ANTONIO CARLOS PEDROSO Modulação da Resposta Imune .Galinha I. Ferreira, Antonio José Piantino

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  • AANNTTOONNIIOO CCAARRLLOOSS PPEEDDRROOSSOO

    Modulao da Resposta Imune em Aves Imunizadas com Vacinas Avirias

    Associadas ao -Glucano

    Tese apresentada ao Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo, para obteno do ttulo de Doutor em Cincias (Microbiologia).

    So Paulo

    2009

  • AANNTTOONNIIOO CCAARRLLOOSS PPEEDDRROOSSOO

    Modulao da Resposta Imune em Aves Imunizadas com Vacinas Avirias

    Associadas ao -Glucano

    Tese apresentada ao Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo, para obteno do ttulo de Doutor em Cincias (Microbiologia).

    rea de concentrao: Microbiologia

    Orientador:

    Prof. Dr. Antonio Jos Piantino Ferreira

    So Paulo

    2009

  • DADOS DE CATALOGAO NA PUBLICAO (CIP) Servio de Biblioteca e Informao Biomdica do

    Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo

    reproduo total

    Pedroso, Antonio Carlos.

    Modulao da resposta imune em aves imunizadas com vacinas avirias associadas ao -glucano / Antonio Carlos Pedroso. -- So Paulo, 2009.

    Orientador: Antonio Jos Piantino Ferreira. Tese (Doutorado) Universidade de So Paulo. Instituto de Cincias Biomdicas. Departamento de Microbiologia. rea de concentrao: Microbiologia. Linha de pesquisa: Vacinas avirias; imunomodulador. Verso do ttulo para o ingls: Immune response modulation in chicken immunized with vaccines associated to -glucan. Descritores: 1. -Glucano 2. Resposta imune 3. Vacinas 4. Galinha I. Ferreira, Antonio Jos Piantino II. Universidade de So Paulo. Instituto de Cincias Biomdicas. Programa de Ps Graduao em Microbiologia III. Ttulo.

    ICB/SBIB078/2009

  • UNIVERSIDADE DE SO PAULO

    INSTITUTO DE CINCIAS BIOMDICAS

    Candidato: Antonio Carlos Pedroso.

    Ttulo da Tese: Modulao da Resposta Imune em Aves Imunizadas com Vacinas Avirias

    Associadas ao -glucano.

    Orientador: Antonio Jos Piantino Ferreira.

    A comisso Julgadora dos trabalhos de Defesa da Tese de Doutorado, em sesso pblica

    realizada a..................../............................/......................., considerou

    ( ) Aprovado ( ) Reprovado

    Examinador(a): Assinatura:........................................................................................

    Nome:...............................................................................................

    Instituio:........................................................................................

    Examinador(a): Assinatura:........................................................................................

    Nome:...............................................................................................

    Instituio:........................................................................................

    Examinador(a): Assinatura:........................................................................................

    Nome:...............................................................................................

    Instituio:........................................................................................

    Examinador(a): Assinatura:........................................................................................

    Nome:...............................................................................................

    Instituio:........................................................................................

    Presidente: Assinatura:........................................................................................

    Nome:...............................................................................................

    Instituio:........................................................................................

  • Agradeo a Deus fonte de infinita energia que sempre

    ilumina os meus caminhos.

  • Aos meus amados pais Antonio e Iolanda, pelo apoio,

    incentivo, pacincia e o amor incondicional que tem por

    esse filho.

    Aos meus irmos Edson e Simone, pelo apoio e

    conselhos recebidos. Minha gratido por sempre estarem

    disponveis a me ouvirem.

  • AGRADECIMENTOS

    Ao amigo e Professor Dr. Antonio Jos Piantino Ferreira, pela acolhida, a confiana

    depositada, orientao e conhecimento compartilhado, que tornou possvel esse trabalho. A

    minha gratido.

    A Dra. Claudete S. Astolfi Ferreira, pelo apoio, amizade, a disponibilidade em sempre

    ajudar, e pelas valiosas sugestes e ensinamentos. Muito Obrigado.

    Ao Laboratrio de Ornitopatologia da FMVZ/USP, por dar condies de realizar essa

    tese e gratificar a origem de muitas amizades que decorrer alm desse ambiente de pesquisa.

    Amigos estes, que me ajudaram nos experimentos e me proporcionaram muitas

    alegrias fora do nosso laboratrio: Jorge Chacn, Marcos Ivo, Lidiane, Liliana, Luciana,

    Eliana, Mrio Srgio, Amarilis, Carina, Andr, Joelma, Camila, Mauricio Faria.

    Aos estudantes de iniciao cientifica e estagirios na poca que colaboraram nos

    experimentos com as aves: Lucila, Matheus, Fernanda, Sibelle.

