. Results also suggest, to Microbiology laboratory from this hospital, less costs, less professionals and resources mobilization. .

  • Susana Cludia de Matos Lima Ferreira I

  • Susana Cludia de Matos Lima Ferreira I

    ndice

    Lista de abreviaturas .............................................................................................. II

    Lista de figuras ...................................................................................................... III

    Lista de quadros.................................................................................................... IV

    1. Introduo .......................................................................................................... 1

    1.1. Enterobacteriaceae...................................................................................... 1

    1.2. Aco antimicrobiana dos -lactmicos....................................................... 2

    1.3. Mecanismos bacterianos de resistncia aos -lactmicos .......................... 4

    1.4. Beta-lactamases .......................................................................................... 5 1.4.1. Classificao ......................................................................................... 6 1.4.1. Outras -lactamases............................................................................. 9

    1.5. Beta-lactamases de espectro expandido (ESBLs)..................................... 11

    1.6. Epidemiologia ............................................................................................ 20

    1.7. Factores de risco ....................................................................................... 24

    1.8. Infeces nosocomiais versus infeces da comunidade.......................... 24

    1.9. Deteco laboratorial de ESBLs ................................................................ 27

    1.10. Mtodos de caracterizao gentipica..................................................... 33

    1.11. Significado clnico da deteco de ESBLs............................................... 35

    1.12. Teraputica.............................................................................................. 35

    1.13. Objectivo.................................................................................................. 36

    2. Material e Mtodos........................................................................................... 37

    3. Resultados ....................................................................................................... 40

    4. Discusso......................................................................................................... 48

    5. Perspectivas futuras......................................................................................... 53

    6. Bibliografia........................................................................................................ 54

  • Susana Cludia de Matos Lima Ferreira II

    Lista de abreviaturas

    DPCO Doena pulmonar crnica obstrutiva.

    ESBLs -lactamases de espectro expandido.

    PBPs Penicillin-Binding-Proteins.

    pI ponto isoelctrico.

    IRT -lactamase TEM resistente ao inibidor.

    CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute.

    CIM Concentrao inibitria mnima.

    NNIS National Nosocomial Infection Surveillance.

    UCI Unidade de Cuidados Intensivos.

    PCR Polimerase Chain Reaction.

    RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism.

    SSCP Single-strand Conformational Polymorphism.

    LCR Ligase Chain Reaction. AES - Advanced Expert System. CAZ Ceftazidima. ATM Aztreonamo. CTX Cefotaxima. CRO Ceftriaxona. CDP Cefpodoxima. AMC Amoxicilina/ cido clavulnico. CT/CTL cefotaxima/cefotaxima com cido clavulnico. TZ/TZL ceftazidima/ceftazidima com cido clavulnico. PM/PML cefepima/cefepima com cido clavulnico.

  • Susana Cludia de Matos Lima Ferreira III

    Lista de figuras

    Figura 1 Estrutura qumica das penicilinas e das cefalosporinas.

    Figura 2 Parede celular das bactrias Gram-negativas e Gram-positivas.

    Figura 3 Tiras Etest ESBL.

    Figura 4 Sistema automtico VITEK2 AES.

    Figura 5 Resultados das metodologias praticadas.

    Figura 6 Outros resultados relevantes.

    Figura 7 Frequncia de estirpes produtoras de ESBLs detectadas em 42

    meses.

    Figura 8 Frequncia de estirpes isoladas em regime de internamento e

    ambulatrio.

    Figura 9 Frequncia de estirpes ESBL positivas por produto biolgico.

    Figura 10 Relao entre idade, sexo e microrganismo produtor de ESBLs.

  • Susana Cludia de Matos Lima Ferreira IV

    Lista de quadros

    Quadro I Classificao das -lactamases segundo Richmond e Sykes.

    Quadro II