90 - Universitas Airlanggarepository.unair.ac.id/25569/17/17. Lampiran.pdf6. Campuran alginat,...

89

Lampiran 1

PERHITUNGAN KOMPOSISI ALGINAT, KITOSAN, DAN KURKUMIN

Acuan awal pembuatan sponge adalah Loyang bulat. d = 23 cm , r = 11,5 cm , t = 0,5 cm V = π r2 t = 3,14 x 11,52 x 0,5= 207,63 cm3 = 208 ml. Dari variasi alginat:kitosan maka diperoleh :

Jenis Sponge Perbandingan Persentase (%) Alginat Kitosan Alginat Kitosan

A0C4 0 4 0 100 A1C2 1 2 33,3 66,6 A1C3 1 3 25 75 A1C4 1 4 20 80 A2C2 2 2 50 50 A4C1 4 1 80 20 A3C1 3 1 75 25 A2C1 2 1 66,6 33,3 A4C0 4 0 100 0

Sponge Perhitungan ml Gram yang terkandung dalam ml. Alginat (ml) Kitosan (ml) Alginat (gr) Kitosan (gr)

A0C4 0 = 100

100 x 208

= 208

0 2,08

A1C2 = 33,3

100 x 208

= 69 = 66,6

100 x 208

= 139

0,69 1,39

A1C3 = 25

100 x 208

= 52 = 75

100 x 208

= 156

0,52 1,56

A1C4 = 20

100 x 208

= 42 = 80

100 x 208

= 166

0,42 1,66

A2C2 = 50

100 x 208

= 104 = 50

100 x 208

= 104

1,04 1,04

A4C1 = 80

100 x 208

= 166 = 20

100 x 208

= 42

1,66 0,42

A3C1 = 75

100 x 208

= 156 = 25

100 x 208

= 52

1,56 0,52

A2C1 = 66,6

100 x 208

= 139 = 33,3

100 x 208

= 69

1,39 0,69

A4C0 = 100

100 x 208

= 208

0 2,08 0

*Menurut penelitian Dai et al. 2009

ADLN Perpustakaan Universitas Airlangga

Skripsi Absorbent Dressing Sponge Berbasis Alginat-Kitosan Berkurkumin Untuk Luka Derajat Eksudat Sedang-Besar

Arindha Reni Pramesti

90

Cara pembuatan kurkumin 5µM dalam 1 liter ethanol.

Rumus kimia kurkumin = C21H20O6 ,Mr = 368.

M = 𝑛𝑉

5 µM = 𝑛𝑉

5x10-6 = 𝑔𝑟𝑎𝑚 /𝑀𝑟

1 𝑙𝑖𝑡𝑒𝑟

5x10-6 = 𝑔𝑟𝑎𝑚 /368

1 𝑙𝑖𝑡𝑒𝑟

Gram = 0,00184 gr dalam 1 liter ethanol

= 1,84 mg dalam 1000 ml ethanol.

Cara pengencerannya menggunakan labu ukur 1 liter.




91

Lampiran 2

PEMBUATAN ABSORBENT DRESSING SPONGE

Langkah Keterangan Gambar 1. Menimbang

alginat, kitosan, dan kurkumin dengan timbangan analitik.

2. Alginat dilarutkan dalam aquades. Disentrifuse dengan kecepatan 5500 rpm selama 15 menit.

3. Kitosan dilarutkan dalam asam asetat 1%. Disentrifuse dengan kecepatan 5500 rpm selama 2 jam.

4. Kurkumin dilarutkan dalam ethanol.




92

5. Larutan kitosan, alginat, dan kurkumin dicampur menjadi satu. Larutan alginat dimasukkan sedikit demi sedikit dengan pipet kedalam larutan kitosan yang telah ditambah 1ml larutan kurkumin sambil di sentrifuse selama ±2 jam dengan kecepatan 5500 rpm.

6. Campuran alginat, kitosan, dan kurkumin kemudian disentrifuse untuk memisahkan residu dan supernatant selama 25 menit dengan kecepatan 8000 rpm.

7. Hasil residu dan supernatant kemudian dipisahkan. Hasil residu yang dipakai untuk pembuatan sponge.

8. Residu kemudian dicetak pada loyang.

Hasil percampuran




93

9. Residu yang telah dicetak pada Loyang dimasukkan dalam freezer -800C selama 24 jam sebelum di lyophilizer.

10. Setelah dibekukan

dalam deep freezer kemudian di lyophilizer selama 24 jam untuk mengubahnya menjadi sponge.

11. 9 variasi sponge yang telah dibuat.




