11 ς 2015 3 28 ομ 4 μαρίνα κλεάνθους αιμοσφαιρινοπάθειες
-
Upload
loucas-nicolaou -
Category
Education
-
view
1.589 -
download
5
Transcript of 11 ς 2015 3 28 ομ 4 μαρίνα κλεάνθους αιμοσφαιρινοπάθειες
Προγεννητική Διάγνωση Αιμοσφαιρινοπαθειών Νέες Μεθοδολογίες
Μαρίνα Κλεάνθους
Αν. Καθηγήτρια, Διευθύντρια,
Τμήμα Μοριακής Γενετικής Θαλασσαιμίας,
Ινστιτούτο Νευρολογίας και Γενετικής Κύπρου.
ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: Νέες Μεθοδολογίες 11ο Επιμορφωτικό Επιστημονικό Συνέδριο Βιολόγων ΟΕΛΜΕΚ Βιολογία: Από την Υγεία μέχρι την Βιοποικιλότητα
ΜΑΡΙΝΑ ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ
ΙΝΣΤ ΙΤΟΥΤΟ ΝΕΥΡΟΛΟΓΙΑΣ & ΓΕΝΕΤ ΙΚΗΣ ΚΥΠΡΟΥ
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 6
28 Μαρτίου 2015, Λευκωσία, Κύπρος
Επισκόπηση
Προγεννητική διάγνωση με CVS
Μη επεμβατική προγεννητική διάγνωση
Προεμφυτευτική γενετική διάγνωση
Νέες μεθοδολογίες
7 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Προγεννητική Διάγνωση
β-θαλασσαιμία
α-θαλασσαιμία Hb Bart’s Hydrops Fetalis
Σοβαρές μορφές αιμοσφαιρινοπάθειας H
Άλλες αιμοσφαιρινοπάθειες (π.χ. HbS)
Για ζευγάρια που έχουν πιθανότητα να αποκτήσουν παιδιά με πολύ σοβαρές γενετικές ασθένειες.
Προγεννητικός Έλεγχος
9
Amniocentesis
CVS: Chorionic Villus Sampling
Εντοπισμός ζευγαριών με ρίσκο
Πληθυσμιακός έλεγχος για ανίχνευση των φορέων
Έγκυες
Οικογενειακό ιστορικό
Γενετικές συμβουλές
Βιοψία πλακούντα (CVS)
Γενετική διάγνωση
Τεκμηριωμένη επιλογή στους υποψήφιους γονείς
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Biopsy Approaches
Amniocentesis 2nd Trimester (15th-20th week)
CVS 1st Trimester (11th week)
CVS miscarriage risk < 1%
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 10
Προγεννητική Έλεγχος Απομόνωση DNA και Μοριακή Διάγνωση
MATERNAL TISSUE
CHORIONIC
VILLI
BLOOD CLOT
(Maternal origin)
Απομόνωση DNA
Απομόνωση DNA
Προσδιορισμός μεταλλάξεων γονέων
Προσδιορισμός γονότυπου του εμβρύου
Συλλογή αίματος από γονείς
Συνολικά Αποτελέσματα Προγεννητικής Διάγνωσης Αιμοσφαιρινοπαθειών στη Κύπρο
11
• β-thalassaemias 3284
Normal 802
Heterozygote 1665
Thalassaemic 817
• Thalassaemic Newborns
76
• α-thalassaemia 78 0
10
20
30
40
50
60
1991 CVS
1981 Cordocentesis
1977
Περίοδος: 1991 - 2014
50 thalassaemics per year
5 thalassaemics per year
No prevention Prevention
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
12 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Εξωκυτταρικό Εμβρυϊκό DNA στο Μητρικό Πλάσμα
13
Denis Lo et al, 1997
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Εφαρμογές ΜΕΠΔ
Κλινικές Εφαρμογές
Προσδιορισμός του Rhesus του εμβρύου σε Rhesus αρνητικές εγκύους (αιμολυτική ασθένεια των νεογνών)
