Anemia Falciforme

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Hesther de Macedo Bousquet Mayara Souza Martins Nígela Rodrigues Carvalho

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Diagnóstico molecular

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Page 1: Anemia Falciforme

Hesther de Macedo BousquetMayara Souza MartinsNígela Rodrigues Carvalho

Page 2: Anemia Falciforme

Hemoglobina

Cadeias – codificadas por um gene no cromossomos 11

Cadeias – codificadas por dois genes no cromossomo 16

Page 3: Anemia Falciforme

1) Variações estruturais da hemoglobina

2) Variaçoões na taxa de produção das cadeias da hemoglobina (Talassemias)

Page 4: Anemia Falciforme

Mutação no gene da HBB: alteração na cadeia beta

substituição da adenina por timina no sexto códon do gene beta

GAG GTGÁcido

GlutâmicoValina

Hemácias em foice

Hemoglobina diferente

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1) Eletroforese em pH alcalino e ácido;

2) Focalização isoelétrica;

3) Eletroforese de cadeias globínicas;

4) HPLC.

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Mutações pontuais: detectadas através de enzimas de restrição (reconhecem o local específico onde está a mutação);

Anemia falciforme: ausência de um sítio de clivagem da enzima no gene da beta globina (Dde I);

Fragmentos gerados: separados pelo tamanho através de eletroforese em gel de agarose.

Page 7: Anemia Falciforme

Beta-globina normal. A enzima Dde I corta a seqüência nas posições 27, 40, 62, 107, 287, 488, 576.

Page 8: Anemia Falciforme

Beta-globina anormal. A enzima Dde I corta a seqüência nas posições 27, 40, 62, 107, 488, 576.

Page 9: Anemia Falciforme

Normal

Afetado

3’CUCGGUGUGGAUCCCAAC 5’ 5’AAGAGUCUUCUCUGUCUCC 3’

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PCR

Enzima de Restrição (Ddel)

Normal

Afetado

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Eletroforese em gel de agarose

Page 12: Anemia Falciforme

O diagnóstico molecular é importante, pois fornece informações fundamentais sobre a condição do paciente e seu prognóstico;

É muito importante no diagnóstico das hemoglobinopatias – anemia falciforme é uma das doenças genéticas mais freqüentes na população brasileira;

Deve-se utilizar uma metodologia adequada para o correto diagnóstico, para efetivo aconselhamento genético e tratamento destas desordens genéticas.