94

Lampiran 3

GRAFIK HASIL UJI Fourier Transform Infra Red (FT-IR)




95




96




97




98




99




100

Lampiran 4

PERHITUNGAN PERSENTASE KEMAMPUAN ABSORB SPONGE

Rata-rata berat sponge Jenis

Sponge Data yang

diamati Pengulangan Ke-

1 2 3

A0C4 Wo 0,03 0,03 0,03 We 0,60 0,71 0,65

A1C2 Wo 0,06 0,07 0,06 We 1,68 1,71 1,62

A1C3 Wo 0,09 0,10 0,10 We 1,79 2,06 1,96

A1C4 Wo 0,09 0,08 0,08 We 1,55 1,49 1,57

A2C2 Wo 0,05 0,05 0,05 We 1,50 1,38 1,35

A4C1 Wo 0,04 0,04 0,04 We 0,89 0,87 0,70

A3C1 Wo 0,04 0,04 0,04 We 0,97 1,01 1,13

A2C1 Wo 0,05 0,05 0,05 We 0,84 0,94 1,08

A4C0 Wo 0,03 0,03 0,03 We 0,70 0,68 0,60

Keterangan :Wo = Berat sponge mula-mula (gram) We = Berat sponge setelah menyerap PBS (gram) RUMUS : E =

𝑾𝒆−𝑾𝒐𝑾𝒐

X 100%

Sponge Pengulangan Ke-

Nilai Absorb (%) Rata-rata Nilai Absorb (%)

EA0C4 1 =

0,60−0,03

0,03 X 100%

= 1900 =

1900 + 2233 + 2066

3

= 2066

2 =

0,71−0,03

0,03 X 100%

= 2233 3

= 0,65−0,03

0,03 X 100%

= 2066




101



EA1C2 1 =

1,68−0,06

0,06 X 100%

= 2700

= 2700 + 2342 + 2600

3

= 2547 2

= 1,71−0,07

0,07 X 100%

= 2342 3

= 1,62−0,06

0,06 X 100%

= 2600 EA1C3 1

= 1,79−0,09

0,09 X 100%

= 1888

= 1888 + 1960 + 1860

3

= 1902 2

= 2,06−0,10

0,10 X 100%

= 1960 3

= 1,96−0,10

0,10 X 100%

= 1860 EA1C4 1

= 1,55−0,09

0,09 X 100%

= 1622

= 1622 + 1762,5 + 1862,5

3

= 1749 2

= 1,49−0,08

0,08 X 100%

= 1762,5 3

= 1,57−0,08

0,08 X 100%

= 1862,5 EA2C2 1

= 1,50−0,05

0,05 X 100%

= 2900

= 2900 + 2660 + 2600

3

= 2720 2

= 1,38−0,05

0,05 X 100%

= 2660 3

= 1,35−0,05

0,05 X 100%

= 2600




102



A4C1 1 =

0,89−0,04

0,04 X 100%

= 2125 =

2125 + 2075 + 1650

3

= 1950

2 =

0,87−0,04

0,04 X 100%

= 2075 3

= 0,70−0,04

0,04 X 100%

= 1650 A3C1 1

= 0,97−0,04

0,04 X 100%

= 2325 =

2325 + 2425 + 2725

3

= 2491

2 =

1,01−0,04

0,04 X 100%

= 2425 3

= 1,13−0,04

0,04 X 100%

= 2725 A2C1 1

= 0,84−0,05

0,05 X 100%

= 1580 =

1580 + 1780 + 2060

3

= 1806

2 =

0,94−0,05

0,05 X 100%

= 1780 3

= 1,08−0,05

0,05 X 100%

= 2060 A4C0 1

= 0,70−0,03

0,03 X 100%

= 2233 =

2233 + 2166 + 1900

3

= 2099

2 =

0,68−0,03

0,03 X 100%

= 2166 3

= 0,60−0,03

0,03 X 100%

= 1900




103

Lampiran 5

CARA PEMBUATAN LARUTAN PBS pH 7,4

Langkah Keterangan Gambar 1. Menimbang

sebanyak 5 gram di-sodium hydrogen phosphate.

2. Dilarutkan dalam 100 ml aquades.

3. pH awal adalah 8,86. Untuk menurunkan menjadi pH 7,4 ditetesi sedikit demi sedikit HCl 1M dan diukur dengan pH meter.