Προσδιορισμός του φύλου του εμβρύου για X-φυλοσύνδετες ασθένειες
ΜΕΠΔ για ανευπλοειδίες με NGS (Χρωμ. 21, 18 και 13 εμπορικά διαθέσιμο με κόστος €500)
Ερευνητικές μελέτες
Μονογονιδιακές ασθένειες (π.χ. β-θαλασσαιμία, Κυστική ίνωση)
Ανωμαλίες κύησης (Προεκλαμψία, πρόωρος τοκετός)
14 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
ΜΕΠΔ για β-Θαλασσαιμία
ΔΥΣΚΟΛΙΕΣ:
Ποιότητα εμβρυικού DNA στο πλάσμα
Το απομονωμένο DNA είναι κυρίως μητρικό (~10% εμβρυϊκό)
Μητρικό και εμβρυικό DNA παρόμοιο
Πολλοί γονείς φέρουν ίδιες μεταλλάξεις
ΠΡΟΚΛΗΣΕΙΣ:
Αξιόπιστος προσδιορισμός πατρικού αλληλομόρφου
Αξιόπιστος προσδιορισμός μητρικού αλληλομόρφου
15 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
N/IVS1-110 N/IVS1-110
N/IVS1-110 N/N IVSI-110/IVSI-110
N/IVS1-110 N/IVS1-6
N/IVS1-110 N/N N/IVSI-6 IVSI-110/IVSI-6
Επιλογή πολυμορφισμών (SNPs) με ψηλό βαθμό ετεροζυγωτίας στον Κυπριακό Πληθυσμό
16
130 SNPs στο γονιδιακό τόπο της β-σφαιρίνης
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)
75 τυχαία επιλεγμένα δείγματα
Sequenom® MALDI-TOFF Mass Array
49 SNPs με βαθμό ετεροζυγωτίας > 6% επιλέχθηκαν για ΜΕΠΔ
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Illumina Solexa Platform (HiSeq2000) in collaboration with Erasmus Medical Centre (Rotterdam)
~1 million reads/sample 5% minor allele 50 000 molecules
Μέθοδος - Στοχευμένη NGS Primer design for 4 SNPs (150-250bp) PCR Amplification (3 replicates) PCR product purification Cluster generation by bridge amplification Sequencing by synthesis Bioinformatics analysis
17
NGS για την Ανάλυση του Εξωκυτταρικού Εμβρυϊκού DNA στο Μητρικό Πλάσμα
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Ανάλυση Εξωκυτταρικού DNA Μητρικού Πλάσματος με NGS
Illumina Solexa Platform, (HiSeq2000)
10 οικογένειες, 4 SNPs
ΜΕΠΔ 8/10 με ανάλυση απλοτύπων
NIPD: Normal or β-thal trait
SNP1 SNP2 SNP3 SNP4
c c g ND c c g ND
SNP1 SNP2 SNP3 SNP4
SNP1 SNP2 SNP3 SNP4
βthal c g t Normal t c g
c c g t c g
ND Normal
N/IVS1-110 N/IVS1-6
Mat plasma
European Journal of Human Genetics, 2013
Προεμφυτευτική Γενετική Διάγνωση (ΠΓΔ)
Εξωσωματική γονιμοποίηση (In vitro fertilization - IVF) για δημιουργία εμβρύων
Έλεγχος 1-2 κυττάρων του εμβρύου
Επιλογή των υγειών εμβρύων για μεταφορά στη μήτρα
Πρώτη ΠΓΔ (Handyside et al, 1990)
Χιλιάδες παιδιά έχουν γεννηθεί μετά από ΠΓΔ
19
• ΣΤΑΔΕΙΑ
• Συμβουλευτική
• Επαγωγή ωορρηξίας
• Συλλογή ωοκυττάρων
• Γονιμοποίηση με ICSI
• Βιοψία εμβρύου
• Γενετική διάγνωση
• Μεταφορά 1-2 κατάλληλων εμβρύων
• Επιβεβαίωση κύησης
• Προγεννητική διάγνωση (κατευθυντήριες γραμμές από ESHRE)
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Επαγωγή Ωορρηξίας και Συλλογή Ωαρίων
Ελεγχόμενη διέγερση των ωοθηκών με τη
