CÉLULA-MATRIZ EXTRACELULAR

EN FPI

Vanesa Vicens Zygmunt

Mediadores

antifibróticos Mediadores

profibróticos TGF-β1, IGF-1,

ET-1, PDGF,

TIMPs, KGF,

HGF, ROS,

Th1/Th2

PGE2, MMPs

MEC Fibroblastos/

Miofibroblastos

MA

CEA II

MI

CEA II

FISIOPATOLOGÍA

El microambiente pro-fibrótico de la MEC contribuiría a los cambios fenotípicos

y de función celular --- perpetuación del proceso.

Vicens-Zygmunt, V.

Caracterizar el perfil proteico de la MEC en pulmones de

pacientes con FPI.

OBJETIVOS

Desarrollar una matriz 3D in vitro que mimetice las

condiciones biomecánicas del pulmón FPI, que permita el

cultivo celular en su interior.

CARACTERIZACIÓN PROTEICA DE LA MEC EN FPI

RNA

Transcript

Reversa MICROARRAYS MEC

(84 prots) cDNA

7 normal

17 FPI

qPCR

WB

IHQ

Expresión

génica

Localización de proteïnas

Confirmación de proteïnas

20 proteínas están

sobreexpresadas en

pulmón fibrótico

6 proteínas están

infraexpresadas en

pulmón fibrótico

DNA-MICROARRAYS

Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120

Rt-PCR

col1a1

col1a2

col3a1

unitats

arb

itrà

ries (

rac B

A)

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0Ntx

FPI

*

* p<0,01

Colágeno I y III

MMP1

MMP2

MMP7

MMP9

MMP12

MMP13

un

ita

ts a

rbitra

rie

s (

rac B

A)

0

20

40

60

80

100

Ntx

FPI

*

*

*

**

* p<0,01

Metaloproteinasas

col4a2

Lam

a3

un

ita

ts a

rbitra

rie

s (

rac B

A)

0,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

Ntx

FPI *

*

* p<0,01

Proteínas de membrana basal

Responsables de la

degradación de la

MEC, de la mbna basal

y del remodelado

tisular.

Confieren

resistencia al

estiramiento

Anclaje celular

a la membrana

basal

Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120

RESULTADOS

Rt-PCR

TNC

VCAN

un

itats

arb

itrà

rie

s (r

ac

BA

)

0

1

2

3

4

5

Ntx

FPI

*

** p<0,01

Proteínas del intersticio pulmonar

Favorecen la

diferenciación celular,

adhesión y migración.

TNC VCAN

TNC

Actin

Control FPI

Control FPI

TN

C/a

cti

n

Unid

ades a

rbitra

rias (

rac B

A)

WB

Inmunohistoquímica

DESARROLLO DE UNA MEC 3D

Grupo

carbonil

Grupo

amino

Azúcar reducido:

Glucosa/Ribosa

Proteína

horas días

(Colágeno)

Productos de Amadori

Semanas, meses, años irreversible (CHOH)4

CH2OH

Base de

Schiff

Advanced Glication End-products (AGEs)

reversible irreversible

AGE cross-links

COLÁGENO TIPO I con

FIBROBLASTOS en su INTERIOR

GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA

DESARROLLO DE UNA MEC 3D

COLÁGENO TIPO I con

FIBROBLASTOS en su INTERIOR

GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA

PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D

PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D

Estructuras de las fibras de Colágeno I

PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D

Formación de AGEs

PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D

Dureza

VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D

VIABILIDAD FIBROBLASTOS

VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D

VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D

video

CAMBIO EN EL FENOTIPO CELULAR

PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS DE MATRIZ (TNC)

EN CULTIVO 3D

MUCHAS GRACIAS!

Equipo ufip

Estany S, Vicens-Zygmunt V, Llatjós R, Montes A, Penin R, Escobar I, Xaubet A, Santos S, Manresa F,

Dorca J, Molina-Molina M. Lung fibrotic tenascin-C upregulation is associated with other

extracellular matrix proteins and induced by TGFβ1. BMC Pulm Med. 2014;14:120.

Vicens-Zygmunt V, Estany S, Colom A, Montes-Worboys A, Machahua C, Sanabria AJ, Llatjos R, Escobar

I, Manresa F, Dorca J, Molina-Molina M. Fibroblast viability and phenotypic changes within glycated

stiffened three-dimensional collagen matrices. Respir Res. 2015;16:82.

Proyecto financiado por: ISCIII-FIS, SEPAR, SOCAP, FUCAP