104

Lampiran 6

PERHITUNGAN PERSENTASE KADAR AIR ABSORBENT DRESSING

SPONGE

Berat sponge sebelum dan sesudah pemanasan pada suhu 3000C. Jenis Sponge Data yang diamati % Kadar Air

Sponge A0C4 Wo 0,105 42,9 W 0,060

Sponge A1C2 Wo 0,103 20,4 W 0,082

Sponge A1C4 Wo 0,101 32,7 W 0,068 RUMUS : % kadar air = 𝑾𝒐−𝑾

𝑾𝒐 x 100%

% kadar air SpongeA0C4 = 0,105 −0,060

0,105 x 100%

= 42,9 %


0,103 x 100%

= 20,4 %


0,101 x 100%

= 32,7 %




105

Lampiran 7

PERHITUNGAN PERSENTASE RE-EPITELISASI

Jenis Sponge Panjang Luka (okuler) Total Tertutup Epitel

Kontrol 135 65 Sponge A1C2 80 70 Sponge A0C4 80 80 Sponge A1C4 50 50

Hasil dari perhitungan panjang luka total dan tertutup epitel yang masih bersatuan

okuler kemudian ditera menggunakan mikrometer objektif untuk menghasilkan

angka dalam satuan µm.

Kontrol

65 okuler

A1C2

70 okuler

A0C4

80 okuler

A1C4

50 okuler




106

Mikrometer okuler yang sudah terpasang pada mikroskop kemudian

dihimpitkan dengan mikrometer objektif dan di cari garis yang berhimpitan.

Hasilnya diketahui bahwa 80 okuler sama dengan 82 objektif. Jarak antar garis

pada mikrometer objektif bernilai 0,01 mm, kemudian dilakukan perhitungan

sebagai berikut :

Okuler ≈ Objektif

80 okuler = 82 objektif

80 okuler = 82 x 0,01 mm

80 okuler = 0,82 mm

1 okuler = 0,82

80

1 okuler = 0,01025 mm = 10,25 µm.

Jenis Sponge Panjang Luka (okuler) Panjang Luka (mm) Total Tertutup Epitel Total Tertutup Epitel

Kontrol 135 65 = 135 x 0,01025 = 1,38

= 65 x 0,01025 = 0,67

Sponge A1C2 80 70 = 80 x 0,01025 = 0,82

= 70 x 0,01025 = 0,72

Sponge A0C4 80 80 = 80 x 0,01025 = 0,82

= 80 x 0,01025 = 0,82

Sponge A1C4 50 50 = 50 x 0,01025 = 0,51

= 50 x 0,01025 = 0,51

Mikrometer

objektif

Mikrometer

okuler




107

Panjang Luka

Jenis Sponge Panjang Luka (mm) Total Tertutup Epitel

Kontrol 1,38 0,67 Sponge A1C2 0,82 0,72 Sponge A0C4 0,82 0,82 Sponge A1C4 0,51 0,51

RUMUS : % Re-epitelisasi = 𝐏𝐚𝐧𝐣𝐚𝐧𝐠 𝐥𝐮𝐤𝐚 𝐲𝐚𝐧𝐠 𝐝𝐢𝐭𝐮𝐭𝐮𝐩𝐢 𝐞𝐩𝐢𝐭𝐞𝐥

𝐏𝐚𝐧𝐣𝐚𝐧𝐠 𝐥𝐮𝐤𝐚 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐥 X 100%

% Re-epitelisasi Kontrol = 0,67

1,38 X 100%

= 49 %

% Re-epitelisasi Sponge A1C2 = 0,72

0,82 X 100%

= 88 %


0,82 X 100%

= 100 %


0,51 X 100%

= 100 %




108

Lampiran 8

INSISI PADA MENCIT

Langkah Keterangan Gambar 1. Proses adaptasi

pada mencit ± 7 hari.

2. Menyiapkan alat dan bahan yaitu gunting untuk mencukur bulu mencit, skalpel untuk membuat luka insisi, alkohol, chloform untuk membius mencit, hypafix untuk memerban sponge pada punggung mencit.

3.

Setelah adaptasi selama ± 7 hari mencit siap di insisi. Pertama-tama mencit dibius dengan menggunakan chloroform ± 30 detik.




109

4.

Pencukuran bulu pada punggung mencit.

5. Perlukaan pada mencit dilakukan dengan menggunakan skalpel. Insisi pada bagian punggung dengan panjang ±1cm dan kedalaman ±0,5cm.

6. Sponge yang akan

ditempelkan pada punggung mencit terlebih dahulu dilekatkan pada hypafix. Hypafix ini hanya berfungsi untuk melekatkan sponge agar tidak mudah lepas.