χρήση της ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης
προκειμένου να εξασφαλιστεί η πολλαπλή
ανάπτυξη ωοθυλακίων
Η λήψη των ωαρίων πραγματοποιείται
διακολπικά υπό υπερηχογραφική
καθοδήγηση
20 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Εξωσωματική Γονιμοποίηση
Ενδοωαριακή έγχυση σπερματοζωαρίου (Intracytoplasmic sperm injection - ICSI)
Σχηματισμός προπυρήνων (+ 2ο πολικό σωμάτιο)
Σύντηξη προπυρήνων
Σχηματισμός ζυγωτού
21 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Βιοψία Εμβρύου
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 22
Βιοψία πολικού σωματίου Βιοψία βλαστομεριδίου (Ημέρα 3) Βιοψία τροφοβλάστη (Ημερα 5)
Μοριακή Διάγνωση
23
HBB HBD HBG1 HBG2 HBE1
DIIS2362
4852169-4852366
DIIS1243
5049068-5048932 DIIS4891
5191026-5190926 DIIS1338
5927976-5928210
DIIS1323
626918-6216738
Exon 1 IVS I Exon 2 IVS II Exon 3
Efficiency > 92%
ADO 1-3%
1. C. Vrettou et al , (1999) Prenat. Diagn. 19: 1209 – 1216 2. Zachaki et al, Hemoglobin 2011;35(1):56-66 3. Claudia et al. Prenat. Diagn. 2009: 29: 50-56
β-gene
STRs
1st PCR: β-globin gene 5 β-Locus STRs
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Μεταλλάξεις β-Θαλασσαιμίας και Ανάλυση Πολυμορφισμών (STR)
24
Mother
Father
Child 1 A
Child 1B
N/IVSI-110)
N/N
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 25
ΠΓΔ για β-Θαλασσαιμία
200 123
IVSI-110 115 243 184
I
209 119 N 111 251 182 II
B-THAL
200 119 N 115 247 182 III
206 121 N 108 243 188 IV
D11S2362
D11S1243 HBB D11S4891
D11S1338 D11S1323
HBB STR MARKER
200
119 N 115
251 182
V
203 123 N 115 249 188 VI
203 119 N 115 243 182 VII
B-THAL
200
123 IVSI-110
115
243 184
I
206
121 N 108
243 188
IV
B-THAL
200 119
N 115
251 182
V
206 123 IVSI-110 115
243 182 VIII
B-THAL
200 123
IVSI-110 115
243 184
I
206 123 IVSI-110 115
243 182 VIII
B-THAL
200 119 N 115
251 182 V
B-THAL
206
121 N
108 243 188
IV
B-THAL
206
121 N
108 243 188
IV
B-THAL
206 123 IVSI-110 115
243 182 VIII
B-THAL
200 123
IVSI-110 115
243 184
I
206 123 IVSI-110 115
243 182 VIII
206 123 IVSI-110 115 243 182 VIII
ΠΓΔ για Θαλασσαιμία με Παράλληλο Έλεγχο Ιστοσυμβατότητας (HLA Typing)
Εφαρμόζεται σε ζευγάρια με θαλασσαιμικό παιδί
ΠΓΔ για επιλογή και μεταφορά στη μήτρα εμβρύων που είναι υγιή και ταυτόχρονα ιστοσυμβατά με θαλασσαιμικό παιδί της οικογένειας
Στη γέννηση συλλέγεται αίμα ομφάλιου λώρου από το νεογέννητο και απομονώνονται αιμοποιητικά βλαστικά κύτταρα
Τα βλαστικά αιμοποιητικά κύτταρα μεταμοσχεύονται στο θαλασσαιμικό παιδί και εγκαθίστανται στο μυελό των οστών
Επανασύσταση της αιματοποίησης ήταν επιτυχημένη σχεδόν σε όλες τις περιπτώσεις που δημοσιεύτηκαν
26 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 27
ΠΓΔ για β-Θαλασσαιμία και τυποποίηση HLA