    A Andyara pelo apoio, companheirismo, pacincia e enorme demonstrao de

    preocupao e carinho por mim.

    Ao Laboratrio de Patologia e Oncologia Experimental da FMVZ/USP, sob

    responsabilidade da Professora Dra. Maria Lcia Zaidan Dagli, por disponibilizar o uso do

    aparelho Real Time. E aos amigos que l fiz; Heidje, Daniel, Patricia, Mrcia, Tereza, Mirela,

    Bruno, Juliana. Em especial a Cynthia pela ajuda, pacincia nos ensinamentos, e mais do que

    isso a amizade. E em especial ao meu amigo Lucas Chaible, pelo apoio, ensinamentos, e pela

    ajuda fundamental a qual tornou possvel a concluso de vrios assuntos do molecular. Sou

    muito grato a vocs Cyntia e Lucas.

    Aos funcionrios da FMVZ/USP: Ataliba, Paulinho, Lcio, Rosinha, Emerson,

    Robson, Guimares, Luiz Nego, Marcos e Rogrio.

    A Juliana Rodrigues pelas contribuies no molecular.

  • Alice, secretria da Ps Graduao do Departamento de Microbiologia do ICB pela

    sempre disponibilidade em ajudar.

    A todos que direta ou indiretamente cooperaram na realizao deste trabalho.

    A Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP) que financiou

    esse projeto (Processo 04/09080-8).

  • Todas as vezes que se comprometer a fazer algo na vida,

    procure fazer do melhor modo, com honestidade, sinceridade e,

    acima de tudo, com bom senso e sensibilidade. Faa de sua vida

    uma eterna conquista rumo ao conhecimento, grandeza do ser,

    autenticidade e ser sempre vencedor

    GGaannddhhii

  • Essa tese fruto de quatro anos e meio de trabalho rduo, de renncias e persistncias.

    Hoje vejo que tudo foi vlido para o meu crescimento pessoal e profissional; e que a

    convivncia com timos pesquisadores e bons amigos me tornou melhor em todos os sentidos.

    A todos o meu apreo e gratido.

  • RESUMO

    PEDROSO, A. C. Modulao da Resposta Imune em Aves Imunizadas com Vacinas Avirias Associadas ao -Glucano. Doutorado (Microbiologia) - Instituto de Cincias Biomdicas da Universidade de So Paulo, So Paulo, 2009.

    Os -glucanos so formados por polissacardeos estruturais da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae), alguns cereais em gros e fungos. Os -glucanos apresentam a molcula de glicose ligada ao carbono nas posies -1,3 e pode apresentar cadeias laterais com o resduo de glicose ligado nas posies -1,6. O -glucano tem sua ao benfica como antiinflamatrio, antitumoral, hipocolesterolmico e hipoglicmico. A inocuidade do -glucano solubilizado nesse trabalho foi demonstrada in vitro, em cultivo celular de fibroblastos de embries de galinhas SPF, e confirmado in vivo aps a injeo no msculo peitoral de frangos. O -glucano um modulador biolgico devido sua capacidade de em aumentar a resposta imune inata, aumentando os mecanismos inespecficos de defesa dos animais. O -glucano solvel na dose de 240 g/ave, associado ao diluente da vacina de Marek, apresentou efeito imunomodulador na resposta imune humoral. Os nveis de IgG no plasma foram detectados pela tcnica de ELISA, e a resposta imune celular foi avaliada pela deteco de IFN-, IL-2 e IL-6 em frangos vacinados com vacina recombinante e viva contra doena de Gumboro. O -glucano solvel nesse experimento demonstrou ser um potente imunoadjuvante aps aumentar a resposta imune humoral e celular para os antgenos da doena infecciosa da Bursa, quando associado em vacinas recombinantes e vivas.

    Palavras-chave: -Glucano. Resposta imune. Vacinas. Galinha.

  • ABSTRACT

    PEDROSO, A. C. Immune Response Modulation in Chicken Immunized with Vaccines Associated to -Glucan. Ph. D. Thesis - Instituto de Cincias Biomdicas, Universidade de So Paulo, 2009.

    The -glucans are structural polysaccharides from yeast cell wall (Saccharomyces cerevisiae), some cereal grains and fungi. The -glucans have a glucose molecule carbon linked in sites -1,3 and they have side chains of glucose residue in sites -1,6. The -glucans have a helpful effect as anti-inflammatory, antitumoral, hypoglycemic and hypocholesterolemic activity .The safety of -glucan water-soluble obtained in this work was demonstrated in vitro, using specific-pathogen-free (SPF) cell culture chicken embryo fibroblast and it was confirmed in vivo after injection in chicken pectoral muscle. The -glucan is a biological modulator due to its ability to increase the innate immune re