7. Sponge kemudian ditempelkan pada luka insisi yang telah dibuat.

8. Mencit dipelihara kembali selama 3 hari sebelum dilakukan penyayatan pada kulitnya untuk dibuat preparat histologi.




110

Lampiran 9

PROSEDUR PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI

Langkah Keterangan Gambar 1. Setelah 3 hari

perlukaan, kulit mencit yang luka diambil kemudian diawetkankan dalam larutan BNF (Buffer Neutral Formaline) 10% selama ± 24 jam.

2. Setelah 24 jam dilihat apakah kulit mencit sudah tenggelam didasar vial (botol). Proses tenggelam menunjukkan BNF sudah terserap kedalam kulit. Apabila belum maka diperlukan proses aspirasi ±2 hari atau sampai kulit tenggelam.

3. Kulit yang dipilih kemudian dimasukkan kedalam kaset dengan ditempeli kertas label di dalam kaset agar tidak tertukar. Kemudian dilakukan washing untuk membersihkan BNF dari kulit. Washing dilakukan selama ±2jam pada air mengalir.




111

4. Dilakukan dehidrasi yang bertujuan untuk menarik air yang terdapat di dalam jaringan agar dapat diisi oleh molekul paraffin. Dehidrasi dilakuakan pada alkohol bertingkat.

5. Penjernihan (clearing) untuk menghilangkan kadar ethanol pada jaringan kulit.

6. Infiltrasi parafin yang bertujuan untuk memasukkan jaringan kulit kedalam lingkungan parafin.

7. Penanaman

(Embedding) kulit mencit pada parafin cair hingga diperoleh blok parafin. Blok parafin beku selama 24 jam. Setelah itu blok parafin diletakkan pada holder.

8. Penyayatan

(sectioning) dengan menggunakan sop mikrotom, dipotong setebal 4µm




112

9. Penempelan (Affiksing) yaitu gelas obyek yang dilapisi meyer albumin disiapkan, kemudian potongan jaringan yang berada pada waterbath siap ditempelkan.

10. Deparafinasi untuk menghilangkan/ melarutkan parafin yang terdapat di dalam jaringan.

11. Pewarnaan (staining)

12. Penutupan (mounting) dengan menggunakan ethelan.

13. Preparat siap diamati dengan mikroskop.




113

Lampiran 10

PERHITUNGAN PERSENTASE SEL HIDUP PADA MTT ASSAY

Nilai Optical density Sponge A1C2, A0C4, A1C4

Pengulangan Nilai Optical Density

Kontrol Sel Kontrol Media Sponge A1C2

Sponge A0C4

Sponge A1C4

1 0,106 0,108 0,106 0,093 0,091 2 0,106 0,103 0,104 0,091 0,093 3 0,129 0,127 0,128 0,12 0,119 4 0,125 0,122 0,131 0,116 0,122 5 0,081 0,08 0,085 0,076 0,077 6 0,123 0,125 0,137 0,117 0,129 7 0,091 0,087 0,094 0,092 0,093 8 0,114 0,105 0,116 0,102 0,1

Rata-Rata 0,109 0,107 0,113 0,101 0,103

RUMUS : % sel hidup = 𝑶𝑫 𝑷𝒆𝒓𝒍𝒂𝒌𝒖𝒂𝒏+𝑶𝑫 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂

𝑶𝑫 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 𝒔𝒆𝒍+𝑶𝑫 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂

% sel hidup SpongeA1C2 = 0,109 + 0,103

0,101 + 0,103

= 104 %


0,101 + 0,103

= 103 %


0,101 + 0,103

= 106 %




114

Lampiran 11

PROSEDUR MTT ASSAY

Langkah Keterangan Gambar 1. Sel yang siap diberi

perlakuan. Masing-masing sumuran telah terisi sel dan media eagle’s.

2. Sampel dimasukkan ke dalam sumuran masing-masing sebanyak 1 µL

3. Sel yang telah diberi perlakuan dimasukkan kedalam inkubator selama 24 jam.

4. Setelah 24 jam, sel dibersihkan dengan larutan PBS. Cara membersihkannya dengan menggoyang-goyangkan mikroplate.




115

5. Kemudian ditambah 25 µL pereaksi MTT dan diinkubasi kembali selama 4 jam pada suhu 370C

6. Setelah diinkubasi selama 4 jam kemudian ditambah pelarut DMSO sebanyak 50µL pada setiap sumuran.

7. Disentrifuse 30 rpm selama 5 menit.

8. Sel hidup dihitung dengan elisa reader




116




90 - Universitas Airlanggarepository.unair.ac.id/25569/17/17. Lampiran.pdf6. Campuran alginat,...

Documents

Transcript of 90 - Universitas Airlanggarepository.unair.ac.id/25569/17/17. Lampiran.pdf6. Campuran alginat,...