MHC - Chr6p21 Σε 3.6 Mb βρίσκονται 224 HLA γονίδια και ψευδογονίδια
Προεμφυτευτική Γενετική Διάγνωση στην Κύπρο Περίοδος: 2005-2014
Disease Cases Pregnancies
HBB 195 58
HBB – HLA 3 0
HBA 4 1
Tay Sachs Disease (TSD ) 1 1
SDHB autosomal paragaglioma 2 1
Huntington's Diseases (HD) 1 0
Charcot-Marie-Tooth type 1A 1 1
Cystic Fibrosis (CF) 1 1
Total 208 63
28 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Νέες Μεθοδολογίες στη Προγεννητική Διάγνωση
Νέες τεχνικές προσδιορισμού μεταλλάξεων (π.χ. Real Time-PCR, MLPA, NGS)
Νέες τεχνολογικές εξελίξεις που σχετίζονται με την υποβοηθούμενη αναπαραγωγή (ICSI, Laser,
διαλογή σπέρματος, vitrification)
NGS στη ΠΔ για αιμοσφαιρινοπάθειες – χρωμοσωμικές ανωμαλίες – γενετικοί τροποποιητικοί παράγοντες
Περισσότερες πληροφορίες στους υποψήφιους γονείς
Από προγεννητική γενετική διάγνωση στη προγεννητική γενωμική διάγνωση
29 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Νέα Εποχή στη Προγεννητική Διάγνωση Εξατομικευμένες Θεραπείες για το Έμβρυο
Συγκριτικές μελέτες σε έμβρυα Genomics, transcriptomics, proteomics, methylomics (omics)
Κατανόηση της παθοφυσιολογίας και εξέλιξης των ασθενειών στα διάφορα στάδια ανάπτυξης του εμβρύου
Ανάπτυξη εξατομικευμένων θεραπειών για το έμβρυο ή το νεογέννητο
30
Στο παρόν, η ΠΔ παρέχει μια τεκμηριωμένη επιλογή για τους υποψήφιους γονείς
Στο μέλλον, τα δεδομένα/υλικό από την ΠΔ θα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για εξατομικευμένες θεραπείες των εμβρύων
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣΕς
Περίληψη
Η κύρια μέθοδος που χρησιμοποιείται στη ΠΔ των αιμοσφαιρινοπαθειών βασίζεται
στην ανάλυση βιοψίας πλακούντα (CVS)
Η ΜΕΠΔ αναμένεται να αντικαταστήσει σύντομα τη συμβατική μέθοδο
Μια άλλη επιλογή για ορισμένα ζευγάρια είναι η ΠΓΔ
ΠΓΔ-HLA μια ελκυστική θεραπευτική προσέγγιση, αλλά όχι μια γρήγορη λύση
Χρησιμοποίηση νέων τεχνολογιών (π.χ. NGS, ψηφιακό PCR)
Συνεχής παραγωγή νέων δεδομένων omics για το έμβρυο - ασθένειες
Νέος στόχος ΠΔ: Παροχή στοιχείων για την εφαρμογή νέων και εξατομικευμένων
θεραπειών για το έμβρυο ή το νεογέννητο
31 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
32 ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ
Η ομιλία σε φιλμάκι Διάλεξη Μαρίνας Κλεάνθους
http://www.biosyn-oelmek.org/
Ιστοσελίδα Συνδέσμου Βιολόγων ΟΕΛΜΕΚ http://www.biosyn-oelmek.org/?page_id=352 youtube https://www.youtube.com/watch?v=WT59sODFJkk facebook Βιολόγων https://www.facebook.com/groups/670297819664373/1088887251138759/?comment_id=1089101171117367&ref=notif¬if_t=like
ΚΛΕΑΝΘΟΥΣ ΜΑΡΙΝΑ ΠΡΟΓΕΝΝΗΤΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΩΝ: ΝΕΕΣ ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΕΣ 33